检索结果-内蒙古大学图书馆

双波长分子排阻色谱测定半胱氨酸偶联一甲基澳瑞他汀E抗体药物偶联物的药物抗体偶联比

药物分析杂志 2018年第8期38卷 1432-1436页

作者：王文波武刚崔永菲于传飞王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室北京100050

目的:建立双波长分子排阻色谱(SEC)测定抗体药物偶联物(ADC)的药物抗体偶联比(DAR)的方法。方法:采用凝胶色谱柱,柱温25℃,以0.1 mol·L^(-1)磷酸盐-0.1 mol·L^(-1)氯化钠缓冲液为流动相对100μg样品进行等度洗脱,流速1.0 mL&#... 详细信息

目的:建立双波长分子排阻色谱(SEC)测定抗体药物偶联物(ADC)的药物抗体偶联比(DAR)的方法。方法:采用凝胶色谱柱,柱温25℃,以0.1 mol·L^(-1)磷酸盐-0.1 mol·L^(-1)氯化钠缓冲液为流动相对100μg样品进行等度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1),在248 nm及280 nm双波长下分别对ADC的小分子药物和抗体进行检测;采用紫外分光光度计在248 nm及280 nm处进行吸收度测量。结果:双波长SEC可准确地对ADC的DAR进行测定,测得的DAR为4.17,RSD为0.24%;紫外分光光度(UV)法测得的DAR为3.97,RSD为2.8%。结论:双波长SEC检测可用于ADC样品的DAR测定,同时可对样品的大小异构体进行分析。SEC及UV 2种方法测得的DAR结果相似,都可用于ADC的药物抗体偶联比分析。

关键词：抗体药物偶联物半胱氨酸澳瑞他汀药物抗体偶联比分子排阻色谱紫外分光光度法

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一种抗TNFα单抗不同粒径级别蛋白聚体监测结果的比较与评价

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中国药事 2018年第8期32卷 1073-1078页

作者：郭莎张峰刘春雨于传飞李萌王文波付志浩俞小娟王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室北京100050

目的:探讨在单克隆抗体(单抗)稳定性研究中,分子排阻高效液相色谱法(size exclusion-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)、微流数字成像(microflow digital imaging,MDI)技术、澄清度及可见异物检查在不同粒径级别蛋白聚体监测中的交互作用。方法:分别采用SEC-HPLC、MDI、澄清度及可见异物检查研究肿瘤坏死因子α(TNFα)靶点单抗在4℃储存6个月、37℃和6000 lx光照条件下储存28 d后,蛋白聚体、不溶性微粒、澄清度及可见异物的不同变化。结果:SEC-HPLC结果表明,与样品在4℃储存6个月的结果相比,抗TNFα单抗的蛋白聚体含量在37℃和6000 lx照度处理28d后均增加均不明显。使用MDI技术可见,抗TNFα单抗经37℃和6000 lx照度处理28 d后,1~10μm、10μm以上、25μm及以上粒径的微粒数量比在4℃储存6个月的样品有明显增多,且增多的微粒主要为蛋白聚体。通过目视法对样品的澄清度和可见异物检查发现,37℃储存和6000 lx照度处理28 d后的抗TNFα单抗澄清度低于4℃储存的样品;各储存条件下的抗TNFα单抗均未检出可见异物。结论:在单抗稳定性研究中,纳米级、微米级蛋白聚体的形成上并不具有一致性,因此,应采用多种方法对蛋白聚集情况进行表征和分析,避免单一方法的局限。

关键词：单克隆抗体稳定性研究蛋白聚体分子排阻高效液相色谱法微流数字成像技术

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过滤对一种IgG2亚型EGFR单抗中不溶性微粒的影响

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中国药事 2018年第9期32卷 1245-1250页

作者：郭莎张峰刘春雨于传飞李萌王文波付志浩俞小娟王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室北京102629

目的:探讨过滤操作对一种免疫球蛋白G2(immunoglobin G2,IgG2)亚型表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)单克隆抗体(单抗)生物类似药(similar biotherapeutic product,SBP)候选药中不溶性微粒的影响。方法:利用微流数字成像(microflow digital imaging,MDI)技术对某厂家生产的Ig G2亚型EGFR单抗SBP候选药与其原研药(reference biotherapeutic product,RBP)中不同粒径的不溶性微粒进行比较;采用0.22μm的滤器对EGFR单抗SBP候选药进行过滤,并采用MDI法立即对不同粒径和性质的不溶性微粒进行检测和分析;再将过滤后的EGFR单抗SBP候选药在室温静置2 h,并采用MDI法对不同粒径和性质的不溶性微粒进行检测和分析。结果:某Ig G2亚型EGFR单抗SBP候选药中不同粒径的不溶性微粒数量明显高于RBP;用0.22μm的滤器过滤后,EGFR单抗SBP候选药中的不溶性微粒数由8.51×105粒·m L-1降为1.52×104粒·m L-1,且主要成分蛋白聚体、气泡和纤维均明显减少;室温静置2 h后,其中的不溶性微粒数由1.52×104粒·m L-1增加至3.23×104粒·m L-1,且增加的微粒主要为蛋白聚体。结论:与原研药相比,该EGFR单抗SBP候选药蛋白聚体水平较高,过滤后有明显改善,但随着放置时间延长,蛋白聚体含量又有明显增加。这提示我们需加强研发,以提高SBP候选药的产品质量、安全性和有效性。

关键词：单克隆抗体过滤不溶性微粒蛋白聚体微流数字成像技术

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治疗性单克隆抗体电荷异质性分析方法比较

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药物分析杂志 2017年第8期37卷 1383-1388页

作者：王文波武刚于传飞张峰刘春雨李萌陈伟郭莎高凯王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室北京100050

目的:对4种常用的单抗电荷异质性分析方法进行比对研究。方法:以重组抗TNFα全人源单克隆抗体为例,分别利用离子交换色谱(IEC)、毛细管区带电泳(CZE)、毛细管等电聚焦电泳(CIEF)和成像毛细管等电聚焦电泳(iCIEF)4种方法对该抗体的电荷... 详细信息

目的:对4种常用的单抗电荷异质性分析方法进行比对研究。方法:以重组抗TNFα全人源单克隆抗体为例,分别利用离子交换色谱(IEC)、毛细管区带电泳(CZE)、毛细管等电聚焦电泳(CIEF)和成像毛细管等电聚焦电泳(iCIEF)4种方法对该抗体的电荷异质性进行分析;利用CIEF和iCIEF 2种方法对抗体主峰等电点(pI)进行分析。结果:4种方法能够对重组抗TNFα全人源单克隆抗体的电荷异构体进行有效的分离和定量,其中IEC和CZE 2种方法检测的电荷异构体峰面积百分比(酸性峰、主峰和碱性峰)较为一致,4种方法检测的碱性峰比例较一致,CIEF和iCIEF检测的主峰与酸性峰比例较其他方法偏高。CIEF和iCIEF检测抗体主峰等电点具有一定差异,其中,聚焦时间长短和pI Marker的选择是影响单抗pI值检测的主要因素。结论:通过抗体电荷异质性分析方法的比较研究可见,在单抗电荷异构体比例和主峰pI测定上4种方法具有一定的差异。对单抗的质控应结合产品特性和表征研究,合理选择电荷异质性分析方法。

关键词：单克隆抗体电荷异质性等电点质量控制毛细管电泳离子交换色谱

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光阻法检测治疗性抗体不溶性微粒的取样方式探讨

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药物分析杂志 2017年第8期37卷 1370-1376页

作者：郭莎曹俊霞倪永波于传飞刘春雨李萌张峰王文波陈伟高凯王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室北京100050

目的:考察不同取样方式对光阻法检测小装量治疗性抗体不溶性微粒的影响。方法:采用光阻法对体积小于25 m L的19个靶点65个批次治疗性抗体中≥2μm、≥10μm和≥25μm的不溶性微粒进行检测,将抗体分为3组,取样方式分别为单支样品不同取... 详细信息

目的:考察不同取样方式对光阻法检测小装量治疗性抗体不溶性微粒的影响。方法:采用光阻法对体积小于25 m L的19个靶点65个批次治疗性抗体中≥2μm、≥10μm和≥25μm的不溶性微粒进行检测,将抗体分为3组,取样方式分别为单支样品不同取样体积(0.5、1、3 m L)检测与合并样品(取样体积5 m L)检测,合并样品不同取样体积(0.5、1、3、5 m L)检测,以及合并样品后稀释(稀释20、10、5倍)检测与合并样品原倍检测。结果:对于≥2μm、≥10μm、≥25μm的不溶性微粒,不管是采用单支样品不同取样体积还是采用合并样品后不同取样体积,与合并样品后每次取样5 m L的不溶性微粒检测结果相比,均没有统计学意义上的差异;且≥2μm不溶性微粒的取样体积变异小于≥10μm、≥25μm的不溶性微粒。合并样品后稀释检测的结果则与合并样品检测的结果具有统计学差异,且稀释后的结果要高于未稀释的结果,稀释倍数越大,与未稀释结果的差异也越大。结论:采用光阻法对体积小于25 m L的小装量治疗性抗体进行不溶性微粒检测时,为节省样品并减少外源微粒污染,不管单支取样还是合并取样,均可首先考虑选择小于5 m L的单次取样体积进行检测,而对合并后稀释检测的方式应慎重选择。

关键词：药品检验取样方法光阻法治疗性抗体不溶性微粒小装量取样体积稀释检测

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重组抗埃博拉病毒单克隆抗体质控方法的建立

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中国药学杂志 2016年第1期51卷 46-51页

作者：王文波王兰于传飞张峰刘春雨李萌陈伟高凯中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室北京100050

目的重组抗埃博拉病毒抗体是由3种抗埃博拉病毒包膜糖蛋白(GP)的单抗组成的复方抗体,本实验分别对3种重组单抗的质控方法进行研究。方法利用ELISA方法测定重组抗埃博拉病毒单抗的结合活性;利用LC-MS肽图法对其进行鉴别;CE-SDS和SE-HPLC... 详细信息

目的重组抗埃博拉病毒抗体是由3种抗埃博拉病毒包膜糖蛋白(GP)的单抗组成的复方抗体,本实验分别对3种重组单抗的质控方法进行研究。方法利用ELISA方法测定重组抗埃博拉病毒单抗的结合活性;利用LC-MS肽图法对其进行鉴别;CE-SDS和SE-HPLC测定纯度;i CIEF法测定等电点及电荷异质性;切糖后对N-糖进行2AB标记,用正向色谱结合质谱对其糖型和含岩藻糖修饰糖型比例分析;利用高效液相色谱法测定其聚山梨酯20含量。结果 3种重组抗埃博拉病毒单抗结合活性的EC50为(12.53±1.62)、(11.10±0.62)、(6.09±0.35)ng·m L^(-1);LC-MS肽图法测定一级序列覆盖率均大于95%;非还原CE-SDS主峰纯度分别为(94.41±0.05)%、(95.58±0.17)%、(96.11±0.05)%;还原CE-SDS重链和轻链纯度之和分别为(98.19±0.06)%、(97.97±0.03)%、(98.57±0.03)%;SE-HPLC主峰分别为(99.59±0.01)%、(99.56±0.01)%、(99.74±0.01)%;i CIEF分析主峰等电点为(8.70±0.01)、(8.26±0.01)、(8.85±0.01);3种单抗聚山梨酯20含量分别为(0.34±0.00)、(0.35±0.00)、(0.35±0.01)mg·m L^(-1);LC-MS对N糖谱分析相对灵敏,3种单抗含岩藻糖糖型比例均小于0.5%。结论本实验的质控方法研究运用了现代化质控理念,建立的质控方法具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,为突发状况下埃博拉疫情防控提供了用药储备的技术支持,也为其他组合抗体的质量控制积累了经验。

关键词：重组抗埃博拉病毒单克隆抗体质量控制肽图法

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应用生物膜干涉技术测定治疗性单抗与新生儿Fc受体的亲和力

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中国新药杂志 2016年第16期25卷 1861-1867页

作者：张峰武刚于传飞王文波高凯王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室

目的:建立基于生物膜干涉（Biolayer interferometry,BLI）技术检测治疗性单抗与新生儿Fc受体（neonatal Fc receptor,FcRn）亲和力的方法。方法:链霉亲和素（streptavidin,SA）偶联传感器结合生物素标记FcRn后,使用稀释液（0.1%BSA/0.0... 详细信息

目的:建立基于生物膜干涉（Biolayer interferometry,BLI）技术检测治疗性单抗与新生儿Fc受体（neonatal Fc receptor,FcRn）亲和力的方法。方法:链霉亲和素（streptavidin,SA）偶联传感器结合生物素标记FcRn后,使用稀释液（0.1%BSA/0.05%Tween20/PBS,p H 6.0）封闭传感器后采用BLI方法检测,以稀释液1∶2系列稀释样品(浓度范围为125;6 000 nmol·L;),空白对照采用未结合FcRn的传感器检测上述系列稀释样品。结果采用Steady state analysis方式拟合,计算样品平衡常数（KD）值,计算样品各自的95%可信区间（confidence interval,CI）,对不同抗体与FcRn的亲和力进行比较。结果:Ig G-FcRn结合曲线呈现明显的快结合-快解离形态。应用建立的方法检测不同单抗与FcRn的亲和力结果:bevacizumab与FcRn的亲和力较trastuzumab高95%,存在显著性差异;bevacizumab生物类似药（similar biotherapeutic products,SBP）-1与FcRn亲和力较原研药（reference biotherapeutic products,RBP）有32%的升高,且有显著性差异。其他Cys-偶联药物前后、Lys-偶联药物前后、表达细胞系由SP2/0更换为CHO均未对Ig G-FcRn亲和力产生影响。结论:建立了优化的基于生物膜干涉技术检测Ig G抗体与FcRn亲和力测定方法,可用于单抗及抗体偶联药物与FcRn亲和力的评价。

关键词：单克隆抗体 FcRn 生物膜干涉亲和力

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抗体偶联药物抗HER2单抗-MCC-DM1质控方法的建立

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药物分析杂志 2016年第1期36卷 22-30页

作者：李萌于传飞王文波朱磊刘春雨张峰陈伟王兰高凯王军志中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的:建立抗体偶联药物(ADC)抗人表皮生长因子受体-2(HER2)单抗-马来酰亚胺基-环己烷-1-羧化物(MCC)-美登素衍生物(DM1)(trastuzumab-DM1,T-DM1)的质控方法。方法:利用人乳腺癌BT-474细胞增殖抑制实验测定T-DM1的生物学活性;利用生物分... 详细信息

目的:建立抗体偶联药物(ADC)抗人表皮生长因子受体-2(HER2)单抗-马来酰亚胺基-环己烷-1-羧化物(MCC)-美登素衍生物(DM1)(trastuzumab-DM1,T-DM1)的质控方法。方法:利用人乳腺癌BT-474细胞增殖抑制实验测定T-DM1的生物学活性;利用生物分子间相互作用分析核心技术(biomolecular interaction analysis core-technology,BIAcore)测定其结合常数(KD);利用HER2抗原和抗DM1抗体双夹心酶联免疫法(ELISA)对T-DM1进行鉴别;利用液质联用法和紫外分光光度法测定药物抗体偶联比(DAR);利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定游离药物DM1的含量;利用十二烷基磺酸钠-毛细管凝胶电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate,CE-SDS)和分子排阻色谱(size exclusion-high performance liquid chromatography,SE-HPLC)分析纯度;利用成像毛细管等点聚焦电泳(i CIEF)分析电荷异质性,其他各项指标均符合现行版中国药典的要求及其他相关要求。结果:T-DM1生物学活性相对效价为(94.04±2.60)%,KD为(1.03±0.02)E-9 mol·L-1,RSD均小于5%;ELISA鉴别为阳性;液质联用法和紫外分光光度法测得的DAR分别为3.21及3.25;RP-HPLC法测定游离药物DM1的含量为(0.822 2±0.050 5)%,RSD小于10%;非还原CE-SDS主峰面积为(96.63±0.07)%,RSD为0.07%;SE-HPLC主峰面积为(97.65±0.005 8)%,RSD为0.005 8%;i CIEF分析可以将每个偶联数的抗体药物分开,达到很好的鉴别。结论:建立ADC中T-DM1质控方法具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,为我国ADC的质量检测提供了参考依据。

关键词：抗体偶联药物(ADC) 抗HER2单抗-MCC-DM1(T-DM1) 曲妥珠单抗美登素药物抗体偶联比生物学活性酶联免疫(ELISA) 鉴别纯度测定

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完整蛋白分子筛色谱串联质谱测定药物抗体偶联比

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药物分析杂志 2016年第1期36卷 31-35页

作者：于传飞王文波张峰刘春雨李萌陈伟郭莎王兰高凯王军志中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室北京100050

目的:建立完整蛋白分子筛色谱串联质谱分析方法对一种基于半胱氨酸偶联的抗体偶联药物(ADC)的药物抗体偶联比(DAR)进行测定。方法:采用Poly LC PHEA色谱柱,利用p H为7.0的200 mmol·L-1乙酸铵溶液为流动相对脱糖样品进行脱盐,通过... 详细信息

目的:建立完整蛋白分子筛色谱串联质谱分析方法对一种基于半胱氨酸偶联的抗体偶联药物(ADC)的药物抗体偶联比(DAR)进行测定。方法:采用Poly LC PHEA色谱柱,利用p H为7.0的200 mmol·L-1乙酸铵溶液为流动相对脱糖样品进行脱盐,通过串联质谱对含有不同数目药物的ADC组分进行测定。结果:所测定的DAR为4.16±0.10,相对标准差为2.40%,且均能显示含不同数目药物的ADC组分的相对比例。结论:完整蛋白分子筛色谱串联质谱分析可确定ADC中含不同数目药物的组分并对各组分进行定量,可用于基于半胱氨酸偶联的ADC的DAR分析。

关键词：抗体偶联药物药物抗体偶联比分子排阻色谱分子筛色谱柱质谱分析

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一种基于半胱氨酸偶联的抗体偶联药物的药物抗体偶联比测定

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中国新药杂志 2015年第20期24卷 2336-2340页

作者：于传飞王文波张峰刘春雨李萌陈伟郭莎王兰高凯王军志中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室

目的:建立了利用反相色谱(RP-HPLC)串联质谱对一种基于半胱氨酸偶联的抗体偶联药物(ADC)的药物抗体偶联比(DAR)进行测定的方法。方法:采用RP-HPLC方法,色谱柱为Varian公司的PLRP-S(50 mm×2.1 mm,5μm,1 000);流动相A为50 mmol... 详细信息

目的:建立了利用反相色谱(RP-HPLC)串联质谱对一种基于半胱氨酸偶联的抗体偶联药物(ADC)的药物抗体偶联比(DAR)进行测定的方法。方法:采用RP-HPLC方法,色谱柱为Varian公司的PLRP-S(50 mm×2.1 mm,5μm,1 000);流动相A为50 mmol·L-1磷酸钠-1.5 mol·L-1硫酸铵(p H 7.0);流动相B为75%50 mmol·L-1硫酸钠(p H 7.0)-25%异丙醇;梯度洗脱;柱温25℃;流速为0.8 m L·min-1;检测波长为280 nm。串联质谱对液相分离各组分进行定性分析。结果:所建立的RP-HPLC串联质谱分析方法可对各个峰组分进行定性定量,所测得的DAR为(4.0±0.1),标准差为2.5%。结论:基于PLRP-S色谱柱的RP-HPLC,无高浓度盐,不会对常规液相色谱系统造成污染,使用的是质谱兼容的流动相,能够兼顾质谱定性与液相定量,可用于基于半胱氨酸偶联的ADC的DAR测定。

关键词：抗体偶联药物药物抗体偶联比反相高效液相色谱法 PLRP-S色谱柱质谱分析

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