检索结果-内蒙古大学图书馆

疾病监测 2024年第5期39卷 586-591页

作者：熊光萍彭蕊王萌璇魏宇航范佳欣唐晓苹王宏章青庞立丽孔翔羽李希希李丹地传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 甘肃中医药大学公共卫生学院甘肃兰州730000

目的了解我国1株G9P[8]基因型A组轮状病毒(RVA)JL18221140的全基因组分子特征。方法对我国吉林省1例G9P[8]基因型RVA(JL18221140)原始粪便标本采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)一步法扩增11个基因节段,并通过DNAStar, MEGA 11.0等... 详细信息

目的了解我国1株G9P[8]基因型A组轮状病毒(RVA)JL18221140的全基因组分子特征。方法对我国吉林省1例G9P[8]基因型RVA(JL18221140)原始粪便标本采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)一步法扩增11个基因节段,并通过DNAStar, MEGA 11.0等生物信息分析软件进行同源性及进化分析。结果 JL18221140的全基因组11个节段的基因型为G9-P[8]-I1-R1-C1-M1-A2-N1-T1-E1-H1,NSP1基因型呈现DS-1样特征。系统发育分析显示VP7和VP4分别聚集在谱系G9-Ⅵ和P[8]-Ⅲ中。结论 JL18221140为G9P[8]基因型中罕见的G9P[8]-A2重配株,该基因型可能是由中国流行的G9P[8]-A1和G2P[4]-A2毒株共感染过程中基因组间重配产生的。表明对RVA持续监测并对全基因组测序的重要性,有利于了解我国RVA毒株的遗传变异情况,为今后病毒的防控和疫苗的研发提供更有效的基础数据。

关键词： A组轮状病毒全基因组测序 G9P[8] 变异重配

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融合表达新冠病毒S1与N蛋白的非复制型重组腺病毒的构建与鉴定

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病毒学报 2024年第2期40卷 225-232页

作者：毛彤瑶张鹏姜苏芮李丹地段招军传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000

体外构建融合表达新型冠状病毒(SARS-CoV-2)S1抗原与N抗原的复制缺陷型重组腺病毒疫苗,为深入开展该疫苗免疫原性的研究提供基础。利用Overlap PCR和同源重组方法构建插入SARS-CoV-2的S1-N基因的重组腺病毒质粒pKAd5-S1-N,通过琼脂糖凝... 详细信息

体外构建融合表达新型冠状病毒(SARS-CoV-2)S1抗原与N抗原的复制缺陷型重组腺病毒疫苗,为深入开展该疫苗免疫原性的研究提供基础。利用Overlap PCR和同源重组方法构建插入SARS-CoV-2的S1-N基因的重组腺病毒质粒pKAd5-S1-N,通过琼脂糖凝胶电泳、多酶切、测序等方法鉴定重组质粒正确性;重组质粒转染HEK293A细胞获得病毒毒种AdV5-S1-N并扩增,氯化铯密度梯度离心法纯化病毒,有限稀释分析法测病毒滴度,Western blot方法验证AdV5-S1-N重组腺病毒S1-N融合蛋白表达情况;将AdV5-S1-N疫苗通过肌肉注射途径免疫BALB/c小鼠,第14d采集颌下静脉血,ELISA法检测血清针对S1和N蛋白抗原的特异性抗体滴度。成功获得滴度为9.45×10^(11)IU/mL的重组腺病毒AdV5-S1-N。Western blot结果发现:AdV5-S1-N感染细胞后,融合蛋白可正常表达,与抗S1蛋白及抗N蛋白抗体均有特异结合。ELISA结果显示免疫重组腺病毒的小鼠可产生针对S1和N蛋白的特异性IgG抗体。应用复制缺陷型腺病毒载体成功获得融合表达SARS-CoV-2 Omicron突变株S1-N蛋白的高滴度重组腺病毒,该重组病毒能在小鼠诱导针对S1和N蛋白的特异性免疫应答,为后续深入研究和评价该候选疫苗奠定了基础。

关键词：新型冠状病毒腺病毒载体疫苗体液免疫融合表达

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SARS-CoV-2亚单位疫苗制备及免疫原性初步研究

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病毒学报 2024年第5期40卷 943-951页

作者：徐骁黄涛刘铁柱芜为孙丽娜李川李建东王世文王希良传染病溯源与智能决策全国重点实验室中国疾病预防控制中心病毒性疾病预防控制所北京100052 国家卫生健康委医学病毒学与病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052 病原与生物安全国家重点实验室军事医学科学院北京微生物与流行病学研究所北京100071

严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(Severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARS-CoV-2)自2019年年末出现以来,给全人类造成了严重的公共卫生事件和社会经济负担。本实验以SARS-CoV-2突变株XBB1.5的受体结合域(Receptor binding domain,RBD)序列为疫苗核心分子串联SARS-CoV-2的全长S蛋白制备了亚单位纳米颗粒疫苗。将S蛋白的6个氨基酸残基突变为6个脯氨酸残基,提高表达量和蛋白质分子的稳定性。而且将弗林酶酶切位点进行突变以增加蛋白质的稳定性。在羧基端串联昆虫铁蛋白的氨基酸序列,利用铁蛋白纳米颗粒多面体可结合抗原蛋白的特性,增加抗原递呈。在氢氧化铝和CpG1018双佐剂组合免疫小鼠后,可诱导小鼠产生针对SARS-CoV-2多种变异株的中和抗体,且可诱导小鼠产生了较强的细胞免疫和体液免疫。本研究表明,XBB1.5突变株RBD区域串联S蛋白全长序列及昆虫铁蛋白制备的纳米颗粒疫苗可以有效预防SARS-CoV-2变体,是一个很好的候选疫苗分子。

关键词：新型冠状病毒亚单位疫苗受体结合域血管紧张素转化酶2

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人呼吸道合胞病毒中和抗体检测方法的建立与初步应用

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中华预防医学杂志 2024年第7期58卷 959-966页

作者：张丽李海曹蕾胡宏俏王娜李海鑫江洁毛乃颖李晓梅张燕山东第一医科大学(山东省医学科学院)公共卫生与健康管理学院济南250117 传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室、国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室、中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

目的建立用于人呼吸道合胞病毒(HRSV)中和抗体滴度检测的噬斑减少中和实验(PRNT),并进行条件优化与初步应用。方法应用CHO表达系统制备帕利珠单克隆抗体(Palivizumab),同时对细胞种类、细胞培养时间、固定通透方法、封闭方法等影响因素... 详细信息

目的建立用于人呼吸道合胞病毒(HRSV)中和抗体滴度检测的噬斑减少中和实验(PRNT),并进行条件优化与初步应用。方法应用CHO表达系统制备帕利珠单克隆抗体(Palivizumab),同时对细胞种类、细胞培养时间、固定通透方法、封闭方法等影响因素进行优化。验证该方法的重复性,并与传统PRNT验证其相关性。利用优化的PRNT方法检测BALB/c小鼠血清(融合蛋白肌肉注射免疫)对HRSV A和B亚型的中和抗体滴度。结果Palivizumab的表达量约为50 mg/L。PRNT的最佳工作条件为:培养细胞为HEp-2细胞,细胞培养时间为2 d,最佳固定通透方式为4%(V/V)多聚甲醛室温固定15 min后0.2%(V/V)Triton X-100通透15 min,去掉封闭步骤。优化后该方法的重复性验证总体变异系数均<15%,与传统PRNT呈现良好的线性关系,Spearman相关系数rs高达0.983。在检测小鼠血清对HRSV A亚型long株和B亚型9320株的中和抗体滴度时,融合蛋白联合AlOH和CpG佐剂诱导小鼠产生的中和抗体滴度最高。结论本研究建立的HRSV中和抗体检测方法快速、可重复、高通量,能够适用于A、B亚型HRSV的中和抗体检测。

关键词：人呼吸道合胞病毒免疫染色噬斑减少中和实验中和抗体

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2018-2023年新疆维吾尔自治区风疹流行病学特征及病毒基因特征分析

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病毒学报 2024年第2期40卷 374-382页

作者：玛合木提江·库尔班钱程凯赛尔·吾斯曼孙璐阿依波塔·孜那西朱贞新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心免疫规划所乌鲁木齐830011 传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室WHO西太平洋地区麻疹/风疹参比实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

为了解2018-2023年新疆维吾尔自治区(以下简称新疆)风疹流行病学特征以及风疹病毒(Rubella virus,RuV)基因特征,本研究整理和汇总2018-2023年新疆风疹发病数据,采集2022年临床标本开展核酸检测和病毒分离,并对分离株进行测序,获得其靶... 详细信息

为了解2018-2023年新疆维吾尔自治区(以下简称新疆)风疹流行病学特征以及风疹病毒(Rubella virus,RuV)基因特征,本研究整理和汇总2018-2023年新疆风疹发病数据,采集2022年临床标本开展核酸检测和病毒分离,并对分离株进行测序,获得其靶基因序列(位于E1基因的739个靶核酸片段,E1-739)。基于E1-739,将本研究RuV株与WHO基因分型代表株以及已报道的1E和2B基因亚型代表株构建系统发育树,鉴定其基因型/亚型。同时,与同时期我国其他省份流行RuV代表株进行比对,了解新疆流行RuV的分子差异。结果显示,2018-2023年,新疆共计报告风疹病例599例,除外2019年风疹发病有小幅回升(414例,1.66/10万),其余年份发病率均维持在较低水平(年均发病率为0.17/10万),并在2023年降低到了历史最低水平(8例,0.03/10万);2018-2023年间,病例主要集中在北疆的阿勒泰和塔城等地区;病例年龄分布显示,2018年和2021-2023年间,<10岁儿童病例占比均较高(52.8%~62.5%),而2019年和2020年则以10-19岁年龄组人群为主(72.4%和51.9%)。病毒学监测数据显示,2022年从新疆4个地(州、市)共获得7株RuV病毒株的靶基因,分属于1E-L2(6株)和2B-L2c(1株),与同期我国其他省份流行的RuV病毒株具有较高的亲缘性。本研究为新疆地区优化风疹防控策略提供了基础科学数据。

关键词：风疹流行病学基因特征新疆维吾尔自治区

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应用气-液两相呼吸道类器官从中国临床住院患儿中分离鉴定人副流感病毒1/2/3

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病毒学报 2024年第2期40卷 274-282页

作者：余玙璠吴伟波牛培华宋敬东霍威邦胡月超刘俊彤魏岚邓瑶杨扬朱娜谭文杰中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病溯源预警和智能决策全国重点实验室北京100052 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室北京102206 深圳市病原微生物与免疫重点实验室国家感染性疾病临床医学研究中心深圳市第三人民医院深圳518112

人副流感病毒(Human parainfluenza viruses,hPIVs)是引起人类呼吸道感染的重要病原体之一,目前我国相关临床毒株资源有限,本研究旨在获得近期流行、背景明晰的hPIVs临床分离株。应用原代人呼吸道上皮细胞分化的气-液界面呼吸道上皮类器... 详细信息

人副流感病毒(Human parainfluenza viruses,hPIVs)是引起人类呼吸道感染的重要病原体之一,目前我国相关临床毒株资源有限,本研究旨在获得近期流行、背景明晰的hPIVs临床分离株。应用原代人呼吸道上皮细胞分化的气-液界面呼吸道上皮类器官(Air-liquid interface human airway epithelial organoid,HAE),从深圳市第三人民医院2016~2017年住院患儿hPIVs阳性咽拭子标本中分离获得hPIV1/2/3,分别命名为hPIV1/C-Tan/SZ01/2016、hPIV2/C-Tan/SZ01/2017、hPIV3/C-Tan/SZ01/2017。通过逆转录荧光定量PCR (Reversetranscriptionquantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测病毒核酸扩增、免疫荧光检测病毒蛋白在HAE的表达、负染及超薄切片透射电镜观察病毒形态和细胞定位,并对传代过程中病毒的活性、遗传稳定性和基因组特征进行分析。结果表明基于HAE分离hPIVs可以高效获得hPIVs临床分离株,所获毒株具有典型的病毒形态特征。三种hPIVs在HAE中复制良好且遗传稳定,病毒滴度均可达到约107 TCID50/100μL。对分离获得的hPIV1/2/3临床分离株进行全基因组及HN基因进行序列测定,结果表明:hPIV1全长为15568bp,属于hPIV1 C亚型;hPIV2全长15694bp,属于hPIV2 A3亚型;hPIV3全长15443bp,属于hPIV3 C3亚型,提示3株临床分离株与我国普遍流行的基因型相一致。综上,本研究应用HAE从近期住院患儿临床样本中成功分离获得生物学特性和基因组背景清晰且遗传稳定的hPIV1/2/3毒株。这些临床流行毒株资源的分离鉴定,为hPIVs的感染特点和致病机制的深入研究及抗病毒药物筛选和疫苗研发奠定了基础。

关键词：人副流感病毒病毒分离鉴定人呼吸道上皮类器官

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表达水痘-带状疱疹病毒gE蛋白的复制缺陷型重组腺病毒的构建

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病毒学报 2025年第1期41卷 48-58页

作者：杨梦瑶柴鹏弟章青宋敬东裴银辉段招军华北理工大学基础医学院河北省慢性疾病基础医学重点实验室唐山063000 传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

体外构建表达水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)糖蛋白E(Glycoprotein E,gE)的复制缺陷型人26型重组腺病毒疫苗,并进行重组病毒免疫原性的初步评价。利用同源重组的方法将gE原始信号肽序列替换成tPA组织纤溶酶原激活剂(Tis... 详细信息

体外构建表达水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)糖蛋白E(Glycoprotein E,gE)的复制缺陷型人26型重组腺病毒疫苗,并进行重组病毒免疫原性的初步评价。利用同源重组的方法将gE原始信号肽序列替换成tPA组织纤溶酶原激活剂(Tissue plasminogen activator,tPA)信号序列(tPA-gE),将目的片段基因(tPA-gE)连接到腺病毒载体Ad26-empty得到重组腺病毒质粒Ad26-tPA-gE。线性化的重组腺病毒质粒转染至HEK293A细胞进行病毒包装与扩增,利用氯化铯密度梯度离心法纯化病毒,基于腺病毒六邻体蛋白质测定病毒滴度,Western blot验证重组腺病毒中tPA-gE表达情况,电镜检测重组病毒大小与形态。重组病毒(Ad26-tPA-gE)通过肌肉注射免疫C57BL/6N小鼠,第8周后下颌采血通过间接ELISA检测小鼠血清中特异性的抗gE的抗体效价评价体液免疫,ELISPOT检测小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ及IL-2情况观察细胞免疫。纯化得到滴度为7.2×10^(10)ifu/mL的重组腺病Ad26-tPA-gE,Western blot验证重组病毒感染的细胞能够正常表达gE,电镜检测病毒大小均一,形态完整。重组腺病毒疫苗Ad26-tPA-gE可成功诱导小鼠产生抗gE特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体,以及淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-2。成功构建了表达VZV gE的复制缺陷型重组腺病毒,免疫C57BL/6N小鼠后有效激活体液及细胞免疫反应,为后续基于腺病毒载体的带状疱疹疫苗研究提供基础。

关键词：水痘-带状疱疹病毒带状疱疹疫苗糖蛋白E 人26型腺病毒载体

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轮状病毒跨物种传播中基因重配的研究进展

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国际病毒学杂志 2025年第1期32卷 76-79页

作者：张无敌李丹地甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室、国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室、中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

轮状病毒(rotavitus,RV)是一种光滑呼肠孤病毒科的双链分节段RNA病毒,是引起5岁以下婴幼儿急性胃肠炎(acute gastroenteritis,AGE)住院和重症的首位病因,也是儿童腹泻死亡的主要病因。由于RV的核酸为分节段特性,因此在RV复制过程中容易... 详细信息

轮状病毒(rotavitus,RV)是一种光滑呼肠孤病毒科的双链分节段RNA病毒,是引起5岁以下婴幼儿急性胃肠炎(acute gastroenteritis,AGE)住院和重症的首位病因,也是儿童腹泻死亡的主要病因。由于RV的核酸为分节段特性,因此在RV复制过程中容易发生基因节段的重配。研究RV跨物种间的传播可以更清楚地了解RV的病原学特性,并且有助于揭示RV的传播途径,对疫苗研究和评估及防控策略的制定等均具有重大的意义。

关键词：轮状病毒跨物种基因重配

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伪狂犬病毒PRV-2022毒株gD蛋白突变与人Nectin-1结合力

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中华实验和临床病毒学杂志 2024年第4期38卷 395-401页

作者：王新悦王维禹梅国勇韩俊陈操中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所、传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室、国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室北京102206 齐齐哈尔大学生命科学与农林学院齐齐哈尔161006

目的为探究PRV-2022毒株gD蛋白不同突变对与Nectin-1受体结合的影响。方法通过PCR、RT-qPCR和基因测序技术对PRV-2022毒株进行鉴定,利用生物信息学方法对PRV-2022毒株gD基因进行遗传进化分析。体外构建PRV-2022毒株gD蛋白胞外域第69位和... 详细信息

目的为探究PRV-2022毒株gD蛋白不同突变对与Nectin-1受体结合的影响。方法通过PCR、RT-qPCR和基因测序技术对PRV-2022毒株进行鉴定,利用生物信息学方法对PRV-2022毒株gD基因进行遗传进化分析。体外构建PRV-2022毒株gD蛋白胞外域第69位和第82位氨基酸突变的重组表达质粒并表达纯化,通过His-pull down和生物层干涉技术比较了重组gD蛋白不同突变与Nectin-1受体的结合能力。结果从伪狂犬病毒PRV-2022毒株中调取gD基因,通过遗传进化分析发现PRV-2022毒株与2011年之前分离的毒株分属于同一个分支,遗传距离较近。成功构建含有A69V和S82N氨基酸突变的gD蛋白胞外域表达质粒,表达纯化得到重组PRV gD胞外域蛋白,比较发现gD-69、gD-82、gD-2022、gD-Bartha蛋白均能与Nectin-1相互作用。相对于PRV经典疫苗株Bartha,gD蛋白第69位和第82位氨基酸双突变后与人Nectin-1亲和力最高,而无论单独任一突变位点都使gD蛋白与Nectin-1的亲和力降低。结论PRV的gD蛋白存在A69V和S82N突变时明显影响与人Nectin-1受体结合能力且同时突变时与人Nectin-1亲和力最高。

关键词：伪狂犬病伪狂犬病毒 gD蛋白 Nectin-1受体分子相互作用

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柯萨奇病毒A10型对利巴韦林耐药性的初步研究

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病毒学报 2024年第2期40卷 337-345页

作者：孙甜甜宗彦君王蕊李冀琛刘莹李晓亮韩振志于力恒刘志军孙强张勇潍坊医学院潍坊261053 传染病溯源预警和智能决策全国重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 国家脊髓灰质炎实验室国家卫生健康委员会实验室生物安全重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒与病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 山东第一医科大学济南250117 首都儿科研究所病毒学研究室儿童病毒病病原学北京市重点实验室北京100020

近年来,全国范围内手足口病(Hand, foot, and mouth disease,HFMD)的感染率逐渐上升,其中柯萨奇病毒A组10型(Coxsackievirus A10,CV-A10)是主要病原体之一,利巴韦林是临床上治疗儿童手足口病的常用药物之一。为了评价利巴韦林在体外对CV... 详细信息

近年来,全国范围内手足口病(Hand, foot, and mouth disease,HFMD)的感染率逐渐上升,其中柯萨奇病毒A组10型(Coxsackievirus A10,CV-A10)是主要病原体之一,利巴韦林是临床上治疗儿童手足口病的常用药物之一。为了评价利巴韦林在体外对CVA10的抑制效果,本研究中,我们随机选取了19条2009-2021年的不同地区和不同年代的有代表性的中国内地优势流行基因型C基因型的CVA10毒株,通过细胞毒性实验(Cell counting kit-8,CCK8)来检测利巴韦林在RD细胞上对CVA10的抑制率。将抑制率大于85%的CVA10定义为对利巴韦林敏感组,抑制率小于15%的CVA10定义为对利巴韦林耐药组。结果显示利巴韦林在0.78mmol/L浓度下可以对CVA10产生较好的抑制作用并且对细胞的毒性较低。19株CVA10中有4株表现出对利巴韦林耐药性,2株表现出对利巴韦林敏感性,剩余13株的敏感性在85%~15%之间。通过7日龄ICR乳鼠感染实验比较对利巴韦林敏感组和耐药组毒株的致病力差异,通过观察乳鼠临床评分、生存率、体重及组织取材的滴度测定结果均表明对利巴韦林敏感组CVA10在小鼠上的致病力比耐药组强。进一步使用MEGA 7.0软件对影响CVA10复制和翻译的2C区氨基酸序列进行差异性分析,以分析可能的耐药位点。结果显示对利巴韦林耐药组和敏感组CVA10的2C区的327位和328位氨基酸位点存在差异。本研究发现当前国内流行的CVA10存在广泛对利巴韦林耐药现象,其中部分CVA10对利巴韦林完全耐药。因此,有必要加强对CVA10耐药株的监测,以便更好地指导临床医生正确地选择抗病毒药物,为个体化的治疗提供理论依据。

关键词：柯萨奇病毒A10型利巴韦林耐药性 2C区差异位点

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