检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2012年第6期28卷 726-736页

作者：王慧芦广庆杨宝鹏王帆喻其林徐宁程欣欣邢来君李明春南开大学微生物学系、分子微生物学与技术教育部重点实验室天津300071 农业部环境保护科研监测所天津300191

CCH1和MID1基因编码的钙闸门是外源钙进入细胞内的重要通道,Ca2+作为细胞内重要的第2信使分子,其浓度的升高可激活相应的途径参与各种细胞反应过程。该研究将利用钙通路CCH1和MID1基因的单缺失菌株,并构建其相应的回补菌株,研究CCH1或M... 详细信息

CCH1和MID1基因编码的钙闸门是外源钙进入细胞内的重要通道,Ca2+作为细胞内重要的第2信使分子,其浓度的升高可激活相应的途径参与各种细胞反应过程。该研究将利用钙通路CCH1和MID1基因的单缺失菌株,并构建其相应的回补菌株,研究CCH1或MID1基因缺失后对白念珠菌药物耐受性和致病性的影响作用。通过药物平板敏感性试验和微量液基稀释法比较不同菌株对唑类药物敏感性的变化,进一步添加钙通道阻滞剂和钙离子螯合剂来分析钙离子浓度变化对药物作用的影响,结果发现CCH1或MID1基因的缺失明显对氟康唑和伊曲康唑表现出敏感性,且药物作用受到钙离子浓度变化的调节。最后建立小鼠感染模型分析不同菌株的毒力变化差异,确定CCH1或MID1基因的缺失显著减弱了白念珠菌的致病性。

关键词：白念珠菌 CCH1 MID1 药物耐受性致病性

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一种改进的丝状真菌DNA提取方法

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微生物学通报 2008年第3期35卷 466-469页

作者：张颖慧魏东盛邢来君李明春南开大学微生物学系分子微生物学与技术教育部重点实验室天津300071

以丝状真菌雅致枝霉(Thamnidium elegans)和深黄伞形霉(Umbelopsis isabellina)为材料,使用优化的CTAB法提取基因组DNA。改进后的方法使用液氮冻融以及玻璃珠振荡的方法代替了传统的液氮研磨,所需菌体量少,而得到的基因组DNA比用传统的C... 详细信息

以丝状真菌雅致枝霉(Thamnidium elegans)和深黄伞形霉(Umbelopsis isabellina)为材料,使用优化的CTAB法提取基因组DNA。改进后的方法使用液氮冻融以及玻璃珠振荡的方法代替了传统的液氮研磨,所需菌体量少,而得到的基因组DNA比用传统的CTAB法得到的基因组DNA产率高、纯度好、且步骤简单,适用于一次微量提取多个样品的基因组DNA。这种方法得到的基因组DNA可用于大部分分子生物学基本实验如PCR和DNA的酶切等。

关键词： DNA提取 CTAB 玻璃珠液氮冻融

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三角褐指藻△^5-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及在酿酒酵母中的表达

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生物工程学报 2009年第2期25卷 195-199页

作者：杨哲魏东盛邢来君李明春南开大学微生物学系分子微生物学与技术教育部重点实验室天津300071

△5-脂肪酸脱氢酶是合成花生四烯酸的关键酶。根据已报道的△5-脂肪酸脱氢酶基因设计引物,分别从三角褐指藻基因组DNA和总cDNA中扩增得到1520 bp和1410 bp的特异片段,序列分析结果显示,结构基因中含有一个大小为110 bp的内含子,这是国... 详细信息

△5-脂肪酸脱氢酶是合成花生四烯酸的关键酶。根据已报道的△5-脂肪酸脱氢酶基因设计引物,分别从三角褐指藻基因组DNA和总cDNA中扩增得到1520 bp和1410 bp的特异片段,序列分析结果显示,结构基因中含有一个大小为110 bp的内含子,这是国内外首次报道。将△5-脂肪酸脱氢酶基因亚克隆到大肠杆菌和酿酒酵母的穿梭表达载体pYES2.0中,在大肠杆菌中筛选到含有目的片段的重组质粒pYPTD5,用电击转化的方法将重组质粒pYPTD5转化到营养缺陷型酿酒酵母菌株INVSc1中,在缺省培养基中筛选得到酿酒酵母转化菌株YPTD5。在合适的培养条件下,添加外源底物双高γ-亚麻酸和诱导物半乳糖,培养并收集菌体。通过脂肪酸甲酯气相色谱分析,表明三角褐指藻△5-脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母中获得了高效的表达,将双高γ-亚麻酸转化为花生四烯酸,其底物转化率达到了45.9%。

关键词：花生四烯酸酿酒酵母功能验证

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白念珠菌的铁吸收系统及其调控

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第11期28卷 1055-1058页

作者：桂磊魏东盛邢来君李明春南开大学微生物学系分子微生物学与技术教育部重点实验室天津 300071

白念珠菌（Candida albicans）是常见的条件致病性病原体，广泛存在于人体的口咽部、胃肠道和泌尿生殖道。在人体免疫力低下时白念珠菌就会大量繁殖发展为菌丝型，侵犯组织，引起临床症状，主要表现为黏膜感染，也可通过血液散播侵犯内... 详细信息

白念珠菌（Candida albicans）是常见的条件致病性病原体，广泛存在于人体的口咽部、胃肠道和泌尿生殖道。在人体免疫力低下时白念珠菌就会大量繁殖发展为菌丝型，侵犯组织，引起临床症状，主要表现为黏膜感染，也可通过血液散播侵犯内脏器官引起多种器官的感染，如支气管和肺念珠菌病、泌尿道念珠菌病、念珠菌性脑膜炎等。许多艾滋病患者、移植患者和化疗患者的死亡往往是由于并发白念珠菌病。目前主要抗白念珠菌的药物有两性霉素B和唑类衍生物，然而这些抗真菌药物存在毒性问题和药物耐药性问题，特别对于像慢性感染的艾滋病患者，耐药性问题更为严重，因此，了解白念珠菌的致病机制，以期研发新的药物用于医治这种病原引发的疾病。

关键词：白念珠菌病吸收系统药物耐药性致病性病原体念珠菌性脑膜炎肺念珠菌病艾滋病患者调控

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白念珠菌pH应答转录因子Rim101p在大肠杆菌中的表达

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南开大学学报（自然科学版） 2011年第5期44卷 96-100页

作者：桂磊郑雯邢来君李明春南开大学微生物学系分子微生物学与技术教育部重点实验室天津300071

Rim101蛋白是白念珠菌中pH应答反应的重要转录因子.为进一步研究Rim101p的功能,采用PCR方法获得RIM101基因序列,并将其克隆入表达载体pET-21a,转化大肠杆菌表达菌BL21,通过摸索诱导条件使Rim101p在大肠杆菌中成功表达.EMSA实验结果进一... 详细信息

Rim101蛋白是白念珠菌中pH应答反应的重要转录因子.为进一步研究Rim101p的功能,采用PCR方法获得RIM101基因序列,并将其克隆入表达载体pET-21a,转化大肠杆菌表达菌BL21,通过摸索诱导条件使Rim101p在大肠杆菌中成功表达.EMSA实验结果进一步验证了重组Rim101p的活性.

关键词：白念珠菌 Rim101p EMSA

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假单胞菌合成聚合物和复杂化合物的种类及机理研究进展

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微生物学通报 2015年第3期42卷 559-567页

作者：张驰宫婷杨超孙杨左振强宋存江南开大学分子微生物学与技术教育部重点实验室天津300071

假单胞菌合成的代谢产物种类繁多。本文对假单胞菌合成的具有产业化前景或已实现产业化的藻酸盐、维生素B12、环状脂肽、吩嗪、单乙酰基间苯三酚、2,4-二乙酰基间苯三酚、鼠李糖脂以及聚羟基脂肪酸酯等六类复杂化合物或聚合物以及它们... 详细信息

假单胞菌合成的代谢产物种类繁多。本文对假单胞菌合成的具有产业化前景或已实现产业化的藻酸盐、维生素B12、环状脂肽、吩嗪、单乙酰基间苯三酚、2,4-二乙酰基间苯三酚、鼠李糖脂以及聚羟基脂肪酸酯等六类复杂化合物或聚合物以及它们合成机制的研究进展进行综述,并就上述物质合成研究的发展方向进行展望。

关键词：假单胞菌聚合物合成复杂化合物

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海藻糖合酶的分子生物学研究进展

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微生物学报 2009年第1期49卷 6-12页

作者：朱玥明张峻邢来君李明春南开大学微生物学系分子微生物学与技术教育部重点实验室天津300071 天津市林业果树研究所天津300112

海藻糖合酶能够将麦芽糖转化为海藻糖,在海藻糖的工业生产中具有十分重要的意义。本文从海藻糖合酶的基因克隆、基因工程应用、结构和催化机制的研究以及其在微生物体内的功能等方面讨论了海藻糖合酶的研究进展。

关键词：海藻糖海藻糖合酶 α-淀粉酶家族催化机制 C端结构域代谢途径

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低温和外源不饱和脂肪酸对高山被孢霉脂肪酸脱氢酶基因表达的影响

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微生物学报 2012年第11期52卷 1369-1377页

作者：于爱群石桐磊张飙邢来君李明春南开大学微生物学系分子微生物学与技术教育部重点实验室天津300071 天津中医药大学天津300193

【目的】在转录水平上研究低温和外源不饱和脂肪酸对于高山被孢霉脂肪酸脱氢酶基因的表达调控机制。【方法】通过实时定量PCR技术和启动子报告基因融合载体的方法,研究低温和外源不饱和脂肪酸对于高山被孢霉3种脂肪酸脱氢酶基因表达随... 详细信息

【目的】在转录水平上研究低温和外源不饱和脂肪酸对于高山被孢霉脂肪酸脱氢酶基因的表达调控机制。【方法】通过实时定量PCR技术和启动子报告基因融合载体的方法,研究低温和外源不饱和脂肪酸对于高山被孢霉3种脂肪酸脱氢酶基因表达随时间进程的影响。【结果】实时定量PCR的结果表明:低温对于3种脂肪酸脱氢酶基因的转录具有激活作用,外源不饱和脂肪酸对基因转录起抑制作用,而且这两种作用都是快速响应的,随时间延长逐渐减弱并消失。脂肪酸组成测定结果证明了基因转录水平变化与对应产物变化之间没有相关性。低温能够在短时间内诱导pFAD6启动子活性增加,并随时间延长而持续增强;外源不饱和脂肪酸对pFAD6启动子活性起抑制作用,其不饱和度和浓度越高,抑制作用越强,而且抑制作用是快速且持续的。【结论】低温和外源不饱和脂肪酸除了在转录水平上调控高山被孢霉脂肪酸脱氢酶基因表达发生变化之外,可能主要在转录后水平上介导了胞内脂肪酸组成的变化。而且,脂肪酸脱氢酶基因的表达可能受到胞内脂肪酸组成变化的反馈调节作用。本文首次在转录水平上对高山被孢霉脂肪酸脱氢酶基因的表达调控机制进行了探索,为深入了解脂肪酸脱氢酶基因表达及多不饱和脂肪酸合成对外界信号的应答机制提供了有用信息,也对应用微生物发酵和转基因技术生产不饱和脂肪酸具有指导意义。

关键词：低温不饱和脂肪酸脂肪酸脱氢酶实时定量PCR 启动子

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dTDP-L-鼠李糖生物合成路径的电喷雾多级串联质谱法表征

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质谱学报 2016年第1期37卷 17-22页

作者：许莹莹董晨影周大炜南开大学泰达生物技术研究院天津300457 天津市微生物功能基因组学重点实验室天津300457 南开大学分子微生物学与技术教育部重点实验室天津300457

本研究以2’-脱氧胸苷-5’-二磷酸-L-鼠李糖(dTDP-L-Rha)生物合成路径涉及的系列酶促反应产物为研究对象,建立了电喷雾碰撞诱导解离串联质谱(CID-ESI-MSn)对罕见单糖生物合成路径的表征方法。该方法首先通过ESI-MS技术分析2’-脱氧胸苷-... 详细信息

本研究以2’-脱氧胸苷-5’-二磷酸-L-鼠李糖(dTDP-L-Rha)生物合成路径涉及的系列酶促反应产物为研究对象,建立了电喷雾碰撞诱导解离串联质谱(CID-ESI-MSn)对罕见单糖生物合成路径的表征方法。该方法首先通过ESI-MS技术分析2’-脱氧胸苷-5’-二磷酸-D-葡萄糖-4,6-脱氢酶(RmlB)、2’-脱氧胸苷-5’-二磷酸-4-酮-6-脱氧-葡萄糖-3,5异构酶(RmlC)和2’-脱氧胸苷-5’-二磷酸-4-酮-鼠李糖还原酶(RmlD)酶活产物的形成,随后应用CID-ESI-MSn技术对酶促反应终产物L-鼠李糖(dTDP-L-Rha)的结构进行表征。结果表明:dTDP-L-Rha的生物合成始于2’-脱氧胸苷-5’-二磷酸-D-葡萄糖(dTDP-DGlc),依次涉及RmlB、RmlC和RmlD三个酶的参与。这与传统的高效液相色谱法(HPLC)监测、纯化制备,核磁共振(NMR)及ESI-MS结构表征的分析结果一致。该方法简单、灵敏、快速,适用于重要罕见单糖生物合成路径的表征。

关键词：罕见单糖 dTDP-L-鼠李糖生物合成路径电喷雾串联质谱(ESI-MS/MS)

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少根根霉△^12-脂肪酸脱氢酶基因在毕赤酵母中的表达

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南开大学学报（自然科学版） 2008年第1期41卷 106-109页

作者：魏东盛李明春张昕欣邢来君南开大学微生物系分子微生物学与技术教育部重点实验室天津300071

为探讨采用转基因的方法将毕赤酵母改造为产多不饱和脂肪酸菌株的可行性,将来自于丝状真菌少根根霉的△^(12)-脂肪酸脱氢酶基因与毕赤酵母的胞内表达载体 pPIC3.5K 连接构建了重组表达载体 pPI-CRAD12,经 Sac Ⅰ线性化后电击转化毕赤酵... 详细信息

为探讨采用转基因的方法将毕赤酵母改造为产多不饱和脂肪酸菌株的可行性,将来自于丝状真菌少根根霉的△^(12)-脂肪酸脱氢酶基因与毕赤酵母的胞内表达载体 pPIC3.5K 连接构建了重组表达载体 pPI-CRAD12,经 Sac Ⅰ线性化后电击转化毕赤酵母菌株 GS115获得转基因酵母菌株 *** 鉴定结果表明,目的基因已经整合到毕赤酵母基因组中.经甲醇诱导表达后,通过气相色谱和气相色谱和质谱连用的方法分析转基因毕赤酵母的脂肪酸成分表明,转基因毕赤酵母的亚油酸含量增加了4.5%,说明了可以通过增加△^(12)-脂肪酸脱氢酶基因的拷贝数或者使用强启动子的方法来增加亚油酸的含量,为将毕赤酵母改造为产多不饱和脂肪酸的基因工程菌株进行了有意义的探索.

关键词：少根根霉毕赤酵母脂肪酸脱氢酶亚油酸

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