检索结果-内蒙古大学图书馆

中国免疫学杂志 2008年第1期24卷 38-41,48页

作者：王菁华孙博李国忠王丹丹刘玉梅王琪穆莉莉金连弘李呼伦哈尔滨医科大学神经生物教研室哈尔滨医科大学神经生物学黑龙江省高校重点实验室哈尔滨150081 哈尔滨医科大学第一临床医学院神经内科哈尔滨150081

目的:探讨NK1.1+细胞在重症肌无力疾病进展中发挥的作用以及其调节机制。方法:(1)用腹腔注射抗NK1.1抗体和抗TGF-β抗体的方法制造NK1.1+细胞缺陷和TGF-β缺陷的小鼠模型;(2)通过肌无力评分标准来评价试验组和对照组小鼠之间实验性自身... 详细信息

目的:探讨NK1.1+细胞在重症肌无力疾病进展中发挥的作用以及其调节机制。方法:(1)用腹腔注射抗NK1.1抗体和抗TGF-β抗体的方法制造NK1.1+细胞缺陷和TGF-β缺陷的小鼠模型;(2)通过肌无力评分标准来评价试验组和对照组小鼠之间实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)的发病情况和病情严重程度的区别;(3)观察淋巴细胞增殖以及应用ELISA方法检测细胞因子TGF-β、抗AchRIgG的各种亚型。结果:(1)NK1.1+细胞缺陷的小鼠同对照组小鼠相比EAMG发病时间延迟且病情严重程度明显降低,但在免疫后7天用抗NK1.1处理却不能改变EAMG的临床病程。(2)NK1.1+细胞缺陷没有明显改变由AchR刺激产生的T细胞增殖反应,但由AchR特异性T细胞所产生的TGF-β有明显的增高。(3)经TGF-β中和抗体处理的NK1.1+细胞缺陷的小鼠其EAMG的进展明显加快。(4)NK1.1+细胞缺陷鼠血清中抗AchRIgG、AchRIgG2b亚型的含量下降。结论:NK1.1+细胞在EAMG的起始时发挥重要的作用,并且NK1.1+细胞的缺失将导致AchR特异性T细胞产生TGF-β的增加,从而抑制了重症肌无力的进展。

关键词：实验性自身免疫性重症肌无力 NK1.1^+ 细胞细胞因子 TGF—β

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高胆固醇血症致大鼠心室肌细胞L-型钙电流失衡的机制

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中国药理学通报 2008年第3期24卷 336-339页

作者：吴红金秀东白云龙关立新吕延杰杨宝峰哈尔滨医科大学药理学教研室黑龙江哈尔滨150086 牡丹江医学院生理学教研室黑龙江牡丹江157011 牡丹江医学院药理学教研室黑龙江牡丹江157011

目的研究高胆固醇血症(HC)对大鼠心室肌细胞L-型钙电流(ICa-L)以及细胞内钙浓度[Ca2+]i的影响。方法Wistar大鼠随机分为高胆固醇血症组和对照组各6只,分别给予高胆固醇饲料和普通饲料饲养4wk后,检测血脂;酶解法急性分离大鼠单个心肌细胞... 详细信息

目的研究高胆固醇血症(HC)对大鼠心室肌细胞L-型钙电流(ICa-L)以及细胞内钙浓度[Ca2+]i的影响。方法Wistar大鼠随机分为高胆固醇血症组和对照组各6只,分别给予高胆固醇饲料和普通饲料饲养4wk后,检测血脂;酶解法急性分离大鼠单个心肌细胞,采用全细胞膜片钳技术和激光扫描共聚焦显微镜观察高胆固醇血症对大鼠心室肌细胞ICa-L以及[Ca2+]i的变化。结果喂高胆固醇饲料4wk后,血清总胆固醇较正常对照组明显增高(P<0·01),甘油三脂无明显变化。膜片钳显示:高胆固醇血症大鼠各实验电压L-型钙电流电流密度均减少。在实验电压为0mV时,大鼠心室肌细胞L-型钙电流密度从正常对照组(-8·56±1·29)pA/pF减少到高胆固醇血症组(-5·24±0·90)pA/pF。激光共聚焦显示:在静息状态下,[Ca2+]i升高,峰值荧光强度由211·88±9·08增加至458·63±23·50(P<0·01)。结论高胆固醇血症可导致细胞内钙超载,使L-型钙通道电流失衡,可能是诱导心律失常的原因之一。

关键词：高胆固醇血症心律失常细胞浆内钙浓度 L-型钙电流膜片钳技术

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新城疫病毒D90毒株对肺癌A549细胞生物学特性的研究

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中国预防兽医学报 2008年第3期30卷 179-182,189页

作者：符芳刘春燕高瑞杨宝峰宋纯李曦中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省科技成果转化中心黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨医科大学黑龙江哈尔滨150001

本试验采用细胞培养、吖啶橙染色、电镜、流式细胞仪等方法,研究了新城疫D90病毒株对肺癌A549细胞的体外杀伤作用。D90感染的细胞经吖啶橙染色后,可见到典型的细胞凋亡的形态学变化;电镜下可观察到凋亡小体,同时也观察到了典型的坏死细... 详细信息

本试验采用细胞培养、吖啶橙染色、电镜、流式细胞仪等方法,研究了新城疫D90病毒株对肺癌A549细胞的体外杀伤作用。D90感染的细胞经吖啶橙染色后,可见到典型的细胞凋亡的形态学变化;电镜下可观察到凋亡小体,同时也观察到了典型的坏死细胞;流式细胞仪的分析结果表明,在24 h的时间段,病毒的作用机制主要表现为凋亡,在48 h时间段内,病毒的作用机制主要表现为坏死。人胎儿肝细胞单层培养物中接种D90后,未观察到细胞病变。结果表明,新城疫D90毒株作用于肺癌A549细胞的机制主要为凋亡与坏死相结合,因此它有期望成为一种有效的抗肿瘤生物制剂。

关键词：凋亡吖啶橙染色流式细胞仪

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中药毒性理论在我国的形成与创新发展

中药毒性理论在我国的形成与创新发展

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《中国中药杂志》第九届编委会暨中药新药研发理论与技术创新论坛

作者：赵军宁杨明陈易新叶祖光四川省中医药科学院药理毒理研究所国家中医药管理局中药质量生物评价重点研究室中药品质评价与中药四川省重点实验室四川成都 610041 成都中医药大学药学院四川成都 610075 国家食品药品监督管理局药品评价中心北京 100045 北京中研同仁堂医药研发有限公司北京 100075

本文系统概述了中药毒性理论在我国的形成与发展的基本状况，对中药毒性理论的科学内涵进行深入讨论，并提出既能体现中医药优势和特色，又可与国际接轨的“药毒网络调控学说”，将有助于为临床安全有效的应用有毒中药提供科学支撑和新... 详细信息

本文系统概述了中药毒性理论在我国的形成与发展的基本状况，对中药毒性理论的科学内涵进行深入讨论，并提出既能体现中医药优势和特色，又可与国际接轨的“药毒网络调控学说”，将有助于为临床安全有效的应用有毒中药提供科学支撑和新的理论依据。

关键词：中药毒性理论中药药性临床应用

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人呼吸道腺病毒通用特异检测试剂的研究及应用

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中国地方病学杂志 2008年第6期27卷 686-690页

作者：陈晶曲章义魏凤香张鸿彦王鹏王迎晨姜海英哈尔滨医科大学公共卫生学院卫生微生物学教研室 150081

目的建立一种特异性强、灵敏度高、操作简便的呼吸道腺病毒检测方法，为临床呼吸道腺病毒通用特异诊断试剂的研发奠定实验基础。方法用生物信息学软件DNAMAN5．2．2、GeneRunner3．05、BLAST对GenBank中已收录的10个型别人呼吸道腺病毒... 详细信息

目的建立一种特异性强、灵敏度高、操作简便的呼吸道腺病毒检测方法，为临床呼吸道腺病毒通用特异诊断试剂的研发奠定实验基础。方法用生物信息学软件DNAMAN5．2．2、GeneRunner3．05、BLAST对GenBank中已收录的10个型别人呼吸道腺病毒核酸全序列进行比对分析，找m高度保守序列，设计5对腺病毒通用特异引物，同时确保PCR产物具有型别特异性。用NP-40裂解法制备模板，对引物的有效性、特异性及灵敏忡进行验证．并应用于64例急性呼吸道感染患儿咽拭子标本的检测，阳性标本的PCR产物直接测序鉴定血清型．将阳性标本接种HeLa细胞，光镜下观察细胞病变，电镜下观察病毒形态。结果BLAST结果表明，5对引物与其他病毒、细菌及人类基因组等无高度同源性，是腺病毒特异性引物。用5对引物扩增人3型腺病毒DNA，均出现阳性目的条带，但不能检测呼吸道合胞病毒和柯萨奇病毒，验证了引物的有效性和腺病毒特异性。模板稀释、病毒稀释均可检测到10。梯度，说明引物具有较高的灵敏性，同时验证了NP-40裂解法的稳定性。64例临床咽拭子标本巾检测出2例阳性标本，阳性率为3．13％（2／64）。阳性标本接种HeLa细胞，光镜下可见细胞变圆、聚集成葡萄串状、脱落等腺病毒所致细胞病变，电镜下可见细胞核内有典型的品格状排列的腺病毒颗粒。PCR产物测序结果表明，2株病毒均为B组腺病毒。结论成功设计了腺病毒通用的、特异的，同时扩增产物又具有腺病毒型别特异性的引物。用该引物建立的PCR方法检测呼吸道标本中的腺病毒DNA具有灵敏和特异的特点，适用于临床常规诊断腺病毒感染。

关键词：腺病毒,人呼吸系统诊断试验,常规聚合酶链反应

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动脉粥样硬化大鼠心肌梗死模型中钙敏感受体的表达和细胞凋亡通路变化

动脉粥样硬化大鼠心肌梗死模型中钙敏感受体的表达和细胞凋亡通路...

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国际心脏研究会（ISHR）中国分会第十届暨中国病理生理学会心血管专业委员会第十三届学术会议

作者：郭津徐长庆李鸿珠王丽娜张伟华李光伟赵雅君张力田野哈尔滨医科大学病理生理教研室黑龙江生物医药工程重点实验室

本文旨在观察钙敏感受体在动脉粥样硬化大鼠心肌梗死模型中的表达和细胞凋亡通路的变化。采用高脂饮食和注射VD3的方法,复制大鼠高脂血症和动脉粥样硬化模型,异丙肾上腺素(200 mg/kg体重)皮下注射制备大鼠心肌梗死模型。Wistar大鼠随机... 详细信息

本文旨在观察钙敏感受体在动脉粥样硬化大鼠心肌梗死模型中的表达和细胞凋亡通路的变化。采用高脂饮食和注射VD3的方法,复制大鼠高脂血症和动脉粥样硬化模型,异丙肾上腺素(200 mg/kg体重)皮下注射制备大鼠心肌梗死模型。Wistar大鼠随机分为6组:正常对照组(Control);动脉硬化组(AS);异丙肾上腺素1d和2d组(ISO/1d,ISO/2d);动脉硬化+异丙肾上腺素1d和2d组(AS/1d,AS/2d)(n=12)。采用RT-PCR和Western blot分别检测CaSR、Bax、Bcl-2、caspase-3、Fas的mRNA和蛋白表达;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况;光镜观察腹主动脉形态学变化;光镜和电镜观察心肌形态学和超微结构变化;紫外分光法检测乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物岐化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)的含量,电化学免疫发光法检测肌钙蛋白(cTnT)水平。与Control组比较,ISO/1d组:LDH和CK活性、MDA含量和cTnT水平、细胞凋亡指数以及CaSR、Bax、caspase-3和Fas的表达均升高,同时SOD活性降低,Bcl-2表达减少,心肌细胞超微结构损伤严重;与ISO/1d组比较,ISO/2d组,上述变化有所减轻,AS/1d组则进一步加重。动脉粥样硬化大鼠心肌钙敏感受体的表达增加导致对心肌梗死的敏感性增加,其机制与氧化应激损伤和细胞凋亡进一步加重有关。

关键词：钙敏感受体大鼠动脉粥样硬化心肌梗死细胞凋亡

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心血管系统钙敏感受体的研究进展

心血管系统钙敏感受体的研究进展

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国际心脏研究会（ISHR）中国分会第十届暨中国病理生理学会心血管专业委员会第十三届学术会议

作者：徐长庆张伟华王丽娜郭津李光伟哈尔滨医科大学病理生理教研室黑龙江生物医药工程重点实验室

钙敏感受体（calcium-sensing receptor,CaSR）是G蛋白耦联受体C家族成员（该家族成员还包括mGluR、GABAB受体和信息素受体）在哺乳动物、鸟、两栖动物、爬虫动物和鱼类均有分布。1993年,Brown EM等人首次从牛甲状旁腺克隆出CaSR。CaSR... 详细信息

钙敏感受体（calcium-sensing receptor,CaSR）是G蛋白耦联受体C家族成员（该家族成员还包括mGluR、GABAB受体和信息素受体）在哺乳动物、鸟、两栖动物、爬虫动物和鱼类均有分布。1993年,Brown EM等人首次从牛甲状旁腺克隆出CaSR。CaSR由氨基端的细胞外区（ECD）、7个跨膜螺旋的跨膜区（TMD）和胞内羧基端尾部（COOH）组成。ECD含多个糖基化位点,TMD的细胞内环和COOH尾部有PKC和PKA磷酸化位点。细胞外钙是CaSR的天然配体,CaSR对其他激动剂的敏感性为:La>Gd>Be>Ca=Ba>Sr>Mg。CasR主要分布在甲状旁腺、肾脏、肠道和骨细胞,也广泛表达在中枢系统、胃、食道、肝、胰腺等组织。CaSR的主要功能是维持机体Ca和其它金属离子的稳态,同时参与调控细胞的分泌、增殖、分化、趋化、凋亡、基因表达、离子通道开关等。CaSR的研究已成为国际热点,国内则刚起步,涉及心血管领域CaSR的研究开展较晚。2003年,我们首次证明成年大鼠心肌组织存在CaSR的功能表达。2006年,Tfelt-Hansen等人证实,在新生大鼠心室肌细胞也有功能性表达。其他实验小组近年来也提供了一些证据,表明在人主动脉平滑肌细胞、人主动脉内皮细胞、大鼠肠系膜动脉、猪冠状动脉内皮细胞等,也有CaSR的功能性表达。本课题组以大鼠冠脉结扎在体模型、离体心脏灌流模型、分离的单个心肌细胞和原代培养乳鼠心肌细胞为观察对象,采用高效液相色谱、流式细胞仪、膜片钳、激光共聚焦,Western blot、RT-PCR、原位杂交、免疫荧光、TUNEL染色、MTT等手段,对心血管系统CaSR开展了多层次、多角度的系列研究,首次发现、揭示或证实了:（1）成年、新生和不同鼠龄大鼠心肌CaSR的表达特点和规律;（2）CaSR激活通过G蛋白-PLC-IP3通路引起细胞内钙增加,参与心肌钙稳态和兴奋-收缩耦联的调控,并是细胞钙超载的发生机制之一;（3）CaSR在心肌缺血-再灌注损伤的表达规律（缺血期表达增加,再灌注早期进一步增加,晚期则减少）和发挥的关键作用,通过激活MAPKs-Cyt c-Caspase-3通路及Fas受体死亡通路,诱导心肌细胞凋亡。（4）PKCε介导的CaSR活性改变,参与了缺血后适应的心肌保护作用。（5）心肌低氧-复氧过程中CaSR表达增多,通过钙稳态失衡,诱发内质网应激增强,导致心肌细胞凋亡。（6）在异丙肾性大鼠心肌肥大模型和AngⅡ诱导的心肌细胞肥大模型,CaSR的表达均增加,并通过神经钙调磷酸酶（CaN）通路和PKC通路参与AngⅡ诱导的大鼠心肌肥大。（7）动脉粥样硬化大鼠心肌钙敏感受体的表达增加,进而导致对心肌梗死的敏感性增加,其机制与氧化应激损伤和细胞凋亡进一步加重有关。

关键词：心血管系统缺血-再灌注钙敏感受体

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人分化抑制因子Id-3基因在大肠埃希菌中的高效表达及其多克隆抗体的制备

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中国现代医学杂志 2008年第23期18卷 3446-3449页

作者：林燕童铁钢穆丹梅白宇杨木蕾郑敏吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(兽医生物技术国家重点实验室) 黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨医科大学附属第一医院黑龙江哈尔滨150001

目的在大肠杆菌中表达人Id-3与谷胱甘肽-S转移酶(GST)的融合蛋白,并制备抗人Id-3的多克隆抗体。方法从乳腺癌组织中提取总RNA,用RT-PCR扩增出Id-3的编码序列,克隆至表达载体pGEX-6P-1中,重组质粒经PCR、酶切、测序鉴定后,在大肠杆菌中经... 详细信息

目的在大肠杆菌中表达人Id-3与谷胱甘肽-S转移酶(GST)的融合蛋白,并制备抗人Id-3的多克隆抗体。方法从乳腺癌组织中提取总RNA,用RT-PCR扩增出Id-3的编码序列,克隆至表达载体pGEX-6P-1中,重组质粒经PCR、酶切、测序鉴定后,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达获得GST-Id-3融合蛋白,SDS-PAGE分析表达产物,Western-Blot检测重组抗原的免疫原性。通过亲和层析法纯化表达的GST-Id-3融合蛋白,并以此为抗原制备多克隆抗体。结果经PCR、酶切、测序鉴定证明,Id-3基因已正确克隆至pGEX-6P-1中,经IPTG诱导后,表达出相对分子量为39000GST-Id-3融合蛋白。ELISA和琼扩试验鉴定所制备的多克隆抗体可以与GST-Id-3融合蛋白发生特异性反应。结论Id-3基因在大肠杆菌中的成功表达及制备的多克隆抗体,为检测Id-3及其在各种组织中的表达水平提供了一种检测途径,也为分析Id-3分子结构、抗原表位和生物学功能奠定了基础。

关键词：人分化抑制因子3(Id-3) 表达纯化多克隆抗体

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P38MAPKc、aspase-8在Fas-放线菌素D诱导Bel-7402细胞凋亡中的作用

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哈尔滨医科大学学报 2008年第3期42卷 216-220页

作者：王玉孙黎光王璐中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室哈尔滨医科大学国际遗传学杂志编辑部黑龙江哈尔滨150081

目的确定P38MAPKc、aspase-8的关系,以探讨Fas-actinomycin D(Fas-AD)诱导Bel-7402细胞凋亡的信号转导机制。方法通过流式细胞仪检测Fas-AD、SB203580(P38MAPK特异性抑制剂)及Ac-IEFD-cho(caspase-8特异性抑制剂)对Bel-7402细胞凋亡的影响;通过Western-blot法检测Fas-AD、SB203580及Ac-IEFD-cho对培养的Bel-7402细胞的P38MAPK、caspase-8的激活及其表达的影响。结果Fas-AD能明显诱导Bel-7402细胞凋亡,SB203580和Ac-IEFD-cho能明显抑制Fas-AD诱导的细胞凋亡。Fas-AD能诱导P38MAPK、caspase-8激活并表达,而SB203580和Ac-IEFD-cho能分别抑制它们的激活及表达。结论在Bel-7402细胞凋亡中,P38MAPK与caspase-8参与Fas-AD凋亡途径,并且相互调节。

关键词： Fas caspase-8 P38MAPK 凋亡

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PRRSV和PCV-2以及PRV多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光PCR检测方法的建立

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中国兽医科学 2008年第6期38卷 494-499页

作者：王小武符芳柴政孔令达蔡雪辉宋淑萍许红喜李曦中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163319

根据GenBank中登录的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白基因、猪圆环病毒2型(PCV-2)rep蛋白基因和猪伪狂犬病病毒(PRV)gE基因的核苷酸序列分别设计了3对特异性引物,成功建立了同时检测PRRSV、PCV-2、PRV的多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光PC... 详细信息

根据GenBank中登录的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白基因、猪圆环病毒2型(PCV-2)rep蛋白基因和猪伪狂犬病病毒(PRV)gE基因的核苷酸序列分别设计了3对特异性引物,成功建立了同时检测PRRSV、PCV-2、PRV的多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光PCR方法。敏感性试验结果显示,PRRSV、PCV-2的敏感性可达250拷贝/μL,PRV的敏感性可达500拷贝/μL。表明,该方法具有较好的特异性、重复性和敏感性,可以用于PRRSV、PCV-2和PRV的快速检测。

关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型猪伪狂犬病病毒多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光 PCR

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