检索结果-内蒙古大学图书馆

佐剂及其在基因免疫研究中的应用

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中国兽医科技 2005年第4期35卷 315-321页

作者：郭慧琛孙世琪刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

论述了免疫佐剂的作用机理及细胞因子、CpGDNA、化学佐剂、共刺激信号分子、化学因子、黏附分子等佐剂在基因疫苗中的应用概况,并对免疫佐剂在基因疫苗中的应用前景进行了展望。

关键词：佐剂基因疫苗免疫

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用原位杂交对BHK-21细胞中的FMDV定位和检测

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畜牧兽医学报 2005年第11期36卷 1170-1173页

作者：邵军军常惠芸林彤丛国正独军政谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

为了明确FMDV在细胞内的增殖部位,建立检测细胞内低拷贝FMDV的方法,对试验接种FMDV O/Akesu/58(107TCID50)毒株的BHK-21细胞中2～10 h不同时间段的病毒RNA进行检测和定位.选用FMDVRNA非结构蛋白区3D保守序列作为寡核苷酸探针,采用尾段... 详细信息

为了明确FMDV在细胞内的增殖部位,建立检测细胞内低拷贝FMDV的方法,对试验接种FMDV O/Akesu/58(107TCID50)毒株的BHK-21细胞中2～10 h不同时间段的病毒RNA进行检测和定位.选用FMDVRNA非结构蛋白区3D保守序列作为寡核苷酸探针,采用尾段标记法以地高辛-11-dUTP标记,用原位杂交敏感加强型试剂盒检测杂交体.结果显示,从感染FMDV后2～10 h内的BHK-21细胞中检测出阳性染色的病毒粒子,这些病毒粒子大多集中在核周围,随感染时间延长阳性染色信号增强.这说明用寡核苷酸探针与敏感加强型试剂盒结合对检测细胞内低拷贝的病毒粒子是可行的,同时也从分子水平上证明FMDV主要在细胞质中进行复制和繁殖.

关键词：原位杂交 FMDV 探针 BHK-21

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口蹄疫病毒O/China/99株多基因植物组成型表达载体的构建及序列分析

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中国人兽共患病杂志 2005年第10期21卷 841-844,905页

作者：潘丽张永光王永录王宝琴王文秀方玉珍蒋守田张维德董金杰吕建亮谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

目的构建包含FMDV结构蛋白P1、非结构蛋白2A、3C以及部分2B的基因片段P12X3C的植物组成型表达载体,为FMDV可饲疫苗的研制奠定基础。方法通过PCR扩增法,从pGEM/P12A质粒和pGEM/3C质粒中扩增P12A及部分2B基因(P12X)、3C基因,将获得的P12X... 详细信息

目的构建包含FMDV结构蛋白P1、非结构蛋白2A、3C以及部分2B的基因片段P12X3C的植物组成型表达载体,为FMDV可饲疫苗的研制奠定基础。方法通过PCR扩增法,从pGEM/P12A质粒和pGEM/3C质粒中扩增P12A及部分2B基因(P12X)、3C基因,将获得的P12X与3C片段经BamHI/SpeI和SpeI/SalI双酶切后,与经BamHI/SalI双酶切后的pUC18质粒大片段连接,得到重组质粒pUC18/P12X3C,pUC18/P12X3C质粒经BamHI/SalI双酶切后的大片段与经同样双酶切的植物表达载体pBin438连接,转化子经酶切、PCR及测序鉴定后,获得包含FMDV O/China/99株P12X3C片段的植物组成型表达载体pBin438/P12X3C,最后通过三亲交配法,将表达载体pBin438/P12X3C导入农杆菌。结论成功构建FMDV多基因的植物组成型表达载体。

关键词：口蹄疫病毒 O/China/99株多基因植物组成型表达载体基因序列可饲疫苗

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我国水稻黑条矮缩病和玉米粗缩病研究进展

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植物保护学报 2005年第1期32卷 97-103页

作者：陈声祥张巧艳浙江省农业科学院农业部病毒学与生物技术重点开放实验室杭州310021

上世纪60年代初我国华东和华北地区分别发现了水稻黑条矮缩病和玉米粗缩病,后来都分别发生了2次大流行,同时都以病害防治为目标分别开展了研究,探明了当地病害发生规律,提出了相应的防治方法,获得了不同程度的防病效果。80年代以来,水... 详细信息

上世纪60年代初我国华东和华北地区分别发现了水稻黑条矮缩病和玉米粗缩病,后来都分别发生了2次大流行,同时都以病害防治为目标分别开展了研究,探明了当地病害发生规律,提出了相应的防治方法,获得了不同程度的防病效果。80年代以来,水稻黑条矮缩病的发生报道仅限于华东地区局部地市,玉米粗缩病的发生涉及华北、东北、西北、西南和华中地区13个省市。根据各地对两病病原形态、寄主及症状、介体昆虫及传病特性等方面相似性的报道,提出了我国玉米粗缩病与水稻黑条矮缩病病原异同性问题。经近10年来对两病用生物学和分子生物学方法进行比较鉴定,证明我国玉米粗缩病和水稻黑条矮缩病病原同属水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)。同时基本探明了水稻黑条矮缩病在浙江杂交稻区和华北玉米区的再次流行成灾的原因,提出了相应的防治措施.并有效地控制了病害的流行危害。

关键词：玉米粗缩病研究进展水稻黑条矮缩病毒分子生物学方法病害发生规律 60年代病害防治防治方法防病效果 80年代华东地区华中地区病原形态介体昆虫比较鉴定防治措施华北流行相似性寄主成灾稻区

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猪带绦虫六钩蚴cDNA文库的构建及免疫原基因的筛选与克隆

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畜牧兽医学报 2005年第4期36卷 391-396页

作者：景志忠郭爱疆海岗宗瑞谦才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒病重点开放实验室兰州730046

研究避开庞大的猪带绦虫基因组DNA,以构建六钩蚴发育阶段的cDNA表达文库为策略,利用pSPORT1质粒表达载体首次成功构建了表达文库。经库容量、重组率和代表性测定,库容量达5.0×106,重组率100%,用特异性引物能扩增出六钩蚴发育阶段1... 详细信息

研究避开庞大的猪带绦虫基因组DNA,以构建六钩蚴发育阶段的cDNA表达文库为策略,利用pSPORT1质粒表达载体首次成功构建了表达文库。经库容量、重组率和代表性测定,库容量达5.0×106,重组率100%,用特异性引物能扩增出六钩蚴发育阶段10ku基因、18ku基因和45W基因家族的A型、B型、C型转录本,说明文库质量高,代表性强。应用快速筛选质粒表达文库和克隆免疫原基因的技术,成功地筛选和克隆到TsO1基因,其完整阅读框架(ORF)为393bp。将其登录到GenBank(AY327451),经BLAST分析,证实是猪带绦虫六钩蚴发育阶段的1个新免疫原基因。

关键词：猪带绦虫六钩蚴免疫原 cDNA文库克隆构建 cDNA表达文库基因组DNA 发育阶段质粒表达载体特异性引物 BLAST 基因家族快速筛选库容量代表性重组率转录本

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免疫层析快速诊断试纸条在动物疾病诊断中的应用

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中国动物检疫 2005年第8期22卷 43-45页

作者：吴海波邵军军常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

免疫层析(immunochromatography，IC)是20世纪80年代初期发展出来的一种独特的免疫分析方法．它是在免疫渗滤技术基础上建立的一种简单快速的免疫学检测技术，由Beggs等(1990)最先用于人绒毛膜促性腺激素(HCG)的测定。到了90年代．该技... 详细信息

免疫层析(immunochromatography，IC)是20世纪80年代初期发展出来的一种独特的免疫分析方法．它是在免疫渗滤技术基础上建立的一种简单快速的免疫学检测技术，由Beggs等(1990)最先用于人绒毛膜促性腺激素(HCG)的测定。到了90年代．该技术又与单克隆抗体技术和新材料技术相结合．发展了一项新型体外诊断技术-免疫层析快速诊断试纸条．

关键词：免疫层析快速诊断试纸条动物疾病诊断技术原理

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猪圆环病毒II型结构蛋白的二级结构及其B细胞抗原表位预测

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中国预防兽医学报 2005年第6期27卷 462-464页

作者：刘光清倪征云涛梁华丽华炯刚李双茂杜清云浙江省农业科学院农业部病毒学与生物技术重点开放实验室浙江杭州310021

本研究以猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)II型的基因组序列为材料,采用Garnier-Robson方法、Chou-Farplus方法和Karplus-Schulz方法预测了其结构蛋白的二级结构,用Kyte-Doolittle方法对结构蛋白的亲水性进行了分析,用Emini方法预测了结构蛋白的表面可能性,以Jameson-Wolf方法预测了蛋白的抗原指数。然后综合评价了PCV-2型结构蛋白的B细胞抗原表位。结果表明,PCV-2结构蛋白形成α螺旋结构的能力较差,但是该蛋白含有较多的β折叠和转角结构,因而该蛋白具有丰富的二级结构。分析结果还表明结构蛋白具有多处抗原指数较高的区段,其中羧基端含有潜在的B细胞优势抗原表位,因此其在免疫学中的地位也应当引起重视。本研究将为猪圆环病毒的反向疫苗学的研究提供一定的理论依据。

关键词：口蹄疫病毒结构蛋白 B细胞表位二级结构

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牛朊蛋白单氨基酸变异体的原核表达

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中国兽医科技 2005年第4期35卷 245-250页

作者：陈建华吴润刘湘涛陈豪泰甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

应用pGEX原核表达载体构建了牛朊蛋白的1个正常重组蛋白和3个单氨基酸变异体的原核表达质粒,即pGEX-BoPrP(93～241)、pGEX-BoPrP(93～241)(S154N)、pGEX-BoPrP(93～241)(A129V)和pGEX-BoPrP(93～241)(Q234R).经转化*** BL21(DE3),均表达了预期大小约为42.4 ku的融合蛋白.在优化的诱导表达条件下,各重组菌可产生表达量占细菌总蛋白量30%～45%的融合蛋白.经免疫印迹检查,所有融合蛋白均可与抗牛单克隆抗体4C11反应.表明,单氨基酸突变并不影响单抗4C11的识别表位.

关键词：氨基酸变异体朊蛋白牛原核表达质粒表达载体构建 E.coli 融合蛋白单克隆抗体重组蛋白表达条件免疫印迹蛋白量表达量重组菌表位单抗

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猪瘟病毒E2重组蛋白纯化和复性条件的研究

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中国兽医科技 2005年第4期35卷 251-255页

作者：胡慧邱昌庆张彦明中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100

对猪瘟病毒(CSFV) C株、LT株E2基因主要抗原区在pGEX系列表达载体中原核表达的融合蛋白进行了变性、复性和纯化回收试验。用建立的变性、复性和纯化方法,获得了可溶性的纯化蛋白E2,其纯度达70%,回收率为10%。对复性纯化的E2蛋白进行了... 详细信息

对猪瘟病毒(CSFV) C株、LT株E2基因主要抗原区在pGEX系列表达载体中原核表达的融合蛋白进行了变性、复性和纯化回收试验。用建立的变性、复性和纯化方法,获得了可溶性的纯化蛋白E2,其纯度达70%,回收率为10%。对复性纯化的E2蛋白进行了免疫活性检测,结果表明,其比未纯化蛋白的免疫活性高20倍左右。

关键词：猪瘟病毒 E2重组蛋白包涵体复性纯化

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鹅源新城疫病毒ZJI株基因组cDNA克隆的序列修饰

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微生物学通报 2005年第6期32卷 1-6页

作者：刘玉良胡顺林张艳梅吴艳涛刘秀梵 Rmer-Oberdrfer Angela Weits Jutta Lange Martina 黄勇龙进学扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009 德国Friedrich-Lffler研究所国家动物病毒病研究中心分子生物学实验室

将鹅源新城疫病毒ZJI株全基因组cDNA克隆通过酶切切下包含T7启动子区域和转录载体的片段,将其自身环化后获得约6.5kb的质粒。设计引物,利用基因定点突变技术,在此质粒上T7启动子与NDV Leader序列之间突变插入额外的3个G碱基,将此突变最... 详细信息

将鹅源新城疫病毒ZJI株全基因组cDNA克隆通过酶切切下包含T7启动子区域和转录载体的片段,将其自身环化后获得约6.5kb的质粒。设计引物,利用基因定点突变技术,在此质粒上T7启动子与NDV Leader序列之间突变插入额外的3个G碱基,将此突变最终引入到原基因组cDNA克隆中。应用RT-PCR技术从尿囊液中扩增NDV基因组F/HN基因区域部分片段,利用限制性内切酶BsmB I将扩增片段连接,最终将原cDNA克隆中相应片段替换下。测序结果表明,原基因组cDNA克隆中特定位置碱基插入突变成功,F/HN基因区域碱基突变均得以纠正。以上cDNA克隆的修饰与替换为该毒株的反向遗传研究打下了基础。

关键词：鹅源新城疫病毒基因定点突变基因组cDNA克隆改造

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