检索结果-内蒙古大学图书馆

b型流感嗜血杆菌结合疫苗游离多糖含量检测高效阴离子交换色谱-脉冲安培法的建立及验证

中国生物制品学杂志 2022年第1期35卷 79-84页

作者：赵丹李茂光毛琦琦李亚南陈苏京叶强中国食品药品检定研究院国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

目的建立b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)结合疫苗游离多糖含量检测的超速离心联合高效阴离子交换色谱-脉冲安培(high performance anion exchange chromatography with pulsed amperometric detector,HPAEC-PAD)法,并对该方法进行验证及初步应用。方法将供试品经超速离心后,收集上清获得游离多糖,加入水解液使供试品水解约16 h后,采用CarboPacPA-104 mm×250 mm分析柱与CarboPacPA-104 mm×50 mm保护柱,氢氧化钠-醋酸钠溶液梯度洗脱,检测供试品游离多糖含量。对该方法进行专属性、线性、精密度、稳定性、准确度验证,确定定量限。用建立的方法检测13个批次Hib结合疫苗游离多糖含量,同时与乙醇沉淀法进行比较。结果Hib多糖标准品在0.77~12.26μg/mL范围内,与峰面积呈良好的线性关系,测定5次,线性相关系数均大于0.995;方法定量限为1.875 ng/mL;精密度、稳定性的RSD均小于5%;高、中、低3个浓度的平均加标回收率为100.26%,RSD为3.96%。13个批次Hib结合疫苗中的游离多糖含量为6.76%~16.74%。结论该方法准确可靠,可用于检测Hib结合疫苗游离多糖含量,同时也为其他多糖蛋白结合疫苗游离多糖提取和检测提供了思路。

关键词：高效阴离子交换色谱-脉冲安培法超速离心 b型流感嗜血杆菌游离多糖

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毛细管电泳结合激光诱导荧光检测分析单抗N糖谱的方法学联合验证

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药物分析杂志 2022年第1期42卷 172-178页

作者：王文波武刚于传飞张峰王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

目的:对毛细管电泳结合激光诱导荧光(CE-LIF)检测单抗N糖谱方法进行多家实验室的联合验证。方法:依据国际人用药品注册技术协调会(ICH)Q2;1指导原则和2015年版《中华人民共和国药典》通则9101,开展方法学验证。评价指标包括专属性、线... 详细信息

目的:对毛细管电泳结合激光诱导荧光(CE-LIF)检测单抗N糖谱方法进行多家实验室的联合验证。方法:依据国际人用药品注册技术协调会(ICH)Q2;1指导原则和2015年版《中华人民共和国药典》通则9101,开展方法学验证。评价指标包括专属性、线性、准确度、精密度、定量限、范围和耐用性。结果:验证数据表明,该方法具有良好的特异性、准确性、精密性和耐用性。蛋白量在100~400μg范围内具有良好的线性,R;大于0.97,且回收率在81%~109%范围内。精密性评价结果显示,G0F、Man5、G1F(1,6)、G1F(1,3)和G2F的校正峰面积百分比和迁移时间的RSD值均小于10%。该方法的定量下限为0.016%,可对在0.016%~77.233%范围内的单个色谱峰进行准确定量分析。同时多个条件下的耐用性评价结果表明该方法具有耐用性,峰面积百分比的RSD小于9%,迁移时间的RSD小于0.1%。结论:组织开展了基于CE-LIF的检测单抗N糖谱的方法学联合验证,结果表明方法可行,可用于单抗N糖谱的检测。

关键词：单克隆抗体 N糖谱测定方法学验证毛细管电泳质量控制

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重组抗白细胞介素23单克隆抗体的质量研究

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中国新药杂志 2021年第19期30卷 1738-1745页

作者：付志浩武刚李萌崔永霏王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

目的:针对白细胞介素-23单克隆抗体(抗IL-23单抗)的关键质量属性建立质控方法。方法:采用基于反向高效液相色谱法(RP-HPLC)的肽图法进行鉴别;采用还原/非还原十二烷基磺酸钠毛细管电泳(CE-SDS)和分子排阻色谱(SEC-HPLC)进行纯度控制;采... 详细信息

目的:针对白细胞介素-23单克隆抗体(抗IL-23单抗)的关键质量属性建立质控方法。方法:采用基于反向高效液相色谱法(RP-HPLC)的肽图法进行鉴别;采用还原/非还原十二烷基磺酸钠毛细管电泳(CE-SDS)和分子排阻色谱(SEC-HPLC)进行纯度控制;采用成像毛细管等电聚焦电泳(icIEF)测定电荷异质性;采用RP-HPLC测定轻链95位天冬氨酸异构体(light chain isoAsp95,LC isoAsp95);采用基于U2OS IL23R/IL12RB1二聚化分析细胞的化学发光法测定生物学活性。其他各项指标均应符合《中华人民共和国药典》2015年版以及其他相关要求。结果:肽图检测具有特征图谱,起到很好的鉴别作用。还原CE-SDS的重链、非糖基化重链(nonglycosylated heavy chain, NGHC)和轻链峰面积之和百分比为(97.84±0.12)%,非还原CE-SDS主峰峰面积百分比为(97.23±0.11)%;SEC-HPLC单体的峰面积百分比为(99.26±0.005)%,总聚集体峰面积百分比为(0.71±0.005)%。icIEF分析的主峰的峰面积百分比为(73.83±0.29)%,酸性峰的峰面积百分比为(24.03±0.34)%,碱性峰的峰面积百分比为(2.10±0.09)%;供试品LC isoAsp95的百分比为(3.37±0.52)%;供试品相对于参比品的相对生物学活性为(102.25±8.47)%。结论:针对抗IL-23单抗的质量属性,研究建立质控方法并进行质量研究,确保产品的安全有效且质量可控,对抗IL-23单抗的质量控制具有借鉴意义。

关键词：抗白细胞介素23单克隆抗体银屑病肽图鉴别纯度测定生物学活性

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CE-SDS分析单克隆抗体大小异质性的方法优化及系统适用性对照品的研制

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中国药学杂志 2022年第24期57卷 2061-2066页

作者：李萌杨雅岚赵雪羽王文波武刚于传飞王兰中国食品药品检定研究院国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629

目的优化2015年版《中国药典》已收录的十二烷基硫酸钠毛细管电泳法(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfate,CE-SDS)用于单抗分子大小变异体测定,及制备CE-SDS的系统适用性对照品。方法优化2015年版《中国药典》CE-SDS的关... 详细信息

目的优化2015年版《中国药典》已收录的十二烷基硫酸钠毛细管电泳法(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfate,CE-SDS)用于单抗分子大小变异体测定,及制备CE-SDS的系统适用性对照品。方法优化2015年版《中国药典》CE-SDS的关键参数,包括样品缓冲液的pH及紫外检测波长;制备了CE-SDS的系统适用性对照品,开展了多个实验室间协作研究,并利用分子排阻色谱(size exclusion-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)、成像毛细管等电聚焦电泳(imaged capillary isoelectric focusing,iCIEF)及CE-SDS评价其长期稳定性(18个月)。结果优化了该方法的关键参数:样品缓冲液pH值为6.5,检测波长为214或220 nm;制备了CE-SDS的系统适用性对照品;协作标定非还原CE-SDS的主峰纯度为92.19%~94.77%,还原CE-SDS的非糖基化重链(non-glycosylated heavy chain,NGHC)含量/总重链含量为0.93%~1.66%;18个月的长期稳定性良好。结论修订了2015年版《中国药典》三部3127:单抗分子大小变异体测定法(CE-SDS法),并为该法研制了系统适用性对照品,收录于2020年版《中国药典》三部3127,助力相关企业的研发和质控。

关键词：单克隆抗体大小异质性十二烷基硫酸钠-毛细管电泳系统适用性对照品

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戊型肝炎疫苗效力国家参考品的制备

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中国生物制品学杂志 2023年第9期36卷 1127-1131,1137页

作者：高帆卞莲莲毛群颖梁争论吴星中国食品药品检定研究院、国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室、国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629

目的制备戊型肝炎疫苗(简称戊肝疫苗)效力国家参考品,用于戊肝疫苗效力的质量控制。方法选取1批戊肝疫苗为候选参考品原料,加入经筛选的冻干保护剂,分装、冻干后制备为候选参考品,进行均匀性和稳定性考察,并分发给4个实验室进行协作标... 详细信息

目的制备戊型肝炎疫苗(简称戊肝疫苗)效力国家参考品,用于戊肝疫苗效力的质量控制。方法选取1批戊肝疫苗为候选参考品原料,加入经筛选的冻干保护剂,分装、冻干后制备为候选参考品,进行均匀性和稳定性考察,并分发给4个实验室进行协作标定和适用性研究。结果选择5%海藻糖+2%右旋糖酐作为冻干保护剂制备候选参考品。候选参考品的分装精度为0.7%;抗原含量均匀性变异系数(coefficient of variation,CV)为9.0%;铝含量均匀性CV为4.0%。水分含量为1.7%。候选参考品具有较好的加速稳定性和复溶稳定性。协作标定共获得18个有效数据,结果显示候选参考品半数有效量(median effective dose,ED50)均值为0.15μg(95%置信区间为0.12~0.18μg),实验室内CV为30.8%~64.2%,实验室间CV为32.6%。2家实验室自行研制的戊肝疫苗与候选参考品均表现出良好的剂量效应关系,阳转率均随疫苗抗原含量减少而降低,曲线变化趋势相近。结论首次制备了戊肝疫苗效力国家参考品(300031-201801),用于戊肝疫苗效力ED50检测质量控制。

关键词：戊型肝炎疫苗体内效力国家参考品

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以CD79b为靶点抗体偶联药物的质量研究

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药物分析杂志 2023年第10期43卷 1727-1736页

作者：李萌赵雪羽武刚杜加亮王文波郭璐韵龙彩凤杨雅岚付志浩俞小娟刘春雨段茂芹徐刚领于传飞王兰中国食品药品检定研究院国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室、国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629 中国药科大学南京211198

目的:建立抗体偶联药物(ADC)抗CD79b单抗-vc-MMAE(维泊妥珠单抗)的质控方法。方法:采用细胞杀伤法测定抗CD79b单抗-vc-MMAE的生物学活性;采用表面等离子共振法(SPR)测定其亲和力参数(K_(D));采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定其与CD79... 详细信息

目的:建立抗体偶联药物(ADC)抗CD79b单抗-vc-MMAE(维泊妥珠单抗)的质控方法。方法:采用细胞杀伤法测定抗CD79b单抗-vc-MMAE的生物学活性;采用表面等离子共振法(SPR)测定其亲和力参数(K_(D));采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定其与CD79b的相对效价;对抗CD79b单抗及抗CD79b单抗-vc-MMAE进行肽图鉴别;采用分子排阻色谱法(SEC-HPLC)和十二烷基硫酸钠毛细管电泳法(CE-SDS)分析其纯度;采用毛细管等点聚焦电泳法(iCIEF)分析其电荷异质性;采用液质联用法(UPLC-MS)测定其相对分子质量和药物抗体偶联比(DAR);采用疏水色谱法(HIC-HPLC)进一步确认其DAR;采用反相色谱法(RP-HPLC)测定游离小分子药物。结果:抗CD79b单抗-vc-MMAE的生物学活性相对效价为(99.32±3.99)%,K_(D)为(4.27±0.27)×10^(-9)mol·L^(-1),结合活性相对效价为(106.01±2.88)%,抗CD79b单抗和抗CD79b单抗-vc-MMAE的参比品与其样品的肽图图谱一致,SEC-HPLC主峰纯度为(99.32±0.05)%,非还原CE-SDS的重链-重链-轻链-轻链(HHLLC)纯度为(6.89±0.19)%,重链-重链-轻链(HHLC)纯度为(27.21±0.15)%,重链-重链(HHC)纯度为(18.33±0.06)%等,还原CE-SDS轻链和重链纯度为(95.47±0.16)%,iCIEF主峰峰面积百分比为(73.57±0.55)%,主峰等电点7.53±0.00,液质联用法测定抗CD79b单抗-vc-MMAE分别偶联0、2、4、6个小分子药物的相对分子质量为147891、150527、153161和155796,DAR为3.60,HIC法测得的DAR为3.53±0.01,RP-HPLC测定游离小分子药物浓度为(0.039±0.003)μg·mL^(-1)。结论:建立了抗CD79b单抗-vc-MMAE的质控方法,对该产品的安全性、有效性进行控制,为该类ADC药物的质量检测提供参考。

关键词：抗体偶联药物质量控制药物抗体偶联比生物学活性游离小分子药物分化群79b 连接子大小异质性电荷异质性

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右旋糖酐生产用菌种肠膜状明串珠菌CMCC(B)34991的全基因组分析

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中国生物制品学杂志 2021年第6期34卷 666-670,677页

作者：王珊珊石继春杜宗利石刚龙新星叶强徐颖华中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

目的对我国右旋糖酐生产用菌种肠膜状明串珠菌CMCC(B)34991的全基因组分子特征进行分析。方法将CMCC(B)34991菌种培养后,依次进行形态观察、生化鉴定、质谱分析及16S rRNA序列测定,同时应用高通量测序技术,对CMCC(B)34991菌种进行全基... 详细信息

目的对我国右旋糖酐生产用菌种肠膜状明串珠菌CMCC(B)34991的全基因组分子特征进行分析。方法将CMCC(B)34991菌种培养后,依次进行形态观察、生化鉴定、质谱分析及16S rRNA序列测定,同时应用高通量测序技术,对CMCC(B)34991菌种进行全基因组序列测定和比较基因组学分析。结果CMCC(B)34991菌种与4种肠膜状明串珠菌亚种代表株的16S rRNA基因序列相似度均大于99.5%。CMCC(B)34991菌种染色体全基因组序列全长为1857684 bp,平均GC含量为38.2%,共含有2089个基因,编码基因占整个基因组序列的88.4%,其中具有直系同源簇(clusters of orthologous groups,COG)功能1621个,参与KEGG代谢通路1112个。CMCC(B)34991菌种与4种肠膜状明串珠菌亚种代表株之间核苷酸同源性很高,平均核苷酸一致性(average nucleotide identity,ANI)值大于98.5%,DNA-DNA杂交(DDH)值超过89%,它们之间的共有基因1186个,而CMCC(B)34991菌种基因组特有基因247个。进化树显示,肠膜状明串珠菌与其他明串珠菌的分子进化历程不同。结论首次获得了我国右旋糖酐生产用菌种肠膜状明串珠菌CMCC(B)34991全基因组的基本特征,为后续右旋糖酐的生产工艺优化和生产用菌种的质量控制奠定了基础。

关键词：右旋糖酐肠膜状明串珠菌生产用菌种全基因组序列质量控制

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溶瘤病毒选择增殖活性检测方法的建立及优化

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中国生物制品学杂志 2024年第11期37卷 1349-1353页

作者：王光裕于雷史新昌周勇中国食品药品检定研究院国家卫生健康委生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的以重组人单纯疱疹病毒-1(recombinant human herpes simplex virus-1,rhHSV-1)作为溶瘤病毒,建立溶瘤病毒选择增殖活性测定方法,并进行优化及验证,以期用于溶瘤病毒相关制品的质量评价。方法将rhHSV-1按相同的MOI分别感染正常细胞... 详细信息

目的以重组人单纯疱疹病毒-1(recombinant human herpes simplex virus-1,rhHSV-1)作为溶瘤病毒,建立溶瘤病毒选择增殖活性测定方法,并进行优化及验证,以期用于溶瘤病毒相关制品的质量评价。方法将rhHSV-1按相同的MOI分别感染正常细胞及肿瘤细胞,培养一段时间后,提取病毒核酸,以其为模板进行qPCR扩增,获得病毒基因组拷贝数,计算病毒增殖比值,以其作为选择增殖活性的评价指标。优化方法中的细胞种类(正常细胞为MRC-5及HEK-293,肿瘤细胞为Hep3B及Fadu)、MOI(0.1、0.01、0.001、0.0001、0.00001)、培养时间(2 h及2、3、4 d),并验证方法的精密性及专属性。采用优化的方法检测溶瘤病毒rhHSV-1工作种子批的选择增殖活性。结果以Hep3B作为肿瘤细胞、MRC-5作为正常细胞时,rhHSV-1的增殖效果最佳,最适MOI为0.0001,最佳培养时间为72 h。采用优化的方法重复3次检测rhHSV-1的增殖比值分别为260.68、336.65及259.14,均>100,CV为15.52%;采用优化的方法检测rhHSV-1可见明显扩增,检测人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)和5型腺病毒(adenovirus 5,Ad5)未见明显扩增。溶瘤病毒rhHSV-1工作种子批的增殖比值为727。结论建立的用于检测rhHSV-1选择增殖活性的方法具有良好的精密性及专属性,可用于溶瘤病毒选择增殖活性的评价。

关键词：溶瘤病毒选择增殖活性 qPCR法重组人单纯疱疹病毒-1 增殖比值

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以CD79b为靶点的抗体偶联药物的一级结构表征

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中国药学杂志 2023年第1期58卷 33-40页

作者：赵雪羽李萌武刚王文波段茂芹于传飞徐寒梅王兰中国药科大学江苏省合成多肽药物发现与评价工程中心南京211198 中国食品药品检定研究院国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629

目的对基于半胱氨酸偶联方式的抗体偶联药物(antibody-drug conjugate,ADC)抗CD79b单抗-vc-MMAE进行一级结构表征。方法本实验采用超高效液相色谱-串联质谱(ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS)对抗CD79b单抗-vc-MMAE的完整相对分子质量、轻重链亚基相对分子质量以及药物抗体偶联比(drug-to-antibody ratio,DAR)进行测定;采用UPLC-MS/MS对抗CD79b单抗-vc-MMAE的序列覆盖度、偶联位点及位点占有率和糖基化位点进行分析,对抗CD79b单抗进行二硫键定位。结果抗CD79b单抗-vc-MMAE的完整相对分子质量包括:ADC药物的未加药形式的相对分子质量为147893、修饰2个小分子药物的相对分子质量为150527、修饰4个小分子药物的相对分子质量为153161以及修饰6个小分子药物的相对分子质量为155796;抗CD79b单抗-vc-MMAE的轻重链亚基相对分子质量包括:轻链的相对分子质量为23726、轻链修饰1个小分子药物的相对分子质量为25043,重链的相对分子质量为48778、重链修饰1个小分子药物的相对分子质量为50095、重链修饰2个小分子药物的相对分子质量为51412、重链修饰3个小分子药物的相对分子质量为52728;抗CD79b单抗-vc-MMAE的DAR为3.60;抗CD79b单抗-vc-MMAE的序列覆盖度为100%;抗CD79b单抗-vc-MMAE的药物偶联位点及位点占有率:轻链C218和重链C220、C226和C229的位点占有率分别为80.46%、80.39%、21.85%以及16.98%。抗CD79b单抗-vc-MMAE的糖基化位点为重链N297;抗CD79b单抗的16对二硫键全部检出。结论表征了抗CD79b单抗-vc-MMAE的一级结构,为该类ADC药物一级结构的研究提供参考依据。

关键词：抗体偶联药物药物抗体偶联比药物偶联位点一级结构

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重组人生长激素体外生物学活性测定Nb2-11细胞增殖法的联合验证

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药学学报 2025年第3期60卷 784-790页

作者：张孝明李鹤洋邓哲齐乃松吴熙李懿王绿音吕萍梁成罡李晶中国食品药品检定研究院国家卫生健康委生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629 药品监管科学全国重点实验室北京102629 吉林大学生命科学学院吉林长春130012 河南省药品医疗器械检验院河南省疫苗批签中心河南郑州450008 深圳市药品检验研究院广东深圳518057

为探索基于Nb2-11细胞增殖的重组人生长激素(rhGH)体外生物学活性测定方法的标准化,本研究首先检测了2批rhGH原液,3批注射用rhGH和24批rhGH注射液的生物学活性,初步制订了实验有效标准。进一步按照《中华人民共和国药典》2020年版通则9... 详细信息

为探索基于Nb2-11细胞增殖的重组人生长激素(rhGH)体外生物学活性测定方法的标准化,本研究首先检测了2批rhGH原液,3批注射用rhGH和24批rhGH注射液的生物学活性,初步制订了实验有效标准。进一步按照《中华人民共和国药典》2020年版通则9401进行方法学验证。随后联合7家实验室采用本方法测定来自4家不同生产企业的6批制剂及2批原液的体外生物学活性,分别对实验室间一致性,实验室内和实验室间精密度进行了研究。用本方法和体内动物法分别检测28批rhGH原液,进行体内外结果一致性研究。最后检测多批不同效期rhGH样品,进行标准限度研究。联合验证结果表明,本方法具有良好的实验室内及实验室间重现性,拟订实验有效标准通过率为100%。本方法与体内动物法检测结果具有良好的一致性。动物实验获得中国食品药品检定研究院实验动物福利伦理委员会批准[批准号:中检动(福)第2024(B)004号]。本方法适用于国内外不同生产厂家的rhGH原液与制剂,可作为测定rhGH类产品生物学活性的标准化方法替代体内动物法应用于rhGH的质量控制和放行检验。

关键词：重组人生长激素生物学活性细胞增殖法方法学验证联合验证

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