检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医药生物技术 2018年第6期13卷 488-492页

作者：谭亚军夏德菊李喆晁哲田霖董国霞侯启明马霄中国食品药品检定研究院百白破疫苗与毒素室/卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的建立定量检测白喉和破伤风类毒素抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法。方法分别采用白喉、破伤风单抗包被酶标板,兔抗白喉、破伤风多抗作为二抗,辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG抗体作为酶标抗体,以平行线法建立定量检测白喉和破伤... 详细信息

目的建立定量检测白喉和破伤风类毒素抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法。方法分别采用白喉、破伤风单抗包被酶标板,兔抗白喉、破伤风多抗作为二抗,辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG抗体作为酶标抗体,以平行线法建立定量检测白喉和破伤风类毒素抗原含量的夹心ELISA法,并进行方法学验证。结果两种定量检测ELISA方法的验证结果均符合规定。检测白喉类毒素抗原ELISA方法的定量限为8.90×10-4Lf/ml,回收率为98.35%,批内变异系数(CV)≤10.59%,批间CV≤13.51%;检测破伤风类毒素抗原ELISA方法的定量限为2.13×10^(-3)Lf/ml,回收率为107.28%,批内CV≤13.96%,批间CV≤10.06%。结论建立了白喉、破伤风类毒素抗原ELISA检测方法,该法特异性强、准确度高、重复性好,可用于白喉破伤风疫苗产品的质量控制和生产过程控制。

关键词：白喉破伤风抗原白喉-破伤风菌苗酶联免疫吸附测定

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两种不同类型无细胞百日咳疫苗诱导小鼠免疫应答分析

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微生物学免疫学进展 2018年第4期46卷 14-18页

作者：王丽婵晁哲卫辰吴燕骆鹏马霄中国食品药品检定研究院百白破疫苗与毒素室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

目的比较两种不同类型无细胞百日咳疫苗免疫小鼠后诱导体液免疫和细胞免疫应答的特点。方法将BALB/c小鼠分为3组(分别纯化Pa组、共纯化Pa组、PBS组),分别用稀释后的两种不同工艺生产的无细胞百日咳疫苗及PBS皮下接种,接种量0.5 m L/只,... 详细信息

目的比较两种不同类型无细胞百日咳疫苗免疫小鼠后诱导体液免疫和细胞免疫应答的特点。方法将BALB/c小鼠分为3组(分别纯化Pa组、共纯化Pa组、PBS组),分别用稀释后的两种不同工艺生产的无细胞百日咳疫苗及PBS皮下接种,接种量0.5 m L/只,于第4周加强免疫,剂量与初免相同。于免疫后第1周、第4周和第5周取血,分离血清用于检测小鼠抗百日咳抗体Ig G水平(抗-PT和抗-FHA);同时于加强免疫后第7天,分离小鼠脾淋巴细胞,经刺激后,取其培养上清,用流式细胞微球芯片捕获法(cytometric bead array,CBA法)测定脾淋巴细胞经体外刺激后所产生的Th1、Th2和Th17型细胞因子的含量。结果对两种类型无细胞百日咳疫苗组检测的结果进行比较,在免后第4周,分别纯化Pa组和共纯化Pa组的抗-PT和抗-FHA Ig G水平差异无统计学意义(P>0.05);但在免后第5周,分别纯化Pa组的抗-PT和抗-FHA Ig G水平均高于共纯化Pa组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。经PT刺激后诱导产生的细胞因子,分别纯化Pa组的IL-4含量高于共纯化Pa组,差异具有统计学意义(P<0.05);分别纯化Pa组和共纯化Pa组的其他细胞因子差异均无统计学意义(P>0.05)。结论两种类型的无细胞百日咳疫苗免疫小鼠后均能诱导产生体液免疫应答和细胞免疫应答。

关键词：无细胞百日咳疫苗免疫应答抗体细胞因子

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破伤风抗体体外结合ELISA检测方法的建立及初步验证

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中国生物制品学杂志 2017年第9期30卷 969-972,976页

作者：董国霞田霖晁哲侯启明马霄中国食品药品检定研究院百白破疫苗与毒素室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的建立破伤风抗体体外结合ELISA检测方法,并进行初步验证。方法将破伤风疫苗免疫后获得的小鼠血清与破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)在体外进行结合,将结合后的血清转移至已包被的酶标板中,分别加入二抗、酶标抗体和底物等进行检测,... 详细信息

目的建立破伤风抗体体外结合ELISA检测方法,并进行初步验证。方法将破伤风疫苗免疫后获得的小鼠血清与破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)在体外进行结合,将结合后的血清转移至已包被的酶标板中,分别加入二抗、酶标抗体和底物等进行检测,建立破伤风抗体体外结合双抗夹心ELISA法。对建立的方法进行特异性、线性范围、检测限、重复性和准确性初步验证。结果建立的破伤风抗体体外结合双抗夹心ELISA法的标准曲线在浓度为0.016~1 U/ml之间时,可获得最佳线性,相关系数R=0.999 8;检测限为0.009 U/ml;与白喉-百日咳抗体无交叉反应;重复性验证中高浓度和低浓度质控血清的变异系数(CV)分别为4.467%和5.419%;准确性验证中高浓度和低浓度质控血清的相对偏差分别为-8.03%和-14%。结论建立的破伤风抗体体外结合ELISA检测方法具有良好的特异性、重复性和准确性,为破伤风疫苗效价检测新方法的建立奠定了基础。

关键词：破伤风抗体体外结合酶联免疫吸附测定

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第1代百日咳毒素国家参考品的标定

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中国生物制品学杂志 2018年第8期31卷 853-857页

作者：卫辰晁哲王丽婵吴燕张霖阳潘殊男方习静张立志刘翠王魁程之铭骆鹏马霄中国食品药品检定研究院百白破疫苗与毒素室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629 北京北生研生物制品有限公司细菌类疫苗研究室北京100176 武汉生物制品研究所有限责任公司细菌类疫苗研究室湖北武汉430207 北京科兴生物制品有限公司研发中心北京100085 北京民海生物科技有限公司质量控制部北京102600 华兰生物疫苗有限公司质控部河南新乡453000

目的标定第1代百日咳毒素国家参考品。方法以WHO第1代百日咳毒素国际参考品JNIH-5为标定标准品,组织6个实验室采用CHO细胞簇集试验的方法对百日咳毒素候选参考品C1进行协作标定,并给予国际单位值。由中国食品药品检定研究院通过CHO细胞... 详细信息

目的标定第1代百日咳毒素国家参考品。方法以WHO第1代百日咳毒素国际参考品JNIH-5为标定标准品,组织6个实验室采用CHO细胞簇集试验的方法对百日咳毒素候选参考品C1进行协作标定,并给予国际单位值。由中国食品药品检定研究院通过CHO细胞簇集试验对4和37℃放置7、14、21、28 d的C1进行热加速稳定性检测,-20℃放置36个月的C1进行实时稳定性检测,将C1用不同稀释液(水、PBS、50%甘油)复溶,于4、-20、-80℃分别放置1、7及14 d,检测复溶稳定性。结果 C1经6个实验室的协作标定获得104个有效结果,最终确定候选参考品簇集活性为3 000 IU/支。C1的纯度、外观、水分、无菌、分装精度均合格,与JNIH-5的抗原抗体结合能力差异无统计学意义(P>0.05),具有良好的实时稳定性、热加速稳定性,C1经50%甘油复溶后2周内稳定性较好。结论该候选参考品符合国家参考品的各项要求,可用于百日咳毒素CHO簇集试验及组分百日咳疫苗原液抗原纯度、安全性和免疫原性的检测。

关键词：百日咳毒素 CHO簇集试验参考品

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两种Lowry法检测百日咳疫苗原液蛋白含量的比较

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中国生物制品学杂志 2017年第5期30卷 519-524页

作者：卫辰骆鹏王丽婵张华捷晁哲吴燕侯启明马霄胡云章中国医学科学院北京协和医学院医学生物研究所云南昆明650118 中国食品药品检定研究院百白破疫苗与毒素室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的比较《中国药典》三部(2015版)收录的两种Lowry法测定百日咳疫苗原液蛋白定量的差异,为原液蛋白准确定量和新版药典Lowry法的适用性确认提供依据。方法 9个实验室分别按照现行药典收录的两种Lowry法,对4家15批百日咳疫苗原液蛋白含... 详细信息

目的比较《中国药典》三部(2015版)收录的两种Lowry法测定百日咳疫苗原液蛋白定量的差异,为原液蛋白准确定量和新版药典Lowry法的适用性确认提供依据。方法 9个实验室分别按照现行药典收录的两种Lowry法,对4家15批百日咳疫苗原液蛋白含量进行测定。并与凯氏定氮法检测结果进行比较。结果方法 1(未经酸沉淀Lowry法)实验室内测定结果的变异系数(CV)均值在1.7%~8.9%之间,实验室间测定结果的CV值在3.9%~9.3%之间;方法 2(酸沉淀Lowry法)实验室内测定结果的CV均值在3.6%~7.4%之间,实验室间测定结果的CV值在3.9%~18.1%之间。同一样品两种方法测定结果差异有统计学意义(P<0.001),结果呈相关性(R2=0.944 9)。在与部分样品测得的凯氏定氮法结果的比较中,方法 1差异有统计学意义(P<0.001),方法 2差异无统计学意义(P>0.05)。结论所有样品采用同一种Lowry方法测定时所得结果实验室内和实验室间一致性较好,采用方法 2测定结果明显低于方法 1,更接近凯氏定氮法结果真实值,表明酸沉淀对Lowry法百日咳原液蛋白定量有显著影响。与Lowry方法 1相比,Lowry方法 2更能准确反映百日咳疫苗原液的真实蛋白含量,且精密度、适用性均符合要求。

关键词：百日咳原液蛋白定量 Lowry法

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SEA为载体蛋白的A/C群脑膜炎奈瑟菌结合物初步免疫效果评价

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微生物学免疫学进展 2017年第2期45卷 29-35页

作者：王丽婵谭亚军卫辰张华捷骆鹏张庶民马霄中国食品药品检定研究院百白破疫苗与毒素室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的对以金黄色葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxin A,SEA)为载体蛋白的A/C群脑膜炎奈瑟菌结合物的免疫效果进行初步评价。方法采用1-氰基-4-二甲氨基-砒啶四氟硼酸(1-cyano-dimethylamino pyridiniumtetrafluoroborate,CDAP)活化法,将SEA、破伤风类毒素(tetanus toxin,TT)分别与A群脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖(group A *** capsular polysaccharide,GAMP)、C群脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖(group C *** cap-sular polysaccharide,GCMP)结合制备结合物;将结合物分别免疫BALB/c小鼠,腹部皮下免疫3次,于第1针免后第9天、第19天、第27天眼眶采血,分离血清备用;检测体液免疫及细胞免疫反应水平。结果 SEA与GAMP结合后能增强抗-GAMP Ig G抗体水平,第3次免后GAMP-SEA组多糖抗体水平达到1∶12 800,高于GAMP组1∶400,但GCMP-SEA组结果不理想。SEA与GAMP结合后均能激发细胞免疫反应,IFN-γ和IL-4的SFC与GAMP组比较均升高,且IFN-γ高于IL-4。SEA与GAMP、GCMP结合后Th1/Th2细胞亚群比值分别达到23.48和22.19,高于GAMP组(14.09)和GCMP组(16.73),差异有统计学意义(P<0.05),提示SEA与GAMP、GCMP结合后可激发细胞免疫。结论 SEA与GAMP、GCMP结合后既能增强GAMP、GCMP的免疫原性,提高体液免疫反应,又能激发细胞免疫反应,提示SEA具备作为A/C群脑膜炎奈瑟菌结合疫苗载体蛋白的可行性。

关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素A 破伤风类毒素载体蛋白 A/C群脑膜炎奈瑟菌结合物免疫效果

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肺炎链球菌蛋白PspC的制备与鉴定

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中国医药生物技术 2017年第5期12卷 397-401页

作者：谭亚军王丽婵卫辰张华捷侯启明张庶民马霄北京中国食品药品检定研究院百白破疫苗与毒素室/卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室 100050

目的对肺炎链球菌表面蛋白C(PspC)进行全基因合成、重组表达、纯化制备和鉴定。方法根据Gen Bank中Psp C的基因序列和氨基酸序列,通过密码子优化和全基因合成的方式获得目的蛋白基因,构建无标签、高效重组表达菌株,建立重组蛋白的纯化... 详细信息

目的对肺炎链球菌表面蛋白C(PspC)进行全基因合成、重组表达、纯化制备和鉴定。方法根据Gen Bank中Psp C的基因序列和氨基酸序列,通过密码子优化和全基因合成的方式获得目的蛋白基因,构建无标签、高效重组表达菌株,建立重组蛋白的纯化制备方法,并进行抗原鉴定及免疫原性检测分析。结果人工合成的Psp C基因序列经鉴定与预期一致,目的蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,表达量在30%以上,经两步纯化后纯度达到95%。重组蛋白能与肺炎链球菌阳性血清产生特异性抗原抗体反应,免疫小鼠后可诱导产生较高水平的蛋白特异性抗体。结论获得了重组肺炎链球菌蛋白Psp C,其具有与天然抗原相似的抗原性和免疫原性,为今后开展疫苗研制、载体蛋白应用等研究奠定基础。

关键词：肺炎链球菌重组蛋白质类肺炎链球菌表面蛋白C

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首批百日咳杆菌鼠源抗血清国家参考品的制备和标定

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微生物学免疫学进展 2017年第4期45卷 17-20页

作者：王丽婵骆鹏卫辰晁哲潘殊南张霖阳邓新田奇叶晓珂肖詹容朱涛马霄中国食品药品检定研究院百白破疫苗与毒素室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 北京天坛生物制品股份有限公司菌苗室北京100176 天津康希诺生物技术有限公司理化检测室天津300450

目的制备和标定百日咳杆菌鼠源抗血清国家参考品。方法按《中华人民共和国药典》2015版(三部)(简称《中国药典》)相关要求,制备候选百日咳杆菌鼠源抗血清参考品(简称候选参考品),以WHO百日咳杆菌鼠源抗血清标准品(编号97/642)为标准,组... 详细信息

目的制备和标定百日咳杆菌鼠源抗血清国家参考品。方法按《中华人民共和国药典》2015版(三部)(简称《中国药典》)相关要求,制备候选百日咳杆菌鼠源抗血清参考品(简称候选参考品),以WHO百日咳杆菌鼠源抗血清标准品(编号97/642)为标准,组织3家单位进行协作标定,并采用热加速试验对候选参考品进行稳定性观察。结果共制备合格候选参考品300支,其外观、水分、分装精度均符合《中国药典》的相关要求;协作标定结果显示,室内和室间几何变异系数(geometric coefficient of variation,GCV)均低于20%;经统计学分析,最终确定候选参考品中含PT-Ig G、FHA-Ig G、PRN-Ig G分别为95 IU/m L、917 IU/m L、102 IU/m L,95%可信区间分别为91.7~103.7 IU/m L、900.2~944.5 IU/m L、99.4~106.1 IU/m L;每支安瓿分别含PT-Ig G 19 IU、FHA-Ig G 183 IU、PRN-Ig G21 IU;候选参考品于-20℃放置15个月及37℃放置7 d、14 d、21 d和28 d后,各种百日咳组分抗体的酶标单位值均变化不大,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论首批百日咳杆菌鼠源抗血清国家参考品均符合《中国药典》的各项要求,且一致性、稳定性良好,可用于百日咳组分疫苗小鼠效力血清学方法的质量控制评价。

关键词：百日咳杆菌百日咳组分疫苗鼠源抗血清国家参考品

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国内外破伤风相关疫苗的质量参数比较

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中国药学杂志 2015年第8期50卷 714-717页

作者：董国霞田霖谭亚军侯启明马霄中国食品药品检定研究院百白破疫苗与毒素室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的了解基础免疫阶段在我国市场上主要使用的国内外破伤风相关疫苗的关键质量参数及其水平。方法以国内外各厂家分别生产的10批次产品为依据,对其质量数据进行统计、分析和比较。结果国产产品和进口产品各有其优势所在,同时也均有需进... 详细信息

目的了解基础免疫阶段在我国市场上主要使用的国内外破伤风相关疫苗的关键质量参数及其水平。方法以国内外各厂家分别生产的10批次产品为依据,对其质量数据进行统计、分析和比较。结果国产产品和进口产品各有其优势所在,同时也均有需进一步提升的空间。结论期望更多国内外疫苗厂家能针对自身产品特点,进一步提高产品质量,在未来制造出更安全、有效且使用便捷的新型疫苗。

关键词：破伤风相关疫苗质量参数比较

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肺炎链球菌表面蛋白A的制备与鉴定

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中国医药生物技术 2015年第4期10卷 335-339页

作者：王丽婵谭亚军卫辰骆鹏张庶民侯启明马霄中国食品药品检定研究院百白破疫苗与毒素室/卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的通过基因合成法获取3种不同分支肺炎链球菌表面蛋白A(Psp A)的目的基因,制备重组蛋白。方法根据Gen Bank中Psp A相应分支菌株的基因序列、氨基酸序列,通过密码子优化合成目的基因,并与表达载体连接且转化到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3... 详细信息

目的通过基因合成法获取3种不同分支肺炎链球菌表面蛋白A(Psp A)的目的基因,制备重组蛋白。方法根据Gen Bank中Psp A相应分支菌株的基因序列、氨基酸序列,通过密码子优化合成目的基因,并与表达载体连接且转化到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中诱导表达。表达产物经不同步骤层析纯化获得目的蛋白,对其进行免疫原性鉴定。结果人工合成3株菌株的Psp A基因序列经鉴定与Gen Bank的基因序列一致。3种蛋白在大肠杆菌中均以可溶形式表达,表达量在30%以上,经多步骤纯化其纯度达到90%。3种蛋白均能与阳性血清产生特异性抗原抗体反应。结论成功制备3种无标签Psp A蛋白,且具备与天然抗原相似的抗原性,为后续研究奠定基础。

关键词：肺炎链球菌基因表达纯化

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