检索结果-内蒙古大学图书馆

国际免疫学杂志 2009年第1期32卷 43-47页

作者：鹿文葆王希良军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

负链RNA病毒基因组由单负链RNA构成。其基因组RNA需要被转录为mRNA才能引导病毒蛋白在细胞内合成。使用传统的DNA重组技术对负链RNA病毒进行基因操作已经难以奏效。反向遗传学方法是通过反转录病毒RNA为cDNA，从而构建成含有病毒基因组c... 详细信息

负链RNA病毒基因组由单负链RNA构成。其基因组RNA需要被转录为mRNA才能引导病毒蛋白在细胞内合成。使用传统的DNA重组技术对负链RNA病毒进行基因操作已经难以奏效。反向遗传学方法是通过反转录病毒RNA为cDNA，从而构建成含有病毒基因组cDNA的质粒并转染相应细胞产生病毒。通过中间的DNA环节在DNA相对负链RNA病毒基因组进行人工操作，这使得研究者可以自定义产生需要的病毒。因而研究反向遗传学技术的建立、发展过程以及它在相关病毒基因片段结构功能、疫苗研制、外源基因表达、基因治疗等方面的应用很有意义。

关键词：反向遗传学负链RNA病毒感染性克隆cDNA

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致病性细菌微进化的研究进展

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生命科学 2009年第4期21卷 479-484页

作者：杨瑞馥军事医学科学院微生物流行病研究所病原与生物安全国家重点实验室

2009年是达尔文诞辰200周年,《物种起源》发表150周年。值此之际,我们将致病性细菌微进化的遗传学动力、研究方法及其意义进行综述,并以鼠疫耶尔森氏菌与沙门氏菌为例讨论了这两种细菌的微进化研究进展。

关键词：微进化致病菌鼠疫耶尔森氏菌沙门氏菌

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HIV的起源与SIV的跨种传播

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军事医学科学院院刊 2009年第6期33卷 501-504页

作者：李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室全军艾滋病检测中心北京100071

人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)是在全球广泛流行并导致严重危害的人类病原体,是由非人灵长类动物免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus,SIV)跨种传播给人类并进化而来的。本文介绍了SIV跨种传播进化为多种HI... 详细信息

人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)是在全球广泛流行并导致严重危害的人类病原体,是由非人灵长类动物免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus,SIV)跨种传播给人类并进化而来的。本文介绍了SIV跨种传播进化为多种HIV毒株的科学发现及跨种传播病毒在新型宿主中的适应性进化,分析了这些发现的科学和公共卫生意义。

关键词：人免疫缺陷病毒非人灵长类动物免疫缺陷病毒起源进化

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分枝杆菌噬菌体D29裂解酶基因的表达与鉴定

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军事医学科学院院刊 2009年第2期33卷 113-116页

作者：杨文慧于龙胡凌飞温占波李劲松军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室生物防护装备工程技术研究中心北京100071

目的:在耻垢分枝杆菌中表达预测的噬菌体D29裂解酶基因片段,鉴定其细胞壁裂解活性。方法:在分析分枝杆菌噬菌体D29开放阅读框序列的基础上,用PCR法从噬菌体D29基因组DNA中扩增出与裂解酶同源性较高的序列gene10,将其克隆入大肠杆菌-分... 详细信息

目的:在耻垢分枝杆菌中表达预测的噬菌体D29裂解酶基因片段,鉴定其细胞壁裂解活性。方法:在分析分枝杆菌噬菌体D29开放阅读框序列的基础上,用PCR法从噬菌体D29基因组DNA中扩增出与裂解酶同源性较高的序列gene10,将其克隆入大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒后,在耻垢分枝杆菌中进行诱导表达。对表达产物进行SDS-PAGE检测,对诱导培养重组菌进行混浊度测定、透射电镜观察以鉴定其裂解活性。结果及结论:成功构建了重组穿梭质粒pUV-gene10并使gene10在耻垢分枝杆菌中获得表达,表达产物能有效降低宿主菌培养液混浊度,降解宿主菌细胞壁,证实gene10表达产物为噬菌体裂解酶,并推测其为非经典分泌蛋白。

关键词：裂解酶分枝杆菌噬菌体D29 大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒

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细菌非编码小RNA研究进展

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微生物学通报 2009年第7期36卷 1025-1030页

作者：张炜童贻刚冯福民军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 华北煤炭医学院预防医学系河北唐山063000

细菌非编码小RNA(small non-coding RNA,sRNA)是一类长度在50~500个核苷酸,不编码蛋白质的RNA。迄今,在各种细菌中共发现超过150多种sRNA。它们通过碱基配对识别靶标mRNA,在转录后水平调节基因的表达,是细菌代谢、毒力和适应环境压力的... 详细信息

细菌非编码小RNA(small non-coding RNA,sRNA)是一类长度在50~500个核苷酸,不编码蛋白质的RNA。迄今,在各种细菌中共发现超过150多种sRNA。它们通过碱基配对识别靶标mRNA,在转录后水平调节基因的表达,是细菌代谢、毒力和适应环境压力的重要调节因子。细菌sRNA的研究技术主要有基于生物信息学的计算机预测法和基于实验室的检测分析方法。这些方法所得到的sRNA都需要进行实验室确认,然后再进一步通过各种实验手段研究其功能。

关键词：非编码小RNA 细菌基因组

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接受抗病毒治疗的AIDS患者HIV-1非核苷类逆转录酶抑制剂类耐药基因突变的选择动力学研究

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中华检验医学杂志 2009年第4期32卷 390-396页

作者：李珏焦丽燕李韩平李林刘永健庄道民鲍作义刘思扬李宏王哲李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 河南省疾病预防控制中心

目的研究接受抗病毒治疗的AIDS患者非核苷类逆转录酶抑制剂（non—nucleoside reverse transcriptase inhibitor，NNRTI）类耐药基因突变分子进化特征。方法从我国中部农村抗病毒治疗AIDS患者研究队列中选择4例服药依从性较好，治疗初... 详细信息

目的研究接受抗病毒治疗的AIDS患者非核苷类逆转录酶抑制剂（non—nucleoside reverse transcriptase inhibitor，NNRTI）类耐药基因突变分子进化特征。方法从我国中部农村抗病毒治疗AIDS患者研究队列中选择4例服药依从性较好，治疗初期为野生型毒株，在治疗过程中逐渐产生NNRTI类耐药基因突变的患者为研究对象，对每位患者的4～5次随访血浆样本的逆转录酶（reverse transcriptase，RT）基因进行克隆测序分析，观察每个克隆的基因型耐药性特征。结果共检测了855个克隆，得到4例患者历次克隆序列中带各种NNRTI类耐药基因突变的构成图谱：4例患者表现出不同的HIV-1 NNRTI类耐药突变途径，发现4条主要NNRTI类耐药基因突变演变途径：（1）G190A，常伴随F227L突变出现，在长期的治疗过程中还有继续累加P236V突变的趋势；（2）Y188C，多单独出现，有时与P236V等同时发生；（3）Y181C，多与V179D或K103N同时出现，不同的患者选择趋向不同；（4）K103N，多与Y181C或M230L突变联合出现。结论总结出4例患者HIV-1 NNRTI类耐药基因突变的选择动力学特征。4例患者表现出不同的NNRTI类耐药基因突变演变途径，最先筛选出来的耐药突变往往能够成为最后的优势种.

关键词：获得性免疫缺陷综合征逆转录酶抑制剂抗药性突变进化,分子

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在入境国际航行船舶上采获输入性阿蠓及一新种的记述(双翅目：蠓科)

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四川动物 2009年第2期28卷 161-163页

作者：聂维忠李俊成李德昕虞以新汪仁杰刘恩东秦皇岛出入境检验检疫局河北秦皇岛066002 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

2003年3月和12月,秦皇岛出入境检验检疫局检疫人员分别在由菲律宾和印度驶抵中国秦皇岛港锚地的入境国际航行船舶上采获输入性阿蠓,经分类鉴定共有3种,分别是棘刺阿蠓Alluaudomyia spinosipesTokunaga、拟斑茎阿蠓Alluaudomyia psedomac... 详细信息

2003年3月和12月,秦皇岛出入境检验检疫局检疫人员分别在由菲律宾和印度驶抵中国秦皇岛港锚地的入境国际航行船舶上采获输入性阿蠓,经分类鉴定共有3种,分别是棘刺阿蠓Alluaudomyia spinosipesTokunaga、拟斑茎阿蠓Alluaudomyia psedomaculipennis(Carter,Ingram and Macfie)和新种船舶阿蠓Alluaudomyia fregataYu,Li andNie ***.。对船舶阿蠓新种形态学特征进行了描述。分析认为上述蠓类应是由入境国际航行船舶携带而来的输入性蠓种。模式标本均收藏在军事医学科学院医学昆虫标本馆。

关键词：输入性蠓阿蠓新种入境国际航行船舶

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不同佐剂与鼠疫F1-V融合重组蛋白抗原滴鼻免疫效果的研究

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免疫学杂志 2009年第2期25卷 183-186页

作者：袁源王栋邢丽王希良军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室河南省疾病预防控制中心

目的研究不同佐剂与鼠疫F1-V融合重组蛋白抗原滴鼻免疫Balb/c小鼠,观察机体产生体液免疫和局部粘膜免疫反应的效果,为发展黏膜疫苗提供理论基础。方法鼠疫F1-V融合重组蛋白抗原按比例分别与PorB(2类外膜蛋白)重组蛋白、蛋白体佐剂制备... 详细信息

目的研究不同佐剂与鼠疫F1-V融合重组蛋白抗原滴鼻免疫Balb/c小鼠,观察机体产生体液免疫和局部粘膜免疫反应的效果,为发展黏膜疫苗提供理论基础。方法鼠疫F1-V融合重组蛋白抗原按比例分别与PorB(2类外膜蛋白)重组蛋白、蛋白体佐剂制备黏膜疫苗,滴鼻免疫Balb/c小鼠3次,取尾静脉血,采用ELISA检测血清IgG及抗体亚型分类,并检测鼻咽、肺、小肠及阴道灌洗液sIgA;采用FAC检测脾淋巴细胞表型的变化。结果PorB重组蛋白佐剂疫苗组和蛋白体佐剂疫苗组较无佐剂组体液免疫抗体水平高、蛋白体佐剂疫苗组好于PorB重组蛋白佐剂疫苗组,但无显著性差异。结论PorB重组蛋白佐剂疫苗和蛋白体佐剂疫苗均能诱导较强的系统免疫和黏膜免疫应答,且PorB重组蛋白佐剂疫苗免疫效果可与蛋白体佐剂疫苗相媲美,可进一步论证是否可用PorB重组蛋白佐剂替代蛋白体佐剂,这为鼠疫粘膜疫苗的研制奠定了基础。

关键词：鼠疫F1-V抗原 PorB重组蛋白蛋白体免疫反应

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呼吸道合胞病毒融合蛋白F在重组杆状病毒表达系统中的表达及抗原性研究

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免疫学杂志 2009年第3期25卷 267-270,274页

作者：王善辉余兵兵王希良李培锋内蒙古农业大学动物医学与科学学院军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

目的利用杆状病毒表达系统对RSVA型Long株F基因进行表达研究,为RSV重组亚单位疫苗的研制奠定基础。方法用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增F基因,将其克隆到pFastBacHT A载体中,阳性重组质粒转化DH10Bac感受态细胞,PCR鉴定获得阳性克隆,... 详细信息

目的利用杆状病毒表达系统对RSVA型Long株F基因进行表达研究,为RSV重组亚单位疫苗的研制奠定基础。方法用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增F基因,将其克隆到pFastBacHT A载体中,阳性重组质粒转化DH10Bac感受态细胞,PCR鉴定获得阳性克隆,碱裂解法提取阳性质粒,转染Sf9昆虫细胞,获得含F基因的重组杆状病毒质粒,重组病毒感染Sf9细胞72h后,进行SDS-PAGE电泳、间接免疫荧光和Western-blot试验。免疫Balb/c小鼠,用ELISA测定抗体滴度,MTT试验检测T淋巴细胞增殖。结果目的蛋白F在昆虫细胞中有特异性表达,能被F蛋白单克隆抗体所识别,该蛋白诱导了高滴度的RSV特异性抗体。结论成功克隆RSVF基因,并在Sf9昆虫细胞中获得表达,该蛋白具有良好的免疫原性,为进一步研究开发RSV重组亚单位疫苗奠定了基础。

关键词：呼吸道合胞病毒重组杆状病毒融合蛋白F

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基因芯片技术检测重要人兽共患病病毒方法的建立

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中国生物化学与分子生物学报 2009年第11期25卷 1058-1063页

作者：李永强康晓平孙庆歌刘洪常国辉祝庆余杨银辉军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

为了建立能对25种重要人兽共患病病毒进行筛查及鉴定用的基因芯片技术,本实验首先设计针对每种病毒的寡核苷酸探针并进行探针特异性的生物信息学验证.然后探索病毒核酸随机扩增方法,优化杂交动力学条件,建立本芯片标准的数据处理分析方... 详细信息

为了建立能对25种重要人兽共患病病毒进行筛查及鉴定用的基因芯片技术,本实验首先设计针对每种病毒的寡核苷酸探针并进行探针特异性的生物信息学验证.然后探索病毒核酸随机扩增方法,优化杂交动力学条件,建立本芯片标准的数据处理分析方法.最后用细胞培养的病毒和模拟临床标本验证芯片的敏感性与特异性.结果表明,锚定随机PCR扩增法适合于本芯片病毒核酸的扩增;芯片杂交前用0.25%NaBH4进行封闭,最优杂交条件为51℃,2h及50%甲酰胺浓度;芯片具有较好的敏感性及检测特异性.初步结果表明,本实验所建立的基因芯片技术可应用于对25种重要人兽共患病病毒进行筛查及鉴定.

关键词：基因芯片技术人兽共患病病毒筛查及鉴定特异性随机PCR

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