检索结果-内蒙古大学图书馆

甲型肝炎病毒、帕斯拉属和罗卡属戊型肝炎病毒三重荧光定量RT-PCR检测方法的建立和应用

中华实验和临床病毒学杂志 2025年第1期39卷 115-121页

作者：毕敬琛尹文娇杨磊河北医科大学公共卫生学院石家庄050017 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室北京102206 河北省环境与人群健康重点实验室石家庄050017

目的为弥补目前临床检验方法对肝炎患者感染来自啮齿动物的罗卡属(genus Rocahepevirus)戊型肝炎病毒(HEV-C)的漏检情况,以及与甲型肝炎病毒(HAV)感染进行快速鉴别,本研究建立一种可同时检测HAV、帕斯拉属(genus Paslahepevirus)戊型肝... 详细信息

目的为弥补目前临床检验方法对肝炎患者感染来自啮齿动物的罗卡属(genus Rocahepevirus)戊型肝炎病毒(HEV-C)的漏检情况,以及与甲型肝炎病毒(HAV)感染进行快速鉴别,本研究建立一种可同时检测HAV、帕斯拉属(genus Paslahepevirus)戊型肝炎病毒(HEV-A)和HEV-C的三重实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测方法。方法选取3对扩增引物和3条TaqMan探针,对反应体系及扩增温度进行优化,构建三重qRT-PCR方法;利用质粒建立标准曲线,并评价该方法的灵敏度;利用其它标本评价特异度;利用HAV、HEV-A和HEV-C的核酸进行稳定性评价;对疑似甲型或戊型肝炎病例标本进行检测,并与HAV(或HEV)IgM抗体和巢式RT-PCR(nRT-PCR)检测结果比较。结果三重qRT-PCR的三条标准曲线的相关系数R 2均大于0.99,斜率均接近-3.3;对HAV、HEV-A和HEV-C质粒的最低检出限分别为8拷贝/μl、5拷贝/μl和8拷贝/μl;与乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒等无交叉反应;批内和批间试验变异系数均小于5%。HAV IgM抗体检测法、HAV nRT-PCR和三重qRT-PCR对疑似甲型肝炎病例血清的检测阳性率分别为95.1%(58/61)、83.6%(51/61)和83.6%(51/61),其中HAV IgM抗体检测法与HAV nRT-PCR(或三重qRT-PCR)的检测一致率为85.2%(52/61),差异具有统计学意义(χ^(2)=4.00,P=0.039)。HEV IgM抗体检测法、HEV nRT-PCR和三重qRT-PCR对疑似戊型肝炎病例血清的检测阳性率分别为89.7%(61/68)、69.1%(47/68)和72.1%(49/68),其中HEV IgM抗体检测法与三重qRT-PCR的检测一致率为79.4%(54/68),差异具有统计学意义(χ^(2)=8.64,P=0.002);HEV nRT-PCR和三重qRT-PCR对疑似戊型肝炎病例粪便的检测阳性率分别为80.0%(20/25)、76.0%(19/25),检测一致率为96%(24/25),差异无统计学意义(χ^(2)=0,P>0.05)。结论本研究建立了一种可同时快速检测甲型肝炎病毒、帕斯拉属或罗卡属戊型肝炎病毒的三重实时荧光定量RT-PCR检测方法,其灵敏度、特异度和稳定性高,适用于新近感染甲型肝炎病毒或戊型肝炎病毒患者标本的快速检测。

关键词：甲型肝炎病毒帕斯拉属戊型肝炎病毒罗卡属戊型肝炎病毒三重实时荧光定量RT-PCR

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2018-2023年新疆维吾尔自治区风疹流行病学特征及病毒基因特征分析

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病毒学报 2024年第2期40卷 374-382页

作者：玛合木提江·库尔班钱程凯赛尔·吾斯曼孙璐阿依波塔·孜那西朱贞新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心免疫规划所乌鲁木齐830011 传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室WHO西太平洋地区麻疹/风疹参比实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

为了解2018-2023年新疆维吾尔自治区(以下简称新疆)风疹流行病学特征以及风疹病毒(Rubella virus,RuV)基因特征,本研究整理和汇总2018-2023年新疆风疹发病数据,采集2022年临床标本开展核酸检测和病毒分离,并对分离株进行测序,获得其靶... 详细信息

为了解2018-2023年新疆维吾尔自治区(以下简称新疆)风疹流行病学特征以及风疹病毒(Rubella virus,RuV)基因特征,本研究整理和汇总2018-2023年新疆风疹发病数据,采集2022年临床标本开展核酸检测和病毒分离,并对分离株进行测序,获得其靶基因序列(位于E1基因的739个靶核酸片段,E1-739)。基于E1-739,将本研究RuV株与WHO基因分型代表株以及已报道的1E和2B基因亚型代表株构建系统发育树,鉴定其基因型/亚型。同时,与同时期我国其他省份流行RuV代表株进行比对,了解新疆流行RuV的分子差异。结果显示,2018-2023年,新疆共计报告风疹病例599例,除外2019年风疹发病有小幅回升(414例,1.66/10万),其余年份发病率均维持在较低水平(年均发病率为0.17/10万),并在2023年降低到了历史最低水平(8例,0.03/10万);2018-2023年间,病例主要集中在北疆的阿勒泰和塔城等地区;病例年龄分布显示,2018年和2021-2023年间,<10岁儿童病例占比均较高(52.8%~62.5%),而2019年和2020年则以10-19岁年龄组人群为主(72.4%和51.9%)。病毒学监测数据显示,2022年从新疆4个地(州、市)共获得7株RuV病毒株的靶基因,分属于1E-L2(6株)和2B-L2c(1株),与同期我国其他省份流行的RuV病毒株具有较高的亲缘性。本研究为新疆地区优化风疹防控策略提供了基础科学数据。

关键词：风疹流行病学基因特征新疆维吾尔自治区

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我国罕见G9P-A2基因型重配株轮状病毒全基因组分子特征分析

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疾病监测 2024年第5期39卷 586-591页

作者：熊光萍彭蕊王萌璇魏宇航范佳欣唐晓苹王宏章青庞立丽孔翔羽李希希李丹地传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 甘肃中医药大学公共卫生学院甘肃兰州730000

目的了解我国1株G9P[8]基因型A组轮状病毒(RVA)JL18221140的全基因组分子特征。方法对我国吉林省1例G9P[8]基因型RVA(JL18221140)原始粪便标本采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)一步法扩增11个基因节段,并通过DNAStar, MEGA 11.0等... 详细信息

目的了解我国1株G9P[8]基因型A组轮状病毒(RVA)JL18221140的全基因组分子特征。方法对我国吉林省1例G9P[8]基因型RVA(JL18221140)原始粪便标本采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)一步法扩增11个基因节段,并通过DNAStar, MEGA 11.0等生物信息分析软件进行同源性及进化分析。结果 JL18221140的全基因组11个节段的基因型为G9-P[8]-I1-R1-C1-M1-A2-N1-T1-E1-H1,NSP1基因型呈现DS-1样特征。系统发育分析显示VP7和VP4分别聚集在谱系G9-Ⅵ和P[8]-Ⅲ中。结论 JL18221140为G9P[8]基因型中罕见的G9P[8]-A2重配株,该基因型可能是由中国流行的G9P[8]-A1和G2P[4]-A2毒株共感染过程中基因组间重配产生的。表明对RVA持续监测并对全基因组测序的重要性,有利于了解我国RVA毒株的遗传变异情况,为今后病毒的防控和疫苗的研发提供更有效的基础数据。

关键词： A组轮状病毒全基因组测序 G9P[8] 变异重配

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融合表达新冠病毒S1与N蛋白的非复制型重组腺病毒的构建与鉴定

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病毒学报 2024年第2期40卷 225-232页

作者：毛彤瑶张鹏姜苏芮李丹地段招军传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000

体外构建融合表达新型冠状病毒(SARS-CoV-2)S1抗原与N抗原的复制缺陷型重组腺病毒疫苗,为深入开展该疫苗免疫原性的研究提供基础。利用Overlap PCR和同源重组方法构建插入SARS-CoV-2的S1-N基因的重组腺病毒质粒pKAd5-S1-N,通过琼脂糖凝... 详细信息

体外构建融合表达新型冠状病毒(SARS-CoV-2)S1抗原与N抗原的复制缺陷型重组腺病毒疫苗,为深入开展该疫苗免疫原性的研究提供基础。利用Overlap PCR和同源重组方法构建插入SARS-CoV-2的S1-N基因的重组腺病毒质粒pKAd5-S1-N,通过琼脂糖凝胶电泳、多酶切、测序等方法鉴定重组质粒正确性;重组质粒转染HEK293A细胞获得病毒毒种AdV5-S1-N并扩增,氯化铯密度梯度离心法纯化病毒,有限稀释分析法测病毒滴度,Western blot方法验证AdV5-S1-N重组腺病毒S1-N融合蛋白表达情况;将AdV5-S1-N疫苗通过肌肉注射途径免疫BALB/c小鼠,第14d采集颌下静脉血,ELISA法检测血清针对S1和N蛋白抗原的特异性抗体滴度。成功获得滴度为9.45×10^(11)IU/mL的重组腺病毒AdV5-S1-N。Western blot结果发现:AdV5-S1-N感染细胞后,融合蛋白可正常表达,与抗S1蛋白及抗N蛋白抗体均有特异结合。ELISA结果显示免疫重组腺病毒的小鼠可产生针对S1和N蛋白的特异性IgG抗体。应用复制缺陷型腺病毒载体成功获得融合表达SARS-CoV-2 Omicron突变株S1-N蛋白的高滴度重组腺病毒,该重组病毒能在小鼠诱导针对S1和N蛋白的特异性免疫应答,为后续深入研究和评价该候选疫苗奠定了基础。

关键词：新型冠状病毒腺病毒载体疫苗体液免疫融合表达

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2021—2022年我国风疹流行病学及其病毒基因特征分析

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中华实验和临床病毒学杂志 2024年第1期38卷 49-57页

作者：钱程刘莹蔡建林崔爱利李立群范丽霞刘李周淑洁陈瑛崔晓娴毛乃颖张燕朱贞传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室、国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室、WHO西太平洋地区麻疹/风疹参比实验室、中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 云南省疾病预防控制中心昆明650022 青海省疾病预防控制中心西宁810007 四川省疾病预防控制中心成都610041 安徽省疾病预防控制中心合肥230061 甘肃省疾病预防控制中心兰州730030 上海市疾病预防控制中心上海200336

目的了解2021—2022年间风疹流行病学及其病毒基因特征, 为我国风疹防控提供基础科学数据。方法自中国疾病预防控制信息系统中的传染病监测模块和监测报告管理模块获取2021—2022年间全国风疹发病数据;从全国麻疹/风疹实验室网络获得阳... 详细信息

目的了解2021—2022年间风疹流行病学及其病毒基因特征, 为我国风疹防控提供基础科学数据。方法自中国疾病预防控制信息系统中的传染病监测模块和监测报告管理模块获取2021—2022年间全国风疹发病数据;从全国麻疹/风疹实验室网络获得阳性风疹病毒(rubella virus, RuV)分离株, 通过逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)扩增并测定位于E1基因的两个核苷酸(nucleotide, nt)片段[F1-480(8 633~9 112 nt)和F2-633(8 945~9 577 nt)], 整理拼接后获得靶基因序列(E1-739), 将其与已报道的基因型/亚型参考株构建系统发育树以鉴定基因型别, 同时从GenBank数据库中下载我国2018—2020年间流行的RuV病毒株序列开展系统发育分析。结果 2021—2022年我国风疹发病率均为0.06/10万(2021年:840例;2022年:784例), 病例主要集中于西部和南部省份。病例年龄分布分析显示, 2021—2022年风疹发病主要以<5岁儿童为主(2021年:34.17%, 287/840;2022年:42.09%, 330/784), 其中以0~2岁患儿占比最高。进一步分析病例免疫史发现, 8~23月龄的病例中, 仅接种了1剂次含风疹成分的疫苗(rubella containing vaccine, RCV)幼儿的发病比例较高;2~14岁年龄组病例主要分布在接种了2剂次或以上RCV的儿童中;然而, >15岁病例主要集中在未接种RCV或免疫史不详的人群中。全国病毒学监测数据显示, 2021—2022年间从我国6个省市共获得22株RuV病毒分离株, 分属于1E-L2(11株)和2B-L2c(11株)基因亚型, 并与2018—2020年间流行的RuV病毒株具有很高的同源性。结论 2021—2022年间我国风疹发病维持在较低水平, 流行的RuV为1E-L2和2B-L2c基因亚型。

关键词：风疹流行病学基因特征

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人呼吸道合胞病毒中和抗体检测方法的建立与初步应用

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中华预防医学杂志 2024年第7期58卷 959-966页

作者：张丽李海曹蕾胡宏俏王娜李海鑫江洁毛乃颖李晓梅张燕山东第一医科大学(山东省医学科学院)公共卫生与健康管理学院济南250117 传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室、国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室、中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

目的建立用于人呼吸道合胞病毒(HRSV)中和抗体滴度检测的噬斑减少中和实验(PRNT),并进行条件优化与初步应用。方法应用CHO表达系统制备帕利珠单克隆抗体(Palivizumab),同时对细胞种类、细胞培养时间、固定通透方法、封闭方法等影响因素... 详细信息

目的建立用于人呼吸道合胞病毒(HRSV)中和抗体滴度检测的噬斑减少中和实验(PRNT),并进行条件优化与初步应用。方法应用CHO表达系统制备帕利珠单克隆抗体(Palivizumab),同时对细胞种类、细胞培养时间、固定通透方法、封闭方法等影响因素进行优化。验证该方法的重复性,并与传统PRNT验证其相关性。利用优化的PRNT方法检测BALB/c小鼠血清(融合蛋白肌肉注射免疫)对HRSV A和B亚型的中和抗体滴度。结果Palivizumab的表达量约为50 mg/L。PRNT的最佳工作条件为:培养细胞为HEp-2细胞,细胞培养时间为2 d,最佳固定通透方式为4%(V/V)多聚甲醛室温固定15 min后0.2%(V/V)Triton X-100通透15 min,去掉封闭步骤。优化后该方法的重复性验证总体变异系数均<15%,与传统PRNT呈现良好的线性关系,Spearman相关系数rs高达0.983。在检测小鼠血清对HRSV A亚型long株和B亚型9320株的中和抗体滴度时,融合蛋白联合AlOH和CpG佐剂诱导小鼠产生的中和抗体滴度最高。结论本研究建立的HRSV中和抗体检测方法快速、可重复、高通量,能够适用于A、B亚型HRSV的中和抗体检测。

关键词：人呼吸道合胞病毒免疫染色噬斑减少中和实验中和抗体

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2017—2021年河南省漯河市急性呼吸道感染病例肠道病毒感染型别分析

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中华预防医学杂志 2023年第3期57卷 378-385页

作者：李汶霞谢智博徐瑾夏百成段鸿渐宋金华王慧玲许文波张燕范华山东第一医科大学(山东省医学科学院)公共卫生与健康管理学院济南250117 国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室、中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 河南省疾病预防控制中心免疫预防与规划所郑州450016

目的了解2017—2021年河南省漯河市急性呼吸道感染(ARIs)病例中肠道病毒(EV)的感染状况,分析EV在ARIs中的流行情况及型别组成。方法于2017年10月至2021年5月,采集河南省漯河市中心医院1828例ARIs患者的咽拭子样本,并收集相关临床流行病... 详细信息

目的了解2017—2021年河南省漯河市急性呼吸道感染(ARIs)病例中肠道病毒(EV)的感染状况,分析EV在ARIs中的流行情况及型别组成。方法于2017年10月至2021年5月,采集河南省漯河市中心医院1828例ARIs患者的咽拭子样本,并收集相关临床流行病学资料。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)筛选EV阳性样本,随后对阳性样本采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增5′非翻译区(5′UTR),使用Enterovirus Genotyping Tool在线定型工具初步定型后采用RT-PCR法进行VP1区全长扩增,再次比对确定EV分型。结果1828例ARIs病例中,男性占56.7%(1036例);年龄M(Q1,Q3)为3(1,5)岁;5岁以下人群占71.6%(1309例)。1828例ARIs病例中,通过qPCR检测鉴定EV阳性样本共有71例,检出率为3.88%(71/1828);男、女性EV检出率分别为3.28%(34/1036)和4.67%(37/792),差异无统计学意义(χ^(2)=2.32,P=0.14)。2~<6岁、6月龄~<2岁、6~<10岁和<6月龄的EV检出率依次为6.29%(48/763)、3.00%(18/600)、2.52%(4/159)和1.67%(1/60)(χ^(2)=27.91,P<0.001)。2017年秋、冬季EV检出率为0.92%(3/326);2018—2020年各年EV检出率依次为1.18%(6/508)、2.47%(12/485)和8.31%(34/409),呈逐年上升趋势(χ_(趋势)^(2)=29.76,P<0.001),主要流行季节为夏、秋季;2021年春季检出率为4.00%(4/100)。共鉴定出12种型别:CVA2、CVA4、CVA5、CVA6、CVA10、CVB3、CVB5、E5、E11、E30、PV-1和EV-D68,其中CVA2、CVA10、CVA6和CVB3为优势型别。59例EV分型样本中,临床表现以上呼吸道感染为主(36/59,61.01%)。上呼吸道感染检出的优势型别为CVA10(10/36,27.78%)、CVA6(9/36,25.00%)和CVB3(8/36,22.22%);下呼吸道感染中检出的优势型别为CVA2(7/19,36.84%)。结论2017—2021年河南省漯河市ARIs病例中EV感染具有明确的季节性和年龄特征,上、下呼吸道感染所检出的优势型别有所不同。

关键词：肠道病毒呼吸道感染病原谱

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柯萨奇病毒A10型对利巴韦林耐药性的初步研究

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病毒学报 2024年第2期40卷 337-345页

作者：孙甜甜宗彦君王蕊李冀琛刘莹李晓亮韩振志于力恒刘志军孙强张勇潍坊医学院潍坊261053 传染病溯源预警和智能决策全国重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 国家脊髓灰质炎实验室国家卫生健康委员会实验室生物安全重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒与病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 山东第一医科大学济南250117 首都儿科研究所病毒学研究室儿童病毒病病原学北京市重点实验室北京100020

近年来,全国范围内手足口病(Hand, foot, and mouth disease,HFMD)的感染率逐渐上升,其中柯萨奇病毒A组10型(Coxsackievirus A10,CV-A10)是主要病原体之一,利巴韦林是临床上治疗儿童手足口病的常用药物之一。为了评价利巴韦林在体外对CV... 详细信息

近年来,全国范围内手足口病(Hand, foot, and mouth disease,HFMD)的感染率逐渐上升,其中柯萨奇病毒A组10型(Coxsackievirus A10,CV-A10)是主要病原体之一,利巴韦林是临床上治疗儿童手足口病的常用药物之一。为了评价利巴韦林在体外对CVA10的抑制效果,本研究中,我们随机选取了19条2009-2021年的不同地区和不同年代的有代表性的中国内地优势流行基因型C基因型的CVA10毒株,通过细胞毒性实验(Cell counting kit-8,CCK8)来检测利巴韦林在RD细胞上对CVA10的抑制率。将抑制率大于85%的CVA10定义为对利巴韦林敏感组,抑制率小于15%的CVA10定义为对利巴韦林耐药组。结果显示利巴韦林在0.78mmol/L浓度下可以对CVA10产生较好的抑制作用并且对细胞的毒性较低。19株CVA10中有4株表现出对利巴韦林耐药性,2株表现出对利巴韦林敏感性,剩余13株的敏感性在85%~15%之间。通过7日龄ICR乳鼠感染实验比较对利巴韦林敏感组和耐药组毒株的致病力差异,通过观察乳鼠临床评分、生存率、体重及组织取材的滴度测定结果均表明对利巴韦林敏感组CVA10在小鼠上的致病力比耐药组强。进一步使用MEGA 7.0软件对影响CVA10复制和翻译的2C区氨基酸序列进行差异性分析,以分析可能的耐药位点。结果显示对利巴韦林耐药组和敏感组CVA10的2C区的327位和328位氨基酸位点存在差异。本研究发现当前国内流行的CVA10存在广泛对利巴韦林耐药现象,其中部分CVA10对利巴韦林完全耐药。因此,有必要加强对CVA10耐药株的监测,以便更好地指导临床医生正确地选择抗病毒药物,为个体化的治疗提供理论依据。

关键词：柯萨奇病毒A10型利巴韦林耐药性 2C区差异位点

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水痘带状疱疹病毒gE-Foldon融合蛋白的表达及免疫效果的分析

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病毒学报 2024年第2期40卷 314-325页

作者：李海鑫曹蕾郭晋源孙馨胡宏俏时雨晴张丽武婕慧谢智博张瑶张燕李海李栋山东第一医科大学山东省医学科学院公共卫生与健康管理学院济南250117 国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

水痘带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)是引起全球老年人带状疱疹(Herpes zoster,HZ)的主要病原体,VZV gE蛋白是诱导机体产生免疫应答的主要结构蛋白,基于gE蛋白设计的重组蛋白疫苗Shingrix已经在我国批准上市。多种研究表明聚... 详细信息

水痘带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)是引起全球老年人带状疱疹(Herpes zoster,HZ)的主要病原体,VZV gE蛋白是诱导机体产生免疫应答的主要结构蛋白,基于gE蛋白设计的重组蛋白疫苗Shingrix已经在我国批准上市。多种研究表明聚体蛋白可以诱导更强的免疫应答,本研究应用中国仓鼠卵巢细胞CHO-S表达连接Foldon结构域的蛋白(gE-Foldon)、连接Fc片段的蛋白(gE-Fc)和gE蛋白。三种抗原(gE-Foldon、gE-Fc和gE)分别联合AlOH+CpG佐剂,比较在BALB/c小鼠中的免疫效果,同时,将商品化的Shingrix作为对照。SDS-PAGE和WB结果显示成功表达纯化三种抗原,非还原条件下可以观察到gE-Foldon以三聚体形式存在。与gE和gE-Fc抗原相比,gE-Foldon在小鼠中诱导产生的IgG抗体(40492)和中和抗体滴度(1190.5)最高(P<0.01),与Shingrix相当。此外gE-Foldon诱导小鼠产生的分泌IL-2、IL-4的淋巴细胞数量显著高于其他免疫组(P<0.0001,P<0.05)。综上所述,gE-Foldon蛋白联合AlOH+CpG佐剂可诱导较强的体液和细胞免疫应答,因此可以作为预防HZ的潜在候选疫苗。

关键词：水痘带状疱疹病毒 gE-Foldon蛋白免疫效果

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表达水痘-带状疱疹病毒gE蛋白的复制缺陷型重组腺病毒的构建

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病毒学报 2025年第1期41卷 48-58页

作者：杨梦瑶柴鹏弟章青宋敬东裴银辉段招军华北理工大学基础医学院河北省慢性疾病基础医学重点实验室唐山063000 传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

体外构建表达水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)糖蛋白E(Glycoprotein E,gE)的复制缺陷型人26型重组腺病毒疫苗,并进行重组病毒免疫原性的初步评价。利用同源重组的方法将gE原始信号肽序列替换成tPA组织纤溶酶原激活剂(Tis... 详细信息

体外构建表达水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)糖蛋白E(Glycoprotein E,gE)的复制缺陷型人26型重组腺病毒疫苗,并进行重组病毒免疫原性的初步评价。利用同源重组的方法将gE原始信号肽序列替换成tPA组织纤溶酶原激活剂(Tissue plasminogen activator,tPA)信号序列(tPA-gE),将目的片段基因(tPA-gE)连接到腺病毒载体Ad26-empty得到重组腺病毒质粒Ad26-tPA-gE。线性化的重组腺病毒质粒转染至HEK293A细胞进行病毒包装与扩增,利用氯化铯密度梯度离心法纯化病毒,基于腺病毒六邻体蛋白质测定病毒滴度,Western blot验证重组腺病毒中tPA-gE表达情况,电镜检测重组病毒大小与形态。重组病毒(Ad26-tPA-gE)通过肌肉注射免疫C57BL/6N小鼠,第8周后下颌采血通过间接ELISA检测小鼠血清中特异性的抗gE的抗体效价评价体液免疫,ELISPOT检测小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ及IL-2情况观察细胞免疫。纯化得到滴度为7.2×10^(10)ifu/mL的重组腺病Ad26-tPA-gE,Western blot验证重组病毒感染的细胞能够正常表达gE,电镜检测病毒大小均一,形态完整。重组腺病毒疫苗Ad26-tPA-gE可成功诱导小鼠产生抗gE特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体,以及淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-2。成功构建了表达VZV gE的复制缺陷型重组腺病毒,免疫C57BL/6N小鼠后有效激活体液及细胞免疫反应,为后续基于腺病毒载体的带状疱疹疫苗研究提供基础。

关键词：水痘-带状疱疹病毒带状疱疹疫苗糖蛋白E 人26型腺病毒载体

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