检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2024年第9期37卷 1096-1101,1108页

作者：史新昌于雷秦玺安怡方李响周勇中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的对离子色谱(ion chromatography,IC)联用脉冲安培检测器(pulsed amperometric detector,PAD)分析重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)N糖图谱方法进行多实验室联合验证。方法将rhEPO供试品用25 mmol/L磷酸盐缓冲液超滤置换缓冲体系,调整浓度至2 mg/mL,用糖苷酶F酶切后,经乙醇沉淀,取上清冷冻干燥,获得rhEPO游离N糖。色谱条件:分析柱为Dionex CarboPac PA200,保护柱为Dionex CarboPac PA200;流动相A为50 mmol/L氢氧化钠溶液,流动相B为200 mmol/L氢氧化钠溶液,流动相C为250 mmol/L乙酸钠溶液;进样体积为25μL;流速为0.5 mL/min;柱温为30℃;梯度洗脱;使用仪器自带分析软件进行峰簇最高峰保留时间和峰簇面积百分比积分。选择3家实验室(L1~L3)进行方法的联合验证,包括准确度、精密度、线性、检出限(limit of detection,LOD)和定量限(limit of quantification,LOQ)、稳定性。结果rhEPO N糖各峰簇清晰可见;3个实验室不同浓度供试品各峰簇面积百分比均在84%~116%之间,方法准确度良好;各峰簇最高峰保留时间RSD均<5%,面积百分比RSD均<10%,方法重现性良好;蛋白浓度在1.0~3.0 mg/mL范围内,线性良好,R2>0.98;LOD约为0.10 mg/mL,LOQ约为0.32 mg/mL;在2~8℃下存放48 h,稳定性良好。结论建立了rhEPO N糖图谱IC法,联合验证指标良好,为rhEPO质量标准的提高提供了技术支持。

关键词：人促红细胞生成素 N糖图谱离子色谱联合验证

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甘精胰岛素注射液有关物质分析方法研究

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药物分析杂志 2022年第1期42卷 23-32页

作者：丁晓丽陈莹胡馨月李晶张慧梁成罡中国食品药品检定研究院激素室国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北102629

目的:优化甘精胰岛素注射液有关物质分析方法,论证现行标准规定限度科学性,并对主要有关物质进行鉴别。方法:采用Thermo scientific Bio-Basic-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以氯化钠-磷酸盐缓冲液-乙腈(18.4 g∶250 mL∶250 ... 详细信息

目的:优化甘精胰岛素注射液有关物质分析方法,论证现行标准规定限度科学性,并对主要有关物质进行鉴别。方法:采用Thermo scientific Bio-Basic-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以氯化钠-磷酸盐缓冲液-乙腈(18.4 g∶250 mL∶250 mL,加水至1000 mL)为流动相A,氯化钠-磷酸盐缓冲液-乙腈(3.2 g∶250 mL∶650 mL,加水至1000 mL)为流动相B,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1),检测波长214 nm,柱温35℃。利用该方法收集含量最大有关物质组分并利用LC-MS方法进行鉴别。分析色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C_(18)Column(100 mm×2.1 mm,1.7μm,300A),以0.1%甲酸水溶液为流动相A,0.1%甲酸乙腈溶液为流动相B,进行梯度洗脱,柱温为50℃。质谱数据采集条件为MS;模式,一级质谱能量40 V。结果:该RP-HPLC有关物质分析方法,方法学验证结果良好,能够有效分离并准确测定样品中的有关物质;经鉴定,甘精胰岛素注射液的主要有关物质为B链第3位天冬酰胺的脱-NH;降解产物,即3^(B)-琥珀酰亚胺-甘精胰岛素。结论:优化后的RP-HPLC方法能够有效用于甘精胰岛素注射液有关物质分析,现行国家标准有关物质限度规定科学合理,能够满足甘精胰岛素注射液货架期内的质控需求。

关键词：甘精胰岛素注射液药品在用期有关物质 3^(B)-琥珀酰亚胺-甘精胰岛素结构鉴定反相高效液相色谱法液相质谱联用

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环状RNA研究进展及应用前景

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中国生物制品学杂志 2025年第4期38卷 473-480,489页

作者：黄天治史新昌(综述) 周勇(审校) 中国食品药品检定研究院重组药物室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

环状RNA(circular RNA,circRNA)是一类具有环形编码结构的RNA,其特点是在RNA剪接过程中形成环状拓扑结构。相较于传统线性mRNA,circRNA表现出更好的稳定性和免疫原性,这些特性使其在疫苗、生物标志物和靶向治疗等多种领域具有广泛的应... 详细信息

环状RNA(circular RNA,circRNA)是一类具有环形编码结构的RNA,其特点是在RNA剪接过程中形成环状拓扑结构。相较于传统线性mRNA,circRNA表现出更好的稳定性和免疫原性,这些特性使其在疫苗、生物标志物和靶向治疗等多种领域具有广泛的应用前景。本文对circRNA的研究历程、体内外合成及降解、组成元件、生物学功能和应用等方面的研究进展作一综述,以期为其在疫苗设计与开发中的应用提供新的思路。

关键词：环状RNA 体外合成生物学功能应用前景

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rAAV2-ND4注射液基因转录水平的生物学活性检测方法

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药物分析杂志 2023年第11期43卷 1820-1825页

作者：秦玺陈龙史新昌杨靖清潘燕群于雷毕华裴德宁安怡方潘悦李响周勇中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 武汉纽福斯生物科技有限公司武汉430014 西交利物浦大学苏州215123

目的:建立并验证检测rAAV2-ND4注射液转录水平的生物学活性检测方法。方法:rAAV2-ND4样品(3.0×10^(10)vg·mL^(-1),以每孔360μL)感染HEK293T细胞(3.0×105cells·mL^(-1),每孔0.8 mL,37℃5%二氧化碳培养预培养24 h)后... 详细信息

目的:建立并验证检测rAAV2-ND4注射液转录水平的生物学活性检测方法。方法:rAAV2-ND4样品(3.0×10^(10)vg·mL^(-1),以每孔360μL)感染HEK293T细胞(3.0×105cells·mL^(-1),每孔0.8 mL,37℃5%二氧化碳培养预培养24 h)后2 h,加适量培养基继续培养24 h,收集细胞;按细胞总RNA提取试剂盒操作细则提取细胞总RNA(裂解细胞、吸附、去蛋白、去杂质和洗脱);将提取后的细胞总RNA为模板,用qPCR方法分别检测ND4的mRNA Ct值和β-actin内参基因mRNA Ct值。通过同时设立rAAV2-ND4参比品进行平行检测,通过β-actin内参基因和rAAV2-ND4参比品双重校正检测rAAV2-ND4相对于其参比品的生物学活性。对所建立方法进行方法学验证,包括准确性、精密度、线性和专属性等。另考察了3批制品的批间一致性。结果:qPCR检测ND4 mRNA转录量和参比品校正的方法检测结果提示ND4 mRNA与rAAV2-ND4感染细胞滴度之间存在量效关系。经方法学验证,方法的检测值与预期值之间偏离率在100%~130%;不同时间不同人员的9次结果RSD为13.75%;rAAV2-ND4滴度在1.0×10^(10)~5.0×10^(10)vg·mL^(-1)范围内方法线性r>0.97;方法具有很好的专属性。3批rAAV-ND4检测值的RSD为9.3%。结论:初步建立了rAAV2-ND4转录水平的生物学活性检测方法。

关键词：生物学活性实时定量PCR 内标法感染检测基因治疗

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重组抗前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9单克隆抗体质控方法的建立

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中国生物制品学杂志 2023年第12期36卷 1483-1490页

作者：武刚于传飞俞小娟李萌杨雅岚崔永霏郭璐韵王兰中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室、卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室、国家药监局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629

目的建立重组抗前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9(proprotein convertase subtilisin/Kexin 9,PCSK9)单克隆抗体关键质量属性的质控方法。方法根据《中国药典》三部(2020版)及人用药品注册技术要求国际协调会(International Council for Har... 详细信息

目的建立重组抗前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9(proprotein convertase subtilisin/Kexin 9,PCSK9)单克隆抗体关键质量属性的质控方法。方法根据《中国药典》三部(2020版)及人用药品注册技术要求国际协调会(International Council for Harmonisation of Technical Requirements for Pharmaceuticals for Human Use,ICH)相关要求,采用还原胰蛋白酶肽指纹图谱法对PCSK9单克隆抗体进行一致性鉴别;ELISA法检测抗体特异性;成像毛细管等电聚焦电泳(imaging capillary isoelectric focusing electrophoresis,icIEF)测定电荷变异体;还原/非还原十二烷基磺酸钠毛细管电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate,CE-SDS)检测变异体纯度;分子排阻高效液相色谱(size-exclusion chromatography high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)检测单体、高分子量和低分子量物质含量;切糖后对N-糖进行2AB标记,采用带有荧光检测器的Waters ACQUITY UPLC系统进行糖型分析;通过HepG2细胞系和含荧光标记的低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)测定生物学活性;采用液相检测系统(CAD检测器)检测聚山梨酯20含量。结果PCSK9单克隆抗体样品存在特征肽段,肽指纹图谱与参比品图谱一致,且含有特异性抗体;样品主峰区、酸性峰区、碱性峰区的相对百分含量分别为(49.27±0.38)%、(46.44±0.35)%、(4.28±0.04)%“;重链+轻链”峰、非糖基重链峰和低分子量物质峰相对百分含量分别为(94.16±0.82)%、(4.11±0.76)%、(0.85±0.20)%,主峰、非糖基化主峰和低分子量物质峰相对百分含量分别为(94.27±0.22)%、(2.85±0.08)%、(2.88±0.15)%;单体、高分子量物质和低分子量物质相对百分含量分别为(98.30±0.03)%、(0.75±0.01)%、(0.96±0.02)%;G0F、G1F、G2F、非岩藻糖基化糖型(G0+G1+G2+Man5)相对百分含量分别为(39.31±0.54)%、(34.69±0.41)%、(9.09±0.14)%、(12.61±0.50)%;相对生物学活性为参比品的(101.64±3.61)%;聚山梨酯20含量为(0.012±0.0003)%。结论本研究建立了PCSK9单克隆抗体关键质量属性的质控方法,可确保该产品的安全、有效和质量可控。

关键词：前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9 单克隆抗体质量控制

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mRNA药物研发的主要关键技术

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中国生物制品学杂志 2022年第11期35卷 1402-1408页

作者：凡文超史新昌(综述) 周勇(审校) 卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室中国食品药品检定研究院重组药物室北京100050

基于mRNA的基因治疗药物及预防疫苗已成为开发热点,其技术原理是递送至机体细胞内的mRNA,通过宿主细胞的翻译机制表达产生治疗性蛋白或免疫原蛋白,对机体产生治疗作用或刺激机体产生免疫作用。mRNA药物研发的主要关键技术如体外合成、... 详细信息

基于mRNA的基因治疗药物及预防疫苗已成为开发热点,其技术原理是递送至机体细胞内的mRNA,通过宿主细胞的翻译机制表达产生治疗性蛋白或免疫原蛋白,对机体产生治疗作用或刺激机体产生免疫作用。mRNA药物研发的主要关键技术如体外合成、修饰、纯化以及递送等均具有较好的通用性。通过设计合成不同的目的基因序列,结合上述高度相似的下游关键技术,可实现不同目的蛋白的体内表达,使开发出基于mRNA的标准技术体系成为可能,从而针对疾病进行预防及治疗。高效低成本体外获取目的mRNA,修饰、处理使得mRNA具备高效翻译效率的同时降低机体免疫排斥,以及将外源性mRNA高效递送至体内,解决这些问题是mRNA药物研发的重点。本文主要综述了基于mRNA药物设计的主要关键技术,如mRNA体外转录合成(in vitro transcription,IVT)、核苷及帽尾结构修饰的技术原理及研究进展,其次对mRNA纯化方法、递送系统进行了简要介绍,为mRNA基因治疗药物及疫苗开发提供支持。

关键词：基因治疗 mRNA药物 mRNA疫苗递送系统核苷修饰体外转录

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中国百日咳疫苗生产用菌株完成图基因组遗传分析

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中国生物制品学杂志 2023年第12期36卷 1419-1424,1429页

作者：李喆吴燕王丽婵卫辰廖平安朱德武瞿明霞马霄中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629 武汉生物制品研究所有限责任公司湖北武汉430027

目的对我国百日咳疫苗生产用菌株进行完成图基因组的遗传分析。方法利用PacBio Sequel三代测序平台与Illumina二代测序平台相结合的方式,对百日咳疫苗生产用原始菌株进行完成图基因组测序,并进行基因组组分分析、基因功能注释以及比较... 详细信息

目的对我国百日咳疫苗生产用菌株进行完成图基因组的遗传分析。方法利用PacBio Sequel三代测序平台与Illumina二代测序平台相结合的方式,对百日咳疫苗生产用原始菌株进行完成图基因组测序,并进行基因组组分分析、基因功能注释以及比较基因组分析。同时对企业生产过程中不同代次菌株进行遗传稳定性分析。结果获得了百日咳疫苗原始菌株及其生产过程不同代次菌株的完成图基因组,基因组长度4.1 Mb,GC含量68%,不同代次间基因组结构稳定;获得并分析了pt、pha、prn、fim2、fim3、act、tct、ompA、BrKA、rplD、BP1569等具有免疫原性或潜在免疫原性的基因,不同代次间基因未发生变异。结论本研究获得了结构完整、背景清晰的百日咳疫苗生产用菌株完成图基因组,为我国百日咳疫苗生产用菌种的质量控制提供了依据,同时也为百日咳分子流行病学的研究提供了参考。

关键词：百日咳疫苗原始菌株完成图基因组遗传稳定性质量控制

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均相时间分辨荧光法测定人胰岛素生物学活性

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药学学报 2022年第10期57卷 3223-3228页

作者：王绿音杨艳枫张孝明吕萍张慧李晶梁成罡中国食品药品检定研究院激素室国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629 中国药科大学江苏南京211198

建立基于均相时间分辨荧光免疫分析技术的人胰岛素体外生物学活性测定方法。利用CHO-INSR B1284转基因细胞,通过均相时间分辨荧光免疫分析系统检测人胰岛素的体外生物学活性;对靶细胞铺板密度、药物的量效范围、刺激时间等关键参数进行... 详细信息

建立基于均相时间分辨荧光免疫分析技术的人胰岛素体外生物学活性测定方法。利用CHO-INSR B1284转基因细胞,通过均相时间分辨荧光免疫分析系统检测人胰岛素的体外生物学活性;对靶细胞铺板密度、药物的量效范围、刺激时间等关键参数进行优化;验证方法的专属性、相对准确度、中间精密度、线性与范围,以及细胞的传代稳定性;以重组人胰岛素国家标准品为参比品,将本研究建立的方法应用于其他人胰岛素类似物原料药、制剂的生物学活性测定。结果表明人胰岛素及其类似物存在剂量效应曲线,R^(2)>0.995,符合四参数方程y=(A-D)/[1+(x/C)^(B)]+D。本方法专属性良好,64%、80%、100%、125%、156%共5个效价浓度的待测品相对效价(n=8)的几何均值、相对偏倚、几何变异系数(GCV,%)均符合《中华人民共和国药典》2020版四部通则9401的要求;且方法可适用于其他胰岛素类似物的生物学活性测定。该方法操作简便、耗时短、准确度高、精密度好,可用于胰岛素类产品的生物学活性评价和质量控制。

关键词：生物学活性人胰岛素转基因细胞均相时间分辨荧光技术方法学验证

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1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F型兔源肺炎球菌特异性血清国家参考品的制备

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中国生物制品学杂志 2022年第2期35卷 179-183页

作者：陈琼王珊珊石继春王春娥李红李茂光叶强中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的制备1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F型兔源肺炎球菌特异性血清国家参考品,用于速率比浊法检测疫苗中的多糖含量。方法采用双光径速率浊度免疫分析系统(IMMAGE 800)非竞争性浊度模式进行检测,多糖体积21μL,血清体... 详细信息

目的制备1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F型兔源肺炎球菌特异性血清国家参考品,用于速率比浊法检测疫苗中的多糖含量。方法采用双光径速率浊度免疫分析系统(IMMAGE 800)非竞争性浊度模式进行检测,多糖体积21μL,血清体积21μL,反应缓冲液体积300μL,增益系数为4,反应时间为3.5 min。确定1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F型兔源肺炎球菌特异性血清候选参考品的工作浓度、线性范围、检测限、定量限,并验证专属性和稳定性。采用本实验制备的血清国家参考品及市售血清同时检测2个厂家的23价肺炎球菌多糖疫苗的多糖含量。结果确定各型血清候选参考品的工作浓度在原倍至4倍稀释度之间,在相应工作浓度下,多糖浓度在1~6μg/mL范围时,与响应值呈良好的线性关系,相关系数(R2)均>0.980;检测限和定量限均低于多糖候选参考品最低点(1μg/mL)的反应值;各型血清候选参考品特异性良好,无交叉反应;血清候选参考品于2~8℃保存28 d后仍具有良好的稳定性。除厂家2疫苗的6B和9V型外,2种血清对厂家2疫苗其他型别及厂家1疫苗所有型别多糖含量检测结果的相对标准偏差(RSD)<15%。结论成功制备了12种兔源肺炎球菌特异性血清国家参考品,可用于速率比浊法检测23价肺炎球菌多糖疫苗的多糖抗原含量。

关键词：肺炎球菌特异性血清国家参考品速率比浊法

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第九批狂犬病疫苗效力检定用国家标准品的制备和质量研究

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微生物学免疫学进展 2024年第2期52卷 8-13页

作者：王云鹏李加石磊泰吴小红赵丹华叶强李玉华曹守春中国食品药品检定研究院虫媒病毒疫苗室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

目的制备第九批狂犬病疫苗效力检定用国家标准品,并进行质量研究。方法按照《中华人民共和国药典》2015版(三部)(简称《中国药典》)中关于国家药品标准品制备的相关要求,采用生物反应器工艺,以Vero细胞为基质培养狂犬病病毒CTN-1V疫苗... 详细信息

目的制备第九批狂犬病疫苗效力检定用国家标准品,并进行质量研究。方法按照《中华人民共和国药典》2015版(三部)(简称《中国药典》)中关于国家药品标准品制备的相关要求,采用生物反应器工艺,以Vero细胞为基质培养狂犬病病毒CTN-1V疫苗株,经收获、超滤浓缩、病毒灭活和水解后,层析柱纯化得到疫苗原液。采用ELSIA对原液中的糖蛋白抗原含量进行测定,以终浓度为3.0%的人血清白蛋白为稳定剂,并按原液糖蛋白抗原含量7.0 EU/mL进行半成品配制,之后按1.0 mL/支规格进行无菌分装,采用2台冻干机冻干,批号分别为201906001-01、201906001-02,对分装冻干候选标准品的外观、分装精度和均匀性进行检查。并依据《中国药典》中冻干人用狂犬病疫苗制品相关标准分别对单次收获液、疫苗原液和冻干标准品的无菌检查等项目进行了检定。结果单次病毒收获液、原液质量均符合要求,该批原液中糖蛋白抗原含量为25.9 EU/mL。标准品冻干成品外观、分装精度和均匀性均符合标准物质的要求。另外,该2批候选标准品的渗透压、pH、水分等项目均符合《中国药典》的相关要求。结论本研究制备的候选标准品各项质量检测指标均符合《中国药典》的各项要求,分装精度和均匀性良好,可在完成效价值的协作标定并经批准后作为第九批狂犬病疫苗国家标准品使用。

关键词：狂犬病疫苗疫苗效价标准品制备质量指标

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