检索结果-内蒙古大学图书馆

军事医学科学院院刊 2008年第2期32卷 106-110,120页

作者：韩剑峰姜涛陈水平李晓峰秦成峰于曼秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:构建SARS-CoV BJ01株病毒受体结合位点及七肽重复区的突变病毒,为深入探讨SARS-CoV的致病机制及设计抗病毒策略提供理论依据。方法:采取体外突变、分段克隆及拼接策略构建BJ01株突变病毒基因组全长cDNA,经体外转录获取突变病毒,观... 详细信息

目的:构建SARS-CoV BJ01株病毒受体结合位点及七肽重复区的突变病毒,为深入探讨SARS-CoV的致病机制及设计抗病毒策略提供理论依据。方法:采取体外突变、分段克隆及拼接策略构建BJ01株突变病毒基因组全长cDNA,经体外转录获取突变病毒,观察突变病毒与原型病毒对细胞感染性的差异。结果:获得了S蛋白不同位点的突变病毒,受体结合位点的突变明显降低了BJ01株病毒对Vero E6细胞的感染性,突变病毒的蚀斑滴度比原型病毒降低3个数量级。结论:SARS-CoV BJ01株S蛋白的受体结合位点及七肽重复区与病毒的毒力及致病性密切相关。

关键词： SARS冠状病毒刺突蛋白受体结合域七肽重复区

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细菌自然转化的机制及影响因素

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生物工程学报 2018年第8期34卷 1297-1305页

作者：宁年智王慧军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

水平基因转移对耐药基因传播、编码毒素基因质粒的扩散和毒力岛的转移等过程具有重要的生物学意义。自然转化是指具有感受态的细菌从外界摄取并整合裸露DNA,是水平基因转移的方式之一。细菌发生自然转化极大地促进了耐药基因在不同细菌... 详细信息

水平基因转移对耐药基因传播、编码毒素基因质粒的扩散和毒力岛的转移等过程具有重要的生物学意义。自然转化是指具有感受态的细菌从外界摄取并整合裸露DNA,是水平基因转移的方式之一。细菌发生自然转化极大地促进了耐药基因在不同细菌间的播散,导致细菌对抗生素耐药,给临床治疗带来极大的困难。许多细菌具备自然转化能力,但不同细菌自然转化过程存在着差异。细菌自然感受及转化的诱发及效率亦受到多种因素的影响。文中着重于阐述不同细菌的自然转化机制及其影响因素。

关键词：自然感受态自然转化 Ⅳ型菌毛耐药基因

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炭疽毒素受体与人IgG1的Fc段融合蛋白ATR-Fc在CHO细胞中的表达

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生物工程学报 2005年第5期21卷 826-831页

作者：高丽华胡显文陈薇徐俊杰赵剑陈惠鹏军事医学科学院生物工程研究所北京100071 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

ATR_Fc是人炭疽毒素受体(ATR)的胞外区与人免疫球蛋白IgG1的铰链区、CH2区和CH3区组成的融合蛋白。表达该蛋白是为了获得结合PA的抗体样分子,通过阻断PA与细胞受体的结合,而阻止炭疽致死毒素和水肿因子进入细胞内,可作为预防和治疗炭疽... 详细信息

ATR_Fc是人炭疽毒素受体(ATR)的胞外区与人免疫球蛋白IgG1的铰链区、CH2区和CH3区组成的融合蛋白。表达该蛋白是为了获得结合PA的抗体样分子,通过阻断PA与细胞受体的结合,而阻止炭疽致死毒素和水肿因子进入细胞内,可作为预防和治疗炭疽感染的生物制品。将编码炭疽毒素受体N端1_227氨基酸的基因和编码Fc段的基因连接,插入到pcDNA3.1的HindⅢ和NotⅠ位点得到表达ATR_Fc融合蛋白的真核表达载体pcDNA3.1ATR_Fc,并用脂质体方法将该载体转染至CHO_K1细胞中,用G418筛选并获得ATR_Fc表达水平为10～15μg(106cells·d)的基因工程CHO细胞系ATR_Fc_1D5。采用蛋白A纯化重组蛋白,并用ELISA法鉴定ATR_Fc与PA的亲和性,表明ATR_Fc可与PA特异性结合。

关键词：炭疽毒素受体 Fc融合蛋白重组CHO细胞抗体类分子抗毒素

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2011年第一届牛津国际噬菌体大会介绍

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生物工程学报 2012年第3期28卷 368-375页

作者：范华昊童贻刚军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

1会议简介噬菌体是一类以原核生物（包括细菌、真菌、放线菌或螺旋体等）为宿主的病毒,它最早于1915年被发现,之后,d＇Herelle在1917年再次发现了这种能裂解细菌的生物类群,并将其命名为＂bacteriophage＂,简称＂phage＂。近年来随着细... 详细信息

1会议简介噬菌体是一类以原核生物（包括细菌、真菌、放线菌或螺旋体等）为宿主的病毒,它最早于1915年被发现,之后,d＇Herelle在1917年再次发现了这种能裂解细菌的生物类群,并将其命名为＂bacteriophage＂,简称＂phage＂。近年来随着细菌耐药形势的日益严峻,越来越多有远见和责任感的科学家和企业开始把目光投向这种细菌的天然病毒，越来越多的科学家开始对噬菌体产生浓厚的兴趣，更多噬菌体产品开始走向市场。

关键词：噬菌体国际牛津会议简介原核生物生物类群科学家细菌

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西尼罗病毒Chin-01株5′非编码区(UTR)中复制相关元件的功能研究

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解放军医学杂志 2008年第7期33卷 816-822页

作者：李晓峰姜涛陈水平韩剑峰邓永强秦成峰于曼秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研究西尼罗病毒Chin-01株5′非编码区(UTR)中复制相关元件的功能,为探讨该病毒基因组复制的分子机制提供理论依据。方法通过生物信息学分析,初步筛选出Chin-01株5′UTR中可能的复制相关位点,并构建相应的重组亚基因组突变体,然后以... 详细信息

目的研究西尼罗病毒Chin-01株5′非编码区(UTR)中复制相关元件的功能,为探讨该病毒基因组复制的分子机制提供理论依据。方法通过生物信息学分析,初步筛选出Chin-01株5′UTR中可能的复制相关位点,并构建相应的重组亚基因组突变体,然后以上此为模板,经体外RdRp活性分析及凝胶阻滞试验,观察NS5的RdRp活性及与突变体的结合能力,再将突变位点引入该病毒感染性全长cDNA克隆,初步观察突变体恢复病毒的生物学特性。结果5′UTR中第45-60位核苷酸缺失的突变体无法合成子链,与NS5的结合能力也显著降低。第8和9位核苷酸改变的突变体则丧失了合成子代RNA及与NS5的结合能力,第8、9、69和70位核苷酸突变后形成的结构恢复突变体则可以合成子链RNA,并可与NS5特异性结合。同时,第45-60位核苷酸缺失及第8和9位核苷酸突变的恢复病毒的增殖能力也显著降低。结论Chin-01株5′UTR中的第45-60位及第8、9、69和70位核苷酸维持的结构可能是该病毒基因组复制的关键位点。

关键词：西尼罗病毒 5′非翻译区病毒非结构蛋白质类

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细菌菌蜕的研究进展

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中国生物制品学杂志 2009年第3期22卷 297-300页

作者：蔡昆王慧军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

细菌菌蜕是革兰阴性细菌被噬菌体PhiX174的裂解基因E裂解后形成的完整细菌空壳。细菌菌蜕兼顾了组合抗原免疫原性、佐剂效应、靶向性载体的作用,特别适合于黏膜免疫及口服免疫;由于缺乏内含物而更加安全;生产过程简单,适宜大规模生产。... 详细信息

细菌菌蜕是革兰阴性细菌被噬菌体PhiX174的裂解基因E裂解后形成的完整细菌空壳。细菌菌蜕兼顾了组合抗原免疫原性、佐剂效应、靶向性载体的作用,特别适合于黏膜免疫及口服免疫;由于缺乏内含物而更加安全;生产过程简单,适宜大规模生产。这些特性决定了细菌菌蜕是一种具有良好应用前景的候选疫苗及递送系统。本文就细菌菌蜕的研究进展作一综述。

关键词：细菌菌蜕递送系统疫苗佐剂

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新型阳离子基因传递载体PEI-PBLG的细胞转染研究

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生物工程学报 2007年第2期23卷 229-234页

作者：尉继征林磊熊伟祝庆余军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

对新型阳离子聚合物PEI（10kD）-PBLG进行研究，重点考察其基因转染效率与细胞毒性，探讨其作为基因载体的可能性。通过粒径分析及扫描电镜（SEM）观察PEI（10kD）-PBLG与质粒pEGFP自组装形成的颗粒形态及粒径，预测其进入细胞的可能性... 详细信息

对新型阳离子聚合物PEI（10kD）-PBLG进行研究，重点考察其基因转染效率与细胞毒性，探讨其作为基因载体的可能性。通过粒径分析及扫描电镜（SEM）观察PEI（10kD）-PBLG与质粒pEGFP自组装形成的颗粒形态及粒径，预测其进入细胞的可能性。使用MTT比色法分析PEI（10kD）-PBLG、PEI（25kD）．PBLG、PEI（10kD）和PEI（25kD）的细胞毒性差异。选用表达增强型绿色荧光蛋白的质粒pEGFP作为报告基因模型，将其与PEI（10kD）-PBLG自组装后，分别转染真核细胞株Hela、COS-7、Vero-E6和ECV304，应用流式细胞术检测细胞转染效率，并比较了血清、缓冲液、细胞谱等多种因素对基因转染效率的影响。PEI（10kD）-PBLG可包裹质粒形成粒径100—120nm的纳米复合物，适合介导质粒进入细胞。该纳米粒复合物对转染缓冲液的敏感度较低，并能够在10％血清存在的条件下，转染全部实验用细胞株，尤其对Hela的转染效率最高，其次是COS-7、Vero-E6和ECV304；其中PEI-PBLG（10kD）／pEGFP复合物转染Hela细胞的比率为45．02％，高于Pri（10kD）／pEGFP的29．16％；PEI（10kD）-PBLG的细胞毒性作用显著低于PEI（25kD）、PEI（10kD）和PEI（25kD）-PBLG。新型阳离子多聚物PEI（10kD）-PBLG在提高PEI介导的基因转染效率的同时降低了其细胞毒性，提高了生物相容性，有望成为基因转移的有效载体。

关键词：聚乙烯亚胺聚谷氨酸基因传递转染效率细胞毒性

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荧光定量PCR检测嗜吞噬细胞无形体

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中国人兽共患病学报 2006年第4期22卷 289-293页

作者：张晶波温博海陈梅玲朱丽娜邱玲牛东升军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

目的采用新型TaqMan—MGB探针建立检测嗜吞噬细胞无形体的实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR）方法。方法依据gltA基因序列设计嗜吞噬细胞无形体特异引物和探针，以克隆的嗜吞噬细胞无形体gltA基因片段作DNA模板。在荧光定量... 详细信息

目的采用新型TaqMan—MGB探针建立检测嗜吞噬细胞无形体的实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR）方法。方法依据gltA基因序列设计嗜吞噬细胞无形体特异引物和探针，以克隆的嗜吞噬细胞无形体gltA基因片段作DNA模板。在荧光定量PCR检测仪（ABI 7900HT）上建立实时荧光定量检测方法。结果建立的定量标准曲线的循环闻值（Ct）与模板拷贝数呈良好的线性关系（r=0．996）；与套式PCR相比较，荧光定量PCR检测的灵敏度是其100倍。用荧光定量PCR检测其它相关立克次体和细菌DNA样本，检出结果几乎为0；对荧光定量PCR检测重复性进行分析，变异系数（CV）批内和批间误差在0-2．1％之间，证明该荧光定量PCR具有种特异性和良好的重复性。用荧光定量PCR检测体疑染嗜吞噬细胞无形体的10份蜱和30份小鼠脾脏标本，结果与套式PCR检测结果有密切相关性，但是定量PCR检测敏感性和准确率均高于套式PCR。结论本研究建立的检测嗜吞噬细胞无形体的实时荧光定量PCR具有很高的特异性和敏感性，特别适合检出样本中微量嗜吞噬细胞无形体。

关键词：嗜吞噬细胞无形体实时定量PCR gltA基因埃立克体感染

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登革4型病毒基因组cHP发卡结构对病毒复制和翻译的调控作用

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军事医学科学院院刊 2008年第3期32卷 201-206页

作者：于学东姜涛陈水平邓永强韩剑峰赵慧李晓峰刘然于曼秦成峰秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:探讨登革4型病毒C基因中保守的cHP发卡结构对病毒复制和翻译的调控作用。方法:首先在获得含有海肾荧光素酶(Renilla luciferase,***)报告基因的复制子(***2A-RP)基础上,利用重叠PCR构建cHP发卡结构系列突变体(cHP1～cHP6)。将构建... 详细信息

目的:探讨登革4型病毒C基因中保守的cHP发卡结构对病毒复制和翻译的调控作用。方法:首先在获得含有海肾荧光素酶(Renilla luciferase,***)报告基因的复制子(***2A-RP)基础上,利用重叠PCR构建cHP发卡结构系列突变体(cHP1～cHP6)。将构建的突变体(包括相关的阳性和阴性对照复制子)分别线性化并体外转录成RNA后,取等量各转录体RNA,以脂质体法分别转染BHK-21细胞。通过间接免疫荧光(IFA)、RT-PCR、***报告基因检测技术和实时定量RT-PCR对突变体的复制和翻译进行检测。结果:cHP发卡结构系列突变体均可在BHK-21细胞中复制并稳定表达病毒特异蛋白,在该发卡结构中引入缺失或突变对病毒早期翻译并无显著影响,但病毒RNA复制均显著下调。结论:cHP发卡结构在基因组RNA复制过程中可能具有重要的调控作用。

关键词：登革病毒复制子报告基因复制翻译

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HIV抗体不确定结果的特征与鉴别方法研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第5期30卷 427-430页

作者：鲍作义杨晓莉刘永健耿海山李林李韩平李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室武警总医院检验科

目的分析HIV抗体不确定的血清学特征及预示HIV感染的意义,评价3种实验方法鉴别HIV抗体不确定的效果.方法收集394例HIV抗体不确定标本,分析免疫印迹确认的条带类型.2对97例HIV抗体不确定病例进行随访,观察HIV抗体的发展和变化.3对67例... 详细信息

目的分析HIV抗体不确定的血清学特征及预示HIV感染的意义,评价3种实验方法鉴别HIV抗体不确定的效果.方法收集394例HIV抗体不确定标本,分析免疫印迹确认的条带类型.2对97例HIV抗体不确定病例进行随访,观察HIV抗体的发展和变化.3对67例随访病例的首次标本进行病毒载量、条带免疫印迹和HIV-1 p24抗原检测,以随访的结果为金标准,判断3种方法鉴别不确定的效果.结果 394例不确定标本共有38种带型,env类不确定的构成比例是37.54%;pol不确定占4.04%;gag类不确定占的比例最大,为58.37%.97例接受随访的HIV抗体不确定病例中,5例发生HIV抗体阳转,均为env类不确定.阳转病例的HIV抗体发展很快,约2周就可以看出变化.病毒载量检测鉴别HIV抗体不确定的敏感性最好.结论针对gag蛋白的不确定反应最为常见,但基本上都是非特异反应.env类不确定预示HIV感染的意义较大,特别是gp160p24和***抗体不确定如为早期HIV感染,血清抗体发展的速度很快,大约2周抗体就有发展.病毒载量检测可有效鉴别不确定结果.

关键词： HIV抗体不确定病毒载量

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