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第十一届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会

作者：方变变罗晓平李军燕王鹏龙乌云塔娜萨日娜耿万恒高海英内蒙古自治区农牧业科学院内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室

目的:弓形虫(Toxopiasma gondii)是一种人畜共患病原体,可寄生于包括人在内的哺乳动物、鸟类等200多种宿主体内。目前世界各地均有该病报道,国内调查结果显示:2003年,青海省羊弓形虫阳性率为7.78%,牛为12.67%;2010年,内蒙古地区放牧绵... 详细信息

目的:弓形虫(Toxopiasma gondii)是一种人畜共患病原体,可寄生于包括人在内的哺乳动物、鸟类等200多种宿主体内。目前世界各地均有该病报道,国内调查结果显示:2003年,青海省羊弓形虫阳性率为7.78%,牛为12.67%;2010年,内蒙古地区放牧绵羊弓形虫血清阳性率为10.6%;2014年,内蒙古地区放牧绵羊弓形虫血清阳性率为13.3%,牛血清阳性率为0%;2018年,延边地区的牛弓形虫感染率为10.69%。由于该病在全世界引起了巨大的公共卫生负担,每年约有20万例先天性弓形虫病儿出生。为此,本研究拟调查了内蒙古主要牧区放牧牛羊弓形虫的感染情况,为后续研究及防控措施的构建提供依据。方法:从内蒙古自治区呼伦贝尔市新巴尔虎右旗及阿拉善盟左旗的15个不同羊场随机采集牛羊血液样品共286份。5000r/min,15min离心,取上清液于1.5m L灭菌离心管中。采用间接血凝试验(IHA)检测弓形虫阳性率。其中,阳性血清效价不低于1:1024,阴性血清第一孔允许有前置现象"+"外,其余各孔均为"-"。在稀释液为"-"的前提下,对待检血清进行判定,否则重做。待检血清效价达到或超过1:64判为阳性,"++"为阳性终点。结果:在检测的238份(阿拉善68份,呼伦贝尔176份)绵羊血清中,检出阳性样品4个,总阳性率为1.68%。其中,阿拉善盟阳性率为4.84%,呼伦贝尔阳性率为1.12%。统计分析结果表明,两地间弓形虫感染率差异显著(P<0.05)。在检测的48份牛血清中,未检测到阳性样品,样本阳性率为0%。结论:调查结果显示,内蒙古牧区羊弓形虫感染率高于牛,较牛而言,羊对弓形虫感染较敏感。且位于内蒙古东北角的呼伦贝尔市新巴尔虎右旗羊感染率低于地处内蒙古西南角的阿拉善左旗。究其原因,可能与内蒙古阿拉善盟左旗距内地城市较近有关。为此,内蒙古作为畜牧业大省,应加强该病的监测,进而评估该病在畜间传播风险,为公共卫生安全提供保障。

关键词：牛羊弓形虫病流行病学调查

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常用驱虫药物对内蒙古农牧区羊胃肠道线虫驱虫效果研究

常用驱虫药物对内蒙古农牧区羊胃肠道线虫驱虫效果研究

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第十一届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会

作者：罗晓平李军燕方变变王鹏龙乌云塔娜耿万恒高海英冯新港杨晓野内蒙古自治区农牧业科学院内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室

目的:羊胃肠道线虫病是由寄生于羊胃肠道中的多种线虫引起的一类重要寄生虫病,其在羊疫病中占有相当重要的地位。特点通常表现为感染率高、感染强度大、分布流行范围广,造成的经济损失大。在羊胃肠道线虫病防治方面,由于疫苗的缺失,目... 详细信息

目的:羊胃肠道线虫病是由寄生于羊胃肠道中的多种线虫引起的一类重要寄生虫病,其在羊疫病中占有相当重要的地位。特点通常表现为感染率高、感染强度大、分布流行范围广,造成的经济损失大。在羊胃肠道线虫病防治方面,由于疫苗的缺失,目前仍以药物驱虫为主,但随着驱虫药无节制的使用,胃肠道线虫耐药性也不断加剧。如何合理用药以减缓线虫耐药性产生的速度成为亟需解决的问题,而合理用药的前提便是线虫耐药性的检测及敏感药物的筛选。本研究以内蒙古农区和牧区放牧或半舍饲且感染有胃肠道线虫的绵羊为研究对象,以粪便虫卵减少试验为检测方法,以用药组粪便虫卵减少率和95%置信域下限为评价指标,探查内蒙古绵羊胃肠道线虫对常用驱虫药的耐药性,同时筛选适用于本地区的敏感高效驱虫药物,为兽医临床用药提供依据。方法:分别在内蒙古农区、牧区选择绵羊数在200～500之间,5个月内未使用任何药物驱虫的羊群牧场8个,随机选取100只2岁羊只进行直肠粪便采集,同时逐只打耳标进行标记。对粪便虫卵计数在100个/克以上的羊只,按EPG从大到小排队,蛇形分为4组,包括用药组(氯氰碘柳胺钠组、丙硫咪唑组、伊维菌素组)和对照组。参照世界兽医寄生虫学促进协会(WAAVP)关于蠕虫抗药性检测方法中的粪便虫卵减少试验进行分析,并做了适当的改进。结果:使用丙硫咪唑驱虫的5个牧场中,来自牧区的3个牧场的羊胃肠道线虫均对其产生了耐药性,而来自农区的2个牧场中,1个的虫体对其敏感,另有一个对其疑似耐药;在使用氯氰碘柳胺钠驱虫的5个牧场中,牧区有1个牧场羊胃肠道线虫存在氯氰碘柳胺钠疑似耐药,另外4个来自农区和牧区的牧场的虫体均对该药敏感;而使用伊维菌素的8个牧场中,全部牧场的羊胃肠道线虫均对其产生耐药性。结论:对于内蒙古农区和牧区的放牧绵羊而言,其胃肠道线虫对伊维菌素均产生了耐药性,而对丙硫咪唑和氯氰碘柳胺钠来说,两者在农区的驱虫效果相当,而在牧区,胃肠道线虫对氯氰碘柳胺钠敏感或疑似耐药,而对丙硫咪唑则产生很强的耐药性。究其原因,主要是牧区驱虫时春季以伊维菌素为主,秋季以丙硫咪唑为主,平时则随机用药,而农区则主要使用伊维菌素驱虫,偶尔使用丙硫咪唑。为此,目前,内蒙古地区羊胃肠道线虫驱虫时,应选用除伊维菌素以外的驱虫药物,如丙硫咪唑、氯氰碘柳胺钠、碘硝酚等,而且,在内蒙古地区羊胃肠道线虫耐药性不断加剧的情况下,需经常监测羊胃肠道线虫对驱虫药物的耐药性变化,适时更换药物。

关键词：羊胃肠道线虫耐药性

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马鹿β-防御素-1cDNA全长克隆、序列信息及表达分析

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畜牧兽医学报 2017年第2期48卷 225-234页

作者：田巧珍金鑫张曼蔡硕刘骄王云鹤杨银凤内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018

为了研究马鹿β-防御素-1(Red deerβ-defensin-1,redBD-1)基因的结构与功能,揭示该基因的组织表达规律。本研究利用PCR结合RACE(Rapid-amplification of cDNA ends)技术从马鹿舌黏膜中克隆redBD-1基因的cDNA全长序列并对其进行了生物... 详细信息

为了研究马鹿β-防御素-1(Red deerβ-defensin-1,redBD-1)基因的结构与功能,揭示该基因的组织表达规律。本研究利用PCR结合RACE(Rapid-amplification of cDNA ends)技术从马鹿舌黏膜中克隆redBD-1基因的cDNA全长序列并对其进行了生物信息学分析,同时采用Real-time quantitative PCR(RT-qPCR)技术检测该基因在各组织的表达情况。结果表明,redBD-1基因的cDNA全长序列为455bp,开放阅读框(ORF)为192bp,编码64个氨基酸。生物信息学分析表明,redBD-1蛋白的理论分子量为6.94ku,有10个带正电荷的氨基酸残基,无带负电荷的氨基酸残基,理论等电点为10.85。预测redBD-1蛋白有一个分泌信号肽结构,无跨膜区,主要在细胞外发挥生理功能;6个保守的半胱氨酸残基分别以Cys1-Cys5、Cys2-Cys4和Cys3-Cys6连接形成3个分子内二硫键;成熟蛋白的三级结构是由β-折叠、延伸和无规则卷曲构成。redBD-1基因编码的氨基酸序列同源性最高的是梅花鹿β-防御素(siBD-1)为98.4%,其次是水牛肠β-防御素(BEBD)为92.2%,与人β-防御素-2(HBD-2)同源性最低仅为35.9%。RT-qPCR结果得出,redBD-1在被检器官中均有表达,在消化系统、呼吸系统以及生殖系统的大部分器官表达量较高,肝、肾和脾等实质性器官表达量相对较低。本试验为今后深入研究防御素基因功能以及马鹿黏膜免疫系统提供理论依据。

关键词：马鹿β-防御素-1 RACE 基因克隆序列分析定量表达

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少孢节丛孢菌Aoz1基因调控区的发掘及分析

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黑龙江畜牧兽医 2018年第23期 21-26页

作者：王新芳尹相吉聂福贵陈湘江郭宏年梁萌罗小平钱英红郭少平杨晓野王瑞内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 山东省诸城市畜牧兽医管理局山东诸城262200 内蒙古自治区农牧业科学院呼和浩特010031 内蒙古阿拉善盟畜牧兽医工作站内蒙古阿拉善750306

为了确定少孢节丛孢菌内蒙古株丝氨酸蛋白酶Aoz1基因的潜在启动子区,试验采用透析膜培养的方法培养出少孢节丛孢菌内蒙古株并提取基因组DNA,与NCBI上Aoz1基因进行比对,选定Aoz1基因上游侧翼长度为2 000 bp的序列(命名为AP1)并据此设计引... 详细信息

为了确定少孢节丛孢菌内蒙古株丝氨酸蛋白酶Aoz1基因的潜在启动子区,试验采用透析膜培养的方法培养出少孢节丛孢菌内蒙古株并提取基因组DNA,与NCBI上Aoz1基因进行比对,选定Aoz1基因上游侧翼长度为2 000 bp的序列(命名为AP1)并据此设计引物,用PCR法扩增该序列并构建至平末端载体后测序,使用启动子在线预测软件Web Promoter Scan Service、NNPP以及CpG岛预测软件EMBOSS对AP1进行生物信息学分析。结果表明:所提取的基因组DNA完整性良好;成功构建出重组平末端质粒PEASY-AP1-Blunt,测序结果正确;通过相应软件预测出AP1含有的启动子基本元件,如TATA框、转录起始位点(TSS位点),以及参与Aoz1基因表达调控的转录因子结合位点Sp1、GHO、E2F、T-Ag和GCF等,同时确定了CpG岛的Obs/Exp值与GC含量的百分比分布。说明AP1序列具有启动子的基本结构和特点,初步确定了少孢节丛孢菌Aoz1基因的潜在启动子区。

关键词：少孢节丛孢菌 Aoz1基因 PCR 启动子生物信息学分析启动子预测

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酿酒酵母菌诱导绵羊瘤胃上皮细胞SBD-1表达的信号通路初步研究

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畜牧兽医学报 2017年第3期48卷 561-569页

作者：金鑫张曼田巧珍刘骄王云鹤杨银凤内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018

文章旨在探索核因子-κB(NF-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)通路是否介导益生性酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)诱导绵羊瘤胃上皮细胞(RECs)β-防御素-1(SBD-1)基因的转录。首先建立绵羊RECs培养体系作为体外试验模型,选用诱导S... 详细信息

文章旨在探索核因子-κB(NF-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)通路是否介导益生性酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)诱导绵羊瘤胃上皮细胞(RECs)β-防御素-1(SBD-1)基因的转录。首先建立绵羊RECs培养体系作为体外试验模型,选用诱导SBD-1转录最高的菌液浓度和诱导培养时间进行信号通路初步研究,采用实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)对已建立的诱导SBD-1转录模型中的细胞膜受体——Toll样受体2(TLR2)、信号衔接蛋白——髓样分化因子(MyD88)以及NF-κB和MAPKs通路中的相关因子基因转录变化进行检测;然后选用NF-κB和MAPKs通路中的4种特异性抑制剂(即NF-κB通路特异性抑制剂PDTC、P38通路特异性抑制剂SB202190、ERK 1/2通路特异性抑制剂PD98059、JNK通路特异性抑制剂SP600125)通过单独或相互组合处理细胞后再进行诱导培养,同时采用RT-qPCR的方法检测用抑制剂处理绵羊RECs后SBD-1mRNA的转录水平。结果表明:酿酒酵母菌刺激RECs后,NF-κB和MAPKs通路中各因子NF-κB、P38、JNK、ERK1/2、细胞膜受体TLR2与信号衔接蛋白MyD88的mRNA水平与未刺激组相比均有所升高,且呈显著性差异(P<0.01或P<0.05);通过单独或组合添加抑制剂后再诱导,均发现特异性抑制剂PDTC、SB202190、SP600125、PD98059可极显著抑制酿酒酵母菌对RECs SBD-1的上调作用(P<0.01),且P38通路特异性抑制剂SB202190的抑制效果最明显。结果提示,酿酒酵母菌诱导绵羊RECs SBD-1的转录可能与TLR2-MyD88-NF-κB/MAPKs通路有关,但以TLR2-MyD88-MAPKs中的TLR2-MyD88-P38通路为主要的信号通路。

关键词： β-防御素-1 瘤胃上皮细胞酿酒酵母菌抑制剂信号通路实时荧光定量PCR

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靶向TLR9基因siRNA的筛选及其对BHV-1增殖规律的影响

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中国畜牧兽医 2017年第2期44卷 303-310页

作者：呼凤丽徐丽媛张志飞周伟光内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018

为研究牛胚胎气管(bovine embryonic tracheal,EBTr)细胞Toll样受体9(Toll-like receptors 9,TLR9)在牛疱疹病毒Ⅰ型(bovine herpesvirus type 1,BHV-1)感染的天然免疫反应中的作用,本试验利用小分子干扰RNA(siRNA)技术,以TLR9为靶向分别设计并合成3条siRNA干扰序列,用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术检测应用siRNA-TLR9干扰后TLR9基因的表达变化,筛选出最佳的siRNA-TLR9干扰序列,继而转染EBTr细胞使其TLR9基因沉默后感染BHV-1,用TaqMan实时荧光定量PCR方法检测BHV-1不同时间点的增殖变化。结果显示,转染48h后,与阴性对照组相比,siRNA-TLR9A、siRNA-TLR9B和siRNA-TLR9C分别对TLR9mRNA表达量下调了60.90%、24.05%和40.75%。筛选出siRNA-TLR9A片段在12~72h可以显著抑制TLR9mRNA表达(P<0.05)。用该片段转染EBTr细胞再感染BHV-1后,6~72hsiRNA-TLR9A组BHV-1DNA拷贝数低于对照组。本试验成功筛选出了特异性的抑制EBTr细胞TLR9基因的siRNA序列,并证明抑制TLR9的表达可降低BHV-1的增殖能力。

关键词：小分子干扰RNA 牛胚胎气管细胞 Toll样受体9 牛疱疹病毒Ⅰ型实时荧光定量PCR

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蓝刺头及蓝刺头复方水提物对实验性Ⅱ型糖尿病大鼠血糖及血脂的影响

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中国兽医学报 2017年第5期37卷 923-929页

作者：姜梦如刘丹丹朱浩马晓宇杨英内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

为研究蓝刺头及蓝刺头复方水提物对Ⅱ型糖尿病(T2DM)大鼠血糖、血脂的影响。本试验以SD大鼠饲喂高脂高糖饲料加小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射的方法建立T2DM大鼠模型。将大鼠随机分为正常对照组,模型组,蓝刺头水提物高、中、低浓度组,... 详细信息

为研究蓝刺头及蓝刺头复方水提物对Ⅱ型糖尿病(T2DM)大鼠血糖、血脂的影响。本试验以SD大鼠饲喂高脂高糖饲料加小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射的方法建立T2DM大鼠模型。将大鼠随机分为正常对照组,模型组,蓝刺头水提物高、中、低浓度组,蓝刺头复方水提物高、中、低浓度组,对各组大鼠分别连续56d灌服生理盐水及相应浓度蓝刺头及蓝刺头复方水提物,并检测大鼠相关血糖血脂生化指标。结果显示,蓝刺头及蓝刺头复方水提物高、中剂量组对Ⅱ型糖尿病大鼠空腹血糖均呈明显升高趋势(P<0.05);蓝刺头及蓝刺头复方低剂量组对Ⅱ型糖尿病大鼠空腹血糖均无明显的改善;蓝刺头及蓝刺头复方水提物高、中、低剂量组均可明显降低TC、TG和LDL-C的含量(P<0.05),HDL-C无明显差异(P>0.05)。结果表明,蓝刺头及蓝刺头复方水提物对实验性Ⅱ型糖尿病大鼠具有降糖、降脂的作用。

关键词：蓝刺头 Ⅱ型糖尿病血糖血脂

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骆驼斯氏副柔线虫病传播媒介西方角蝇和截脉角蝇各虫态的系统形态学研究

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中国兽医学报 2017年第6期37卷 1077-1083页

作者：邓侨杨莲茹杨晓野王瑞李斌张伟杨波内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

本研究旨在完善西方角蝇和截脉角蝇各虫态的系统形态学资料,为野外采集两种角蝇各虫态样本的分类鉴定提供理论依据,进而为研究斯氏副柔线虫在角蝇体内发育过程,以及制定防控骆驼斯氏副柔线虫病的有效措施等奠定基础。通过实验室人工饲... 详细信息

本研究旨在完善西方角蝇和截脉角蝇各虫态的系统形态学资料,为野外采集两种角蝇各虫态样本的分类鉴定提供理论依据,进而为研究斯氏副柔线虫在角蝇体内发育过程,以及制定防控骆驼斯氏副柔线虫病的有效措施等奠定基础。通过实验室人工饲养角蝇,收集西方角蝇和截脉角蝇的卵、各龄幼虫、蛹和成蝇,详细观察并描述两种角蝇各虫态的形态结构,以明确两种角蝇各虫态之间的形态学差异。除西方角蝇和截脉角蝇1龄幼虫外,两种角蝇的卵、2龄幼虫、3龄幼虫、蛹和成蝇都存在可识别的形态学差异。本研究详细描述了西方角蝇和截脉角蝇各虫态的形态特征,并确定了多处可用于区分两种角蝇卵、2龄幼虫、3龄幼虫、蛹和成蝇的形态特征差异。

关键词：骆驼斯氏副柔线虫病西方角蝇截脉角蝇形态学

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牛疱疹病毒Ⅰ型感染对牛胚气管细胞Toll样受体2表达的影响

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中国兽医科学 2017年第3期47卷 322-327页

作者：周伟光徐丽媛张志飞呼凤丽内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

为研究牛疱疹病毒Ⅰ型(BH V-1)对体外非免疫细胞——牛胚气管细胞(EBTr)表达Toll样受体2(TL R 2)的影响,了解TLR2在BHV-1感染时介导的天然免疫反应机制,本试验将EBTr细胞分为BHV-1感染组和对照组,分别收集培养后第6、12、18、24及48小... 详细信息

为研究牛疱疹病毒Ⅰ型(BH V-1)对体外非免疫细胞——牛胚气管细胞(EBTr)表达Toll样受体2(TL R 2)的影响,了解TLR2在BHV-1感染时介导的天然免疫反应机制,本试验将EBTr细胞分为BHV-1感染组和对照组,分别收集培养后第6、12、18、24及48小时的细胞总RN A和总蛋白,通过荧光定量PCR和W estern-blot技术,检测感染BHV-1后TLR2在基因和蛋白水平的动态变化。结果显示,在第6和12小时,感染组TLR2 m RNA和蛋白的相对表达量均低于对照组;在第48小时,感染组TLR2 m RNA和蛋白的相对表达量均显著高于对照组(P<0.01)。结果表明,BHV-1感染EBTr细胞会影响TLR2 m RNA和蛋白的表达,提示TLR2参与宿主细胞对BHV-1的识别,触发天然免疫,这为探索BHV-1感染的免疫机制提供了依据。

关键词：牛疱疹病毒Ⅰ型牛胚气管细胞 Toll样受体2 荧光定量PCR Western-blot

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绵羊肺腺瘤病毒巢式RT-PCR检测方法的建立与验证

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中国兽医科学 2017年第1期47卷 23-30页

作者：郭文庆孙晓琳冷冉刘淑英内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

根据Gen Bank上发表的外源性绵羊肺腺瘤病毒(exJSRV)的基因序列,分别设计合成巢式RT-PCR引物及扩增exJSRV-env全基因的引物,建立exJSRV的检测方法。将病肺的巢式外套与内套RT-PCR扩增产物与载体连接,对重组质粒送检测序进行序列分析。... 详细信息

根据Gen Bank上发表的外源性绵羊肺腺瘤病毒(exJSRV)的基因序列,分别设计合成巢式RT-PCR引物及扩增exJSRV-env全基因的引物,建立exJSRV的检测方法。将病肺的巢式外套与内套RT-PCR扩增产物与载体连接,对重组质粒送检测序进行序列分析。结果显示,巢式外套与内套RT-PCR扩增产物的序列与JQ837489.1序列的同源性分别为99.7%和99.4%。通过对3份鼻液以及75份血样的临床检测,将检测阳性的1份鼻液和2份血样送检测序,序列比对结果显示,鼻液、血样的巢式外套和内套RT-PCR扩增产物与JQ837489.1的同源性分别为99.8%、99.7%、99.7%和98.9%、100%、99.4%,且扩增基因序列的氨基酸序列中具有exJSRV特有的致病性YXXM序列。敏感性试验表明,巢式RT-PCR诊断方法的敏感性是普通RT-PCR的10倍,最低能够检测出9.72 fg的标准模板RNA。说明本试验所建立的方法,具有良好的临床应用价值,灵敏性高、特异性好,对exJSRV的临床早期检测提供了一种方便、可靠、经济实用的诊断方法。

关键词：绵羊肺腺瘤病巢式PCR 外源性绵羊肺腺瘤病毒内源性绵羊肺腺瘤病毒

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