目的:建立用气相色谱法测定人类乳头瘤病毒(HPV)疫苗中3-O-脱酰基-4′-单磷酰脂质A(MPL)的含量。方法:HPV疫苗中的MPL经过与氢氧化钠-甲醇的皂化反应,以己烷进行萃取,以三氟醋酐进行衍生化,再经HP-5色谱柱(30 m×0.32 mm, 0.25μm)...
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目的:建立用气相色谱法测定人类乳头瘤病毒(HPV)疫苗中3-O-脱酰基-4′-单磷酰脂质A(MPL)的含量。方法:HPV疫苗中的MPL经过与氢氧化钠-甲醇的皂化反应,以己烷进行萃取,以三氟醋酐进行衍生化,再经HP-5色谱柱(30 m×0.32 mm, 0.25μm)分离,火焰离子检测器(FID)检测,用MPL对照品和内标十五烷酸(pentadecanoic acid)进行内标法定量测定HPV疫苗中MPL含量。结果:MPL质量浓度在15~150μg·mL^(-1)范围内线性关系良好(r=0.999),精密度RSD为0.24%,重复性RSD为1.0%,稳定性RSD为0.37%,平均回收率为100.1%~100.5%(RSD小于2.0%)。12个批次的HPV疫苗中MPL含量范围为93.4~103.2μg·mL^(-1),符合质控要求。结论:本法准确可靠,特异性强,可对HPV疫苗中MPL进行检测。
目的验证人血清中福氏2a及宋内志贺菌O-特异性多糖(分别简称福氏2a多糖及宋内多糖)抗体IgG含量的ELISA定量检测方法,并用于福氏宋内痢疾双价疫苗免疫前后人血清样本的检测。方法将参考血清及质控血清按一定比例混合,制备成10份不同浓度的血清样本(编号为S1~S10),采用企业提供的间接ELISA定量检测方法检测样本,连续测定6 d,计算多糖抗体IgG回收率和变异系数(coefficient of variation,CV),并以回收率CV低于20%的相应参考血清含量作为定量限(limit of quantitation,LOQ)。采用相同检测方法连续6 d测定血清样本S10及质控血清,每天重复检测3次,计算CV;采用参考血清进行多糖竞争抑制ELISA试验,计算血清对多糖的抑制率。采用企业提供的方法检测参考血清,确定线性范围,获得曲线方程,计算相关系数(R^(2))。采用验证的方法检测1842份福氏宋内痢疾双价疫苗免疫前后的人血清样本。结果10份血清样本中福氏2a和宋内多糖抗体IgG回收率分别为73.21%~222.68%和83.67%~123.56%;试验间及试验内精密性CV均<30%;参考血清对100μg/mL福氏2a和宋内多糖的抑制率分别为85.95%和88.42%;福氏2a和宋内多糖抗体IgG检测的线性范围分别为0.05~0.125和0.025~0.125 EU/mL,R^(2)均≥0.99,LOQ分别为0.050和0.025 EU/mL。福氏宋内痢疾双价疫苗免疫后血清IgG含量大幅高于免疫前。结论企业提供的ELISA定量检测方法具有良好的准确性、精密性及特异性,可用于痢疾疫苗免疫血清的检测。
目的建立重组抗前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9(proprotein convertase subtilisin/Kexin 9,PCSK9)单克隆抗体关键质量属性的质控方法。方法根据《中国药典》三部(2020版)及人用药品注册技术要求国际协调会(International Council for Har...
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目的建立重组抗前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9(proprotein convertase subtilisin/Kexin 9,PCSK9)单克隆抗体关键质量属性的质控方法。方法根据《中国药典》三部(2020版)及人用药品注册技术要求国际协调会(International Council for Harmonisation of Technical Requirements for Pharmaceuticals for Human Use,ICH)相关要求,采用还原胰蛋白酶肽指纹图谱法对PCSK9单克隆抗体进行一致性鉴别;ELISA法检测抗体特异性;成像毛细管等电聚焦电泳(imaging capillary isoelectric focusing electrophoresis,icIEF)测定电荷变异体;还原/非还原十二烷基磺酸钠毛细管电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate,CE-SDS)检测变异体纯度;分子排阻高效液相色谱(size-exclusion chromatography high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)检测单体、高分子量和低分子量物质含量;切糖后对N-糖进行2AB标记,采用带有荧光检测器的Waters ACQUITY UPLC系统进行糖型分析;通过HepG2细胞系和含荧光标记的低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)测定生物学活性;采用液相检测系统(CAD检测器)检测聚山梨酯20含量。结果PCSK9单克隆抗体样品存在特征肽段,肽指纹图谱与参比品图谱一致,且含有特异性抗体;样品主峰区、酸性峰区、碱性峰区的相对百分含量分别为(49.27±0.38)%、(46.44±0.35)%、(4.28±0.04)%“;重链+轻链”峰、非糖基重链峰和低分子量物质峰相对百分含量分别为(94.16±0.82)%、(4.11±0.76)%、(0.85±0.20)%,主峰、非糖基化主峰和低分子量物质峰相对百分含量分别为(94.27±0.22)%、(2.85±0.08)%、(2.88±0.15)%;单体、高分子量物质和低分子量物质相对百分含量分别为(98.30±0.03)%、(0.75±0.01)%、(0.96±0.02)%;G0F、G1F、G2F、非岩藻糖基化糖型(G0+G1+G2+Man5)相对百分含量分别为(39.31±0.54)%、(34.69±0.41)%、(9.09±0.14)%、(12.61±0.50)%;相对生物学活性为参比品的(101.64±3.61)%;聚山梨酯20含量为(0.012±0.0003)%。结论本研究建立了PCSK9单克隆抗体关键质量属性的质控方法,可确保该产品的安全、有效和质量可控。
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