检索结果-内蒙古大学图书馆

中国药理学与毒理学杂志 2020年第5期34卷 389-394页

作者：王洛萱李劲草张有志军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室北京100850

失眠症是最为常见的睡眠障碍,以入睡和睡眠维持困难及日间功能障碍为主要表现。失眠症的病理生理研究和镇静催眠药物的非临床评价需以适当的动物模型为基础。本文以模型动物睡眠结构为重点,从心理应激、特殊睡眠环境和药物模型3个方面... 详细信息

失眠症是最为常见的睡眠障碍,以入睡和睡眠维持困难及日间功能障碍为主要表现。失眠症的病理生理研究和镇静催眠药物的非临床评价需以适当的动物模型为基础。本文以模型动物睡眠结构为重点,从心理应激、特殊睡眠环境和药物模型3个方面归纳常用失眠模型。现有失眠动物模型存在一定的局限性,在镇静催眠药物研究中应当灵活选择多种造模方法,以用更接近失眠临床表现的动物模型评价药物作用。

关键词：失眠睡眠剥夺动物模型睡眠结构

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2种小鼠应激模型致模式分离损伤特点及米非司酮和普萘洛尔对足底电击模型小鼠模式分离的干预作用比较

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中国药理学与毒理学杂志 2022年第6期36卷 443-450页

作者：王昊王子元黄晏周文霞军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室北京100850

目的比较2种小鼠应激模型致模式分离损伤的特点及米非司酮和普萘洛尔的干预作用。方法①分别采用足底电击或sc注射给予皮质酮(50和100 mg·kg^(-1))2种方式制备小鼠应激模型,采用物体识别范式评价应激后第1,8和15天小鼠时间与空间... 详细信息

目的比较2种小鼠应激模型致模式分离损伤的特点及米非司酮和普萘洛尔的干预作用。方法①分别采用足底电击或sc注射给予皮质酮(50和100 mg·kg^(-1))2种方式制备小鼠应激模型,采用物体识别范式评价应激后第1,8和15天小鼠时间与空间模式分离能力;②在足底电击模型上,C57BL/6J小鼠按体重和自主活动性随机分为正常对照组、足底电击组、足底电击+米非司酮(70 mg·kg^(-1))组、足底电击+普萘洛尔(20 mg·kg^(-1))组和足底电击+米非司酮+普萘洛尔组。每次足底电击应激前30 min ip给药,观察小鼠的时间和空间模式分离能力。结果①在足底电击模型上,与正常对照组相比,造模后第1天模型组小鼠的时间辨别指数及空间辨别指数均显著降低(P<0.05);第8天仅空间辨别指数明显降低(P<0.01);第15天时间及空间辨别指数均无明显差异。在sc注射皮质酮模型中,与正常对照组比较,模型组小鼠仅于造模后第1天表现出空间辨别指数显著降低(P<0.05),造模第8和15天,空间与时间辨别指数均未见显著变化。②足底电击应激前给予米非司酮可显著提高足底电击模型小鼠的空间辨别指数(P<0.05),给予普萘洛尔则显著提高时间辨别指数(P<0.05),两药联用可显著提高时间和空间辨别指数(P<0.05)。结论足底电击应激对空间和时间模式分离均有损伤作用,外源性皮质酮注射应激仅造成空间模式分离损伤;米非司酮对空间模式分离损伤具有改善作用,而普萘洛尔对时间模式分离损伤具有改善作用,两药联用对时间和空间模式分离损伤均有显著改善作用。

关键词：应激模式分离记忆准确性米非司酮普萘洛尔

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胆碱能M受体调控细胞周期蛋白依赖性激酶5及其在敌敌畏诱导SH-SY5Y细胞毒性损伤中的作用

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中国药理学与毒理学杂志 2020年第3期34卷 179-187页

作者：杨培周琥王丽韫王永安军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室北京100850

目的研究胆碱能M受体(主要为M1受体)参与SH-SY5Y细胞周期依赖性蛋白激酶5(Cdk5)调控及其在敌敌畏(DDVP)诱导SH-SY5Y细胞毒性损伤中的作用。方法①应用免疫荧光结合共聚焦显微镜检测胆碱能M1受体及Cdk5在SH-SY5Y细胞中的分布和表达。②... 详细信息

目的研究胆碱能M受体(主要为M1受体)参与SH-SY5Y细胞周期依赖性蛋白激酶5(Cdk5)调控及其在敌敌畏(DDVP)诱导SH-SY5Y细胞毒性损伤中的作用。方法①应用免疫荧光结合共聚焦显微镜检测胆碱能M1受体及Cdk5在SH-SY5Y细胞中的分布和表达。②细胞对照组、氧化震颤素(Oxo-M)组(1×10-4mol·L-1作用48 h)、罗考唯亭(Rosc)组(培养结束前1 h加入Rosc 1×10-4mol·L-1)、Rosc+Oxo-M组(Rosc 1×10-4mol·L-1预处理1 h后,再加入Oxo-M 1×10-4mol·L-1作用至48 h),应用MTT比色法检测细胞存活率,Western印迹法检测Cdk5表达。③细胞对照组、DDVP组(1×10-5mol·L-1作用48 h)、Rosc组(培养结束前1 h加入1×10-4mol·L-1)、Rosc+DDVP组(Rosc 1×10-4mol·L-1预处理1 h后,再加入DDVP1×10-5mol·L-1作用至48 h),用MTT比色法检测细胞存活率,Western印迹法检测Cdk5表达,流式细胞术膜联蛋白Ⅴ-碘化丙啶双染法检测细胞凋亡率,TUNEL法检测细胞凋亡。结果①激光共聚焦显微镜结果表明,SH-SY5Y细胞中M1受体与Cdk5均有分布和表达。②Oxo-M 1×10-4mol·L-1处理SH-SYSY细胞48 h,细胞存活率为(59.1±7.3)%,与细胞对照组相比显著降低(P<0.05),Cdk5表达显著升高(P<0.05);Rosc 1×10-4mol·L-1处理SH-SYSY细胞1 h,Cdk5表达显著降低(P<0.05);Rosc+Oxo-M组细胞存活率为(84.5±20.9)%,与Oxo-M组相比明显升高(P<0.05),Cdk5表达明显降低(P<0.05)。③DDVP1×10-5mol·L-1处理SH-SYSY细胞48 h,细胞存活率为(68.6±4.1)%,与细胞对照组相比显著降低(P<0.05),Cdk5表达显著升高(P<0.05);Rosc+DDVP细胞存活率为(84.4±8.8)%,与DDVP组相比显著升高,Cdk5表达显著降低(P<0.05)。流式细胞术结合TUNEL染色结果显示,DDVP处理SH-SYSY细胞48 h,细胞凋亡率为(64.1±8.4)%,与细胞对照组相比明显升高(P<0.05),TUNEL阳性细胞增多;而Rosc+DDVP组细胞凋亡率为(34.4±9.5)%,与DDVP组相比明显降低(P<0.05),TUNEL阳性细胞减少。结论 Oxo-M和DDVP可通过增强Cdk5活性引起SH-SY5Y细胞损伤,提示抑制Cdk5活性可显著降低由Oxo-M和DDVP引发的细胞毒作用。

关键词：胆碱能M受体细胞周期依赖性蛋白激酶5 细胞凋亡神经毒性

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抗新型冠状病毒靶点及药物研究进展

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中国药理学与毒理学杂志 2020年第12期34卷 881-898页

作者：韩露王同兴肖智勇周文霞张永祥军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室北京100850

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)是由严重急性呼吸综合征冠状病毒新型冠状病毒(SARS-CoV-2)引起的严重威胁人类健康的传染性疾病。SARS-CoV-2的病毒颗粒由外层的包膜和内层的核衣壳两部分构成,其基因组编码的非结构蛋白和结构蛋白在其吸附... 详细信息

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)是由严重急性呼吸综合征冠状病毒新型冠状病毒(SARS-CoV-2)引起的严重威胁人类健康的传染性疾病。SARS-CoV-2的病毒颗粒由外层的包膜和内层的核衣壳两部分构成,其基因组编码的非结构蛋白和结构蛋白在其吸附、穿入、脱壳、核酸和蛋白质合成、装配和释放整个生命周期中发挥重要作用,针对病毒自身或其感染依赖的宿主分子均可研发抗病毒药物。靶向SARS-CoV-2刺突糖蛋白的抗体药物和靶向SARS-CoV-2 RNA聚合酶的小分子药物等表现出一定的抗病毒作用,是潜力较大的候选药物,但其疗效仍有待进一步临床试验证明。综合考虑病毒自身和宿主靶点,进行多靶点多药物组合可能会取得更佳的防治效果。本综述对SARS-CoV-2的结构和生命周期、潜在的靶点和药物等研究进展进行综述,为研发抗SARS-CoV-2药物提供参考。

关键词：冠状病毒新型冠状病毒肺炎新型冠状病毒抗病毒药物

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瞬时受体电位通道在呼吸系统疾病中的作用研究进展

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中国药理学与毒理学杂志 2021年第6期35卷 471-480页

作者：杨维杰骆媛王永安军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室北京100850

瞬时受体电位(TRP)离子通道是一类非特异性的阳离子通道蛋白家族,在呼吸道感觉神经纤维和非神经细胞中广泛表达,能响应多种刺激,从而参与呼吸系统疾病的发生发展过程。其中TRPA1,TRPV1,TRPV4和TRPM8亚型在呼吸道组织损伤和炎症反应中的... 详细信息

瞬时受体电位(TRP)离子通道是一类非特异性的阳离子通道蛋白家族,在呼吸道感觉神经纤维和非神经细胞中广泛表达,能响应多种刺激,从而参与呼吸系统疾病的发生发展过程。其中TRPA1,TRPV1,TRPV4和TRPM8亚型在呼吸道组织损伤和炎症反应中的作用尤为重要,是近年来呼吸系统领域研究的热点。本文重点对TRPA1,TRPV1,TRPV4和TRPM8在咳嗽、哮喘和慢性阻塞性肺病等呼吸系统疾病中的作用进行综述,提示TRP通道可作为治疗呼吸道疾病的潜在药物靶点。

关键词：瞬时受体电位咳嗽哮喘慢性阻塞性肺病

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液相色谱-质谱技术在核酸表观遗传修饰研究中的应用与展望

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中国药理学与毒理学杂志 2021年第5期35卷 321-335页

作者：何唯唯徐华瞿敏敏张雅姣徐斌谢剑炜军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室北京100850

基于核酸修饰的表观基因组学和表观转录组学是生命科学领域的研究热点。目前已发现并鉴定了17种DNA修饰和至少160种RNA修饰,它们可通过改变核酸的高级结构和生化性质,参与基因时空表达调控,最终体现为生物体性状的差异,甚至与退行性病... 详细信息

基于核酸修饰的表观基因组学和表观转录组学是生命科学领域的研究热点。目前已发现并鉴定了17种DNA修饰和至少160种RNA修饰,它们可通过改变核酸的高级结构和生化性质,参与基因时空表达调控,最终体现为生物体性状的差异,甚至与退行性病变、肿瘤等诸多疾病的发生发展密切相关。由于体内核酸修饰含量极低,建立特异性强、选择性好且灵敏度高的质谱技术已成为DNA和RNA修饰分析鉴定及定量最具潜力的技术方法,特别是液相色谱-质谱联用技术已广泛应用于核酸修饰检测。本文对基于液相色谱-质谱技术的核酸修饰分析方法研究进展进行总结,针对其在准确定量和修饰位点鉴定中的分析方法进行探讨,并对表观遗传学,特别是核酸修饰研究技术在生物学功能、机制研究及毒理学筛选和预警等研究中的应用予以展望,以期促进基于质谱的DNA和RNA修饰功能及应用的深入研究。

关键词：液相色谱串联质谱表观遗传学核酸修饰甲基化

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小鼠条件性恐惧模型的建立和品系敏感性研究

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中国药理学与毒理学杂志 2020年第2期34卷 119-124页

作者：薛瑞魏肇余张森品陈红霞李云峰张有志军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室北京100850

目的在敏感品系上建立稳定可靠的小鼠条件性恐惧模型。方法采用给予30 s声音刺激(85 dB,5000 Hz),后2 s伴随给予不可逃避的足底电击(0.6 mA,持续2 s),声音-电击共配对5次,每次间隔2 min的方法建立小鼠条件性恐惧模型,在ICR、DBA/2(简称D... 详细信息

目的在敏感品系上建立稳定可靠的小鼠条件性恐惧模型。方法采用给予30 s声音刺激(85 dB,5000 Hz),后2 s伴随给予不可逃避的足底电击(0.6 mA,持续2 s),声音-电击共配对5次,每次间隔2 min的方法建立小鼠条件性恐惧模型,在ICR、DBA/2(简称DBA)和C57BL/6J(简称C57)3种品系小鼠上评价场景恐惧和声音线索恐惧获得和表达的行为特点,以确定敏感品系鼠;分别于条件性恐惧训练第2,7,14,21和28天对C57小鼠场景恐惧和声音线索恐惧进行检测,以评价该品系小鼠条件性恐惧的自然消退特点;采用30 s声音+30 s间隔+10次消退训练的模式进行声音线索恐惧消退训练,并于24 h后进行消退保持测试,以评价该品系小鼠消退训练和保持的特点。结果声音-电击配对5次可成功诱导C57小鼠形成场景恐惧和声音线索恐惧,DBA小鼠可诱导形成声音线索恐惧但无法形成场景恐惧,ICR小鼠场景恐惧和声音线索恐惧均未诱导成功,确定C57小鼠为敏感品系鼠。C57小鼠呈现时间依赖的恐惧反应自然消退,其中场景恐惧在训练后第7天僵住百分率消退至(25±12)%,声音线索恐惧训练后第28天僵住百分率维持在(48±22)%;C57小鼠经10轮30 s声音消退训练,僵住时间百分率由(55±30)%消退至(32±27)%,但24 h后消退保持测试时僵住时间百分率又回升至(47±35)%。结论以敏感品系C57小鼠为研究对象,建立了恐惧获得、表达、自然消退、消退训练和消退保持各阶段恐惧行为检测的实验方法,成功建立小鼠条件性恐惧模型。

关键词：条件性恐惧模型创伤后应激障碍小鼠品系场景恐惧声音线索恐惧

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稳定敲降多腺苷二磷酸核糖聚合酶1的HaCaT细胞的建立

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中国药理学与毒理学杂志 2022年第8期36卷 584-591页

作者：刘峰肖智勇程军平蒋宁周文霞张永祥军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室北京100850

目的构建多腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)短发夹RNA(shRNA)的慢病毒载体质粒,获取稳定敲降PARP-1蛋白的人永生化表皮角化形成细胞HaCaT(PARP-1 KDHaCaT细胞)。方法针对PARP-1 mRNA设计干扰序列shRNA,用限制性内切酶技术将干扰序列shRN... 详细信息

目的构建多腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)短发夹RNA(shRNA)的慢病毒载体质粒,获取稳定敲降PARP-1蛋白的人永生化表皮角化形成细胞HaCaT(PARP-1 KDHaCaT细胞)。方法针对PARP-1 mRNA设计干扰序列shRNA,用限制性内切酶技术将干扰序列shRNA插入慢病毒载体质粒pLVX-shRNA2-puro,构建含PARP-1 shRNA的慢病毒载体质粒(pLVX-shRNA2-puro-PARP-1),酶切和核酸测序鉴定该质粒是否构建成功。采用脂质体转染法将该质粒载体转染至HEK293T细胞包装慢病毒。将带有PARP-1 shRNA的慢病毒颗粒〔感染复数为100〕感染HaCaT细胞,经嘌呤霉素3 mg·L^(-1)筛选15 d,用Western印迹法和实时定量PCR(RT-qPCR)检测PARP-1蛋白和mRNA表达水平,验证PARP-1 KD HaCaT细胞PAPR-1敲降效果。用相同方式构建阴性对照细胞(NCHaCaT细胞)。随后分别将NCHaCaT和PARP-1 KDHaCaT细胞分为细胞对照组、DNA损伤剂硫芥(SM)100和1000μmol·L^(-1)组,孵育6和24 h后制备细胞裂解液,用Luminex法测定磷酸化组蛋白H2AX(γ-H2AX)表达水平。结果DNA测序和酶切结果表明,所构建的慢病毒载体质粒中含有PARP-1 shRNA序列,表明含PARP-1 shRNA的慢病毒载体质粒构建成功。RT-qPCR结果显示,PARP-1 KDHaCaT细胞中PARP-1 mRNA水平降低为NCHaCaT细胞的约14%;Western印迹法结果显示,PARP-1 KDHaCaT细胞中PARP-1蛋白表达水平降低为NCHaCaT细胞的约10%。DNA损伤剂SM 1000μmol·L^(-1)作用24 h后,与NCHaCaT细胞相比,PARP-1 KDHaCaT细胞γ-H2AX表达水平明显增加(P<0.01)。结论成功构建含PARP-1 shRNA的慢病毒载体质粒,并获得稳定敲降PARP-1的HaCaT细胞。

关键词：多腺苷二磷酸核糖聚合酶1 RNA干扰 HaCaT细胞

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利用泛素结合结构域UBAN探针鉴定线性泛素化底物

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中国药理学与毒理学杂志 2019年第1期33卷 30-37页

作者：司甜杜现礼刘峰段小涛军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室北京100850

目的根据已知线性泛素化底物NF-κB必需调节蛋白(NEMO)的泛素结合结构域UBAN构建蛋白探针,在目的细胞中富集线性泛素化底物并应用质谱技术进行鉴定,探索线性泛素化在不同生物学事件中发挥调控功能的分子机制。方法 (1)首先通过大肠杆菌... 详细信息

目的根据已知线性泛素化底物NF-κB必需调节蛋白(NEMO)的泛素结合结构域UBAN构建蛋白探针,在目的细胞中富集线性泛素化底物并应用质谱技术进行鉴定,探索线性泛素化在不同生物学事件中发挥调控功能的分子机制。方法 (1)首先通过大肠杆菌表达系统表达纯化特异性识别线性泛素链的蛋白UBAN,通过谷胱甘肽S-转移酶(GST)标签将其与GST琼脂糖微珠连接制成UBAN探针。随后在293T细胞中共转染阳性底物NEMO和线性泛素化链组装复合体(LUBAC)使之过表达,利用UBAN探针免疫共沉淀富集NEMO上的线性泛素链,并通过Western蛋白印迹法验证UBAN探针与线性泛素化链的结合能力,从而确定体系是否建立成功。(2)在293T细胞裂解液中免疫共沉淀富集线性泛素化底物并对其进行质谱鉴定和生物信息学分析,得到潜在线性泛素化底物。在293T细胞中共转染潜在线性泛素化底物极光激酶A(Aurora-A)和LUBAC,用Western蛋白印迹法鉴定。(3)用siRNA干扰Hela细胞LUBAC,并使细胞周期同步化,用Western蛋白印迹法观察线性泛素化对潜在底物Aurora-A生物学功能的调控。结果 (1) Western蛋白印迹法结果表明,UBAN探针能够结合NEMO上的线性泛素链,从而确定体系建立成功。(2)质谱鉴定结果显示,免疫共沉淀法富集到包括极光激酶A(Aurora-A)在内的403个潜在线性泛素化底物;在293T细胞中共转染Aurora-A和LUBAC后,用Western蛋白印迹法测定结果发现,Aurora-A具有线性泛素链特征性条带,具有与线性泛素化链结合的能力。(3) Western蛋白印迹实验结果显示,与对照组相比,干涉LUBAC后Aurora-A苏氨酸288位磷酸化水平上调,表明其被激活。结论运用泛素结合结构域UBAN探针可以实现线性泛素化底物的有效捕捉与富集,在293T细胞中鉴定到底物Aurora-A的自激活可能受线性泛素化调控。本研究建立的线性泛素化底物鉴定策略为进一步探索蛋白质线性泛素化修饰的更多生物学功能提供了新的思路和方法。

关键词： UBAN结构域线性泛素化修饰底物筛选极光激酶A

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核酸适配体在质谱中的应用与展望

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分析化学 2020年第11期48卷 1439-1451页

作者：杨捷威王晨钰罗黎郭磊谢剑炜军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室中央民族大学药学院河北医科大学公共卫生学院

核酸适配体(简称适配体)是一类重要的"化学抗体"型功能性生物分子,基于适配体的质谱技术在提供分子质量及结构特征等基础上,兼具了针对靶分子的高选择性及亲和富集特点,从而提供出高特异、高灵敏信息。本文综述了近年来适配... 详细信息

核酸适配体(简称适配体)是一类重要的"化学抗体"型功能性生物分子,基于适配体的质谱技术在提供分子质量及结构特征等基础上,兼具了针对靶分子的高选择性及亲和富集特点,从而提供出高特异、高灵敏信息。本文综述了近年来适配体在质谱分析中的应用进展,重点评述了适配体在质谱分子相互作用表征中的应用、适配体作为离线型和在线亲和材料用于质谱分析测定等现状,其中结合多种质谱新技术,通过创建或结合多种前处理或在线一体化信号增强方式,特别是适配体功能化纳米材料的应用,在相互作用表征、痕量靶分子选择性提取和高灵敏检测等质谱分析测定方面是研究的重点。最后,本文对适配体在质谱研究中的应用前景进行了展望。

关键词：适配体质谱相互作用表征纳米材料功能化评述

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