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微生物学通报 2021年第9期48卷 3141-3153页

作者：王灿高明明俞鑫婷刘艳楠米志强安徽医科大学附属阜阳医院呼吸内科安徽阜阳236000 解放军总医院第五医学中心呼吸与危重症医学科北京100071 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

【背景】噬菌体解聚酶是噬菌体在裂解细菌过程中产生的一种抗菌蛋白,关于鲍曼不动杆菌荚膜分型及常见型别噬菌体解聚酶的研究报道较少。【目的】以KL2型鲍曼不动杆菌为研究对象,从噬菌体IME-AB2中克隆解聚酶,在大肠杆菌中进行可溶性表... 详细信息

【背景】噬菌体解聚酶是噬菌体在裂解细菌过程中产生的一种抗菌蛋白,关于鲍曼不动杆菌荚膜分型及常见型别噬菌体解聚酶的研究报道较少。【目的】以KL2型鲍曼不动杆菌为研究对象,从噬菌体IME-AB2中克隆解聚酶,在大肠杆菌中进行可溶性表达并研究其体外抗菌活性。【方法】应用二代测序及生物信息学方法鉴定鲍曼不动杆菌荚膜型,分析IME-AB2全基因组。应用分子克隆技术克隆ORF76假定的尾丝蛋白(Putative Tail Fiber)基因,构建重组表达载体pEASY-Blunt-E1-gp76,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,通过Ni-NTA亲和层析纯化解聚酶,研究解聚酶体外抗菌活性。【结果】构建了pEASY-Blunt-E1-gp76解聚酶重组表达质粒,该重组质粒在大肠杆菌中得到可溶性表达;体外活性分析显示,该重组蛋白在体外能够对所有的KL2型鲍曼不动杆菌具有较好的抗菌活性,解聚酶联合人和狗的血清具有很好的杀菌活性。【结论】鉴定解聚酶并提高其抗菌谱具有重要意义,也是噬菌体及解聚酶用于治疗耐药菌研究领域急需解决的重要问题之一。

关键词：鲍曼不动杆菌分型解聚酶血清

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大流量湿壁气旋式生物气溶胶采样器的设计及其性能评价

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中国消毒学杂志 2022年第6期39卷 401-406,409页

作者：郭建树程鹏博吕蒙秦佟童胡凌飞杨文慧周冬生孙岩松赵晓冬军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071 军事科学院军事医学研究院实验动物中心

目的对自行设计的一种大流量湿壁气旋式生物气溶胶采样器进行性能标定。方法使用多分散的NaCl气溶胶评价物理采样效率,使用黏质沙雷菌及大肠埃希菌噬菌体PhiX174气溶胶评价生物采样效率,使用过氧化氢消毒剂进行清洗消毒效果评价,在实际... 详细信息

目的对自行设计的一种大流量湿壁气旋式生物气溶胶采样器进行性能标定。方法使用多分散的NaCl气溶胶评价物理采样效率,使用黏质沙雷菌及大肠埃希菌噬菌体PhiX174气溶胶评价生物采样效率,使用过氧化氢消毒剂进行清洗消毒效果评价,在实际环境中评价湿壁气旋气溶胶采样器的实际采样性能。结果湿壁气旋式生物气溶胶采样器的物理切割粒径为1μm。湿壁气旋式生物采样器对黏质沙雷菌气溶胶及大肠埃希菌噬菌体PhiX174的总生物采样效率分别为(25.47±12.94)%及(16.34±1.67)%,活性生物采样效率分别为(42.98±6.53)%和(24.24±6.68)%。消毒清洗功能能够清除采样器气旋室内(99.73±0.04)%的核酸及>99.99%的活菌。现场气溶胶采样结果显示湿壁气旋气溶胶采样器生物气溶胶检出限比AGI-30降低约40倍,计算得到的空气微生物浓度比BioStage高约7倍。结论该大流量湿壁气旋式生物气溶胶采样器能够在单位时间内采集更多的空气,有更高的富集比和较低的生物粒子检出限。

关键词：湿壁气旋式生物气溶胶采样器物理采样效率生物采样效率黏质沙雷菌噬菌体消毒

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IncFII-FIA-FIB型多重耐药质粒pBTR-CTXM的结构基因组学分析

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微生物学通报 2019年第1期46卷 139-150页

作者：李曼莉王利君赵亚超蒋昭芳周冬生童贻刚赵宝华河北师范大学生命科学学院河北石家庄050024 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 清华大学附属北京清华长庚医院清华大学临床医学院北京102218

【背景】IncFII-FIA-FIB型质粒广泛存在于肠杆菌科细菌中,介导了许多耐药基因的水平转移,并导致细菌多重耐药问题日益严重。【目的】分析IncFII-FIA-FIB型多重耐药质粒pBTR-CTXM的基因组结构,并研究其介导大肠杆菌BTR株的耐药基因水平... 详细信息

【背景】IncFII-FIA-FIB型质粒广泛存在于肠杆菌科细菌中,介导了许多耐药基因的水平转移,并导致细菌多重耐药问题日益严重。【目的】分析IncFII-FIA-FIB型多重耐药质粒pBTR-CTXM的基因组结构,并研究其介导大肠杆菌BTR株的耐药基因水平转移机制。【方法】利用PCR进行耐药基因筛查;接合转移和电转化实验验证质粒pBTR-CTXM是否具备自主接合转移的特性;VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定及药敏分析仪测定相关菌株对抗生素的药物敏感性;构建MatePair文库并进行细菌全基因组高通量测序和质粒结构基因组学分析。【结果】菌株BTR是携带blaNDM-1、blaCTX-M-15、blaTEM、qnrD、qnrS1、mph(A)、erm(B)和tetA(B)等耐药基因的多重耐药大肠杆菌,其中blaCTX-M-15、mph(A)、erm(B)和tet A(B)等耐药基因均位于大小为144 939 bp的质粒p BTR-CTXM (GenBank登录号MF156697)上,该质粒可与菌株BTR内质粒pNDM-BTR接合共转移到受体菌大肠杆菌EC600中。pBTR-CTXM具备IncFII-FIA-FIB型质粒典型的骨架区结构,其多重耐药(Multidrug-resistant,MDR)区由新的复合型转座子Tn6492、Tn2残余、Tn10残余、ISEcp1-blaCTX-M-15-Δorf477转座单元和一些插入序列组成。【结论】pBTR-CTXM中新复合型转座子Tn6492与Tn10残余和ISEcp1-blaCTX-M-15-Δorf477转座单元共同介导大肠杆菌BTR株的多重耐药与耐药基因的水平传播。

关键词：大肠杆菌 IncFII-FIA-FIB型质粒 pBTR-CTXM Tn6492 多重耐药

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PB1样铜绿假单胞菌噬菌体PHW2的生物学特性

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微生物学通报 2021年第9期48卷 3205-3217页

作者：吴芷莹金泽源李万霞曾飞朱明卓陈少贤彭文仪徐艳萍童贻刚柏琴琴南华大学衡阳医学院公共卫生学院卫生检验与检疫系湖南衡阳421001 北京化工大学生命科学与技术学院北京100029 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

【背景】铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一种引起医院感染、急性感染和慢性感染的常见条件致病菌。多重耐药铜绿假单胞菌仍然是引起严重医院感染的常见病菌,其临床治疗面临严峻挑战。噬菌体具有特异性杀菌的能力,在防治铜绿假... 详细信息

【背景】铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一种引起医院感染、急性感染和慢性感染的常见条件致病菌。多重耐药铜绿假单胞菌仍然是引起严重医院感染的常见病菌,其临床治疗面临严峻挑战。噬菌体具有特异性杀菌的能力,在防治铜绿假单胞菌耐药菌方面具有应用前景。【目的】分离能裂解碳青霉烯类耐药的铜绿假单胞菌的噬菌体,分析其生物学特性和基因组特征,为噬菌体治疗储备资源。【方法】采集环境水样,用双层琼脂平板法分离噬菌体,对其形态、一步生长曲线、感染复数等生物学特性进行研究;使用IlluminaMiSeq平台测定噬菌体的全基因组序列,利用Newbler3.0、GeneMarkS、BLASTp、Mauve2.4.0等生物信息软件进行拼接、注释和比较基因组学分析。【结果】分离到一株噬菌体PHW2,该噬菌体属肌尾病毒科成员,可裂解7株碳青霉烯类耐药的铜绿假单胞菌;其最佳感染复数为0.1。一步生长曲线结果显示,其感染宿主菌PA001的潜伏期为100 min,裂解期为360 min,裂解量为25 PFU/cell;噬菌体PHW2在温度25-50℃和pH 6.0-8.0范围内稳定;紫外照射7 min后PHW2活性明显下降;5%氯仿处理100 min内,PHW2仍保持较高的活性。噬菌体PHW2的基因组长65984 bp,GC含量为55.69%,编码92个ORFs,不含tRNA。基因组比对结果显示PHW2与PB1样噬菌体高度相似。体外生物被膜抑制试验和清除试验结果显示,噬菌体PHW2能显著抑制宿主菌PA001形成的生物被膜并破坏24 h内形成的生物被膜。【结论】分离鉴定了一株新的PB1样噬菌体PHW2,对碳青霉烯类耐药的铜绿假单胞菌裂解能力强。生物学特性、基因组特征、体外生物被膜抑制试验和清除试验结果表明该噬菌体具有治疗铜绿假单胞菌耐药菌的潜力。

关键词：铜绿假单胞菌 PB1样噬菌体生物学特性全基因组分析

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表达CTLA4抗体的重组流感病毒构建及溶瘤效果研究

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免疫学杂志 2019年第5期35卷 444-450页

作者：董锁花王立朋程晋霞杨晓岚孙芳段跃强王希良包金风杨鹏辉内蒙古医科大学基础医学院中国人民解放军66400部队医院普通外科军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所/病原微生物与生物安全国家重点实验室解放军总医院第五医学中心

目的拯救表达免疫检查点CTLA4抗体的重组流感病毒,全面鉴定并体内外实验评价其溶瘤效果。方法利用流感病毒反向遗传学(reverse genetics,RG)技术,以A/Puerto Rico/8/34(PR8)为载体,分别在PR8病毒PB1和PA基因片段插入免疫检查点CTLA4抗... 详细信息

目的拯救表达免疫检查点CTLA4抗体的重组流感病毒,全面鉴定并体内外实验评价其溶瘤效果。方法利用流感病毒反向遗传学(reverse genetics,RG)技术,以A/Puerto Rico/8/34(PR8)为载体,分别在PR8病毒PB1和PA基因片段插入免疫检查点CTLA4抗体的重链和轻链构建重组质粒pFlu-CTLA4-PB1、pFlu-CTLA4-PA,与PR8病毒的其余6个质粒pHW191-PB2、pHW194-HA、pHW195-NP、pHW196-NA、pHW197-M、pHW198-NS共转染COS-Ⅰ和MDCK细胞,经拯救、筛选、鉴定获得重组溶瘤流感病毒,命名为rFlu-muCTLA4。通过血凝试验、EID_(50)、PCR等方法全面鉴定;ELISA测定anti-CTLA4抗体含量;3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulphophenyl)-2H-tetrazolium 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5(MTS)细胞活力测定重组病毒对小鼠肝癌H22细胞的杀伤效果;利用小鼠肝癌模型,评价重组病毒在体内对肿瘤的抑制效果。结果 rFlu-muCTLA4的血凝效价为2~9～2^(10),且能够在鸡胚中稳定传代;EID_(50)为10^(-8)EID_(50)/ml;重组病毒的PB1、PA片段与预期大小一致;重组病毒接种鸡胚培养2 d可检测到anti-CTLA4抗体,4天达到高峰值。MTS结果显示,rFlu-muCTLA4能特异性杀伤H22细胞活力,呈现剂量依赖性。动物实验表明,重组病毒能显著减小小鼠肝癌肿瘤体积,提高动物存活率并延长存活时间。结论表达免疫检查点CTLA4抗体的重组流感病毒rFlu-muCTLA4在体内外能靶向杀伤肝癌细胞,有望为溶瘤病毒靶向治疗肝癌提供新的思路。

关键词：溶瘤病毒免疫检查点抑制剂细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4

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加强我国Q热的防控

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寄生虫与医学昆虫学报 2020年第4期27卷 258-263页

作者：熊小路焦俊温博海军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所微生物生物安全国家重点实验室北京100071

Q热是一种重要的人兽共患病,其病原体为贝氏柯克斯体,Q热自然疫源地在我国广泛分布。贝氏柯克斯体在蜱经期和经卵垂直传播,携带贝氏柯克斯体的蜱叮咬野生动物或家畜,引起动物感染;感染动物将贝氏柯克斯体大量排出污染环境,导致人Q热发... 详细信息

Q热是一种重要的人兽共患病,其病原体为贝氏柯克斯体,Q热自然疫源地在我国广泛分布。贝氏柯克斯体在蜱经期和经卵垂直传播,携带贝氏柯克斯体的蜱叮咬野生动物或家畜,引起动物感染;感染动物将贝氏柯克斯体大量排出污染环境,导致人Q热发生或暴发流行,因此,加强我国Q热的防控很有必要。

关键词： Q热贝氏柯克斯体预防与控制

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制霉菌素引起的肠道菌群失衡及代谢物水平的变化

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军事医学 2021年第5期45卷 363-366页

作者：宫赛赛孙娅坤李佳佳高洁南楠罗德炎王慧军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研究广谱抗真菌药对肠道菌群平衡改变及代谢产物的影响。方法选用C57BL/6雌性小鼠,用含广谱抗真菌药制霉菌素饮用水喂养7 d,分离小鼠血清进行代谢组学分析。分离口服制霉菌素7 d后小鼠结肠内容物,提取肠道菌群基因组进行16S rDNA扩... 详细信息

目的研究广谱抗真菌药对肠道菌群平衡改变及代谢产物的影响。方法选用C57BL/6雌性小鼠,用含广谱抗真菌药制霉菌素饮用水喂养7 d,分离小鼠血清进行代谢组学分析。分离口服制霉菌素7 d后小鼠结肠内容物,提取肠道菌群基因组进行16S rDNA扩增子测序、构建SMRT Bell文库,利用PacBio公司SMRT分析软件进行操作分类单元(OTU)物种注释。通过PCoA和PCA、NMDS等降维图和样品聚类树分析群落结构差异,选用t检验、MetaStat、LEfSe、Anosim和MRPP等方法对物种组成和群落结构进行差异显著性检验。结果结肠内容物菌群基因组测序结果表明,微生物多样性分析显示制霉菌素降低肠道菌群多样性;与对照组比较,服药组硬壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)细菌增加;拟杆菌门(Bacteroidetes)、糖杆菌门(Saccharobacteria)细菌丰度降低;血清代谢组检测结果显示,服药组增加的物质包括葡萄糖、甘氨酸、丙氨酸、4-羟基丁酸、亮氨酸、谷氨酰胺,降低的物质为谷氨酸、乳酸。结论小鼠肠道菌群稳态的改变可能与连续服用制霉菌素有关,厚壁菌门和拟杆菌门等优势菌种的变化明显,而且瘤胃菌群、毛螺菌科及拟杆菌群在两组之间结构差异显著,导致谷氨酸、亮氨酸等氨基酸代谢增加,而糖类代谢减慢。

关键词：肠道微生物组肠道菌群制霉菌素代谢组

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鼠疫耶尔森菌铁转运系统研究进展

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军事医学 2021年第11期45卷 868-872页

作者：陈雨露宋凯焦扬宋亚军军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

几乎所有的生物均需要微量的铁。从宿主体内获取铁是病原菌在致病过程中的关键步骤。目前,铁获取机制的重要性已在许多致病菌中得到证实。鼠疫耶尔森菌(简称鼠疫菌)为A类生物恐怖细菌,可导致人类腺鼠疫、肺鼠疫及败血症鼠疫等。与大多... 详细信息

几乎所有的生物均需要微量的铁。从宿主体内获取铁是病原菌在致病过程中的关键步骤。目前,铁获取机制的重要性已在许多致病菌中得到证实。鼠疫耶尔森菌(简称鼠疫菌)为A类生物恐怖细菌,可导致人类腺鼠疫、肺鼠疫及败血症鼠疫等。与大多数细菌一样,鼠疫菌也能编码多种铁摄取系统,这些系统在其生长繁殖和致病性方面均发挥着重要作用,是其不可或缺的毒力因子。该文综述了近年来鼠疫菌的铁摄取系统及其在致病过程中的作用研究进展。

关键词：鼠疫耶尔森菌铁摄取系统耶尔森杆菌素鼠疫

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带荧光标签的产气荚膜梭菌ε毒素融合蛋白纯化及特性鉴定

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军事医学 2022年第10期46卷 744-748页

作者：郭子槊吕若梅黄静柳婷婷陈铭康琳王景林辛文文军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的表达纯化带eGFP和mScarlet标签的产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)ε毒素(ETX),鉴定ETX的毒素特性。方法在大肠杆菌中表达带eGFP和mScarlet标签的ETX融合蛋白,镍柱纯化蛋白;用MTS法测定带不同标签ETX的毒性;用共聚焦显微镜... 详细信息

目的表达纯化带eGFP和mScarlet标签的产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)ε毒素(ETX),鉴定ETX的毒素特性。方法在大肠杆菌中表达带eGFP和mScarlet标签的ETX融合蛋白,镍柱纯化蛋白;用MTS法测定带不同标签ETX的毒性;用共聚焦显微镜观察mScarlet-ETX与HaCaT细胞、HEKa细胞和不同物种红细胞的结合情况。结果成功表达带eGFP和mScarlet标签的ETX融合蛋白,纯化后得到纯度较高的eGFP-ETX和mScarlet-ETX融合蛋白。通过细胞毒实验,证实eGFP-ETX毒素与未加荧光标签的His-ETX相比毒性减弱,mScarlet-ETX毒素与His-ETX毒性基本一致,确定了eGFP-ETX和mScarlet-ETX的最佳荧光值。将mScarlet-ETX应用于HaCaT细胞和HEKa细胞,观察到mScarlet-ETX与HaCaT细胞、HEKa细胞结合,证实HaCaT细胞、HEKa细胞对ETX敏感。将mScarlet-ETX应用于人、小鼠和兔红细胞,mScarlet-ETX只与人红细胞结合。结论 mScarlet-ETX具有良好的毒素活性,可应用于对ETX毒性研究的多个方面。

关键词：产气荚膜梭菌 ε毒素 eGFP标签 mScarlet标签融合蛋白

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lncRNA XLOC006926抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

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免疫学杂志 2018年第5期34卷 412-420页

作者：樊红霞程思杰赵玲娜王科宇严锦刘思齐牛燕张绍庚任明姬杨鹏辉内蒙古医科大学基础医学院呼和浩特010059 中国人民解放军第三0二医院肝胆外科中心北京100039 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所/病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071

目的探讨lnc RNA XLOC006926调控肝癌细胞增殖和转移机制,结合肝癌患者临床病理特征,分析其临床意义。方法利用实时荧光定量PCR方法检测lnc RNA XLOC006926在肝癌细胞系及肝癌患者配对(癌、癌旁)组织(n=88)中的表达水平。进一步通过CCK-... 详细信息

目的探讨lnc RNA XLOC006926调控肝癌细胞增殖和转移机制,结合肝癌患者临床病理特征,分析其临床意义。方法利用实时荧光定量PCR方法检测lnc RNA XLOC006926在肝癌细胞系及肝癌患者配对(癌、癌旁)组织(n=88)中的表达水平。进一步通过CCK-8、克隆形成、划痕及transwell实验检测过表达或抑制lnc RNA XLOC006926对细胞增殖、迁移和侵袭的影响,同时结合临床信息统计分析其与临床病理特征及患者预后的相关性。结果 lnc RNA XLOC006926在肝癌细胞及肝癌组织中的表达显著降低,过表达lnc RNA XLOC006926后肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力降低,相反抑制lnc RNA XLOC006926后肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力增强。结合患者临床信息分析,lnc RNA XLOC006926的表达量与肿瘤大小(P=0.007)、PVTT(P=0.024)具有显著相关性,其低表达预示着预后较差。结论 lnc RNA XLOC006926在肝癌发生发展中发挥了重要作用,参与调节肝癌细胞的增殖及迁移,有望成为肝癌发生发展的生物标志物和肝癌预防治疗的新靶点。

关键词：肝癌长链非编码RNA 增殖迁移侵袭

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