检索结果-内蒙古大学图书馆

现代免疫学 2006年第4期26卷 289-292页

作者：谢应国吴秀芳武素琴罗德炎张松乐王希良西北农林科技大学动物科技学院杨凌712100 军事医学科学院微生物流行病学研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

构建表达炭疽杆菌中性蛋白酶基因部分片段N蛋白（位于248～532氨基酸），并对其免疫效果进行研究；设计引物采用PCR法自炭疽杆菌扩增中性蛋白酶部分片段N，T-A克隆后构建原核表达质粒pET28a（＋）-N，通过Western blot检测重组蛋白的免... 详细信息

构建表达炭疽杆菌中性蛋白酶基因部分片段N蛋白（位于248～532氨基酸），并对其免疫效果进行研究；设计引物采用PCR法自炭疽杆菌扩增中性蛋白酶部分片段N，T-A克隆后构建原核表达质粒pET28a（＋）-N，通过Western blot检测重组蛋白的免疫原性。以AI（OH）3为佐剂皮下注射免疫BALB／c小鼠，用ELISA方法测血清总IgG水平，MTT比色法测定脾T淋巴细胞增殖，采用流式分选法对脾T淋巴细胞亚群分类；Western blot显示重组蛋白具有免疫原性，rN免疫BALB／c小鼠后，ELISA检测到免疫鼠体内有特异性抗体产生；T淋巴细胞亚群试验表明，重组N蛋白以诱发Th2型免疫反应为主；MTT试验表明，rN蛋白对小鼠脾细胞在体外有促进生长和增殖能力，说明该重组蛋白具有生物学活性。纯化的rN可诱导高水平的抗体反应，为进一步的功能研究奠定了基础。

关键词：炭疽杆菌中性蛋白酶蛋白表达纯化

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应用巢式RT-PCR结合RFLP、SSCP对山东肾综合征出血热病人血清中HV基因检测和分型研究

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中国人兽共患病学报 2006年第7期22卷 624-628页

作者：刘运喜赵仲堂许晓群李健高媛江佳富张景兰杨占清曹务春病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071 济南军区联勤部疾病预防控制中心山东大学公共卫生学院流行病学与卫生统计学研究所山东省医学科学院基础医学研究所

目的探讨山东肾综合征出血热重疫区病人血清中HV分子生物学特征,同时寻找准确、简便、迅速的HV检测与分型方法,从而为制定防治决策提供科学根据。方法从山东肾综合征出血热重疫区临沂市费县收集病人早期血清,应用巢式RT-PCR对病人血清中... 详细信息

目的探讨山东肾综合征出血热重疫区病人血清中HV分子生物学特征,同时寻找准确、简便、迅速的HV检测与分型方法,从而为制定防治决策提供科学根据。方法从山东肾综合征出血热重疫区临沂市费县收集病人早期血清,应用巢式RT-PCR对病人血清中的HV进行基因扩增,采用RFLP、SSCP分型,并进行序列测定与分析。结果48份临床和ELISA检测确诊的HFRS病人血清经巢式RT-PCR扩增后,41份阳性,阳性率85.42%。41份阳性标本巢式RT-PCR产物经HindIII、HinfI酶切后,呈现2种不同的RFLP图谱:33份显示与R22株相似的酶切图谱,应属SEOV型;另外8份显示出与HTN76-118株相似的图谱,属HTNV型,这8份HTNV型标本均为10-12月间收集的病人血清。41份阳性标本巢式RT-PCR产物经SSCP分析,亦呈现2种不同的图谱:33份具有与R22株相似的SSCP图谱,应属SEOV型;而另8份则与HTN76-118株具有相似的SSCP图谱,属HTNV型。对部分扩增产物序列采用系统进化树分析也得出类似的结果:sdp1、sdp2、sdp3与HTN型76-118株亲缘关系相近,属同一簇,而sdp22、sdp37与SEOV型Z37、R22株亲缘关系相近,属另外一簇,这与RFLP和SSCP获得的结果相一致。结论山东肾综合征出血热重疫区病人基因型以SEOV型为主,但在秋冬季节也存在HTNV型。巢式RT-PCR结合RFLP、SSCP法可对HV准确分型,而且简便、迅速,适合于大规模流行病学调查。

关键词： HV 巢式RT-PCR RFLP SSCP 序列分析基因型

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我国部分地区蜱中莱姆病螺旋体的检测与基因分型研究

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中国病原生物学杂志 2006年第2期1卷 81-85页

作者：王宏伟何静褚宸一张泮河吴晓明黄海楠高燕蒋宝贵曹务春军事医学科学院微生物流行病学研究所病原微生物和生物安全国家重点实验室北京100071

目的对我国部分地区的多种蜱类进行莱姆病螺旋体的检测和基因分型。方法选择我国黑龙江、吉林和浙江省部分林区为调查点,采集当地蜱类,用巢式PCR法进行检测,阳性产物进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析和单链构象多态性(SSCP)分析,确... 详细信息

目的对我国部分地区的多种蜱类进行莱姆病螺旋体的检测和基因分型。方法选择我国黑龙江、吉林和浙江省部分林区为调查点,采集当地蜱类,用巢式PCR法进行检测,阳性产物进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析和单链构象多态性(SSCP)分析,确定莱姆病螺旋体的基因型。结果共检测蜱512只,阳性126只,阳性率24.61%。其中吉林全沟硬蜱带菌率为37.00%,黑龙江全沟硬蜱带菌率为20.87%,浙江长角血蜱带菌率为28.07%。RFLP分析表明,蜱中莱姆病螺旋体包括***和***两种基因型。SSCP分析显示为7种亚型,其中***分为5个亚型,***分为2个亚型。发现有3只蜱同时感染不同基因(亚)型莱姆病螺旋体。结论证实***和***基因型为我国莱姆病螺旋体的优势基因型,并在我国蜱中发现莱姆病螺旋体不同基因(亚)型的混合感染。

关键词：莱姆病螺旋体基因型限制性片段长度多态性单链构象多态性蜱

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A型肉毒神经毒素(BoNT/A)基因序列分析及其B细胞表位预测

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生物信息学 2006年第2期4卷 53-56,61页

作者：贾杨阮承迈王景林军事医学科学院微生物流行病学研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071 军事医学科学院药物毒物研究所新药设计中心北京100850

比较GenBank中4个不同毒株的A型肉毒神经毒素（BoNT／A）的基因组序列，发现其基因序列的一致性高迭92．2％-99．9％。基于保守性高的BoNT／A氨基酸序列，根据BioSun和LaserGene软件包中的表住分析相关参数，辅以对BoNT／A蛋白的二级结... 详细信息

比较GenBank中4个不同毒株的A型肉毒神经毒素（BoNT／A）的基因组序列，发现其基因序列的一致性高迭92．2％-99．9％。基于保守性高的BoNT／A氨基酸序列，根据BioSun和LaserGene软件包中的表住分析相关参数，辅以对BoNT／A蛋白的二级结构的分析，综合预测BoNT／A的B细胞表位。结果表明，BoNT／A轻链的142-150、284-292区段，轻链的284-292，重链的440-450、465-480、538-549、699-710、751-760、1087-1095、1224-1231、1263-1270区段是B细胞表位优势区的可能性较大。多参数方案井结合不同软件综合预测BoNT／A蛋白的B细胞表位，为进一步实验鉴定BoNT／A的B细胞表位及其多表位疫苗设计和研究奠定了基础。

关键词：肉毒梭菌肉毒神经毒素 B细胞表位

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应用肽核酸探针检测鼠疫耶尔森氏菌

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生物技术通讯 2006年第3期17卷 370-373页

作者：谭亚芳杜宗敏何晓晓翟俊辉郭兆彪王津杨瑞馥军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 湖南大学化学化工学院生物技术研究院化学生物传感与计量学国家重点实验室长沙410082

目的:利用特异的肽核酸(PNA)探针、链霉亲和素包被的磁珠和cy5纳米颗粒,通过荧光扫描技术,建立一种特异、快速、准确地检测鼠疫耶尔森氏菌的方法。方法:针对鼠疫耶尔森氏菌pMT1质粒上的caf1基因设计并合成一对特异PNA探针,经生物素标记... 详细信息

目的:利用特异的肽核酸(PNA)探针、链霉亲和素包被的磁珠和cy5纳米颗粒,通过荧光扫描技术,建立一种特异、快速、准确地检测鼠疫耶尔森氏菌的方法。方法:针对鼠疫耶尔森氏菌pMT1质粒上的caf1基因设计并合成一对特异PNA探针,经生物素标记后,分别与链霉亲和素包被的磁珠和cy5纳米颗粒结合;将探针与待测鼠疫耶尔森氏菌的基因组DNA杂交后,利用荧光扫描技术进行检测。探讨了多个实验因素对测定的影响,并进行了特异性和灵敏度检测。结果:建立并优化了利用PNA探针检测鼠疫耶尔森氏菌的方法,得到较好的线性关系;检测的灵敏度为0.9μg/mL(待测DNA)。结论:PNA探针与靶基因的结合不易受杂交液离子强度的影响,结合后具有较高的稳定性。本研究建立的分析方法能够灵敏、特异、稳定地对鼠疫耶尔森氏菌进行定量检测,为鼠疫的监控、诊断提供了有力手段。

关键词：鼠疫耶尔森氏菌肽核酸磁珠荧光扫描技术

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低出血倾向、低免疫原性葡激酶mSAK(K130T,K135R)的表达、纯化与活性测定

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中国生物化学与分子生物学报 2005年第5期21卷 610-615页

作者：郑玉玲宁保安马茹高志贤姜永强军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 军事医学科学院卫生学环境医学研究所天津300050

为了有效降低葡激酶应用的副作用,构建低出血倾向、低免疫原性葡激酶突变体,高效表达纯化后进行活性鉴定,以野生型重组葡激酶基因为模板,PCR法引入突变位点(K130T,K135R),并将该片段克隆测序鉴定后,克隆至表达载体pBV220,构建低免疫原... 详细信息

为了有效降低葡激酶应用的副作用,构建低出血倾向、低免疫原性葡激酶突变体,高效表达纯化后进行活性鉴定,以野生型重组葡激酶基因为模板,PCR法引入突变位点(K130T,K135R),并将该片段克隆测序鉴定后,克隆至表达载体pBV220,构建低免疫原性葡激酶突变体.表达后的蛋白用Q-Sepharose FF柱与Sephacryl S-200进行纯化,纤维蛋白溶圈法进行活性测定,体外抗体中和试验与豚鼠免疫试验测定突变体蛋白的免疫原性,同时进行动物体内出血倾向观察.测序结果表明,相应位点获得突变,无非特异性突变,将突变后的片段连接pBV220导入大肠杆菌热激诱导获得了高效表达,表达产物占菌体总蛋白的40%～50%.产物主要以可溶性形式存在,经两步纯化后的蛋白的纯度可达98%以上.活性测定试验表明,该突变体的活性较野生型葡激酶稍低,体外中和抗体试验和豚鼠免疫试验证明免疫原性大为下降,豚鼠的皮肤出血以及肺部病理切片均显示该突变体蛋白引起的出血倾向明显降低.

关键词：葡激酶免疫原性低出血倾向

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单链二硫键稳定抗体靶向超抗原SEA(D227A)分子的表达、纯化及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第3期21卷 269-272页

作者：郝淮杰郑玉玲余多慰马茹姜永强南京师范大学生命科学学院分子生物学实验室江苏南京210097 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:提高抗肝癌靶向超抗原SEA(D227A)的产量和稳定性,构建单链二硫键稳定抗体靶向超抗原分子scdsFv-SEA(D227A)。方法:构建scdsFv SEA(D227A)表达质粒,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21plusS表达。包涵体经洗涤和复性后,用QSepharoseHP和Hip... 详细信息

目的:提高抗肝癌靶向超抗原SEA(D227A)的产量和稳定性,构建单链二硫键稳定抗体靶向超抗原分子scdsFv-SEA(D227A)。方法:构建scdsFv SEA(D227A)表达质粒,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21plusS表达。包涵体经洗涤和复性后,用QSepharoseHP和Hiprep26/60SephacrylS-200HR纯化。纯化蛋白经AMS烷化处理并结合PAGE电泳来检测二硫键形成情况,并通过ELISA和MTS分别检测重组蛋白与肝癌细胞的结合活性、稳定性和细胞杀伤活性。结果:重组蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。通过复性及QSepharoseHP离子交换柱和Hiprep26/60SephacrylS-200H凝胶过滤两步纯化后,获得目的蛋白,每升诱导菌液的产量高达60mg。活性测定结果表明,相比与单链抗体靶向超抗原和二硫键抗体靶向超抗原SEA,二硫键抗体靶向超抗原在不影响结合活性和杀伤效果的情况下,稳定性有了较大提高。结论:建立了一种新的稳定的免疫毒素和提高其产量的方法,为hscFv25抗体靶向超抗原的临床应用奠定了基础,同时为其他低稳定性或低产量抗体的改造提供了借鉴的方法。

关键词：单链二硫键稳定抗体产量超抗原 SEA(D227A) 稳定性

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用噬菌体表面展示技术筛选与肝癌细胞系结合的抗体模拟肽

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第4期21卷 452-455页

作者：李韩平郑玉玲周宏熊正英姜永强军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071 军事医学科学院生物工程研究所北京100071 陕西师范大学运动生物学研究所陕西西安710062

目的:从噬菌体展示肽库中,筛选可与肝癌细胞特异性结合的抗体模拟肽。方法:通过生物淘选使噬菌体富集。利用ELISA法,鉴定噬菌体单克隆原种的亲和性,并进行统计学分析。通过竞争ELISA,分析筛选所得抗体模拟肽的结合位点,并进一步分析抗... 详细信息

目的:从噬菌体展示肽库中,筛选可与肝癌细胞特异性结合的抗体模拟肽。方法:通过生物淘选使噬菌体富集。利用ELISA法,鉴定噬菌体单克隆原种的亲和性,并进行统计学分析。通过竞争ELISA,分析筛选所得抗体模拟肽的结合位点,并进一步分析抗体模拟肽的序列组成。结果:随着淘选次数的增加,出现噬菌体的富集。ELISA的结果显示,相对于正常肝细胞,筛选所得环状7肽对肝癌细胞系SMMC7721和BEL7402均有良好的结合活性(P<0.05),且与SMMC7721细胞的结合活性明显优于与BEL7402细胞的亲和性(P<0.05)。在α=0.01的水平上,7肽单克隆噬菌体原种可明显与scFv竞争结合SMMC7721细胞(0.005所挑选的7肽阳性克隆的测序结果均相同。结论:通过淘选获得的抗体模拟肽(CLPRQSSFC)是有效的,为导向治疗提供了新的实验依据。

关键词：噬菌体肽库淘选肝细胞癌

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肠上皮内淋巴细胞对肠上皮屏障功能的影响

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军事医学科学院院刊 2005年第4期29卷 301-304页

作者：徐鹏辉高杰英陈德蕙陈洁曾丽玲何乐思陈小章军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 香港中文大学上皮细胞生物学研究中心

目的:研究在痢疾志贺菌F2a-12脂多糖刺激下,大鼠小肠上皮内淋巴细胞(IEL)对人结肠癌上皮细胞系Caco-2屏障功能的影响。方法:新鲜分离的大鼠小肠IEL与Caco-2共培养,并用F2a-12LPS刺激共培养细胞。通过检测短路电流、紧密连接相关蛋白表... 详细信息

目的:研究在痢疾志贺菌F2a-12脂多糖刺激下,大鼠小肠上皮内淋巴细胞(IEL)对人结肠癌上皮细胞系Caco-2屏障功能的影响。方法:新鲜分离的大鼠小肠IEL与Caco-2共培养,并用F2a-12LPS刺激共培养细胞。通过检测短路电流、紧密连接相关蛋白表达及透射电镜来反映上皮屏障功能的变化。结果:共培养后跨上皮电阻增加,但在LPS刺激后显著降低;紧密连接相关蛋白ZO-2mRNA表达在共培养后增加,LPS刺激后共培养细胞ZO-1mRNA表达显著下降;透射电镜下可见共培养后细胞间紧密连接显著增强,但在LPS刺激后共培养细胞间的连接几乎消失。首次在电镜下发现上皮细胞与IEL间有连接样结构的存在,为其相互作用提供了形态学的证据。结论:IEL对上皮屏障功能具双向调节作用,在生理状态下增强,但在感染信号存在时降低。

关键词：肠黏膜上皮细胞上皮内淋巴细胞共培养跨上皮电阻紧密连接屏障功能

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SARS-CoV S蛋白受体结合区的重组表达及免疫原性分析

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中国病毒学 2005年第5期20卷 472-475页

作者：马翠卿周育森王弋嘉郭彦管洁魏林何玉先军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 河北医科大学免疫学教研室河北石家庄050017

为了表达SARS-CoV的S蛋白的受体结合区并对其免疫原性进行分析,用PCR方法扩增S蛋白的受体结合区基因片段,克隆至原核表达质粒pET-32a+并在大肠杆菌中表达,应用Western-blot鉴定表达的目的蛋白,而后以该蛋白作为诊断抗原包被酶联板来检... 详细信息

为了表达SARS-CoV的S蛋白的受体结合区并对其免疫原性进行分析,用PCR方法扩增S蛋白的受体结合区基因片段,克隆至原核表达质粒pET-32a+并在大肠杆菌中表达,应用Western-blot鉴定表达的目的蛋白,而后以该蛋白作为诊断抗原包被酶联板来检测20份SARS病人血清和28份健康人血清,结果原核表达的S蛋白能够和所用的SARS病人血清反应。这提示表达的S重组蛋白具有良好的抗原性。将变性纯化的重组蛋白和复性蛋白分别皮下免疫小鼠,第三次免疫一周后收集抗血清,用ELISA测定抗体和同时测定中和抗体活性。用变性的抗原免疫的小鼠血清均无中和活性;而用复性的蛋白免疫的小鼠产生了中和抗体。实验表明,S蛋白受体结合区无线性中和表位,中和抗体的产生是由构象表位诱导的。提示该蛋白有可能应用于亚单位疫苗的研究。

关键词：严重急性呼吸窘迫综合征病毒(SARS-CoV) 刺突蛋白(S蛋白) 受体结合区

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