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中国海洋大学学报（自然科学版） 2011年第3期41卷 37-42页

作者：李晨黄倢谢国驷赵培王秀华农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所山东青岛266071 上海海洋大学水产与生命学院上海200090

根据水产养殖中常见的3种病原菌鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)及迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)的研究资料,筛选3个毒力相关基因toxR、aerA、evpA设计引物和探针,构建简型基因芯片,并使用对虾... 详细信息

根据水产养殖中常见的3种病原菌鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)及迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)的研究资料,筛选3个毒力相关基因toxR、aerA、evpA设计引物和探针,构建简型基因芯片,并使用对虾白斑病综合征病毒(WSSV)variable region的PCR荧光标记产物作为表面化学质控。通过已构建和优化的多重PCR反应条件,获得了3个目的基因的PCR产物;经过芯片制作过程的优化,将探针以终浓度20μmol/L溶于50%DMSO,在室温、相对湿度45%的条件下点印于醛基基片表面。扩增的PCR产物与杂交液混合后,在42℃杂交2 h就可检测到理想的杂交信号。芯片的灵敏度试验结果表明,可以检测到的3种水产病原菌的最低模板DNA为:鳗弧菌3×102拷贝、嗜水气单胞菌5×103拷贝、迟缓爱德华氏菌6×101拷贝。该芯片可成功应用于患病大菱鲆内脏的细菌分离物的鉴定。

关键词：基因芯片水产病原菌检测

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4个地理群体魁蚶(Scapharca broughtonii)的形态差异与判别分析

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海洋科学 2011年第11期35卷 108-113页

作者：梁超杨爱国刘志鸿周丽青吴彪农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所山东青岛266071 上海海洋大学水产与生命学院上海200090

运用多变量形态度量学分析方法对韩国统营、山东黄岛、山东蓬莱、江苏前三岛4个地理区域的魁蚶(Scapharca broughtonii Schrenck)种群间的形态变异进行了研究。单因素方差分析(ANOVA)和Tukey检验表明,魁蚶不同地理种群表现出显著形态变... 详细信息

运用多变量形态度量学分析方法对韩国统营、山东黄岛、山东蓬莱、江苏前三岛4个地理区域的魁蚶(Scapharca broughtonii Schrenck)种群间的形态变异进行了研究。单因素方差分析(ANOVA)和Tukey检验表明,魁蚶不同地理种群表现出显著形态变异(P<0.05)。聚类分析结果表明,黄岛和前三岛两个种群形态最为接近,首先聚为一类,然后与韩国种群聚类,再与蓬莱种群聚类;主成分分析构建了3个主成分,其贡献率PC1为33.366%,PC2为20.407%,PC3为15.422%,3个主成分累计方差贡献率为69.195%;建立了魁蚶4个种群的判别函数,其判别准确率分别为韩国通营96.4%,山东蓬莱100%,山东黄岛84.3%,江苏前三岛95.6%。这些数据可为魁蚶不同地理种群的识别、种质资源的可持续利用及保护提供依据。

关键词：魁蚶Scapharca broughtonii 形态变异方差分析主成分分析聚类分析判别分析

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利用叶绿素荧光技术揭示光照、温度和盐度对鼠尾藻嫩芽的影响

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海洋科学 2011年第12期35卷 21-27页

作者：梁洲瑞王飞久孙修涛汪文俊丁昌玲李涛农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所山东青岛266071 上海海洋大学水产与生命学院上海201306

采用鼠尾藻嫩芽为实验材料, 研究了不同光强（25～220 μmol/（m2·s））、温度（5～34℃）和盐度（0～60）对其叶绿素荧光参数的影响。测定的叶绿素荧光参数包括光系统II 最大荧光产量（Fv/Fm）、最大潜在相对电子传递速率（RrET,... 详细信息

采用鼠尾藻嫩芽为实验材料, 研究了不同光强（25～220 μmol/（m2·s））、温度（5～34℃）和盐度（0～60）对其叶绿素荧光参数的影响。测定的叶绿素荧光参数包括光系统II 最大荧光产量（Fv/Fm）、最大潜在相对电子传递速率（RrET,max）、快速光曲线的初始斜率等。结果表明：（1）鼠尾藻嫩芽易受强光、高温胁迫, 在强光照射下, 其Fv/Fm值明显降低, 温度大于30℃时对其光合作用有显著影响; （2）5℃低温处理1 h 或0～60 盐度处理9 h 对光系统Ⅱ均有明显影响, 但24 h 恢复后, 除了盐度60 组, 其他组的叶绿素荧光参数均可基本恢复正常。初步分析了鼠尾藻嫩芽的抗逆生理, 可为鼠尾藻的人工栽培提供参考。

关键词：鼠尾藻(Sargassum thunbergii) 胁迫条件叶绿素荧光参数

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pH胁迫对中国明对虾抗氧化系统酶活力及基因表达的影响

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中国水产科学 2011年第3期18卷 556-564页

作者：王芸李健李吉涛何玉英常志强刘德月上海海洋大学水产与生命学院上海201306 中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室山东青岛266071

研究了pH胁迫对中国明对虾Fenneropenaeus chinens＆）抗氧化系统的影响，将中国明对虾暴露于pH7．0、9．0的水体中148h，于胁迫后0、3、12、24、48、72、96、120、148h测定鳃、肝胰腺、肌肉和血淋巴总抗氧化活力（T-AOC）、抗超氧阴离... 详细信息

研究了pH胁迫对中国明对虾Fenneropenaeus chinens＆）抗氧化系统的影响，将中国明对虾暴露于pH7．0、9．0的水体中148h，于胁迫后0、3、12、24、48、72、96、120、148h测定鳃、肝胰腺、肌肉和血淋巴总抗氧化活力（T-AOC）、抗超氧阴离子活力、过氧化氢酶（CAT）活力和CAT、过氧化物还原酶（Prx）基因表达的影响，以pH8．2作为对照。结果显示，pH胁迫12～24h，对虾各组织T-AOC、抗超氧阴离子、CAT酶活力及CAT基因表达均增加，pH胁迫120~148h上述指标受到抑制。对虾肝胰腺和肌肉P麒基因表达随胁迫时间增加逐渐升高，鳃和血淋巴Prx基因表达随胁迫时间增加呈下降趋势。高pH（9．0）胁迫时，对虾鳃抗氧化系统酶活力及基因表达水平达峰时问较其他3个组织明显缩短；而低pH（7．0）胁迫时，对虾肝胰腺抗氧化系统酶活力比其他组织变化快。实验结果表明，pH胁迫3～24h对中国明对虾抗氧化系统酶活力及相关基因表达有一定的诱导效果，但胁迫120～148h则抑制其抗氧化系统功能，可能会导致中国明对虾机体的氧化损伤；中国明对虾鳃和肝胰腺分别对高、低pH胁迫较敏感。

关键词：中国明对虾 pH胁迫总抗氧化能力抗超氧阴离子能力过氧化氢酶过氧化物还原酶

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栉孔扇贝、虾夷扇贝及其杂交子代的群体遗传多样性分析

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中国水产科学 2011年第3期18卷 574-580页

作者：于涛杨爱国周丽青吴彪刘志鸿农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所山东青岛266071 上海海洋大学水产与生命学院上海201306

采用扩增片段长度多态性(Amplified Fragment Length Polymorphism,AFLP)标记对栉孔扇贝(Chlamys farreri,♀)、虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis,♂)及其F1群体的遗传多样性进行分析。5对引物组合共扩增得到315个位点,其中311个为多态位点,总的多态位点比例为98.73%。栉孔扇贝、虾夷扇贝及其F1群体的Shannon信息指数分别为0.477 1±0.260 6、0.423 9±0.277 7、0.548 8±0.220 9;3个群体的Nei’s基因多样性指数分别为0.329 1±0.185 0、0.289 7±0.195 9、0.382 8±0.161 2,表明杂交子代群体的遗传多样性水平比2个亲本群体都高。栉孔扇贝与虾夷扇贝群体间的遗传距离为0.411 6,栉孔扇贝与F1群体间的遗传距离是0.131 6,虾夷扇贝与F1群体间的遗传距离是0.278 0,表明杂种子代与母本栉孔扇贝遗传距离较近。聚类分析显示,虾夷扇贝群体、栉孔扇贝群体以及F1群体的所有个体分别聚到一起,且都形成独立群体;分子方差分析(AMOVA)结果显示,变异来源有30.47%来自群体间,有69.53%来自群体内,表明群体内的遗传多样性比较丰富。杂种优势的产生与群体遗传多态性有关。

关键词：栉孔扇贝虾夷扇贝 F1 AFLP 遗传多样性杂种优势

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脊尾白虾热休克蛋白HSP70基因的克隆及其表达分析

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水产学报 2011年第8期35卷 1130-1138页

作者：韩俊英李健李吉涛常志强陈萍李华中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室大连海洋大学生命科学与技术学院

克隆了脊尾白虾热休克蛋白基因全长cDNA,并进行了序列分析。该基因由2 250 bp的碱基组成,开放阅读框长1 959 bp,编码由652个氨基酸组成的蛋白,基因两翼分别存在83 bp(5’端)和208 bp(3’端)的非翻译区,将该基因命名为Ec-HSP70。与其它物... 详细信息

克隆了脊尾白虾热休克蛋白基因全长cDNA,并进行了序列分析。该基因由2 250 bp的碱基组成,开放阅读框长1 959 bp,编码由652个氨基酸组成的蛋白,基因两翼分别存在83 bp(5’端)和208 bp(3’端)的非翻译区,将该基因命名为Ec-HSP70。与其它物种HSP70s氨基酸序列进行同源性比较发现,与甲壳动物的同源性都在90%以上,表明该蛋白属于热休克蛋白HSP70家族。聚类分析表明,脊尾白虾热休克蛋白氨基酸序列与中国明对虾和凡纳滨对虾紧密聚为一支,之后聚类顺序依次为斑节对虾、日本囊对虾、刀额新对虾等。通过荧光定量RT-PCR对该基因在肝胰腺、肌肉的表达分析表明,温度、pH和氨氮胁迫都可以引起该基因的高表达,而且肝胰腺中的高表达时间相对肌肉中出现的较早。试验结果表明,温度、pH和氨氮胁迫对脊尾白虾HSP70基因表达有一定的诱导效果,但胁迫的时间过长则抑制其表达,肝胰腺对胁迫比肌肉较敏感。

关键词：脊尾白虾热休克蛋白70 基因克隆表达分析

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pH胁迫对日本对虾非特异性免疫因子及RNA/DNA比值的影响

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渔业科学进展 2011年第1期32卷 60-66页

作者：赵先银李健李吉涛何玉英张喆常志强上海海洋大学 201306 农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛266071

研究了pH胁迫对日本对虾血清非特异性免疫因子及对虾肌肉RNA/DNA比值的影响。结果表明,低pH胁迫组(pH 7.2)和高pH胁迫组(pH 9.2)总一氧化氮合成酶(TNOS)活力分别在31、2 h时达到最大;而诱导型一氧化氮合成酶(INOS)活力在3 h时达到最大值... 详细信息

研究了pH胁迫对日本对虾血清非特异性免疫因子及对虾肌肉RNA/DNA比值的影响。结果表明,低pH胁迫组(pH 7.2)和高pH胁迫组(pH 9.2)总一氧化氮合成酶(TNOS)活力分别在31、2 h时达到最大;而诱导型一氧化氮合成酶(INOS)活力在3 h时达到最大值,随着胁迫时间的延长,酶活力逐渐降低,至72 h趋于稳定,并表现出高pH变化免疫适应能力较差的现象。两pH胁迫组酚氧化酶(PO)活力呈现峰值变化,在12 h时达到最大值,之后逐渐降低,至72 h后趋于稳定。溶菌酶(LZM)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力随着pH胁迫时间的增加而降低,同样表现出高pH变化免疫适应能力较差的现象。另外,pH胁迫条件下日本对虾的肌肉RNA/DNA比值显著低于正常对照组日本对虾肌肉的RNA/DNA比值,这可能是由于pH胁迫影响了对虾体内的物质代谢所致。

关键词： pH胁迫日本对虾非特异性免疫因子 RNA/DNA

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脊尾白虾3个野生群体线粒体COI基因的遗传多样性及其系统发育分析

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渔业科学进展 2011年第6期32卷 50-56页

作者：马朋刘萍李健李吉涛陈萍大连海洋大学 116023 农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛266071

采用PCR扩增技术对脊尾白虾的莱州湾、海洲湾、象山湾的3个野生群体共计62个个体的线粒体COI基因片段进行扩增和测序,获得长度为658bp核苷酸序列。62条序列T、C、A、G和A+T的平均含量分别为31.53%、22.63%、27.30%、18.53%和58.83%,A+T... 详细信息

采用PCR扩增技术对脊尾白虾的莱州湾、海洲湾、象山湾的3个野生群体共计62个个体的线粒体COI基因片段进行扩增和测序,获得长度为658bp核苷酸序列。62条序列T、C、A、G和A+T的平均含量分别为31.53%、22.63%、27.30%、18.53%和58.83%,A+T含量显著高于G+C含量,这一结果与甲壳类、双壳贝类等的COI线粒体基因片段中的观察结果相似。通过统计变异位点、核苷酸多样性指数和平均核苷酸差异数进行基因序列变异分析。AMOVA分析表明,3群体间总遗传分化系数Fst=0.3611(P<0.01),群体间存在较高的遗传分化,其中象山湾群体与莱州湾群体之间的遗传分化系数最高,莱州湾群体与海洲湾群体之间的遗传分化系数最低。另外用MEGA4.0软件中的NJ法构建分子进化树,同时由NCBI下载同源序列,探讨了长臂虾亚科几个种的系统进化关系,用NJ法构建的系统树显示,脊尾白虾不同单倍型先与长臂虾属和小长臂虾属聚为一支,然后与沼虾属聚为一支。

关键词：脊尾白虾野生群体 COI基因遗传多样性系统进化

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脊尾白虾热休克蛋白HSP90基因的原核表达与鉴定

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渔业科学进展 2011年第5期32卷 44-50页

作者：韩俊英李健李吉涛陈萍李华大连海洋大学 116023 农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛266071

将脊尾白虾热休克蛋白90基因克隆到原核表达载体pET-30a中,经酶切验证和DNA测序鉴定后,将重组质粒转化表达宿主大肠杆菌Rosetta,优化温度、时间、IPTG和OD600表达条件进行诱导表达,收集菌液,进行SDS-PAGE和质谱检测,并用Quantity one软... 详细信息

将脊尾白虾热休克蛋白90基因克隆到原核表达载体pET-30a中,经酶切验证和DNA测序鉴定后,将重组质粒转化表达宿主大肠杆菌Rosetta,优化温度、时间、IPTG和OD600表达条件进行诱导表达,收集菌液,进行SDS-PAGE和质谱检测,并用Quantity one软件分析蛋白表达水平。结果表明,成功构建了含脊尾白虾HSP90基因的重组表达载体pET-30a-HSP90,表达目的蛋白相对分子量为82.7kD,为HSP90蛋白。通过条件优化认为重组菌株Rosetta/pET-30a-HSP90的最佳诱导温度为37℃,最佳IPTG浓度为1.0mmol/L,最佳诱导时机和诱导时间分别为0.58h、7h。

关键词：脊尾白虾热休克蛋白90 原核表达

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WSSV-VP37小肽在大肠杆菌中的偏爱型表达

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渔业科学进展 2011年第2期32卷 96-101页

作者：仇知光刘庆慧黄倢农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛266071 青岛农业大学 266109

选用对虾白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)囊膜蛋白VP37的功能区段,利用大肠杆菌密码子偏爱性,在氨基酸不变的情况下将VP37中的密码子通过人工合成改为大肠杆菌偏爱型密码子,并克隆至表达载体pBAD/gIIIA中,构成重组载体p... 详细信息

选用对虾白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)囊膜蛋白VP37的功能区段,利用大肠杆菌密码子偏爱性,在氨基酸不变的情况下将VP37中的密码子通过人工合成改为大肠杆菌偏爱型密码子,并克隆至表达载体pBAD/gIIIA中,构成重组载体pBAD/gIIIA-VP37p′。将重组载体转化入大肠杆菌Top10中,在相同条件下用L-阿拉伯糖与未优化的重组菌株Top10-pBAD/gIIIA-VP37p一同诱导。结果显示,与野生型基因VP37p相比,经密码子优化的VP37p′基因表达目的蛋白量占总蛋白的40.5%,明显高于野生型6.5%的目的蛋白表达量。

关键词：偏爱密码子 VP37 大肠杆菌表达

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