检索结果-内蒙古大学图书馆

解放军医学杂志 2020年第4期45卷 384-390页

作者：陈润开付小兵孙晓艳天津医科大学研究生院天津300070 解放军总医院医学创新研究部创伤修复与组织再生研究中心北京100853 解放军总医院第四医学中心组织修复与再生全军重点研究实验室北京100048

目的应用谱系重编程技术将表皮角质细胞转分化为汗腺样细胞,并在体外构建三维培养体系,诱导工程化的汗腺样细胞自组装为汗腺类器官,以实现汗腺功能性修复。方法采用CRISPR/dCas9系统上调内源性外胚层发育不全(EDA)基因在人永生化表皮角... 详细信息

目的应用谱系重编程技术将表皮角质细胞转分化为汗腺样细胞,并在体外构建三维培养体系,诱导工程化的汗腺样细胞自组装为汗腺类器官,以实现汗腺功能性修复。方法采用CRISPR/dCas9系统上调内源性外胚层发育不全(EDA)基因在人永生化表皮角质(HaCaT)细胞中的表达,筛选阳性克隆后进行诱导培养。将细胞分为HaCaT组(HaCaT细胞使用汗腺培养基培养)、HaCaT+Dox组(HaCaT细胞使用含5μg/ml Dox的汗腺培养基培养)、HaCaT-E组(HaCaT-E细胞使用汗腺培养基培养)、HaCaT-E+Dox组(HaCaT-E细胞使用含5μg/ml Dox的汗腺培养基培养),采用RT-PCR及Western blotting检测EDA基因在各组细胞中的表达水平,以验证质粒转染是否成功。另将细胞分为HaCaT-E组(汗腺培养基组)及HaCaT-E+Dox组(汗腺培养基+5μg/ml Dox组),利用免疫荧光染色鉴定汗腺表面标记物的表达水平,以验证HaCaT细胞是否成功重编程为汗腺样细胞。随后以Matrigel为主体支架模拟汗腺发育微环境,在体外诱导汗腺样细胞自组装形成汗腺类器官,并采用免疫荧光染色检测汗腺表面标记物的表达情况。将汗腺类器官移植至裸鼠烫伤创面后,采用碘-淀粉发汗实验及组织形态学方法检测工程化的汗腺类器官参与汗腺再生及皮肤创面修复的情况。结果CRISPR/dCas9慢病毒表达系统转染后,筛选获得HaCaT-E细胞。RT-PCR检测结果显示,与HaCaT组比较,HaCaT-E+Dox组细胞中EDA mRNA的表达水平上调(4.62±0.19)倍,差异有统计学意义(P<0.05),而HaCaT+Dox组及HaCaT-E组则未见明显上调,差异无统计学意义(P>0.05)。Western blotting检测结果显示,HaCaT组、HaCaT+Dox组、HaCaT-E组及HaCaT-E+Dox组的EDA蛋白表达趋势与RT-PCR检测结果基本一致。经含强力霉素的汗腺培养基诱导培养2~7 d,细胞形态逐渐变为长梭形,呈网络样生长,并表达汗腺表面标记物角蛋白18(CK18)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、水通道蛋白5(AQP5)。在含有Matrigel的三维培养体系中混合培养7 d后,细胞增殖、体积增大,形成具有囊腔的汗腺类器官,且表达汗腺表面标记物和功能性标记物CK18、α-SMA、AQP5。体内实验表明,移植组小鼠脚掌碘-淀粉发汗实验为阳性。组织免疫荧光染色结果进一步显示,绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞主要分布于表皮的基底层及亚基底层,且真皮深层及皮下组织内可见管腺状结构,同时表达GFP及汗腺细胞标记物CK18、α-SMA。结论采用CRISPR/dCas9系统上调内源性EDA基因可重编程表皮角质细胞为汗腺样细胞。以Matrigel为主体支架构建的三维培养环境可在体外诱导工程化的汗腺样细胞自组装并发育形成汗腺类器官。这些工程化的类器官不但具备汗腺原基的表型及结构特征,还能在体内促进汗腺再生,从而实现创面的功能性修复。

关键词：谱系重编程类器官汗腺再生创伤修复

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老年人创伤特点及创伤后重要器官修复再生的研究进展

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感染．炎症．修复 2016年第2期17卷 126-128页

作者：杨思明谢江帆马奎黄沙付小兵解放军总医院第一附属医院全军创伤修复与组织再生重点实验室暨皮肤损伤修复与组织再生北京市重点实验室北京100048

随着社会的发展、人民生活水平和医疗条件的显著提高,人们的生活方式发生了较大的变化,随之而来的是人口老龄化以及疾病谱的改变.专家预测,到2020年,65岁以上的老年人口将是现在的2倍,而到2050年,65岁以上的人口构成比将达到20%,而目前... 详细信息

随着社会的发展、人民生活水平和医疗条件的显著提高,人们的生活方式发生了较大的变化,随之而来的是人口老龄化以及疾病谱的改变.专家预测,到2020年,65岁以上的老年人口将是现在的2倍,而到2050年,65岁以上的人口构成比将达到20%,而目前这个数字大约在12%左右[1].创伤在65岁以上老年人的致死因素中排第5位[2].创伤患者的病死率约为12%,而65岁以上创伤患者的病死率大约为28%[3].目前,老年创伤性损伤患者不断增多,他们往往合并多种慢性疾病,

关键词：老年人口创伤后修复再生创伤特点器官创伤患者人口老龄化医疗条件

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间充质干细胞在血脑屏障损伤修复中的作用及相关研究进展

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感染．炎症．修复 2018年第4期19卷 250-253,256页

作者：杨劼张翠萍马奎杨思明付小兵解放军总医院第四医学中心全军创伤修复与组织再生重点实验室暨皮肤损伤修复与组织再生北京市重点实验室北京100048

中枢神经系统疾病如阿尔茨海默病(AD)、脑卒中(stroke)、创伤性脑损伤(TBI)以及多发性硬化(MS)在全球的发病率日益增高,严重影响患者的生活质量,并且给家庭和社会带来沉重的负担。目前临床上对这些疾病还缺乏有效的治疗方法。有研究发现... 详细信息

中枢神经系统疾病如阿尔茨海默病(AD)、脑卒中(stroke)、创伤性脑损伤(TBI)以及多发性硬化(MS)在全球的发病率日益增高,严重影响患者的生活质量,并且给家庭和社会带来沉重的负担。目前临床上对这些疾病还缺乏有效的治疗方法。有研究发现,血脑屏障(BBB)可在中枢神经系统疾病的发病早期就受到破坏,并且BBB的修复预示着疾病预后的好坏,这意味着BBB不仅可以对中枢神经系统疾病进行早期诊断,而且其功能的修复也可能是治疗这些疾病的关键[1]。中枢神经系统疾病的发病过程主要通过炎症破坏BBB导致持续性神经系统损伤,从而引起中枢神经系统功能障碍,甚至中枢神经系统退行性病变的发生。

关键词：损伤修复血脑屏障间充质干细胞中枢神经系统疾病中枢神经系统功能障碍阿尔茨海默病创伤性脑损伤神经系统损伤

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小型猪耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染创面模型的建立

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感染．炎症．修复 2015年第2期16卷 86-90,F0002页

作者：周文芳黄瑾马奎耿志军孙同柱韩松蒋达和王择胜黎君友解放军总医院全军创伤修复与组织再生重点实验室暨皮肤损伤修复与组织再生北京市重点实验室北京100048 武汉摩尔生物科技有限公司

目的：建立耐药菌感染创面模型，为研究抗菌药物提供可靠稳定的动物模型。方法：在3～4个月龄小型猪背部脊柱中线旁开4cm处用直径16mm的切割器每侧钻出6个至深筋膜的圆形切口，创面间隔3cm。将创面随机分为两组，一侧为耐甲氧西林金黄... 详细信息

目的：建立耐药菌感染创面模型，为研究抗菌药物提供可靠稳定的动物模型。方法：在3～4个月龄小型猪背部脊柱中线旁开4cm处用直径16mm的切割器每侧钻出6个至深筋膜的圆形切口，创面间隔3cm。将创面随机分为两组，一侧为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）感染组，于创面形成后30min接种MRSA菌液0．1ml（1×10^8CFU／cm^2）；对侧为对照组，接种等体积生理盐水。伤后不同时间进行创面炎症反应及愈合的大体观察和组织学观察，测量创面面积，进行组织细菌学检测。结果：MRSA感染2d后创面暗红、创缘肿胀、渗出多、有大量白色分泌物且愈合慢；感染后2、10d创面组织培养菌落数均超过1×10^8CFU／g；对照组2d和10d组织培养菌落数为1×10^5CFU／g，不足以影响伤口正常愈合。组织学观察显示感染后2、10d，MRSA感染组较阴性对照组炎症细胞明显增多、肉芽组织生长缓慢。对照组新生肉芽生长较快，有大量新生血管生成。结论：采用小型猪背部2cm。的全层皮肤缺损创面接种1×108cFu／cm。MRSA的方法，2d后可以形成MRSA感染创面，且具有创面面积可控、感染效果稳定的优点。

关键词：小型猪创面耐药菌 MRSA感染动物模型

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淄博市创面修复学科建设经验总结

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中华创伤杂志 2020年第10期36卷 872-875页

作者：苏永涛顾国明隋颖张波王春雷朱俊晖王一兵霍然付小兵北大医疗鲁中医院烧伤与创面修复中心淄博255400 山东第一医科大学第一附属医院整形修复外科济南250021 山东大学附属省立医院烧伤整形美容外科济南250021 解放军总医院医学创新研究部创伤修复与组织再生研究中心全军创伤修复与组织再生重点实验室北京100048

创面修复学科建设在我国还处于初级探索阶段,没有系统、成熟的经验可以借鉴。笔者所在医院组建创面修复专业委员会、开设创面修复移动工作站、建立创面修复联盟和质控中心、倡导医护一体的治疗模式、开展学术交流与科研,使创面修复学科... 详细信息

创面修复学科建设在我国还处于初级探索阶段,没有系统、成熟的经验可以借鉴。笔者所在医院组建创面修复专业委员会、开设创面修复移动工作站、建立创面修复联盟和质控中心、倡导医护一体的治疗模式、开展学术交流与科研,使创面修复学科在山东迅速发展,并形成创面修复“淄博模式”。笔者介绍淄博市创面修复学科建设的经验,为基层创面修复学科建设提供参考。

关键词：伤口愈合修复外科手术创面修复科

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骨髓间充质干细胞和其来源的汗腺样细胞microRNAs差异表达分析

骨髓间充质干细胞和其来源的汗腺样细胞microRNAs差异表达分析

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：谭志军张翠萍付小兵解放军总医院全军创伤修复与组织再生重点实验室暨皮肤损伤修复与组织再生北京市重点实验室北京100048

目的：对骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBM-MSCs)和其来源的汗腺样细胞进行microRNAs差异表达谱分析,寻找人骨髓间充质干细胞向汗腺样细胞分化的关键microRNAs,并初步预测其功能。方法：原代培养鉴定hBM-...

目的：对骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBM-MSCs)和其来源的汗腺样细胞进行microRNAs差异表达谱分析,寻找人骨髓间充质干细胞向汗腺样细胞分化的关键microRNAs,并初步预测其功能。方法：原代培养鉴定hBM-MSCs和汗腺细胞,当汗腺细胞密度达到70～80％时进行热休克处理,然后将其与hBM-MSCs通过Transwell进行共培养诱导;10天后,分别提取hBM-MSCs和其来源的汗腺样细胞的总RNA,纯化标记后,进行microRNAs杂交和数据分析以及靶基因预测。并将关键microRNA分别转染人骨髓间充质干细胞并继续与热休克的汗腺细胞间接共培养诱导7天,之后采用免疫荧光、RT-PCR和Western Blot技术检测转染并间接共培养对细胞的诱导效果。

关键词：

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人骨髓间充质干细胞转分化为汗腺样细胞的DNA甲基化调控机制

人骨髓间充质干细胞转分化为汗腺样细胞的DNA甲基化调控机制

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：赵焕军赵宏良张翠萍付小兵解放军总医院全军创伤修复与组织再生重点实验室暨皮肤损伤修复与组织再生北京市重点实验室北京100048

目的：筛选与人骨髓间充质干细胞(MSCs)转分化为汗腺样细胞过程密切相关基因启动子位点,探索DNA甲基化调控MSCs的转分化机制.方法：热休克汗腺诱导MSCs共培养10d,免疫组化检测MSCs转分化后KRT19和CEA标志,诱导MSCs分化0d、5d和10d用RT-...

目的：筛选与人骨髓间充质干细胞(MSCs)转分化为汗腺样细胞过程密切相关基因启动子位点,探索DNA甲基化调控MSCs的转分化机制.方法：热休克汗腺诱导MSCs共培养10d,免疫组化检测MSCs转分化后KRT19和CEA标志,诱导MSCs分化0d、5d和10d用RT-PCR和Western blots检测CEA基因和蛋白表达情况.芯片检测MSCs分化前后45万个基因位点DNA甲基化水平变化.从甲基化水平显著变化基因位点中,筛选出与MSCs转分化密切相关基因位点.用飞行质谱技术检测关键基因启动子的甲基化水平在诱导分化前后的水平变化;筛选出的关键基因构建质粒并转染MSCs并培养,培养基内加入10ng/μL5Azd,应用RT-PCR和Western blot检测转染5天CEA基因和蛋白表达.结果：MSC经共培养10d后KRT19和和CEA免疫荧光染色示阳性,对照组KRT19和CEA示阴性.芯片检测MSC诱导分化前后共有76个基因位点的DNA甲基化水平具有明显差异(0.169‰),甲基化水平明显降低51个位点,其中SLC12A7、ENKUR、LRWD1、Pax6和HDAC4等位点甲基化水平显著下降.甲基化水平明显升高25个位点,其中Hoxd11、ADARB2、ANGPT1、UNC84A和BMP6等位点DNA甲基化水平明显升高.提示MSC转分化过程中DNA甲基化水平以下调为主.经过比较分析,选择Pax6基因位点进行飞行质谱检测,结果提示该位点甲基化水平明显降低.质粒构建Pax6转染MSCs,培养5天CEA基因表达明显增高,CEA蛋白阳性表达.结论：DNA去甲基化在MSCs分化过程中起到重要的调控作用,Pax6基因与5azd协同作用可能调控CEA基因表达影响MSC转分化.

关键词：

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用动物固定装置观察负压封闭敷料对小型猪全层皮肤缺损创面修复的影响

用动物固定装置观察负压封闭敷料对小型猪全层皮肤缺损创面修复的...

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：周文芳黎君友孙同柱吴志谷付小兵解放军总医院全军创伤修复与组织再生重点实验室暨皮肤损伤修复与组织再生北京市重点实验室北京100048

目的：负压封闭敷料已在临床创面修复广泛应用,并获得较好的愈合效果,但对其作用机理我们还不甚了解,本文通过自制动物固定装置,观察武汉维斯第牌负压封闭引流材料(VDS)对小型猪全层皮肤缺损创面修复作用的影响.方法：动物固定装置：由...

目的：负压封闭敷料已在临床创面修复广泛应用,并获得较好的愈合效果,但对其作用机理我们还不甚了解,本文通过自制动物固定装置,观察武汉维斯第牌负压封闭引流材料(VDS)对小型猪全层皮肤缺损创面修复作用的影响.方法：动物固定装置：由不锈钢材料构成,包括可自由移动架、两用悬吊棒、悬吊制式服装、接大小便托盘和可放置负压吸引机和吸引罐的悬挂篮组成.动物模型制备：将4月龄小型猪全麻、备皮、消毒后于脊柱两侧各制一个全层皮肤缺损创面(4.5cm×4.5cm).实验分组：A组对照组,凡士林油纱布和4层无菌纱布覆盖包扎;B组125mmHg持续负压24h,至伤后24d.伤后分别将小型猪悬挂于动物固定装置上,单笼喂养,自由饮食.通过大体观察、皮下血流监测和细菌学判断负压封闭敷料对小型猪全层皮肤缺损创面的修复作用.结果：伤后早期大体观察显示两组创面新鲜,均无脓性分泌物.A组创面渗出物较B组多,B组创面无明显分泌物、无水肿.伤后7d,两组创面上皮生长较明显,其上皮化率均能达40％～60％;两组创面有不同程度的肉芽组织生长,A组肉芽填充率＜30％较B组差,B组能达50％以上.伤后14d,两组创面基本长平,A组肉芽填充率低于90％,B组可达到90％以上.伤后21d,A组上皮化率较B组差,B组能达到80％以上.伤后24d两组创面基本愈合.皮下血流监测,伤后4d B组血流灌注量较A高.伤后7d～21d两组血流灌注量均有所下降,但B组仍高于A组.伤后28d B组血流灌注量恢复到伤前水平,A组较高.细菌监测,伤后4d和7d大多创面细菌明显增多,A组细菌量较B组高.10d～21 d两组创面细菌均逐步下降,A组略高于B组.结论：动物固定装置能满足负压封闭引流材料实验研究的需要.在28d的实验中能保证小型猪固定良好,方便更换敷料.在固定状态下小型猪能自由饮水,进食和排便;同时能保证激光多普勒成像仪和其他相关指标的正常检测.负压封闭引流下创面血流量很快增加,能够有效除去创面的渗透液,减轻创面与创周的组织水肿,促进大量新生肉芽组织形成,为上皮爬行提供了基础,负压可促进创面引流的畅通,将存留于创面局部的坏死组织、细菌、分泌物等吸出,减少了创面局部细菌的繁殖.通过连续治疗后使用负压引流的方法创面愈合效果明显较对照组好.

关键词：

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自体表皮细胞悬液在慢性伤口愈合中的应用

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中华创伤杂志 2015年第5期31卷 475-477页

作者：赵洪良张翠萍付小兵石家庄市第一医院烧伤整形科解放军总医院第一附属医院全军组织修复与再生重点实验室

慢性伤口也称为慢性难愈合创面或慢性创面,已经成为中老年人群面临的严重危害之一,不仅严重影响其生活与工作质量,同时也给社会保障带来严重负担.因此,慢性伤口已经成为国内外创面治疗领域的重点和热点[1-2].炎症反应异常、自由基的损... 详细信息

慢性伤口也称为慢性难愈合创面或慢性创面,已经成为中老年人群面临的严重危害之一,不仅严重影响其生活与工作质量,同时也给社会保障带来严重负担.因此,慢性伤口已经成为国内外创面治疗领域的重点和热点[1-2].炎症反应异常、自由基的损伤作用、修复组织细胞的功能异常、新生血管形成障碍、细胞因子表达异常等均会使创面愈合过程延长以及细胞外基质异常[3-5].

关键词：慢性伤口愈合表皮细胞悬液慢性难愈合创面应用自体慢性创面炎症反应异常新生血管形成

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人骨髓间充质干细胞转分化为汗腺样细胞过程中microRNA介导的NF-κB信号通路调节

人骨髓间充质干细胞转分化为汗腺样细胞过程中microRNA介导的NF-...

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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会

作者：陈艳张翠萍付小兵解放军总医院全军创伤修复与组织再生重点实验室暨皮肤损伤修复与组织再生北京市重点实验室北京100048

目的：利用microRNA新技术,寻找MSCs分化为汗腺样细胞过程中的关键microRNA及其介导的信号通路调控,并验证microRNA细胞生物功能.方法：采用1 μg/ml EDA-A1、50 ng/ml EGF以及汗腺热休克损伤微环境,通过transwell间接培养板,诱导MSCs...

目的：利用microRNA新技术,寻找MSCs分化为汗腺样细胞过程中的关键microRNA及其介导的信号通路调控,并验证microRNA细胞生物功能.方法：采用1 μg/ml EDA-A1、50 ng/ml EGF以及汗腺热休克损伤微环境,通过transwell间接培养板,诱导MSCs分化为SGLCs.然后通过microRNA基因芯片检测,分析MSCs诱导前后,以及正常汗腺的microRNA差异表达谱,筛选出表达差异显著的microRNAs,通过生物信息学进行靶点预测,并将关键microRNA模拟物转染MSCs,进行靶基因验证,分析其参与的信号通路网络,并进一步验证其生物功能.

关键词：

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