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黑龙江畜牧兽医 2019年第21期 18-21,28,176页

作者：海丽丽李婷婷刘博毛伟曹金山内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018

为了探讨TLR4与大肠杆菌感染的奶牛子宫内膜组织中前列腺素E2(PGE2)蓄积的相关性,试验分别用1×10-5 mol/L和1×10-6 mol/L的TLR4抑制剂处理体外培养的大肠杆菌DH5α感受态细胞和大肠杆菌突变株JE5505(脂蛋白缺失菌)感染的奶牛... 详细信息

为了探讨TLR4与大肠杆菌感染的奶牛子宫内膜组织中前列腺素E2(PGE2)蓄积的相关性,试验分别用1×10-5 mol/L和1×10-6 mol/L的TLR4抑制剂处理体外培养的大肠杆菌DH5α感受态细胞和大肠杆菌突变株JE5505(脂蛋白缺失菌)感染的奶牛子宫内膜组织,用实时荧光定量PCR方法检测组织中COX-2和mPGES-1 mRNA的表达,用ELISA法检测组织上清液中PGE2的分泌情况。结果表明:大肠杆菌DH5α感受态细胞和大肠杆菌突变株JE5505感染的奶牛子宫内膜组织中COX-2和mPGES-1 mRNA的表达量及组织上清液中PGE2的分泌量明显升高,而TLR4抑制剂能明显降低大肠杆菌DH5α感受态细胞和大肠杆菌突变株JE5505感染的奶牛子宫内膜组织中COX-2和mPGES-1 mRNA的表达量及组织上清液中PGE2的分泌量。说明TLR4可调控大肠杆菌感染的奶牛子宫内膜组织中炎症介质PGE2的分泌。

关键词：大肠杆菌 TLR4 PGE2 COX-2 mPGES-1 奶牛子宫内膜组织炎症

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EP2受体介导大肠杆菌感染的奶牛子宫内膜组织损伤机制研究

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黑龙江畜牧兽医 2019年第23期 11-14,17,167,168页

作者：张超王灵芮毛伟刘博曹金山内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018

为了探索EP2受体是否参与调节大肠杆菌感染的奶牛子宫内膜组织损伤,试验以体外培养的奶牛子宫内膜组织为研究对象,采用实时荧光定量PCR、免疫荧光和H.E.染色等方法对EP2受体激动剂处理的大肠杆菌感染的奶牛子宫内膜组织中损伤因子HMGB-1... 详细信息

为了探索EP2受体是否参与调节大肠杆菌感染的奶牛子宫内膜组织损伤,试验以体外培养的奶牛子宫内膜组织为研究对象,采用实时荧光定量PCR、免疫荧光和H.E.染色等方法对EP2受体激动剂处理的大肠杆菌感染的奶牛子宫内膜组织中损伤因子HMGB-1和HABP1的表达以及子宫内膜组织损伤情况进行了研究。结果表明:与空白对照组相比,用大肠杆菌处理后可极显著上调奶牛子宫内膜组织中HMGB-1和HABP1 mRNA及蛋白的表达,而用大肠杆菌和EP2受体激动剂共同处理组织后HMGB-1和HABP1 mRNA及蛋白的表达进一步升高。用大肠杆菌处理的子宫内膜组织上皮细胞部分脱落,腺细胞崩解、坏死,腺体轮廓不清晰;而用大肠杆菌和EP2受体激动剂共同处理时,子宫内膜组织损伤情况进一步加强,上皮细胞完全脱落,腺体崩解融合更加严重。说明EP2受体能够介导大肠杆菌引起的奶牛子宫内膜组织损伤。

关键词：奶牛子宫内膜组织大肠杆菌 EP2受体高迁移率蛋白B-1 透明质酸损伤

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猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

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中国动物检疫 2020年第10期37卷 121-126页

作者：乌吉斯古楞刘亭岐巨敏莹张斌韩宇刘建奇宋庆庆关平原内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 金宇保灵生物药品有限公司兽医疫苗国家工程实验室内蒙古呼和浩特010020

为体外表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)糖基化囊膜蛋白GP5,以及制备其多克隆抗体,以PRRSV PC疫苗株RNA为模板,应用RT-PCR扩增GP5基因,并克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达载体pET-32a-GP5。经过酶切和测序鉴定后,将阳性重... 详细信息

为体外表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)糖基化囊膜蛋白GP5,以及制备其多克隆抗体,以PRRSV PC疫苗株RNA为模板,应用RT-PCR扩增GP5基因,并克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达载体pET-32a-GP5。经过酶切和测序鉴定后,将阳性重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,加入IPTG低温诱导表达。使用亲和层析法纯化PRRSV GP5蛋白。然后将纯化的蛋白免疫北京大耳白兔制备多克隆抗体,并进行酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接免疫荧光分析(IFA)。结果显示,表达的PRRSV GP5原核蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在,相对分子质量大约30 kDa;制备的GP5蛋白多克隆抗体ELISA效价可达1:64000;IFA检测显示,制备的多克隆抗体能够识别PRRSV。重组PRRSV GP5蛋白及其多克隆抗体的成功制备为PRRSV血清学检测方法的建立提供了良好的生物学材料。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒糖基化囊膜蛋白GP5 原核表达多克隆抗体

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乳酸菌细菌素Avicin A的高效表达及抑菌活性研究

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食品科技 2019年第1期44卷 26-31页

作者：宋前进张静贾燕关平原温永俊内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 内蒙古商贸职业学院呼和浩特010070

乳酸菌细菌素是一种广谱抑菌素,已成为天然食品防腐剂研究与开发的热点。文章进行了该类细菌素在大肠杆菌中的异源表达,并应用Western-blot鉴定。利用组氨酸标签纯化及Trx-Tag标签的切除,对重组蛋白的抑菌活性进行检测。根据GenBank数... 详细信息

乳酸菌细菌素是一种广谱抑菌素,已成为天然食品防腐剂研究与开发的热点。文章进行了该类细菌素在大肠杆菌中的异源表达,并应用Western-blot鉴定。利用组氨酸标签纯化及Trx-Tag标签的切除,对重组蛋白的抑菌活性进行检测。根据GenBank数据库中公布的细菌素Avicin A基因设计引物,以本实验室分离自酸马乳中的乳酸菌XM-38株为模板,采用PCR方法扩增了细菌素Avicin A片段,利用原核表达载体pET-32a(+)构建重组质粒HIS-Trx-Avicin A,将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中表达,获得了可溶性表达的融合蛋白(HIS-Trx-Avicin A)。SDS-PAGE分析HISTrx-Avicin A蛋白大小约为42 ku,表达量约占菌体总蛋白的19%。经亲和柱层析纯化后,得到纯化的HIS-Trx-Avicin A蛋白,含量180μg/mL。用肠激酶对融合蛋白HIS-Trx-Avicin A进行解离,获得浓度为20μg/mL的目的蛋白Avicin A。对HIS-Trx-Avicin A进行Western-blot鉴定,表明该细菌素蛋白得到了重组表达,对多种菌的抑菌实验表明,该重组蛋白具有良好的抑菌活性,研究的Avicin A为食品添加防腐剂提供了一个切实可行的来源。

关键词：细菌素 Avicin A基因原核表达抑菌活性

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塞内卡病毒CH/ZZ/2016株全基因组测序与分析

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中国动物检疫 2020年第12期37卷 108-113页

作者：韩宇王秀明张斌乌吉斯古楞巨敏莹刘建奇宋庆庆关平原内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 金宇保灵生物药品有限公司兽医疫苗国家工程实验室内蒙古呼和浩特010020

为了解塞内卡病毒分离株SVA/CH/ZZ/2016全基因组序列,设计4对相互重叠的特异性引物扩增基因片段,将扩增产物分别克隆至pCE2TA/Blunt-Zero载体并进行测序,拼接校正后获得SVA/CH/ZZ/2016株全基因组。结果显示,该毒株基因组全长7292 bp,包... 详细信息

为了解塞内卡病毒分离株SVA/CH/ZZ/2016全基因组序列,设计4对相互重叠的特异性引物扩增基因片段,将扩增产物分别克隆至pCE2TA/Blunt-Zero载体并进行测序,拼接校正后获得SVA/CH/ZZ/2016株全基因组。结果显示,该毒株基因组全长7292 bp,包括5'UTR(670 bp)、ORF(6546 bp)以及3'UTR(76 bp)。选择国内外其他9株参考毒株序列,对编码区12个基因的核苷酸及编码氨基酸进行比对。结果显示,核苷酸同源性最高的是3B基因,最低的是VP1基因,其余基因的核苷酸序列同源性均在85.2%~100%之间。VP1基因遗传进化分析显示,SVA/CH/ZZ/2016株与美国分离株USAIL_Purdue_43_2016和USAIN_Purdue_3698_2016株亲缘关系最近,属同一进化分支,与原始毒株SVV-001株亲缘关系最远。对SVA/CH/ZZ/2016株和原始毒株SVV-001 VP1蛋白的氨基酸序列进行比对,发现共有10处氨基酸差异。本研究通过对SVA/CH/ZZ/2016株全基因组测序及分析,为进一步开展SVA分子生物学研究及流行病学调查提供了基础数据。

关键词：塞内卡病毒全基因组序列分析

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一例苏尼特绵羊副结核病的诊断

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当代畜禽养殖业 2021年第6期 55-57页

作者：付胜李彦军刘佳利张承天高雅满达孟克郝学峰王金玲内蒙古农业大学兽医学院和农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 内蒙古阿拉善右旗动物疫病预防控制中心内蒙古阿拉善盟737300 鄂尔多斯市乌审旗农牧局动物疫病防控控制中心内蒙古鄂尔多斯017300 鄂尔多斯市伊金霍洛旗动物疫病预防控制中心内蒙古鄂尔多斯017200

本研究通过临床病史、尸体剖检、组织病理学和抗酸染色方法综合诊断了1例绵羊副结核病。其临床症状表现为顽固性腹泻和进行性消瘦,体温无明显变化,病程1年。尸体剖检可见全身脂肪完全萎缩消失,各实质器官萎缩。空肠后段大部分、空肠中... 详细信息

本研究通过临床病史、尸体剖检、组织病理学和抗酸染色方法综合诊断了1例绵羊副结核病。其临床症状表现为顽固性腹泻和进行性消瘦,体温无明显变化,病程1年。尸体剖检可见全身脂肪完全萎缩消失,各实质器官萎缩。空肠后段大部分、空肠中段局部、回肠和盲肠肠管明显增粗,肠壁增厚,肠黏膜增厚明显,黏膜形成明显的脑沟回样褶皱。肠壁淋巴结明显肿大。空肠黏膜固有层和黏膜下层增厚,内有大量的上皮样细胞和少量淋巴细胞增生。肝小叶内可见多个上皮样细胞和淋巴细胞增生灶。肠系膜淋巴结皮质可见上皮样细胞增生灶。在经抗酸染色淋巴结触片内的上皮样细胞胞浆内外均见散在和成簇的典型的红色小杆状副结核杆菌。

关键词：苏尼特绵羊副结核病副结核分枝杆菌抗酸染色法诊断

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斯氏副柔线虫SHR基因表达载体的构建及生物信息学分析

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中国农业大学学报 2019年第6期24卷 116-123页

作者：赵学亮王姝懿呼和巴特尔冯陈晨孙柯王文龙内蒙古农业大学兽医学院/农村农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 内蒙古自治区综合疾病预防控制中心呼和浩特010031

为探讨斯氏副柔线虫免疫相关SHR基因作为疫苗候选抗原及早期诊断抗原的可能性,提取斯氏副柔线虫的总RNA,用RT-PCR技术扩增SHR基因,并将PCR产物克隆到pMD19-T载体,构建原核表达载体pET-30a(+)-SHR,利用在线软件对该基因编码蛋白序列进行... 详细信息

为探讨斯氏副柔线虫免疫相关SHR基因作为疫苗候选抗原及早期诊断抗原的可能性,提取斯氏副柔线虫的总RNA,用RT-PCR技术扩增SHR基因,并将PCR产物克隆到pMD19-T载体,构建原核表达载体pET-30a(+)-SHR,利用在线软件对该基因编码蛋白序列进行生物信息学分析。结果表明:克隆获得SHR基因全长1 083 bp,编码360个氨基酸,理论等电点为6.09,无信号肽和跨膜区;磷酸化预测含有29个磷酸化位点;结构分析发现,α-螺旋构成二级结构的主要成分,亲水性氨基酸比例超过60%;抗原表位预测表明,SHR蛋白是一种抗原性较高的亲水性蛋白。推测SHR有望用作斯氏副柔线虫的免疫诊断抗原和疫苗候选抗原。

关键词：原核表达载体 SHR基因抗原表位生物信息学

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一例奶山羊破伤风的诊断和防治

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现代农业 2021年第6期 66-68页

作者：高雅智宇刘佳利张承天斯庆孟克郝学峰王金玲内蒙古农业大学兽医学院和农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 内蒙古自治区农牧业科学研究院内蒙古呼和浩特010031 鄂尔多斯市乌审旗嘎鲁图镇人民政府内蒙古嘎鲁图017300 鄂尔多斯市伊金霍洛旗动物疫病预防控制中心内蒙古鄂尔多斯017200

破伤风是由外伤感染破伤风梭菌所引起的一种急性中毒性疾病。本研究通过临床症状、尸体剖检、病理组织学、触片检查和毒素检查实验的方法对一例奶山羊进行诊断。临床症状可见病羊呈现角弓反张、后肢僵直;尸体剖检显示,在耳部打耳标处周... 详细信息

破伤风是由外伤感染破伤风梭菌所引起的一种急性中毒性疾病。本研究通过临床症状、尸体剖检、病理组织学、触片检查和毒素检查实验的方法对一例奶山羊进行诊断。临床症状可见病羊呈现角弓反张、后肢僵直;尸体剖检显示,在耳部打耳标处周围组织明显损伤伴有脓样物质渗出,其他组织器官有不同程度的损伤。病理组织学观察显示,耳孔边缘表面形成薄层环状的结痂和炎症反应带,组织深部可见有大量肉芽组织,肉芽组织中有明显的充血、出血水肿以及中性粒细胞浸润。脑组织出现明显水肿,部分脑组织内有大小不等的出血灶。通过触片检查可见耳标创口处可见大量革兰氏阳性粗大杆菌;毒素检查实验中小鼠2 h出现明显后肢和尾部僵直,5 h后死亡。

关键词：奶山羊破伤风病理组织学诊断防治

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基于比较基因组学分析的方法定位及注释双峰驼MHC基因

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中国农业科学 2018年第18期51卷 3591-3599页

作者：支立康额尔敦木图安希文王超王瑞包花尔王秀珍内蒙古农业大学兽医学院/农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室

【目的】定位并注释双峰驼主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex,MHC）基因序列,为进一步研究双峰驼MHC基因提供科学依据。【方法】运用比较基因组学方法,提取人类MHC（HLA）基因编码序列和牛MHC（BoLA）基因编码序... 详细信息

【目的】定位并注释双峰驼主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex,MHC）基因序列,为进一步研究双峰驼MHC基因提供科学依据。【方法】运用比较基因组学方法,提取人类MHC（HLA）基因编码序列和牛MHC（BoLA）基因编码序列并分别与双峰驼转录本进行blastn基因序列比对,识别出相似度较高的scaffolds,通过分析HLA、BoLA基因序列比对在这些scaffolds上的位置顺序,对多条scaffolds进行拼接,得到双峰驼MHC的Pseudo chromosome;再分别提取HLA、BoLA全基因组序列与双峰驼已拼接的scaffolds进行基因组共线性分析,利用lastz建立起的Pseudo chromosome与HLA、BoLA全基因组序列的线性关系判断筛选出的scaffolds是否准确;然后通过分析MHC基因在两物种间的线性关系,在双峰驼参考基因组中提取出MHC基因序列,并对这些序列进行基因注释;最后根据得到的双峰驼MHC基因绘制系统进化树,研究其基因间的进化关系。【结果】通过对HLA、BoLA基因编码序列与双峰驼转录本用blastn进行序列比对,识别出了相似度较高的3条scaffolds,即NW011511766.1（全长4.1M）、NW011515227.1（全长1.2M）和NW011514613.1（全长15K）,对其拼接得到双峰驼MHC的Pseudo chromosome;利用lastz共线性分析,识别出HLA基因序列和BoLA基因序列并比对出其在双峰驼MHC基因的共线性区域。该区域与拼接得到的Pseudo chromosome一致,证明筛选出的scaffolds是准确的。并且发现Class-Ⅰ类和Class-Ⅲ类基因集中分布在NW011515227.1上,而Class-Ⅱ类基因集中分布在NW011511766.1和NW011514613.1上,进一步分析得知Class-Ⅱ类基因主要分布在NW011511766.1的3.5—4.1M的位置;将存在共线性区域的序列提取出来,与比对到双峰驼上的MHC基因的编码序列进行blat分析,结果在双峰驼基因组中共识别出24个与牛BoLA基因高度相似的基因,其中Ⅰ类基因1个,Ⅱ类10个,Ⅲ类基因13个。对双峰驼这24个MHC基因进行信息注释并绘制系统进化树,结果显示注释的Class-Ⅰ类和Class-Ⅱ类基因在同一分支。【结论】通过比较基因组学方法定位并注释了双峰驼的MHC基因,将双峰驼MHC基因序列定位到了3条scaffolds上,找到并注释了24个MHC基因,绘制了双峰驼MHC的Pseudo chromosome,为进一步研究双峰驼MHC基因奠定了理论基础。

关键词：双峰驼 MHC CBLA BoLA HLA 比较基因组学

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影像技术辅助针灸穴位取穴施针方法的探讨

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黑龙江畜牧兽医 2019年第6期 98-103页

作者：董晓峰胡格吉乐图院树刚巴音吉日嘎拉内蒙古农业大学兽医学院/农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 尚义县纪律检查委员会河北尚义076750

为了对一些用传统方法难以取穴的穴位进行定位,试验采用B型超声波和X射线分别对以骨骼、血管、肌肉、肌腱为参照标志的穴位进行定位施针。结果表明:对一些用传统方法难以取穴的穴位,借助B型超声波、X射线等,能对大多数穴位进行准确定位... 详细信息

为了对一些用传统方法难以取穴的穴位进行定位,试验采用B型超声波和X射线分别对以骨骼、血管、肌肉、肌腱为参照标志的穴位进行定位施针。结果表明:对一些用传统方法难以取穴的穴位,借助B型超声波、X射线等,能对大多数穴位进行准确定位,对于某些穴位还能辨别进针的路径、角度与深度。

关键词：影像诊断技术穴位定位施针针灸

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