采用RT—PCR和RACE（Rapid Amplification of cDNA Ends）法分离出奥利亚罗非鱼卵巢芳香化酶（P450aromA）的全序列，得到1784bp的全长cDNA，包括38bp5’非翻译区，1566bp阅读框以及含Poly（A）信号（AATAAA）的167bp3’非翻译区[不包括...
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采用RT—PCR和RACE（Rapid Amplification of cDNA Ends）法分离出奥利亚罗非鱼卵巢芳香化酶（P450aromA）的全序列，得到1784bp的全长cDNA，包括38bp5’非翻译区，1566bp阅读框以及含Poly（A）信号（AATAAA）的167bp3’非翻译区[不包括Poly（A）]。阅读框共编码521个氨基酸，计算的蛋白质分子量为59ku。同源性分析显示，奥利亚罗非鱼P450aromA的氨基酸序列与其它鱼性腺P450arom具有70％以上的同源性，与其它鱼脑P450arom为60％左右同源，但芳香化酶高保守区包括Ⅰ-螺旋区，芳香化酶特异保守区Ⅱ和血红素结合区Ⅲ和其它鱼芳香化酶的同源性分别高达83％-96％，78％～86％和85—100％。系统发育分析表明奥利亚罗非鱼P450aromA与鱼类性腺P450arom属于同一分支的。生物信息学分析显示：奥利亚罗非鱼P450A基因编码的蛋白无信号肽，无跨膜区域，为非分泌蛋白，同时含有多个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点，N-糖激化位点，N-肉豆蔻酰化位点，蛋白激酶C磷酸化位点。
采用解剖观察、组织切片及人工催情等方法,研究芙蓉鲤鲫(Cyprinus capiofurong.♀×Carassius auratus red var.♂)的性腺发育及繁殖性能。结果显示:解剖观察,芙蓉鲤鲫性腺发育异常的个体占83.64%,性腺外观基本正常的个体占16.36%...
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采用解剖观察、组织切片及人工催情等方法,研究芙蓉鲤鲫(Cyprinus capiofurong.♀×Carassius auratus red var.♂)的性腺发育及繁殖性能。结果显示:解剖观察,芙蓉鲤鲫性腺发育异常的个体占83.64%,性腺外观基本正常的个体占16.36%。组织学观察,芙蓉鲤鲫性腺可分三类:两性嵌合体占21.13%,其中以精巢为主的16.90%,以卵巢为主的4.23%,它们性腺发育迟缓,在繁殖季节成熟系数也没有明显变化,性腺多为一侧发育或两侧不对称,两种性腺细胞均不能成熟;雌性个体占40.84%,在生殖季节卵巢可发育到第IV时相,但未见其细胞核发生偏移;雄性个体,占38.03%,在生殖季节只能发育到精子细胞阶段,不能产生成熟的精子。经人工催产,芙蓉鲤鲫少部分个体有发情产卵行为但不能正常受精。结果表明芙蓉鲤鲫为两性败育类型。
为了找到最适合青虾眼柄总RNA抽提的方法,本试验先后使用RNAiso Plus、RNeasy Mini Kit、Unizol等产品抽提青虾眼柄总RNA并在方法上进行了改良,通过电泳、紫外分光光度计和RT-PCR对总RNA进行检测和分析。结果表明RNAiso法抽提的RNA色素...
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为了找到最适合青虾眼柄总RNA抽提的方法,本试验先后使用RNAiso Plus、RNeasy Mini Kit、Unizol等产品抽提青虾眼柄总RNA并在方法上进行了改良,通过电泳、紫外分光光度计和RT-PCR对总RNA进行检测和分析。结果表明RNAiso法抽提的RNA色素含量高;改良RNAiso法抽提的RNA有部分降解,含色素少,对反转录酶有一定的抑制作用但不影响RT-PCR;RNeasy Mini Kit能有效去除抑制反转录酶活性的色素且RNA无降解,但DNA污染严重;RNAiso结合RNeasy Mini Kit法和Unizol结合RNeasy Mini Kit法提取的RNA均无DNA污染,也没有抑制反转录酶活性的色素,但后者所提的RNA完整性好。因此,Unizol结合RNeasy Mini Kit法最适合青虾眼柄总RNA的提取,可获得高质量的RNA用于RT-PCR、cDNA文库构建、定量PCR等实验。
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