检索结果-内蒙古大学图书馆

解放军医学杂志 2009年第6期34卷 695-700,710页

作者：夏玉坤刘伯华杨保安李靖张永国车小燕祝庆余军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 南方医科大学珠江医院临床基础研究所

目的确定人禽流感H5N1病毒HA1蛋白的单克隆抗体(McAb)抗识别表位及主要免疫功能区。方法将16条人禽流感H5N1病毒HA1基因重叠片段克隆入真核表达载体pDisplay,构建表达HA1蛋白的重叠肽段重组质粒,转染HeLa细胞后制备细胞抗原片。利用灭活... 详细信息

目的确定人禽流感H5N1病毒HA1蛋白的单克隆抗体(McAb)抗识别表位及主要免疫功能区。方法将16条人禽流感H5N1病毒HA1基因重叠片段克隆入真核表达载体pDisplay,构建表达HA1蛋白的重叠肽段重组质粒,转染HeLa细胞后制备细胞抗原片。利用灭活的H5N1病毒免疫BALB/c小鼠,制备病毒特异单克隆抗体(单抗)和多克隆抗体(多抗),采用间接免疫荧光法分析单抗、多抗与HA1肽段的反应性,确定HA1蛋白的单抗识别表位及主要免疫功能区。结果成功克隆、表达了16条不同长度的H5N1肽段,并制备、获得30株分泌抗H5N1型禽流感病毒McAb的杂交瘤细胞株,其中18株为抗HA的单抗,18株中有6株单抗具有中和病毒活性。利用表达的H5N1肽段对单抗识别表位进行分析,初步确定3B5、3D1、3B2、M6、M3等18株McAb识别表位区域分别位于氨基酸残基aa133-143、aa155-165、aa166-196、aa166-176、aa34-66及aa296-328之间,其中3B5、3D1、3B2、M6等McAb识别表位为序列依赖型表位,M3和M7等具有中和活性的McAb识别表位为构象性中和表位。结论利用制备的H5N1病毒特异性McAb和表达的病毒HA1蛋白重叠肽抗原,初步确定了18株抗HAMcAb的识别表位和HA1蛋白的主要免疫功能区,为进一步研究开发新型疫苗提供了重要理论依据。

关键词：流感病毒A型,H5N1亚型血凝素糖蛋白类,流感病毒表位

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细菌非编码小RNA研究进展

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微生物学通报 2009年第7期36卷 1025-1030页

作者：张炜童贻刚冯福民军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 华北煤炭医学院预防医学系河北唐山063000

细菌非编码小RNA(small non-coding RNA,sRNA)是一类长度在50~500个核苷酸,不编码蛋白质的RNA。迄今,在各种细菌中共发现超过150多种sRNA。它们通过碱基配对识别靶标mRNA,在转录后水平调节基因的表达,是细菌代谢、毒力和适应环境压力的... 详细信息

细菌非编码小RNA(small non-coding RNA,sRNA)是一类长度在50~500个核苷酸,不编码蛋白质的RNA。迄今,在各种细菌中共发现超过150多种sRNA。它们通过碱基配对识别靶标mRNA,在转录后水平调节基因的表达,是细菌代谢、毒力和适应环境压力的重要调节因子。细菌sRNA的研究技术主要有基于生物信息学的计算机预测法和基于实验室的检测分析方法。这些方法所得到的sRNA都需要进行实验室确认,然后再进一步通过各种实验手段研究其功能。

关键词：非编码小RNA 细菌基因组

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基因芯片技术检测重要人兽共患病病毒方法的建立

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中国生物化学与分子生物学报 2009年第11期25卷 1058-1063页

作者：李永强康晓平孙庆歌刘洪常国辉祝庆余杨银辉军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

为了建立能对25种重要人兽共患病病毒进行筛查及鉴定用的基因芯片技术,本实验首先设计针对每种病毒的寡核苷酸探针并进行探针特异性的生物信息学验证.然后探索病毒核酸随机扩增方法,优化杂交动力学条件,建立本芯片标准的数据处理分析方... 详细信息

为了建立能对25种重要人兽共患病病毒进行筛查及鉴定用的基因芯片技术,本实验首先设计针对每种病毒的寡核苷酸探针并进行探针特异性的生物信息学验证.然后探索病毒核酸随机扩增方法,优化杂交动力学条件,建立本芯片标准的数据处理分析方法.最后用细胞培养的病毒和模拟临床标本验证芯片的敏感性与特异性.结果表明,锚定随机PCR扩增法适合于本芯片病毒核酸的扩增;芯片杂交前用0.25%NaBH4进行封闭,最优杂交条件为51℃,2h及50%甲酰胺浓度;芯片具有较好的敏感性及检测特异性.初步结果表明,本实验所建立的基因芯片技术可应用于对25种重要人兽共患病病毒进行筛查及鉴定.

关键词：基因芯片技术人兽共患病病毒筛查及鉴定特异性随机PCR

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接受抗病毒治疗的AIDS患者HIV-1非核苷类逆转录酶抑制剂类耐药基因突变的选择动力学研究

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中华检验医学杂志 2009年第4期32卷 390-396页

作者：李珏焦丽燕李韩平李林刘永健庄道民鲍作义刘思扬李宏王哲李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 河南省疾病预防控制中心

目的研究接受抗病毒治疗的AIDS患者非核苷类逆转录酶抑制剂（non—nucleoside reverse transcriptase inhibitor，NNRTI）类耐药基因突变分子进化特征。方法从我国中部农村抗病毒治疗AIDS患者研究队列中选择4例服药依从性较好，治疗初... 详细信息

目的研究接受抗病毒治疗的AIDS患者非核苷类逆转录酶抑制剂（non—nucleoside reverse transcriptase inhibitor，NNRTI）类耐药基因突变分子进化特征。方法从我国中部农村抗病毒治疗AIDS患者研究队列中选择4例服药依从性较好，治疗初期为野生型毒株，在治疗过程中逐渐产生NNRTI类耐药基因突变的患者为研究对象，对每位患者的4～5次随访血浆样本的逆转录酶（reverse transcriptase，RT）基因进行克隆测序分析，观察每个克隆的基因型耐药性特征。结果共检测了855个克隆，得到4例患者历次克隆序列中带各种NNRTI类耐药基因突变的构成图谱：4例患者表现出不同的HIV-1 NNRTI类耐药突变途径，发现4条主要NNRTI类耐药基因突变演变途径：（1）G190A，常伴随F227L突变出现，在长期的治疗过程中还有继续累加P236V突变的趋势；（2）Y188C，多单独出现，有时与P236V等同时发生；（3）Y181C，多与V179D或K103N同时出现，不同的患者选择趋向不同；（4）K103N，多与Y181C或M230L突变联合出现。结论总结出4例患者HIV-1 NNRTI类耐药基因突变的选择动力学特征。4例患者表现出不同的NNRTI类耐药基因突变演变途径，最先筛选出来的耐药突变往往能够成为最后的优势种.

关键词：获得性免疫缺陷综合征逆转录酶抑制剂抗药性突变进化,分子

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呼吸道合胞病毒融合蛋白F在重组杆状病毒表达系统中的表达及抗原性研究

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免疫学杂志 2009年第3期25卷 267-270,274页

作者：王善辉余兵兵王希良李培锋内蒙古农业大学动物医学与科学学院军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

目的利用杆状病毒表达系统对RSVA型Long株F基因进行表达研究,为RSV重组亚单位疫苗的研制奠定基础。方法用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增F基因,将其克隆到pFastBacHT A载体中,阳性重组质粒转化DH10Bac感受态细胞,PCR鉴定获得阳性克隆,... 详细信息

目的利用杆状病毒表达系统对RSVA型Long株F基因进行表达研究,为RSV重组亚单位疫苗的研制奠定基础。方法用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增F基因,将其克隆到pFastBacHT A载体中,阳性重组质粒转化DH10Bac感受态细胞,PCR鉴定获得阳性克隆,碱裂解法提取阳性质粒,转染Sf9昆虫细胞,获得含F基因的重组杆状病毒质粒,重组病毒感染Sf9细胞72h后,进行SDS-PAGE电泳、间接免疫荧光和Western-blot试验。免疫Balb/c小鼠,用ELISA测定抗体滴度,MTT试验检测T淋巴细胞增殖。结果目的蛋白F在昆虫细胞中有特异性表达,能被F蛋白单克隆抗体所识别,该蛋白诱导了高滴度的RSV特异性抗体。结论成功克隆RSVF基因,并在Sf9昆虫细胞中获得表达,该蛋白具有良好的免疫原性,为进一步研究开发RSV重组亚单位疫苗奠定了基础。

关键词：呼吸道合胞病毒重组杆状病毒融合蛋白F

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在入境国际航行船舶上采获输入性阿蠓及一新种的记述(双翅目：蠓科)

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四川动物 2009年第2期28卷 161-163页

作者：聂维忠李俊成李德昕虞以新汪仁杰刘恩东秦皇岛出入境检验检疫局河北秦皇岛066002 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

2003年3月和12月,秦皇岛出入境检验检疫局检疫人员分别在由菲律宾和印度驶抵中国秦皇岛港锚地的入境国际航行船舶上采获输入性阿蠓,经分类鉴定共有3种,分别是棘刺阿蠓Alluaudomyia spinosipesTokunaga、拟斑茎阿蠓Alluaudomyia psedomac... 详细信息

2003年3月和12月,秦皇岛出入境检验检疫局检疫人员分别在由菲律宾和印度驶抵中国秦皇岛港锚地的入境国际航行船舶上采获输入性阿蠓,经分类鉴定共有3种,分别是棘刺阿蠓Alluaudomyia spinosipesTokunaga、拟斑茎阿蠓Alluaudomyia psedomaculipennis(Carter,Ingram and Macfie)和新种船舶阿蠓Alluaudomyia fregataYu,Li andNie ***.。对船舶阿蠓新种形态学特征进行了描述。分析认为上述蠓类应是由入境国际航行船舶携带而来的输入性蠓种。模式标本均收藏在军事医学科学院医学昆虫标本馆。

关键词：输入性蠓阿蠓新种入境国际航行船舶

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不同佐剂与鼠疫F1-V融合重组蛋白抗原滴鼻免疫效果的研究

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免疫学杂志 2009年第2期25卷 183-186页

作者：袁源王栋邢丽王希良军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室河南省疾病预防控制中心

目的研究不同佐剂与鼠疫F1-V融合重组蛋白抗原滴鼻免疫Balb/c小鼠,观察机体产生体液免疫和局部粘膜免疫反应的效果,为发展黏膜疫苗提供理论基础。方法鼠疫F1-V融合重组蛋白抗原按比例分别与PorB(2类外膜蛋白)重组蛋白、蛋白体佐剂制备... 详细信息

目的研究不同佐剂与鼠疫F1-V融合重组蛋白抗原滴鼻免疫Balb/c小鼠,观察机体产生体液免疫和局部粘膜免疫反应的效果,为发展黏膜疫苗提供理论基础。方法鼠疫F1-V融合重组蛋白抗原按比例分别与PorB(2类外膜蛋白)重组蛋白、蛋白体佐剂制备黏膜疫苗,滴鼻免疫Balb/c小鼠3次,取尾静脉血,采用ELISA检测血清IgG及抗体亚型分类,并检测鼻咽、肺、小肠及阴道灌洗液sIgA;采用FAC检测脾淋巴细胞表型的变化。结果PorB重组蛋白佐剂疫苗组和蛋白体佐剂疫苗组较无佐剂组体液免疫抗体水平高、蛋白体佐剂疫苗组好于PorB重组蛋白佐剂疫苗组,但无显著性差异。结论PorB重组蛋白佐剂疫苗和蛋白体佐剂疫苗均能诱导较强的系统免疫和黏膜免疫应答,且PorB重组蛋白佐剂疫苗免疫效果可与蛋白体佐剂疫苗相媲美,可进一步论证是否可用PorB重组蛋白佐剂替代蛋白体佐剂,这为鼠疫粘膜疫苗的研制奠定了基础。

关键词：鼠疫F1-V抗原 PorB重组蛋白蛋白体免疫反应

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不同杀虫剂选育对家蝇抗药性水平及kdr基因频率的影响

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昆虫学报 2009年第1期52卷 59-64页

作者：冷培恩张晓龙李春晓刘洪霞范明秋周毅彬董言德赵彤言上海市疾病预防控制中心上海200336 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

采用杀虫剂（溴氰菊酯和甲基嘧啶磷）筛选及不接触药物自然衰退的方法，研究了家蝇Musca domestica氯氟氰菊酯高抗品系（Cyh—R）对杀虫剂的抗性变化，探讨蝇类抗药性治理的方法。用点滴法测定氯氟氰菊酯对不同家蝇品系的毒力，比较抗... 详细信息

采用杀虫剂（溴氰菊酯和甲基嘧啶磷）筛选及不接触药物自然衰退的方法，研究了家蝇Musca domestica氯氟氰菊酯高抗品系（Cyh—R）对杀虫剂的抗性变化，探讨蝇类抗药性治理的方法。用点滴法测定氯氟氰菊酯对不同家蝇品系的毒力，比较抗药性的变化，结合特异性等位基因PCR扩增（PASA）技术检测了不同家蝇品系的kdr基因频率，探讨kdr基因频率与抗性水平之间的关系。结果表明：甲基嘧啶磷筛选后，氯氟氰菊酯对第2～8代Cyh—R品系的LD50呈递减趋势，从F0的2．8434μg／蝇降为F8的0．4404μg／蝇，但第8—18代Cyh—R品系的LD5u呈逐代递增趋势；溴氰菊酯筛选后，氯氟氰菊酯对Cyh—R品系第2～16代的LD50呈上升趋势，从F0的2．8434μg／蝇升至F16的24．3249μg／蝇；表明了施用有机磷杀虫剂可降低其对氯氟氰菊酯的抗药性，而施用拟除虫菊酯药剂则有助于其对氯氟氰菊酯抗药性的增长；不使用任何杀虫剂也能降低其对氯氟氰菊酯的抗药性，但下降速率低于甲基嘧啶磷。PASA技术检测表明Cyh—R品系的kdr抗性基因频率为88．8％，不经过任何药剂筛选其kdr抗性基因频率下降程度最大，达到69．7％；甲基嘧啶磷筛选后其结果降为78．8％，而经溴氰菊酯筛选后kdr抗性基因频率则明显升高，达到98．9％。通过对kdr抗性基因频率和抗性水平进行相关和回归分析表明kdr抗性基因频率与家蝇对氯氟氰菊酯的LD50呈对数关系，即LD50值高的品系其kdr抗性基因频率相应的也较高。建议在家蝇防治中考虑轮换用药。

关键词：家蝇氯氟氰菊酯杀虫剂筛选抗药性治理 kdr基因频率

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大黄抑制鼠疫耶尔森菌分子机制的初步研究

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中国中药杂志 2009年第1期34卷 92-95页

作者：白群华贾燕代兴碧肖虹王应雄杨瑞馥邱景富重庆医科大学公共卫生学院重庆400016 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:探索大黄抑制鼠疫耶尔森菌作用的分子机制。方法:液体稀释法测定大黄水提物对鼠疫菌生长抑制作用的最小浓度(MIC)。应用鼠疫耶尔森菌全基因组芯片研究大黄作用鼠疫菌的表达谱。选择10倍MIC做为大黄抑制鼠疫菌作用浓度,作用时间分... 详细信息

目的:探索大黄抑制鼠疫耶尔森菌作用的分子机制。方法:液体稀释法测定大黄水提物对鼠疫菌生长抑制作用的最小浓度(MIC)。应用鼠疫耶尔森菌全基因组芯片研究大黄作用鼠疫菌的表达谱。选择10倍MIC做为大黄抑制鼠疫菌作用浓度,作用时间分别选择30,60min。提取并纯化鼠疫耶尔森菌总RNA;逆转录合成cDNA;用Cy3,Cy5染料标记后,与鼠疫耶尔森菌全基因组芯片杂交;通过芯片扫描仪获得表达谱分析结果。应用SAM软件对结果进行分析;应用RT-PCR对芯片结果进行验证。结果:得到了大黄不同作用时间鼠疫菌的表达谱。获得了大黄不同作用时间鼠疫菌的相同差异表达基因。结论:大黄抑制鼠疫菌的主要分子机制在于影响细菌核糖体蛋白质合成相关基因与细胞膜相关基因的表达。

关键词：鼠疫耶尔森菌大黄抗菌药基因芯片分子机制

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胶体金免疫层析技术快速定量检测相思子毒素

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军事医学科学院院刊 2009年第6期33卷 546-549页

作者：聂聪王静孙肖红高姗于源华康琳王景林军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国检验检疫科学研究院卫生检疫研究所北京100123

目的:建立胶体金免疫层析技术快速定量检测相思子毒素。方法:利用胶体金标记和双抗体夹心免疫层析技术,建立相思子毒素的快速检测方法,评价其特异性和敏感性,并拟合检测曲线进行定量检测。在面粉、饼干、奶粉、苹果汁、牛奶、果冻等食... 详细信息

目的:建立胶体金免疫层析技术快速定量检测相思子毒素。方法:利用胶体金标记和双抗体夹心免疫层析技术,建立相思子毒素的快速检测方法,评价其特异性和敏感性,并拟合检测曲线进行定量检测。在面粉、饼干、奶粉、苹果汁、牛奶、果冻等食品样品中添加相思子毒素模拟污染样品,评价该方法对固体、半固体、液体等食品样品的检测能力。结果与结论:该法可在15min内完成定性和半定量检测,灵敏度为30ng/ml,线性范围30～600ng/ml、回收率80%～110%,变异系数小于15%。所建立的检测相思子毒素的胶体金免疫层析方法,能快速、灵敏、特异、准确地检测样品中的相思子毒素,并可实现定量,适用于现场快速检测。

关键词：相思子毒素胶体金免疫层析定量检测

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