检索结果-内蒙古大学图书馆

中国血吸虫病防治杂志 2024年第4期36卷 361-369页

作者：顾杨杨何于雯陈易居杨振兴李楠吕顺燕朱燕涛阮方超王佳丽王静林大理大学公共卫生学院云南大理671003 云南省传染病医院云南昆明650301 云南省畜牧兽医科学院、云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 昆明医科大学公共卫生学院云南省昆明市东川区动物疫病预防控制中心

目的分离云南省昆明市东川区三带喙库蚊携带的乙型脑炎病毒,分析其分子特征,为云南省乙型脑炎防治提供科学依据。方法2016年7月,在云南省昆明市东川区坝塘村、小新村养猪场采用诱蚊灯采集蚊虫标本,根据蚊虫形态进行蚊种鉴定。每种蚊虫均... 详细信息

目的分离云南省昆明市东川区三带喙库蚊携带的乙型脑炎病毒,分析其分子特征,为云南省乙型脑炎防治提供科学依据。方法2016年7月,在云南省昆明市东川区坝塘村、小新村养猪场采用诱蚊灯采集蚊虫标本,根据蚊虫形态进行蚊种鉴定。每种蚊虫均按60~100只为一组进行研磨后,采用乳仓鼠肾BHK-21细胞和C6/36白蚊伊蚊细胞进行病毒分离,阳性分离物采用黄病毒属引物进行鉴定。采用15对覆盖Ⅰ型基因型乙型脑炎病毒全长特异性引物对阳性分离物进行逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增,采用DNASTAR软件包中的SeqMan软件进行序列拼接,采用MegAlign软件对所获取序列及从GenBank中下载的38条乙型脑炎病毒全序列进行比对、核苷酸和氨基酸同源性分析,采用GeneDoc软件进行氨基酸差异位点分析,采用Mega X软件构建所分离乙型脑炎病毒编码区及E蛋白序列的系统进化树,分别采用SOPMA在线工具和Swiss-Model软件进行E蛋白二级和三级结构预测。结果共采集蚊虫5820只,经形态学鉴定,共有三带喙库蚊3843只(66.03%)。将蚊虫标本分批次进行病毒分离,从三带喙库蚊中分离到1株阳性病毒分离物,编号为YNDC55-33。将其接种至BHK-21和C6/36细胞后均出现细胞病变,黄病毒属引物扩增均为阳性,测序获得含300个核苷酸的长序列。经BLAST比对,YNDC55-33株病毒该段序列与Ⅰ型基因型乙型脑炎病毒同源性较高。对该株病毒全序列进行拼接后,获得一条长度为10845个核苷酸的长序列,编码3432个氨基酸。基于全基因序列和E基因序列构建的系统进化树分析结果显示,新分离的YNDC55-33株与贵州Ⅰ型基因型毒株(GenBank登录号:HM366552)亲缘关系最近,核苷酸同源性为98.5%、氨基酸同源性为99.4%;与Ⅰ型基因型其他乙型脑炎病毒毒株核苷酸同源性为97.96%±0.33%、氨基酸同源性为99.35%±0.08%;与其他基因型核苷酸同源性均<90%、氨基酸同源性均<98%。氨基酸位点分析结果显示,YNDC55-33株与减毒活疫苗株SA14-14-2在E基因上共有16个氨基酸差异位点;在8个与神经毒力相关氨基酸关键位点上,两者有7个位点存在差异。YNDC55-33株E蛋白二级结构及三级结构预测结果均显示,该毒株以无规则卷曲为主要结构特征。结论在昆明市东川区三带喙库蚊体内分离得到1株氨基酸型乙型脑炎病毒,该病毒与减毒活疫苗株SA14-14-2在抗原性表位相关关键氨基酸位点上无明显差异,其主要蛋白结构为无规则卷曲。本研究丰富了云南省乙型脑炎病毒分布资料,可望为云南省流行性乙型脑炎防控提供参考。

关键词：乙型脑炎病毒三带喙库蚊全基因组测序系统进化分析蛋白质结构

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我国牛羊流行性出血病血清抗体调查

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中国预防兽医学报 2019年第1期41卷 29-34页

作者：杨振兴吕敏娜朱沛杨恒肖雷廖德芳谢佳芮朱建波李华春云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 广东省农业科学院动物卫生研究所/广东省兽医公共卫生公共实验室广东广州510640

为了解流行性出血病(EHD)在我国的流行和分布情况,本研究采用竞争ELISA试验方法,对2015年～2017年我国吉林、河北、西藏、重庆、云南等15个省区的6 413份牛羊血清样品进行检测。结果显示,未发现绵羊EHDV阳性血清,山羊EHDV血清阳性率较... 详细信息

为了解流行性出血病(EHD)在我国的流行和分布情况,本研究采用竞争ELISA试验方法,对2015年～2017年我国吉林、河北、西藏、重庆、云南等15个省区的6 413份牛羊血清样品进行检测。结果显示,未发现绵羊EHDV阳性血清,山羊EHDV血清阳性率较低(0～4%),而牛血清EHDV阳性率有明显的地域性和季节性,由北向南逐渐升高(0～65.83%),表明EHD在我国的流行已具有广泛性;秋季阳性率(61.11%～65%)明显高于春季(10%～16.67%)和夏季(29%～32%),表明该病的流行分布状况与其媒介昆虫的活动有密切关系。本研究是我国首次大规模的EHD血清学调查,对有效防控该病提供了重要的实验数据。

关键词：流行性出血病血清学调查竞争ELISA

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珠江上游地区蚊虫乙型脑炎病毒核酸检测及PrM和E基因序列分析

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中国畜牧兽医 2017年第2期44卷 336-343页

作者：吕顺燕王静林李楠胡骑何于雯赵德宏陈红宇李华春云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒重点实验室昆明650224 云南省昆明市东川区动物疫病预防控制中心昆明654100

试验旨在了解珠江上游地区乙型脑炎病毒(JEV)主要传播媒介蚊虫的种类、分布及携带JEV基因型和分子特征。2013年7月在珠江上游地区师宗县采集蚊虫和库蠓标本,并对蚊虫进行分类鉴定;同时采用黄病毒属引物对采集到的蚊虫和库蠓标本进行检测... 详细信息

试验旨在了解珠江上游地区乙型脑炎病毒(JEV)主要传播媒介蚊虫的种类、分布及携带JEV基因型和分子特征。2013年7月在珠江上游地区师宗县采集蚊虫和库蠓标本,并对蚊虫进行分类鉴定;同时采用黄病毒属引物对采集到的蚊虫和库蠓标本进行检测,阳性标本用JEV PrM和E基因特异引物进行扩增、测序,然后采用生物信息学软件进行序列分析。在4个采集点共采集蚊虫3 705只,分别属于库蚊、按蚊、伊蚊和阿蚊4个属的7种蚊虫,牛圈以中华按蚊、骚扰阿蚊为优势蚊种,羊圈以中华按蚊、骚扰阿蚊为优势蚊种,猪圈以三带喙库蚊、中华按蚊和骚扰阿蚊为优势蚊种。采用JEV PrM和E基因特异引物对采集到蚊虫和库蠓标本分162批进行扩增、测序,采用生物信息学软件进行序列分析。结果显示,4株蚊虫携带的病毒均为基因Ⅰ型JEV,与疫苗株SA14-14-2E蛋白存在15个氨基酸差异位点,在8个影响病毒毒力的重要位点上未发生突变。以上结果提示珠江上游地区存在多种蚊虫种类,三带喙库蚊和中华按蚊是该地区的优势蚊种,三带喙库蚊是当地JEV的主要传播媒介,在当地的媒介中存在基因Ⅰ型JEV流行,而流行株的毒力并未降低。

关键词：乙型脑炎病毒蚊虫分类库蠓 PrM基因 E基因

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口蹄疫病毒热驯化及生物学特性分析

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病毒学报 2023年第6期39卷 1670-1676页

作者：刘仲元张振兴张韵卢渊录孙世琪郭慧琛董虎宋建领中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730000 云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室昆明650224

口蹄疫(Foot and mouth disease,FMD)是一种全球性的、感染偶蹄动物的传染病。病毒衣壳对温度,pH敏感,容易在疫苗生产及储存过程中裂解为免疫原性较低的五聚体,影响疫苗的质量。口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus,FMDV)对热敏感... 详细信息

口蹄疫(Foot and mouth disease,FMD)是一种全球性的、感染偶蹄动物的传染病。病毒衣壳对温度,pH敏感,容易在疫苗生产及储存过程中裂解为免疫原性较低的五聚体,影响疫苗的质量。口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus,FMDV)对热敏感的机制研究对于疫苗抗原稳定性意义重大。本文通过循环热应激驯化方式诱导基因突变向耐热性发展,经噬斑纯化获得了驯化毒株M3,M9和M10。通过多序列比对分析发现驯化毒株P1区发生氨基酸突变,一步生长曲线表明驯化毒株氨基酸突变基本不影响病毒的复制,而驯化毒株相比野生型毒株衣壳耐热性有显著提高。驯化毒株M10单一位点突变(A1013T)增强衣壳稳定性,表明A1013T位点对于O型FMDV毒株衣壳耐热性的重要性,但机制仍待后期进一步阐明。该研究将为制备耐热性的FMD疫苗提供了理论依据。

关键词：口蹄疫病毒热筛选热稳定性氨基酸突变

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云南省师宗县蓝舌病病毒的分离及鉴定

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中国动物传染病学报 2014年第4期22卷 1-6页

作者：肖雷孟锦昕李楠高林何于雯杨恒胡骑李华春朱建波云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室昆明650224

为了解近年来云南省师宗县蓝舌病病毒流行情况，2012年在师宗县五龙乡建立了10头蓝舌病血清学阴性黄牛的监控动物群。从2012年5-10月，每周采血1次，11-12月，每月采血1次，采用C-ELISA进行血清学监测。8月开始动物血清学检测结果转阳... 详细信息

为了解近年来云南省师宗县蓝舌病病毒流行情况，2012年在师宗县五龙乡建立了10头蓝舌病血清学阴性黄牛的监控动物群。从2012年5-10月，每周采血1次，11-12月，每月采血1次，采用C-ELISA进行血清学监测。8月开始动物血清学检测结果转阳性，至11月，监控动物全部转为阳性。用转阳前1周、转阳本周、转阳后2-13周的经处理的红细胞静脉接种鸡胚，收获鸡胚肝脏，用PBS悬浮捣碎的鸡胚肝脏，上清接种于C6/36细胞一代、BHK-21三代后，出现细胞病变（cytopathic effect, CPE）。采用RT-PCR方法，针对蓝舌病较为保守的血清型群特异片段VP7设计了2对引物，扩增其相应片段。结果显示，共分离到86份疑似分离物，其中67份疑似分离物细胞培养液上清经RT-PCR扩增，均扩增出1156 bp片段，初步确认为蓝舌病病毒。采用国际24个蓝舌病标准毒及24个标准阳性血清对86份疑似分离物及其对应血清进行细胞微量中和试验，67份毒株为蓝舌病病毒，与RT-PCR结果一致。通过对2份经中和试验定型为BTV-1、BTV-16分离株的VP2基因测序分析发现，BTV-1株序列与同型Y863（登录号：KC879616）参考毒株的同源性为92%，BTV-16株序列与登录号为AB686221的毒株同源性为99%。结果表明共分离到67株蓝舌病毒株，分离株主要为BTV-1、BTV-9、BTV-16三个血清型。

关键词：蓝舌病病毒分离鉴定

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猪瘟病毒TaqMan实时荧光定量PCR的建立与应用

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中国动物传染病学报 2012年第6期20卷 68-76页

作者：姚俊云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室昆明650224

为了建立一种既能检测野毒,又能检测疫苗毒的猪瘟病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法,经过对GenBank中所有瘟病毒属成员高度保守的5'端非翻译区序列比对分析后,设计出1对TaqMan Real-time RT-PCR引物、1条TaqMan探针和3条RNA标准品制备... 详细信息

为了建立一种既能检测野毒,又能检测疫苗毒的猪瘟病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法,经过对GenBank中所有瘟病毒属成员高度保守的5'端非翻译区序列比对分析后,设计出1对TaqMan Real-time RT-PCR引物、1条TaqMan探针和3条RNA标准品制备引物。猪瘟病毒石门毒株经RNA标准品制备引物RT-PCR扩增后,再经T7 RNA聚合酶体外转录制备包含检测目的片断序列的猪瘟病毒RNA标准品。通过最佳引物、探针浓度的筛选及反应条件的优化,建立了猪瘟病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。该方法批内及批间重复试验变异系数均低于2%,特异性试验仅能检测出猪瘟强毒及疫苗毒株,最低浓度检测极限为1 X 102 copies/μL,上机检测时间少于60 min,建立的标准曲线斜率(Slope)为:-3.97,截距(Intercept)为:47.41,相关系数(R2)为:0.999779。运用该方法对3份猪瘟临床组织样品及6家企业生产的5种细胞苗及2种脾淋苗进行定量检测,结果提示:临床病料含有的病毒拷贝数差异不大,而疫苗产品每头份含有的病毒拷贝数差异较大。所建立的方法具有特异、快速、灵敏、可重复性和线性关系好的特点,不仅适合于猪瘟临床样品的早期检测,也适用于疫苗生产过程中的质控及疫苗制品的效价评估。

关键词：猪瘟病毒 TaqMan实时荧光定量PCR 建立应用

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纽结阿蠓雄虫的发现与描述(双翅目:蠓科)

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中国媒介生物学及控制杂志 2023年第1期34卷 114-116页

作者：孟锦昕王静林刘国平云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 北部战区疾病预防控制中心辽宁沈阳110034

目的调查西藏自治区错那县蠓的种类分布。方法采用诱虫灯诱法在牛舍和居住区采集蠓标本,用树胶酚封片法制作玻片标本。结果描述了发现于西藏自治区错那县的纽结阿蠓(Alluaudomyia desma Yu,2005)雄虫。鉴别特征:两复眼的小眼面间有柔毛... 详细信息

目的调查西藏自治区错那县蠓的种类分布。方法采用诱虫灯诱法在牛舍和居住区采集蠓标本,用树胶酚封片法制作玻片标本。结果描述了发现于西藏自治区错那县的纽结阿蠓(Alluaudomyia desma Yu,2005)雄虫。鉴别特征:两复眼的小眼面间有柔毛,翅径中横脉和径2室端部各有1个暗斑,尾器第9背板后缘中部有1对角突,阳茎中叶端部呈1对指状突,阳基侧突细杆状,基部有2对钩状弯曲,端部近侧弯曲。纽结阿蠓雄虫的翅斑与龙州阿蠓(*** Hao et Yu,1991)相近似,但后者雄虫尾器阳茎中叶和阳基侧突的形状与纽结阿蠓雄虫明显不同。观察标本1♂,保存于北部战区疾病预防控制中心(沈阳110034)。结论新发现雄虫标本特征与原描述雌虫模式标本一致。结合形态特征、采集地点和时间,鉴定为纽结阿蠓,补充了原定种所缺乏的重要的雄虫信息,为该蠓种的分类鉴定提供了依据。

关键词：蠓科阿蠓属纽结阿蠓雄虫标本

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曼氏杆菌(Mannheimia pernigra)的分离鉴定及基因组序列分析

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中国预防兽医学报 2023年第7期45卷 698-703页

作者：李富祥喻永福杨金丽朱沛杨仕标宋建领高华峰云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 石林彝族自治县动物疾病预防控制中心云南昆明652200

为了对云南3起奶牛和山羊呼吸道疾病进行病原检测,本研究在5%CO_(2)的培养条件下从呼吸道疾病奶牛和山羊的肺脏中分离到3株革兰阴性嗜二氧化碳小杆菌YN21118、YN22011和ZY171111,对3株分离株进行16S r DNA基因的PCR扩增及同源性和遗传... 详细信息

为了对云南3起奶牛和山羊呼吸道疾病进行病原检测,本研究在5%CO_(2)的培养条件下从呼吸道疾病奶牛和山羊的肺脏中分离到3株革兰阴性嗜二氧化碳小杆菌YN21118、YN22011和ZY171111,对3株分离株进行16S r DNA基因的PCR扩增及同源性和遗传进化分析,结果显示3株分离株与曼氏杆菌(Mannheimia pernigra)模式菌株CCUG 74657T及其它***分离株的16S r DNA基因序列的同源性达99.6%以上,且3株分离株与***参考株形成同一个进化分支,表明3株分离株均为***。采用琼脂扩散法检测3株分离株对10类32种抗菌药物的敏感性,结果显示3株分离株对青霉素类的阿莫西林克拉维酸、头孢菌素类的头孢噻吩、喹诺酮类的氧氟沙星等29种抗菌药物敏感。将3株分离株感染小鼠进行致病性试验,结果显示3株分离株均能引起小鼠呼吸道疾病。采用Illumina Miseq和PacBio高通量测序平台对分离株ZY171111进行全基因组高通量测序并预测其毒力基因和耐药基因,基因组序列分析结果显示,分离株ZY171111基因组全长2 197 384 bp,G+C摩尔含量为39.1%,基因组携带1 978个蛋白编码基因,其中包括溶血素基因hlyB、黏附相关基因htpB、生存胁迫相关基因clpP和katA等32个毒力基因和磺胺类耐药基因folP、氨基糖苷类耐药基因StrA、喹诺酮类耐药基因gyr A和parC、甲氧苄啶耐药基因dfr A3等39个耐药相关基因。本研究在我国首次分离到***,证实我国存在奶牛和山羊***感染,并于国内外首次报道***的耐药性、耐药基因及其对小鼠的致病性,上述结果为深入研究***的致病性和耐药性提供菌种资源和基因组数据。

关键词：曼氏杆菌奶牛山羊分离致病性

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西昌市虫媒病毒核酸检测及其序列分析

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中华检验医学杂志 2023年第2期46卷 143-149页

作者：陈易居何于雯杨怡铃孙劲杨振兴孟锦昕李楠许传志王静林昆明医科大学公共卫生学院云南省教育厅公共卫生与疾病防控重点实验室昆明650500 云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室昆明650224 西昌学院资源与环境学院西昌615000

目的了解四川省西昌市蚊虫样本中虫媒病毒的流行情况,丰富四川省西南部地区虫媒病毒的活动规律和病毒遗传特征的研究数据。方法2018年6月对采集自西昌市3个村不同猪圈环境中的三带喙库蚊提取核酸,使用云南环状病毒属、版纳病毒属、西藏... 详细信息

目的了解四川省西昌市蚊虫样本中虫媒病毒的流行情况,丰富四川省西南部地区虫媒病毒的活动规律和病毒遗传特征的研究数据。方法2018年6月对采集自西昌市3个村不同猪圈环境中的三带喙库蚊提取核酸,使用云南环状病毒属、版纳病毒属、西藏环状病毒属(S7、S10)、黄病毒属、甲病毒属的特异性引物进行PCR检测,对阳性产物克隆测序并进行序列分析。结果共采集到蚊虫9012只,其中三带喙库蚊为优势蚊种,对采集到的三带喙库蚊分88批次进行扩增,分别检测出2株乙型脑炎病毒(JEV)、7株版纳病毒(BAV)、7株西藏环状病毒(TIBOV)和1株云南环状病毒(YOUV),序列分析结果显示,17株新检测病毒株均与云南分离株遗传关系接近,2株JEV位于GⅠ-b进化支;7株BAV为A2进化分支;7株TIBOV中,6株位于同一进化支;1株TOUV与云南分离株在同一进化支。结论西昌市的三带喙库蚊中存在携带JEV、BAV、YOUV及TIBOV等病毒的可能,其中JEV为GⅠ-b型病毒,BAV为A2型,为西昌市虫媒病毒的检测及分析提供了数据支持。

关键词：虫媒病毒分子诊断检测技术遗传库蚊

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山羊痘病毒SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测方法的建立

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动物医学进展 2012年第7期33卷 32-39页

作者：姚俊杨永军彭海生陈官国段国军鲁富有李华春云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 云南省丽江市华坪县畜牧兽医站云南华坪674800 云南省普洱市动物疫病预防控制中心云南普洱665000

为了建立一种灵敏、特异、快速的山羊痘病毒实时定量检测方法,根据山羊痘病毒(AY077835)gp006基因序列,应用Beacon Designer 7.7软件设计合成一对PCR引物。将被检测的目的 DNA片段克隆PEASY-T1质粒,制备重组质粒标准品,以期建立以质粒... 详细信息

为了建立一种灵敏、特异、快速的山羊痘病毒实时定量检测方法,根据山羊痘病毒(AY077835)gp006基因序列,应用Beacon Designer 7.7软件设计合成一对PCR引物。将被检测的目的 DNA片段克隆PEASY-T1质粒,制备重组质粒标准品,以期建立以质粒拷贝数为单位的标准曲线。通过反应条件的优化及引物浓度的筛选,建立了山羊痘病毒SYBR GreenⅠ实时定量PCR(real-time PCR)检测方法,最佳引物浓度为400nmol/L。组内重复试验和组间重复试验变异系数均低于2%,最低检测限为1×101 copies/μL,上机检测时间在1h以内。用该方法对2011年流行于云南华坪、景谷及2003年流行于云南宣威、寻甸和昆明的山羊痘临床组织样品进行定量检测,结果送检组织样品抽提DNA中病毒含量分别为1.03×105、5.30×103、1.51×104、4.74×103、7.20×104 copies/μL。结果表明,所建立的real-time PCR具有灵敏、特异、快速的特点,适合于山羊痘临床组织样品的定量检测。

关键词：山羊痘病毒 SYBRGreenⅠ 实时定量PCR

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