检索结果-内蒙古大学图书馆

中国基础科学 2012年第2期14卷 3-8页

作者：陈海旭李艳华裴雪涛军事医学科学院野战输血研究所全军干细胞与再生医学研究室北京100850

缺血性疾病是临床上一种严重危害健康,降低患者生活质量,致死、致残率高的疾病,主要包括肢体缺血、糖尿病坏疽、缺血性心肌梗塞及缺血性脑梗塞等。骨髓干细胞(bone marrow-derived stem cells,BMSCs)具有多向分化潜能,已成为缺血性疾病... 详细信息

缺血性疾病是临床上一种严重危害健康,降低患者生活质量,致死、致残率高的疾病,主要包括肢体缺血、糖尿病坏疽、缺血性心肌梗塞及缺血性脑梗塞等。骨髓干细胞(bone marrow-derived stem cells,BMSCs)具有多向分化潜能,已成为缺血性疾病领域的研究热点,通过应用干细胞动员剂动员骨髓干细胞至缺血损伤组织诱使血管新生,改善血流灌注和氧供,修复损伤组织,为缺血性疾病的再血管化治疗提供了新策略。骨髓干细胞动员具有操作简便、安全有效、无创伤以及避免干细胞移植引起的免疫排斥反应的特点,应用骨髓干细胞动员的方法和干预策略具有较好的发展潜力。

关键词：骨髓干细胞干细胞动员 SDF-1α/CXCR4轴缺血性疾病

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临床研究用间充质干细胞的体外制备策略

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中国医药生物技术 2012年第5期7卷 327-332页

作者：张文成王韫芳常铭洋池木根王华刘银霞覃金华闫舫裴雪涛吴祖泽军事医学科学院野战输血研究所干细胞与再生医学实验室北京100850 军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850

目的探讨一种安全、有效并易于推广的临床研究用间充质干细胞的产业化制备策略。方法常规方法分离获得原代脐带间充质干细胞，P1-P3代以含小牛血清培养基进行稳定传代后，以无血清培养基对P4-P6代细胞继续培养和扩增，并以含血清培养基... 详细信息

目的探讨一种安全、有效并易于推广的临床研究用间充质干细胞的产业化制备策略。方法常规方法分离获得原代脐带间充质干细胞，P1-P3代以含小牛血清培养基进行稳定传代后，以无血清培养基对P4-P6代细胞继续培养和扩增，并以含血清培养基作为对照。倒置显微镜每天定时观察细胞生长状态，CCK-8法比较P4代和P6代细胞在两种培养基中的增殖能力，并对P4-P6代细胞的细胞裂解液和细胞培养上清中的牛血清白蛋白（BSA）残留量进行检测。结果对分离获得的原代脐带间充质干细胞进行传代培养，在含血清培养基中，P1-P3代细胞增殖能力稳定，以4×10^4／ml密度接种，3．5-4d可达到90％融合；细胞进入P6后，在无血清培养基培养条件下增殖能力与含血清培养基相近；BSA残留量检测结果显示，无血清培养基组中细胞的培养上清和细胞裂解液中残留的BSA量低于10ng／10^6细胞，满足《中国生物制品规程》对相关细胞治疗产品中BSA残留量的标准要求。结论含血清培养与无血清培养相结合的程序性培养扩增体系，可为临床提供数量充足、质量可控的间充质干细胞。

关键词：间质干细胞血清白蛋白,牛生物疗法生物医学研究

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RNA干扰技术体外抑制肝星状细胞表皮形态发生素表达及其对肝癌细胞迁移能力的影响

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生物化学与生物物理进展 2011年第4期38卷 361-369页

作者：石磊贾雅丽张晓梅袁红丰曾泉周军年岳文裴雪涛军事医学科学院输血医学研究所干细胞与再生医学研究室北京100850 解放军302医院感染性疾病诊疗与研究中心北京100039 解放军总医院消化内科北京100853

肿瘤微环境中肝星状细胞能够影响肝癌细胞的生物学行为.在肝脏发育过程中,肝星状细胞通过表皮形态发生素(epimorphin,EPM,syntaxin2)与肝干细胞接触而促进肝干细胞的功能性分化.EPM在溃疡性结肠炎、间质性肺炎以及结肠癌中也发挥了重要... 详细信息

肿瘤微环境中肝星状细胞能够影响肝癌细胞的生物学行为.在肝脏发育过程中,肝星状细胞通过表皮形态发生素(epimorphin,EPM,syntaxin2)与肝干细胞接触而促进肝干细胞的功能性分化.EPM在溃疡性结肠炎、间质性肺炎以及结肠癌中也发挥了重要的作用.发现肝细胞癌(HCC)细胞能够促使星状细胞EPM表达上调.为了研究肝星状细胞的EPM对于肝癌可能的作用,构建了针对EPM基因表达的shRNA干扰载体,并将质粒转染肝星状细胞,获得了两株携带该干扰片段的细胞系.RT-PCR与Westernblot检测结果表明,转基因干扰星状细胞系EPMmRNA和蛋白质表达量明显降低.之后,使用转基因细胞系的条件培养基对于肿瘤细胞进行侵袭能力的检测,并对星状细胞与肝癌细胞三维共培养,证明EPM干涉后肝星状细胞促进肿瘤细胞迁移的能力降低.结果表明通过RNAi可稳定干扰人肝星状细胞EPM基因的表达,并且EPM能够促进肝癌细胞的转移.

关键词： RNA干扰人肝星状细胞表皮形态发生素癌肝细胞细胞交流

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黑色素细胞与骨髓间充质干细胞复合构建组织工程化皮肤

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中国医学科学院学报 2011年第4期33卷 402-407,483-486页

作者：宋可新乔群刘大庆王晓军赵茹刘志飞裴雪涛中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院整形外科北京100032 军事医学科学院野战输血研究所干细胞与再生医学研究室北京100850

目的探讨构建含有黑色素细胞组织工程化皮肤的方法。方法从人包皮组织中获取黑色素细胞,从人骨髓中获取骨髓间充质干细胞(BMSCs),以二者为种子细胞,按照1∶10的比例混和培养,并与I型胶原膜复合体外构建组织工程化皮肤,对裸鼠创面进行修... 详细信息

目的探讨构建含有黑色素细胞组织工程化皮肤的方法。方法从人包皮组织中获取黑色素细胞,从人骨髓中获取骨髓间充质干细胞(BMSCs),以二者为种子细胞,按照1∶10的比例混和培养,并与I型胶原膜复合体外构建组织工程化皮肤,对裸鼠创面进行修复。通过大体标本观察、4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)体内示踪标记、HE染色、免疫组织化学检测及透射电镜观察等方法,观察组织工程化皮肤修复裸鼠皮肤创面缺损及黑色素细胞的分布情况。结果裸鼠创面皮肤生长良好,DAPI体内示踪标记、免疫组织化学检测S-100蛋白及透射电镜观察可以发现黑色素细胞以正常的组织结构形式分布于创面皮肤。结论黑色素细胞与BMSCs通过适当的比例及体外条件培养,与I型胶原膜复合可以在体外构建出具有黑色素细胞的组织工程化皮肤。

关键词：黑色素细胞骨髓间充质干细胞胶原膜组织工程化皮肤

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诱导扩增脐带血单个核细胞来源的红系祖细胞及其保存

诱导扩增脐带血单个核细胞来源的红系祖细胞及其保存

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第13届全国实验血液学会议

作者：习佳飞陈琳吕洋李瑞琼曾嵘师伟谢小燕南雪李艳华岳文裴雪涛军事医学科学院输血研究所干细胞与再生医学研究室全军干细胞与再生医学重点实验室

目的:临床红细胞输注冶疗是最常用的细胞治疗手段,然而目前血液来源紧张及输血相关传染病发生给其临床应用的安全性和广泛性带来了巨大挑战,因此人们期望寻找更为安全、充足的血液来源。红系祖细胞可以用来替代红细胞输注进行造血支持治... 详细信息

目的:临床红细胞输注冶疗是最常用的细胞治疗手段,然而目前血液来源紧张及输血相关传染病发生给其临床应用的安全性和广泛性带来了巨大挑战,因此人们期望寻找更为安全、充足的血液来源。红系祖细胞可以用来替代红细胞输注进行造血支持治疗,有望部分缓解目前临床输血面临的血液紧张状况。而且目前临床用的红细胞产品体外保存时间较短,而红系祖细胞作为有核细胞可以在体外进行长期冻存,我们如果能够对体外诱导脐带血造血干祖细胞分化为红系

关键词：红系祖细胞体外诱导单个核细胞

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microRNA与肿瘤

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四川医学 2011年第6期32卷 955-957页

作者：赵爱华曾泉李亚里解放军总医院妇产科北京100853 解放军第309医院妇产科军事医学科学院野战输血研究所干细胞与再生医学研究室北京100850

microRNA（miRNA）是一类长度为18～25个核苷酸的单链非编码RNA,广泛存在于真核生物中,主要通过与靶mRNA的3’端非翻译区（3’UTR）完全或部分互补结合,导致mRNA降解或翻译受到抑制,从而在转录后水平负调控靶基因的表达。虽然自第一个mi... 详细信息

microRNA（miRNA）是一类长度为18～25个核苷酸的单链非编码RNA,广泛存在于真核生物中,主要通过与靶mRNA的3’端非翻译区（3’UTR）完全或部分互补结合,导致mRNA降解或翻译受到抑制,从而在转录后水平负调控靶基因的表达。虽然自第一个miRNA—Lin4发现至今不过十余年时间，

关键词： microRNA 肿瘤调控机制

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细胞角蛋白19启动子调控的双报告载体的构建及其在肝干/祖细胞分化研究中的应用

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生物化学与生物物理进展 2010年第7期37卷 728-736页

作者：张衡贾雅丽岳文陈琳谢小燕南雪何丽娟裴海云裴雪涛军事医学科学院输血医学研究所干细胞与再生医学研究室北京100850

肝干/祖细胞是肝细胞和胆管上皮细胞(biliary epithelial cells,BECs)共同的前体细胞,为了对这一前体细胞的分化情况进行研究,利用报告基因来监测肝干/祖细胞的分化走向.首先,通过PCR方法从肝癌细胞系HepG2的全基因组中克隆了细胞角蛋白... 详细信息

肝干/祖细胞是肝细胞和胆管上皮细胞(biliary epithelial cells,BECs)共同的前体细胞,为了对这一前体细胞的分化情况进行研究,利用报告基因来监测肝干/祖细胞的分化走向.首先,通过PCR方法从肝癌细胞系HepG2的全基因组中克隆了细胞角蛋白19(CK19)启动子片段,构建了CK19启动子调控的海肾荧光素酶和红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)双报告载体(pSicoR-CK19-hrl-mrfp).其次,将上述慢病毒载体转染肝干/祖细胞后,通过流式细胞分选获得稳定转染的细胞株.再次,将上述细胞株与表达"上皮形态发生素"(Epimorphin,EPM)的PT67细胞共培养后,整合有pSicoR-CK19-hrl-mrfp表达载体的肝干/祖细胞不仅形态发生了变化,而且排列为二维环状结构,另外还检测到由CK19启动子启动表达的海肾荧光素酶和RFP,细胞形态和基因表型都证明肝干/祖细胞经诱导已经分化成为BECs.与此形成对照的是肝干/祖细胞与不表达EPM的PT67细胞共培养后,没有观测到上述的变化.所以,CK19启动子调控的双报告载体不仅可以实时地显示肝原始细胞在不同的诱导环境下的分化走向,而且还可以定量地检测CK19启动子活性的变化情况.总之,这一载体的成功构建将为研究肝干/祖细胞的分化提供了便捷的工具,同时也有助于筛选可诱导肝干/祖细胞定向分化的分子.

关键词：细胞角蛋白海肾荧光素酶红色荧光蛋白肝干/祖细胞分化

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microRNA-7真核表达载体的构建及其对细胞增殖能力的影响

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军事医学科学院院刊 2010年第6期34卷 523-527,535页

作者：许英晨周军年曾泉袁红丰岳文裴雪涛军事医学科学院野战输血研究所干细胞与再生医学研究室北京100850

目的构建miR-7真核表达载体,以研究miR-7过表达后对细胞增殖能力的影响。方法以人全血标本基因组为模板,PCR扩增miR-7序列,然后将该序列克隆入pHRS-1cla-CMV-EGFP载体中,构建pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体。将构建好的载体瞬... 详细信息

目的构建miR-7真核表达载体,以研究miR-7过表达后对细胞增殖能力的影响。方法以人全血标本基因组为模板,PCR扩增miR-7序列,然后将该序列克隆入pHRS-1cla-CMV-EGFP载体中,构建pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体。将构建好的载体瞬时转染入293FT细胞中,利用RT-PCR技术对转染前后293FT细胞中miR-7的表达水平进行检测。将pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体瞬时转染入乳腺癌细胞系MCF-7中,利用CCK-8法以及BrdU增殖实验检测过表达miR-7后细胞增殖能力的变化。结果构建的pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体质粒酶切和测序鉴定结果正确,实时定量RT-PCR结果表明,与转染pHRS-1cla-CMV-EGFP对照载体细胞相比,转染pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体72 h后的293FT细胞成功地过表达miR-7达76.8倍。CCK-8法以及BrdU增殖实验检测过表达miR-7后乳腺癌细胞系MCF-7的增殖能力显著性下降(P<0.05)。结论成功构建了pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体,瞬时转染后细胞可以有效地高表达miR-7,同时证明过表达miR-7可以使细胞的增殖能力受到明显抑制。

关键词：微小RNAs miR-7 pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP真核表达载体细胞增殖

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系统归巢的间充质干细胞在牙周组织修复再生过程中的作用研究

系统归巢的间充质干细胞在牙周组织修复再生过程中的作用研究

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中华口腔医学会口腔生物医学专业委员会口腔颌面发育和再生医学学术会议

作者：于美娇葛少华王芳文勇阎新龙曾泉岳文杨丕山裴雪涛山东大学口腔医学院山东济南250012 中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所干细胞与再生医学研究室北京100850 山东省口腔生物医学重点实验室山东济南250012文化西路44.1号山东大学口腔医学院山东济南250012 山东省口腔生物医学重点实验室山东济南250012文化西路44.1号山东大学口腔医学院牙周科中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所干细胞与再生医学研究室北京100850

探讨经系统移植的骨髓来源的间充质干细胞(***)能否归巢至牙周缺损区;系统归巢的间充质干细胞是否参与及调控牙周组织的修复与再生以及探讨牙周膜干细胞或牙周区域的成体干细胞的来源问题，分别经过骨髓腔内注射移植和尾静脉内注射移植... 详细信息

探讨经系统移植的骨髓来源的间充质干细胞(***)能否归巢至牙周缺损区;系统归巢的间充质干细胞是否参与及调控牙周组织的修复与再生以及探讨牙周膜干细胞或牙周区域的成体干细胞的来源问题，分别经过骨髓腔内注射移植和尾静脉内注射移植方法将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的BM-MSCs移植入经过Co60γ射线8.0 Gy全身照射(TBI)预处理过的大鼠体内，急性炎症缺损能够迅速的趋化系统输入的EGFP+的BM-MSCs迁移到缺损区并参与到牙周组织各部分的重建过程;牙周膜干细胞或牙周区域的成体干细胞部分来源于系统骨髓;EGFP+ BM-MSCs能够趋化受体大鼠牙周受损区域周围的干细胞或前体细胞迁移到受损区域，并通过促进这些细胞的分裂、增殖和分化来促进牙周组织的修复和再生。

关键词：骨髓间充质干细胞细胞移植牙周组织再生体系

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促红细胞生成素基因修饰的胎肝基质细胞促进脐血CD34+细胞向红系分化

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生物化学与生物物理进展 2010年第4期37卷 381-388页

作者：杨超吉蕾施双双岳文何丽娟南雪裴雪涛军事医学科学院输血医学研究所干细胞与再生医学研究室北京100850 中国科学院动物研究所计划生育与生殖生物学国家重点实验室北京100101

通过重组慢病毒系统感染人胎肝基质细胞(fetal liver stromal cells,FLSCs),建立了能够稳定高效表达促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)的细胞株EPO/FLSCs.从胎儿肝脏克隆EPO基因,构建重组慢病毒EPO的表达载体,感染FLSCs,根据荧光表达... 详细信息

通过重组慢病毒系统感染人胎肝基质细胞(fetal liver stromal cells,FLSCs),建立了能够稳定高效表达促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)的细胞株EPO/FLSCs.从胎儿肝脏克隆EPO基因,构建重组慢病毒EPO的表达载体,感染FLSCs,根据荧光表达强弱进行流式分选,获得能够继续稳定传代的高表达EPO基因的FLSCs,RT-PCR和ELISA结果证实,细胞株中的EPO基因稳定表达.RT-PCR结果显示,FLSCs的EPO在mRNA水平的表达分别是未转染FLSCs和转染空载体FLSCs的5.63倍和5.71倍.ELISA法检测了转染重组慢病毒EPO表达载体的FLSCs EPO蛋白表达水平,结果显示EPO蛋白的表达水平也明显升高.收集EPO/FLSCs的条件培养基,体外诱导脐血CD34+细胞向造血细胞分化,结果显示向红系定向分化的细胞比例明显居多,有可能为临床细胞治疗提供稳定、高质量的细胞来源.

关键词：胎儿肝脏基质细胞慢病毒促红细胞生成素转基因

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