目的:考察不同取样方式对光阻法检测小装量治疗性抗体不溶性微粒的影响。方法:采用光阻法对体积小于25 m L的19个靶点65个批次治疗性抗体中≥2μm、≥10μm和≥25μm的不溶性微粒进行检测,将抗体分为3组,取样方式分别为单支样品不同取...
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目的:考察不同取样方式对光阻法检测小装量治疗性抗体不溶性微粒的影响。方法:采用光阻法对体积小于25 m L的19个靶点65个批次治疗性抗体中≥2μm、≥10μm和≥25μm的不溶性微粒进行检测,将抗体分为3组,取样方式分别为单支样品不同取样体积(0.5、1、3 m L)检测与合并样品(取样体积5 m L)检测,合并样品不同取样体积(0.5、1、3、5 m L)检测,以及合并样品后稀释(稀释20、10、5倍)检测与合并样品原倍检测。结果:对于≥2μm、≥10μm、≥25μm的不溶性微粒,不管是采用单支样品不同取样体积还是采用合并样品后不同取样体积,与合并样品后每次取样5 m L的不溶性微粒检测结果相比,均没有统计学意义上的差异;且≥2μm不溶性微粒的取样体积变异小于≥10μm、≥25μm的不溶性微粒。合并样品后稀释检测的结果则与合并样品检测的结果具有统计学差异,且稀释后的结果要高于未稀释的结果,稀释倍数越大,与未稀释结果的差异也越大。结论:采用光阻法对体积小于25 m L的小装量治疗性抗体进行不溶性微粒检测时,为节省样品并减少外源微粒污染,不管单支取样还是合并取样,均可首先考虑选择小于5 m L的单次取样体积进行检测,而对合并后稀释检测的方式应慎重选择。
目的制备甲型副伤寒沙门菌菌体抗原单克隆抗体,并对其进行鉴定及初步应用。方法用甲醛灭活的甲型副伤寒沙门菌免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,筛选出稳定分泌甲型副伤寒沙门菌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,对克隆纯化后的阳性细胞扩大培养后,免疫BALB/c小鼠,收获腹水,间接ELISA法检测抗体效价,并进行Ig类和亚类鉴定;腹水经辛酸-硫酸铵盐析法纯化后,采用间接ELISA法、玻片凝集试验、SDSPAGE法、免疫扩散试验进行检测。将纯化后的2株单克隆抗体用于双抗体夹心ELISA法的建立,并用自制配对抗体检测甲型副伤寒患者血浆、乙型副伤寒患者血浆、伤寒患者血浆和正常人血浆。结果共筛选出2株持续分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为1H4和2A9,腹水抗体效价为1∶10~7和1∶10~6,分别为IgG_1和Ig G_3亚类,轻链均为κ型。纯化后的单克隆抗体1H4、2A9效价分别为1∶10~7和1∶10~3,1H4纯度大于85%,2A9纯度小于60%。2株单克隆抗体与甲型副伤寒沙门菌50503、50973可产生凝集反应,与伤寒沙门菌50096不产生反应;1H4在稀释度为1∶8时可与甲型副伤寒沙门菌菌体特异多糖(organism specific polysaccharide,OSP)产生凝集反应,而2A9在每个稀释度与OSP均不发生反应。将1H4和2A9用于双抗体夹心ELISA检测法建立,确定1H4/HRP-2A9的组合为最佳配对,用该配对抗体检测阳性样本检出率为100%,正常人血浆样本检出率为0。结论获得2株甲型副伤寒沙门菌菌体抗原单克隆抗体,可用于甲型副伤寒沙门菌的快速鉴定。
目的了解引起手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)的主要6种人类肠道病毒(enteroviru,EV)在我国婴幼儿人群中的流行情况,分析相同血清型EV重复感染以及不同血清型EV的感染特点,为HFMD多价疫苗的研发提供依据.方法采用前瞻性队...
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目的了解引起手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)的主要6种人类肠道病毒(enteroviru,EV)在我国婴幼儿人群中的流行情况,分析相同血清型EV重复感染以及不同血清型EV的感染特点,为HFMD多价疫苗的研发提供依据.方法采用前瞻性队列研究的方法,对江苏省某地EV-A71疫苗Ⅲ期临床试验的181名6~35月龄婴幼儿在2012-2014年进行为期2年的随访.随访期间对受试者采集4次血清,采用微量细胞病变法检测血清中的肠道病毒A组71型(EV-A71)、柯萨奇病毒A组6型(CV-A6)、柯萨奇病毒A组10型(CV-A10)、柯萨奇病毒A组16型(CV-A16)、柯萨奇病毒B组3型(CV-B3)和柯萨奇病毒B组5型(CV-B5)中和抗体效价.对随访期间的HFMD发病病例采集咽拭子和肛拭子,采用实时定量PCR法和巢式PCR法鉴别EV.结果在随访结束时,CV-A10的血清累积阳性率和中和抗体GMT最高(82.2%,120.4).随访期间共有81人发生125次相同血清型EV的重复感染(中和抗体阳性者的中和抗体4倍及以上增高),其中CV-A10的重复感染率最高(27.8%,50/180).虽然相同血清型EV可重复感染,但未见同种病原感染后的再次发病;68.5%(124/181)的受试者至少感染了两种EV,2.2%(4/181)的受试者感染了5种EV.共发现25例HFMD发病病例(7例EV-A71,14例CV-A16,CV-A6、CV-A10、CV-B3和CV-B5各1例),患者均为轻症,未见重症病例.结论该地区婴幼儿人群中EV流行强度高,EV具有一定的相同血清型及不同血清型的重复感染率,值得进一步研究.
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