检索结果-内蒙古大学图书馆

重组人粒细胞集落刺激因子-Fc融合蛋白(rhG-CSF-Fc)的质量研究

药物分析杂志 2012年第1期32卷 107-110页

作者：高凯王兰陶磊于雷李响史新昌刘兰饶春明中国食品药品检定研究院重组技术产品室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的:建立重组人粒细胞集落刺激因子-Fc融合蛋白的质控方法和质量标准。方法:采用NSF-60细胞增殖法测定生物学活性;非还原SDS-PAGE电泳和RP-HPLC测定纯度;以ELISA法分别测定残留CHO细胞蛋白和蛋白A;其余检测项目按中国药典2010年版三部... 详细信息

目的:建立重组人粒细胞集落刺激因子-Fc融合蛋白的质控方法和质量标准。方法:采用NSF-60细胞增殖法测定生物学活性;非还原SDS-PAGE电泳和RP-HPLC测定纯度;以ELISA法分别测定残留CHO细胞蛋白和蛋白A;其余检测项目按中国药典2010年版三部规定进行。结果:用建立的方法对重组人粒细胞集落刺激因子-Fc融合蛋白原液和成品进行了检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和中国药典2010年版三部的要求。结论:建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全有效、质量可控的特点,可用于该类产品的常规检定。

关键词：重组人粒细胞集落刺激因子-Fc融合蛋白十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) 反相高效液相色谱酶标记免疫吸附测定(ELISA) 等电聚焦电泳肽图分析质量控制生物学活性

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酶联免疫吸附法测定破伤风人免疫球蛋白效价的试验研究

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药物分析杂志 2012年第10期32卷 1722-1725,1717页

作者：张华捷顾磊赵建荣吕慧贤侯启明张庶民中国食品药品检定研究院血清室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的:为建立破伤风人免疫球蛋白(HTIG)效价测定的动物替代方法奠定基础。方法:选取7家企业生产的9批HTIG待检品,分别用酶联免疫吸附法(ELISA)和小鼠毒素中和试验法(TNT)测定其效价,并对2种方法检测结果的一致性进行评价。结果:ELISA法... 详细信息

目的:为建立破伤风人免疫球蛋白(HTIG)效价测定的动物替代方法奠定基础。方法:选取7家企业生产的9批HTIG待检品,分别用酶联免疫吸附法(ELISA)和小鼠毒素中和试验法(TNT)测定其效价,并对2种方法检测结果的一致性进行评价。结果:ELISA法测定结果的回收率达到95%～105%,RSD在10%以内,配对t检验、直线回归和Bland-Altman分析表明ELISA法与TNT法的检测结果具有良好的一致性和相关性。结论:为ELISA法替代TNT法用于HTIG效价测定提供了数据支持。

关键词：破伤风人免疫球蛋白被动免疫制剂效价测定酶联免疫吸附毒素中和试验 ELISA法与TNT法一致性

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百日咳黏附素的原核表达及其单克隆抗体的制备

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中国生物制品学杂志 2012年第10期25卷 1344-1348页

作者：徐颖华张华捷谭亚军吴丽洁王丽婵侯启明张庶民中国食品药品检定研究院百白破疫苗和毒素室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的原核表达百日咳黏附素(Pertactin,Prn),并制备抗Prn单克隆抗体。方法从无细胞百日咳疫苗生产菌株CS株基因组DNA中克隆Prn基因,插入表达载体pQE-30中,构建重组表达质粒pQE-30-Prn,转化*** M15,IPTG诱导表达。表达的重组Prn蛋白经阳... 详细信息

目的原核表达百日咳黏附素(Pertactin,Prn),并制备抗Prn单克隆抗体。方法从无细胞百日咳疫苗生产菌株CS株基因组DNA中克隆Prn基因,插入表达载体pQE-30中,构建重组表达质粒pQE-30-Prn,转化*** M15,IPTG诱导表达。表达的重组Prn蛋白经阳、阴离子交换层析纯化后,采用Western blot和ELISA法鉴定重组Prn蛋白的反应原性。以纯化的重组Prn蛋白为免疫原,利用杂交瘤技术制备单克隆抗体,并对制备的单抗进行鉴定。结果重组表达质粒经双酶切和测序鉴定构建正确;表达的重组Prn蛋白相对分子质量约为69 000,主要以包涵体形式表达;纯化的重组Prn蛋白的纯度达95%以上,产量可达25 mg/L,能与不同来源的抗Prn-Ab血清特异性结合。获得2株分泌抗Prn单抗的杂交瘤细胞株,分泌的单抗均为IgG1类,轻链类型均为κ,效价均达1∶105以上,并能特异性识别Prn蛋白,而与百日咳杆菌其他抗原蛋白无交叉反应。结论原核表达、纯化了重组Prn蛋白,并制备了2株效价高、特异性强的单抗,为无细胞百日咳疫苗的质量控制及百日咳杆菌致病机制的研究提供了材料。

关键词：百日咳黏附素原核细胞基因表达单克隆抗体

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戊型肝炎病毒ORF3蛋白研究进展

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中华微生物学和免疫学杂志 2012年第9期32卷 825-830页

作者：周艳耿彦生杨军王佑春中国食品药品检定研究院细胞室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 美国圣祖德儿童研究医院外科

戊型肝炎病毒（hepatitis E virus，HEV）是戊型肝炎的病原体，是肝炎病毒科戊型肝炎病毒属的惟一成员，无包膜、正义、单链RNA病毒，病毒基因组全长约7．2kb，由3个开放阅读框ORFl、ORF2和ORF3组成，其中ORFl编码与病毒复制、转录相关... 详细信息

戊型肝炎病毒（hepatitis E virus，HEV）是戊型肝炎的病原体，是肝炎病毒科戊型肝炎病毒属的惟一成员，无包膜、正义、单链RNA病毒，病毒基因组全长约7．2kb，由3个开放阅读框ORFl、ORF2和ORF3组成，其中ORFl编码与病毒复制、转录相关的酶等非结构蛋白，ORF2编码660aa的病毒衣壳蛋白，ORF3编码小分子的磷蛋白。

关键词：戊型肝炎病毒 ORF3蛋白单链RNA病毒 ORF2 肝炎病毒属病毒基因组开放阅读框非结构蛋白

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竞争抑制ELISA法检测霍乱灭活疫苗中脂多糖的含量

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中国生物制品学杂志 2012年第10期25卷 1366-1367,1372页

作者：陈翠萍董思国朱卫华中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 北京绿竹生物制药有限公司北京100176

目的采用竞争抑制ELISA法检测霍乱灭活疫苗中脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)的含量,以替代小鼠免疫力试验方法。方法用竞争抑制ELISA法检测霍乱灭活疫苗中LPS的含量,并分析与小鼠免疫力试验检测结果的一致性。结果霍乱灭活疫苗中LPS的... 详细信息

目的采用竞争抑制ELISA法检测霍乱灭活疫苗中脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)的含量,以替代小鼠免疫力试验方法。方法用竞争抑制ELISA法检测霍乱灭活疫苗中LPS的含量,并分析与小鼠免疫力试验检测结果的一致性。结果霍乱灭活疫苗中LPS的含量与疫苗保护力呈正相关。结论采用竞争抑制ELISA法检测霍乱灭活疫苗中LPS的含量,能够反映疫苗的保护力,为进一步替代小鼠免疫力试验方法奠定了基础。

关键词：竞争抑制ELISA 免疫力试验霍乱灭活疫苗脂多糖

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我国伤寒Vi多糖疫苗的质量检定及多糖含量检测的趋势分析

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中国生物制品学杂志 2012年第10期25卷 1402-1404页

作者：王斌梁昊宇计国欣曾明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

伤寒是由伤寒沙门菌感染引起的急性全身性传染病，通过粪．口途径传播，其临床特征为持续发热、神经系统中毒症状、肝脾肿大及白细胞减少等，少数可并发肠出血及肠穿孔。人群对伤寒沙门菌普遍易感，但儿童和青壮年发病率最高。伤寒是发... 详细信息

伤寒是由伤寒沙门菌感染引起的急性全身性传染病，通过粪．口途径传播，其临床特征为持续发热、神经系统中毒症状、肝脾肿大及白细胞减少等，少数可并发肠出血及肠穿孔。人群对伤寒沙门菌普遍易感，但儿童和青壮年发病率最高。伤寒是发展中国家常见的肠道传染病，

关键词：伤寒Vi多糖疫苗质量多糖含量趋势分析

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阴道源乳酸杆菌对白色念珠菌的体外抑制作用

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中国生物制品学杂志 2012年第6期25卷 704-708页

作者：陈沁田万红许恒毅喻刚魏华曾明南昌大学食品科学与技术国家重点实验室南昌330047 中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的研究阴道源乳酸杆菌对白色念珠菌的体外抑制作用。方法采用双层平板法、琼脂扩散法及液体培养活菌计数法等考察10株阴道源乳酸杆菌对白色念珠菌的体外抑制效果;分析白色念珠菌的耐酸性;通过琼脂扩散法分析不同pH值的乳酸杆菌发酵上... 详细信息

目的研究阴道源乳酸杆菌对白色念珠菌的体外抑制作用。方法采用双层平板法、琼脂扩散法及液体培养活菌计数法等考察10株阴道源乳酸杆菌对白色念珠菌的体外抑制效果;分析白色念珠菌的耐酸性;通过琼脂扩散法分析不同pH值的乳酸杆菌发酵上清液对白色念珠菌的抑菌效果;并分析10株乳酸杆菌产酸能力的差异。结果10株阴道源乳酸杆菌中,ZDY78、ZDY128、ZDY159a、ZDY162a 4株对白色念珠菌的抑制能力较强;白色念珠菌的耐酸能力较强,当发酵上清液的pH≤3.0时,才能观察到明显的抑菌圈;乳酸杆菌的发酵上清液具有抑制白色念珠菌生长的能力,且抑菌效果与培养液中发酵上清所占比例呈正相关;抑菌能力较强的4株乳酸杆菌其产酸能力强于其余6株乳酸杆菌。结论 4株阴道源乳酸杆菌对白色念珠菌具有明显的抑制作用,且与其产酸能力呈正相关。

关键词：阴道乳酸杆菌白色念珠菌抑菌机理

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LC-MS／MS法对融合蛋白FP3的氨基酸全序列测定

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药学学报 2012年第2期47卷 216-222页

作者：李响高向东陶磊裴德宁郭莹饶春明王军志中国食品药品检定研究院重组技术产品室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210009

运用液质联用、两种串联质谱对融合蛋白FP3的氨基酸全序列测定,确证其一级结构。将样品还原烷基化后,通过胰蛋白酶酶解蛋白,PNGase F去除多肽混合物中糖肽的糖基化,将去糖后的总肽用于液质联用系统,通过液相分离后,运用Q-TOF和线性离子... 详细信息

运用液质联用、两种串联质谱对融合蛋白FP3的氨基酸全序列测定,确证其一级结构。将样品还原烷基化后,通过胰蛋白酶酶解蛋白,PNGase F去除多肽混合物中糖肽的糖基化,将去糖后的总肽用于液质联用系统,通过液相分离后,运用Q-TOF和线性离子阱两种串联质谱测定各个肽段的b,y碎片离子,分析测定融合蛋白FP3的氨基酸全序列。通过LC-ESI-Q-TOF完成了融合蛋白FP3的76%氨基酸序列测定,通过LC-ESI-Trap完成余下24%氨基酸序列测定。液质联用、串联质谱法测定蛋白质氨基酸序列快速、灵敏、准确,是对重组蛋白结构分析和确证的重要手段。

关键词：液质联用融合蛋白氨基酸序列

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我国无细胞百白破联合疫苗中百日咳疫苗的批签发及效力试验的回顾性分析

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中国生物制品学杂志 2012年第8期25卷 1072-1074页

作者：王丽婵张路民侯启明卫辰徐颖华骆鹏张庶民中国食品药品检定研究院血清室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

现在几乎全世界都在实施百日咳疫苗的免疫接种,但百日咳仍然是威胁人类健康的重要传染病之一,也是导致婴幼儿死亡的主要原因之一[1]。目前,百白破联合疫苗包括全细胞百白破联合疫苗（DTwP）和无细胞百白破联合疫苗（DTaP）,前者于1948... 详细信息

现在几乎全世界都在实施百日咳疫苗的免疫接种,但百日咳仍然是威胁人类健康的重要传染病之一,也是导致婴幼儿死亡的主要原因之一[1]。目前,百白破联合疫苗包括全细胞百白破联合疫苗（DTwP）和无细胞百白破联合疫苗（DTaP）,前者于1948年研制成功，其百日咳部分为全菌体灭活后制成。全细胞百日咳疫苗接种后副反应大，日本于1981年率先研制无细胞百日咳疫苗［2］。

关键词：无细胞百白破联合疫苗全细胞百日咳疫苗效力试验全细胞百白破联合疫苗批签发无细胞百日咳疫苗免疫接种人类健康

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金黄葡萄球菌肠毒素C2对小鼠移植瘤的抑制作用

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中国生物制品学杂志 2012年第8期25卷 999-1002页

作者：张华捷李洪义骆鹏张庶民侯启明马霄中国食品药品检定研究院血清室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 沈阳协合生物制药股份有限公司沈阳110179

目的采用小鼠移植瘤模型,对金黄葡萄球菌肠毒素C2的抗肿瘤作用进行研究,以进一步揭示超抗原在肿瘤治疗方面的意义。方法从金葡菌发酵液中提纯SEC2蛋白,并经SDS-PAGE及测序分析;构建小鼠S180肉瘤和Lewis肺癌移植瘤模型,分别腹腔注射高、... 详细信息

目的采用小鼠移植瘤模型,对金黄葡萄球菌肠毒素C2的抗肿瘤作用进行研究,以进一步揭示超抗原在肿瘤治疗方面的意义。方法从金葡菌发酵液中提纯SEC2蛋白,并经SDS-PAGE及测序分析;构建小鼠S180肉瘤和Lewis肺癌移植瘤模型,分别腹腔注射高、中、低剂量(800、400、200 ng/kg)的SEC2,连续给药10 d,同时以环磷酰胺为阳性对照,生理盐水为阴性对照。于给药后第11天处死小鼠,将肿瘤组织分离并称重,比较SEC2对S180肉瘤及Lewis肺癌移植瘤的抑瘤效果。结果在相对分子质量约30 000处可见目的条带,与理论值相符,N-未端氨基酸测序与文献报道一致;SEC2对两种移植瘤均产生较明显抑制作用,高、中、低剂量SEC2对S180肉瘤的抑瘤率分别达到50.60%、31.81%和19.38%,对Lewis肺癌的抑瘤率分别达到55.62%、45.70%和37.78%。结论从动物水平上确认了SEC2的抑瘤效果,为进一步开展超抗原抗肿瘤研究奠定了基础。

关键词：葡萄球菌肠毒素超抗原肿瘤

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