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全国人畜共患病学术研讨会

作者：左庭婷何君檀华端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

目的:利用胶体金免疫层析技术研制的各种快速检测试剂已广泛应用于病原微生物的检测和血清学诊断中。近年来,由于炭疽杆菌出现在恐怖袭击中而越来越受到人们的关注,为适应生物危害突发现场快速准确的侦检要求,我们研制了炭疽杆菌胶体金... 详细信息

目的:利用胶体金免疫层析技术研制的各种快速检测试剂已广泛应用于病原微生物的检测和血清学诊断中。近年来,由于炭疽杆菌出现在恐怖袭击中而越来越受到人们的关注,为适应生物危害突发现场快速准确的侦检要求,我们研制了炭疽杆菌胶体金(免疫层析)法快速检测试剂。方法:柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,直径约25nm。用炭疽杆菌单克隆抗体标记金颗粒,经浸膜干燥后制备成胶体金探针垫。以硝酸纤维素(NC)膜为层析固相载体,包被炭疽杆菌特异性抗体。将胶体金垫、致敏的NC膜与样品垫、吸水垫及被板组装切割后制成免疫层析检测试纸条。结果:将不同株炭疽杆菌进行梯度稀释,用我们研制的炭疽杆菌胶体金法快速检测试剂检测,敏感性均可达1×10～6cfu/ml;对芽孢杆菌属其它细菌以及常见细菌进行检测,显示1×10～8cfu/ml比浊浓度的枯草杆菌、腊样杆菌、苏云金杆菌、矮小杆菌和地衣芽孢杆菌以及大肠杆菌、绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌的检测结果均为阴性。结论:用生物战剂进行恐怖袭击的可能性日益增长,炭疽杆菌的快速检测具有重要的现实意义。炭疽杆菌胶体金法快速检测试剂能检测不同来源和株型的菌体,敏感性与国外报道水平相当。同时,该试剂特异性强,不与芽孢杆菌属其它细菌以及常见细菌发生交叉发应。检测试剂操作简便,不需要专业设备和人员培训,非专业人员按照说明书即可操作,结果快速易辨,2～15分钟肉眼观察可见。因此,炭疽杆菌胶体金法快速检测试剂适合在生物危害突发事件中使用,以进行现场快速准确的侦检。

关键词：炭疽杆菌胶体金免疫层析

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肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的克隆、表达、纯化及生物学活性鉴定

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西北国防医学杂志 2006年第2期27卷 96-98页

作者：樊红艳李建民于婷杨秀旭付玲陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所分子生物学研究室生物安全病原微生物国家重点实验室北京100071

目的:在大肠杆菌中表达人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的可溶性片段(solub le TNF-related apoptosis-induc ing L ig-and,sTRAIL),并鉴定其生物学活性。方法:以人胎盘cDNA为模板,根据GenBank中序列NM_003810设计引物,以PCR方法扩增sTR... 详细信息

目的:在大肠杆菌中表达人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的可溶性片段(solub le TNF-related apoptosis-induc ing L ig-and,sTRAIL),并鉴定其生物学活性。方法:以人胎盘cDNA为模板,根据GenBank中序列NM_003810设计引物,以PCR方法扩增sTRAIL基因,将其克隆入pET-32 a,转化BL21(DE3),IPTG诱导后,收集菌体,超声破碎,离心取上清纯化,鉴定其生物学活性。结果:表达载体经DNA测序鉴定,氨基酸序列与预期一致。宿主菌高效表达目的蛋白,经SDS-PAGE、氨基酸测序鉴定均正确。可溶部分占表达总量的20%。经过两步纯化,sTRAIL纯度达到95%,表达量可达20 mg/L培养基。纯化产物在体外能够明显诱导L929、NC I157、BEL7402、DU145等细胞凋亡,Hela细胞不敏感。对于L929,其半数致死量为0.10μg/m l。结论:本研究在原核表达系统中表达了sTRAIL,获得高纯度sTRAIL蛋白,为其进一步研究提供了良好基础。

关键词：肿瘤坏死因子 TRAIL 原核表达纯化凋亡

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鼠疫耶尔森氏菌比较与进化基因组学研究

鼠疫耶尔森氏菌比较与进化基因组学研究

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2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会

作者：宋亚军军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

鼠疫是曾经严重危害人类的烈性传染病之一,目前学术界公认有三次世界范围鼠疫大流行:公元6世纪的“查士丁尼瘟疫”,公元14-16世纪的“黑死病”以及开始于19世纪末并持续至今的现代鼠疫。仅此三次大流行就造成了至少一亿六千万人死于非命... 详细信息

鼠疫是曾经严重危害人类的烈性传染病之一,目前学术界公认有三次世界范围鼠疫大流行:公元6世纪的“查士丁尼瘟疫”,公元14-16世纪的“黑死病”以及开始于19世纪末并持续至今的现代鼠疫。仅此三次大流行就造成了至少一亿六千万人死于非命,远远超过历史上所有战争死亡人数总和。随着现代医疗水平的提高和公共卫生条件的改善,鼠疫发病率大大下降;但是鼠疫近年来有死灰复燃的趋势,世界卫生组织已经将鼠疫列为重新抬头的传染病

关键词：鼠疫菌株鼠疫耶尔森氏菌疫源地 DFR 鼠疫活疫苗基因组型假结核菌基因组分型

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我国部分地区新发蜱媒传染病复合感染状况调查

我国部分地区新发蜱媒传染病复合感染状况调查

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全国人畜共患病学术研讨会

作者：孙毅许荣满军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

为了了解我国新发蜱媒传染病的复合感染情况,以莱姆病、人埃立克体病和人巴贝西原虫病为代表,采用分子流行病学调查方法 ,对我国部分地区的蜱类和啮齿动物进行了采集和分析。结果发现,我国的蜱类和啮齿动物均发现了这些病原体的复合感... 详细信息

为了了解我国新发蜱媒传染病的复合感染情况,以莱姆病、人埃立克体病和人巴贝西原虫病为代表,采用分子流行病学调查方法 ,对我国部分地区的蜱类和啮齿动物进行了采集和分析。结果发现,我国的蜱类和啮齿动物均发现了这些病原体的复合感染现象,其中蜱类以全沟硬蜱和中华硬蜱为主,啮齿动物以鼠平属、、姬鼠属种类为主。蜱媒传染病的这种复合感染情况应引起公共卫生部门的高度重视。

关键词：新发蜱媒传染病复合感染蜱啮齿动物

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布鲁氏菌病新型疫苗的初步研究

布鲁氏菌病新型疫苗的初步研究

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全国人畜共患病学术研讨会

作者：王希良罗德炎曾政周丽丽张松乐军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

目的研制布鲁氏菌病新型疫苗,为安全、有效的防治布鲁氏菌病提供保证。方法采用基因重组技术扩增牛、羊、猪布氏菌保护性抗原BCSP、BLS、OMP、P和L/L基因片段,及BCSP-L/L、BLS-L/L、OMP-L/L和BCSP-L/L融合基因片段,克隆于原核表达载体pQ... 详细信息

目的研制布鲁氏菌病新型疫苗,为安全、有效的防治布鲁氏菌病提供保证。方法采用基因重组技术扩增牛、羊、猪布氏菌保护性抗原BCSP、BLS、OMP、P和L/L基因片段,及BCSP-L/L、BLS-L/L、OMP-L/L和BCSP-L/L融合基因片段,克隆于原核表达载体pQE上,在IPTG作用下诱导重组蛋白的表达,用层析拄纯化BCSP、BLS、OMP、P和L/L及BCSP-L7/L、BLS-L/L、OMP-L/LL和BCSP-L/L重组蛋白抗原;扩增布氏菌保护性抗原BCSP、BLS、OMP、P和L/L基因片段,及BCSP-L/L、BLS-L/L、OMP-L/L和BCSP-L/L融合基因片段,克隆于真核表达载体pcDNA上,转染Hela细胞,在G的作用于下诱导外原蛋白的表达,经狭缝杂交证实BCSP、BLS、OMP、P和L/L基因片段,及BCSP-L/L、BLS-L/L、OMP-L/L和BCSP-L/L蛋白抗原的表达;制备布氏菌病BCSP/pcDN、BLS/pcDNA、OMP/pcDNA、P/pcDNA和/pcDNAL/L基因片段,及BCSP-L/L/pcDNA、BLS-L/L/pcDNA、OMP-L/L/pcDNA双价基因疫苗,及BCSP、BLS、OMP、P和L/L及BCSP-L/L、BLS-L/L、OMP-LL和BCSP-L/L单价、双价基因重组蛋白疫苗,分别免疫Balb/c鼠三次,及重组蛋白疫苗、基因疫苗联合免疫,再分别用牛、羊和猪布鲁氏菌毒株攻击观察免疫保护效果。结果构建的布鲁氏菌重要保护性抗原基因重组质粒测序结果与设计的序列完全一致;获得了在原核细胞和真核细胞中表达的BCSP、BLS、OMP、P和L/L及BCSP-L/L、BLS-L/L、OMP-L/L和BCSP-L/L重组蛋白,及具有免疫学活性的BCSP、BLS、OMP、P和L/L及BCSP-L/、BLS-L/、OMP-L/和BCSP-L/纯化重组蛋白抗原;加入佐剂制备了布鲁氏菌病新型疫苗（重组蛋白疫苗和基因疫苗）;布氏菌病新型疫苗分别免疫Balb/c鼠,均产生了有效的特异性的免疫应答效果,其中双价疫苗效果好于单价、基因疫苗效果好于重组蛋白疫苗、BLS-L/疫苗效果好于OMP-L/、BCSP-L/、BCSP-L/疫苗;用2×10～8CFU布鲁氏菌野生株攻毒,不同类型的布鲁氏菌病新型疫苗都有一定的保护效果,其中,BLS-L/基因疫苗免疫保护效果好于OMP-L/、BCSP-L/、BC-SP-L/基因疫苗,而蛋白疫苗的保护效果不完全,基因疫苗和重组蛋白疫苗联合免疫有增强布鲁氏菌病新型疫苗的免疫保护效果。结论研制筛选获得的布氏菌病新型疫苗初步证实具有良好细胞免疫和体液免疫的免疫应答及免疫保护效果的效果,深入研究正在进行之中,有望为布氏菌病的有效防治提供保证。

关键词：布鲁氏菌布鲁氏菌病布氏菌病新型疫苗

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基于空间信息技术的北京市肾综合征出血热宿主动物感染与环境因素关系研究

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中国病原生物学杂志 2006年第1期1卷 3-7,F0003页

作者：赵文娟方立群冯丹江佳富闫磊韩晓娜杨红左曙青吴晓明曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国科学院遥感应用研究所

目的探讨北京市肾综合征出血热(HFRS)宿主动物的感染情况与环境因素之间的关系。方法选择北京市9个区(县)作为研究试验区,设立14个调查点,对HFRS动物宿主感染情况进行调查,应用全球定位系统对调查点进行定位,在ArcGIS软件支持下,建立调... 详细信息

目的探讨北京市肾综合征出血热(HFRS)宿主动物的感染情况与环境因素之间的关系。方法选择北京市9个区(县)作为研究试验区,设立14个调查点,对HFRS动物宿主感染情况进行调查,应用全球定位系统对调查点进行定位,在ArcGIS软件支持下,建立调查点矢量图层,并与北京市1∶100 000地形图、北京市Landsat-7 TM卫星遥感影像图及北京市高程图进行叠加,分别提取调查点周围2 km缓冲区内的平均海拔,校正植被指数及土地利用信息,导出后在SPSS 13.0中分析宿主感染情况与环境因素的联系。结果不同地区间HFRS动物宿主密度和带毒率的差异具有统计学意义;宿主带毒率和带毒指数与园地、水浇地面积成正相关关系;宿主带毒情况和校正植被指数之间无相关性;褐家鼠带毒率与海拔、水浇地面积之间呈正相关关系。结论北京地区肾综合征出血热动物感染情况与土地利用等地理环境因素有关,提示应根据不同地理环境特点采取有针对性的防控措施。

关键词：肾综合征出血热地理信息系统遥感全球定位系统宿主动物汉坦病毒

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吉林省林区莱姆病螺旋体感染的调查研究

吉林省林区莱姆病螺旋体感染的调查研究

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会第六届代表大会

作者：黄海楠丁壮曹务春何静吴晓明蒋宝贵高燕赵秋敏王玉福吉林大学畜牧兽医学院动物重要病原与疫病研究室吉林大学畜牧兽医学院动物重要病原与疫病研究室军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室吉林省畜牧兽医总站

目的了解吉林珲春林区的蜱、野鼠及家畜感染莱姆病的情况．方法对蜱和野鼠进行莱姆病螺旋体的PCR扩增,阳性蜱标本RFLP分型,应用间接免疫荧光法检测家畜血清中的IgG抗体．结果PCR检测全沟硬蜱和森林革埤的带菌率为36．0％和30．9%;在五... 详细信息

目的了解吉林珲春林区的蜱、野鼠及家畜感染莱姆病的情况．方法对蜱和野鼠进行莱姆病螺旋体的PCR扩增,阳性蜱标本RFLP分型,应用间接免疫荧光法检测家畜血清中的IgG抗体．结果PCR检测全沟硬蜱和森林革埤的带菌率为36．0％和30．9%;在五种鼠中检测到莱姆病螺旋体的特异性片段,带菌率分别为14．0%、8．3％、13．0%、25．0％和33．3％．阳性蜱标本RFLP分型结果属于***和***型:牛、羊血清学检测阳性率为27．5％和31．5％．结论宿主动物、媒介和家畜中都检测到伯氏疏螺旋体的感染,三个环节证明吉林珲春林区存在莱姆病的自然疫源地．

关键词：伯氏疏螺旋体蜱野鼠家畜

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我国大林姬鼠(Apodemus peninsulae)中Amur类汉坦病毒的发现

我国大林姬鼠(Apodemus peninsulae)中Amur类汉坦病毒的发现

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第九届海内外生命科学论坛

作者：江佳富张文义姚昆吴晓明詹琳左曙青褚宸一张泮河曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的：确定我国大林姬鼠中是否存在Amur类汉坦病毒.方法：针对Amur类汉坦病毒M和S基因分别设计引物,从我国毗邻俄罗斯远东的吉林边境地区捕获的大林姬鼠肺组织标本中,用RT-PCR法扩增M和S基因部分片段,目的片段直接进行核苷酸序列测定,... 详细信息

目的：确定我国大林姬鼠中是否存在Amur类汉坦病毒.方法：针对Amur类汉坦病毒M和S基因分别设计引物,从我国毗邻俄罗斯远东的吉林边境地区捕获的大林姬鼠肺组织标本中,用RT-PCR法扩增M和S基因部分片段,目的片段直接进行核苷酸序列测定,获得序列用BLAST,ClustalX 1.83和MEGA3.1软件进行同源性比对和系统发育分析.结果：从我国东北大林姬鼠肺标本JilinAP06中分别扩增出长度383nt(M基因)和350nt(S基因)大小的目的cDNA片段,JilinAP06 M片段序列两两比对结果显示:其与汉滩病毒原型株76-118同源性仅为83.7％,与最近从吉林地区大林姬鼠中分离获到的Cjilin93株同源性为80.8％;而与我国病人来源B78株同源性最高,为97.2％,其次为我国人源株H5,Liu和H8205,同源性为:96.3％-95.2％;另外与俄罗斯大林姬鼠源的Amur类病毒AP63和AP1168同源性约为92％.系统发育分析结果显示JilinAP06与Amur类汉坦病毒构成一个相对独立的分支.S基因片段的同源性比较和系统发育分析结果与基于M基因片段得到的结果一致.结论：我国大林姬鼠中存在Amur类病毒,并和俄罗斯远东地区Amur类病毒接近,很可能为我国Amur类病毒的自然宿主和人群Amur类病毒感染的重要来源.

关键词：汉坦病毒 Amur virus 大林姬鼠

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A型肉毒神经毒素(BoNT/A)基因序列分析及其B细胞表位预测

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生物信息学 2006年第2期4卷 53-56,61页

作者：贾杨阮承迈王景林军事医学科学院微生物流行病学研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071 军事医学科学院药物毒物研究所新药设计中心北京100850

比较GenBank中4个不同毒株的A型肉毒神经毒素（BoNT／A）的基因组序列，发现其基因序列的一致性高迭92．2％-99．9％。基于保守性高的BoNT／A氨基酸序列，根据BioSun和LaserGene软件包中的表住分析相关参数，辅以对BoNT／A蛋白的二级结... 详细信息

比较GenBank中4个不同毒株的A型肉毒神经毒素（BoNT／A）的基因组序列，发现其基因序列的一致性高迭92．2％-99．9％。基于保守性高的BoNT／A氨基酸序列，根据BioSun和LaserGene软件包中的表住分析相关参数，辅以对BoNT／A蛋白的二级结构的分析，综合预测BoNT／A的B细胞表位。结果表明，BoNT／A轻链的142-150、284-292区段，轻链的284-292，重链的440-450、465-480、538-549、699-710、751-760、1087-1095、1224-1231、1263-1270区段是B细胞表位优势区的可能性较大。多参数方案井结合不同软件综合预测BoNT／A蛋白的B细胞表位，为进一步实验鉴定BoNT／A的B细胞表位及其多表位疫苗设计和研究奠定了基础。

关键词：肉毒梭菌肉毒神经毒素 B细胞表位

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衣壳蛋白缺失突变登革病毒的制备与鉴定

衣壳蛋白缺失突变登革病毒的制备与鉴定

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第九届海内外生命科学论坛

作者：朱武洋陈水平秦成峰于曼姜涛邓永强于学东秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的：制备登革2型病毒中国分离株(DEN2-43)的衣壳蛋白缺失突变病毒.方法：在DEN2-43株病毒感染性全长cDNA克隆的基础之上,利用融合PCR技术构建衣壳蛋白基因缺失的全长cDNA,将其线性化并体外转录成RNA后,经电穿孔法导入宿主细胞获得衣... 详细信息

目的：制备登革2型病毒中国分离株(DEN2-43)的衣壳蛋白缺失突变病毒.方法：在DEN2-43株病毒感染性全长cDNA克隆的基础之上,利用融合PCR技术构建衣壳蛋白基因缺失的全长cDNA,将其线性化并体外转录成RNA后,经电穿孔法导入宿主细胞获得衣壳蛋白缺失突变病毒.结果：序列比对表明,所获得的恢复病毒带有与预期一致的缺失突变.结论：衣壳蛋白缺失突变病毒的制备,为进一步研究衣壳蛋白基因突变对登革病毒生物学特性的影响奠定了基础.

关键词：登革病毒感染性全长cDNA克隆缺失突变病毒

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