检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验和临床病毒学杂志 2010年第6期24卷 451-454页

作者：秦岚雷晓波任丽丽王健伟洪涛中国医学科学院病原生物学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京协和医学院100730 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所

目的通过实验确证轮状病毒（Rotavirus,RV）非结构蛋白1（NSP1）的泛素连接酶活性,为阐明其在RV复制和致病机制中的作用提供线索.方法将NSP1基因及其RING结构域缺失突变体构建到pEGFP-C1质粒上,与表达泛素的质粒pBlue-Script-HA-Ubiqu... 详细信息

目的通过实验确证轮状病毒（Rotavirus,RV）非结构蛋白1（NSP1）的泛素连接酶活性,为阐明其在RV复制和致病机制中的作用提供线索.方法将NSP1基因及其RING结构域缺失突变体构建到pEGFP-C1质粒上,与表达泛素的质粒pBlue-Script-HA-Ubiquitin共转染人胚肾293FT细胞,用免疫荧光和Western blot方法确定蛋白的表达,并通过免疫共沉淀方法分析蛋白的泛素化.结果 NSP1蛋白的表达可增加细胞内的泛素化水平,并且自身也发生泛素化.结论 NSP1蛋白具有E3泛素连接酶活性.可能在泛素化调控机制中发挥作用.

关键词：轮状病毒属病毒非结构蛋白质类泛素连接酶类

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中国柯萨奇病毒B5的全基因组测序及其序列分析

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病毒学报 2010年第4期26卷 283-289页

作者：胡永峰赵丽娜董杰吴志强杜江薛颖杨帆中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室北京100052 中国医学科学院病原生物学研究所北京100176 华北煤炭医学院生物科学系唐山063000

本文对我国首株与手足口病相关的柯萨奇病毒B5(01/CVB5/SD/CHN/09,CVB5/09)进行了基因组测序并与现有的相关序列进行了比较和进化分析。CVB5/09基因组长7399nt,共编码氨基酸2185aa,与现有的CVB5基因组核酸序列相似性在80.6%～85.3%之间... 详细信息

本文对我国首株与手足口病相关的柯萨奇病毒B5(01/CVB5/SD/CHN/09,CVB5/09)进行了基因组测序并与现有的相关序列进行了比较和进化分析。CVB5/09基因组长7399nt,共编码氨基酸2185aa,与现有的CVB5基因组核酸序列相似性在80.6%～85.3%之间,氨基酸序列相似性在96.1%～96.9%。进化分析发现,利用不同的基因组片段P1、P2和P3区构建的进化树中,CVB5/09分别处在不同的进化分支上,不同基因组片段有着不同的进化速率。Simplot相似性分析没有发现基因组有明显的重组发生。本文完成了我国第1株柯萨奇病毒B5全基因组序列的测定,通过与其它相关病毒的比较分析深入了解其遗传特征,以期为手足口病的流行病学调查和预防控制提供有价值的信息。

关键词：手足口病柯萨奇病毒B5 基因组测序序列分析

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氟胞嘧啶作用后的红色毛癣菌表达谱特征分析

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中国科学（C辑） 2009年第7期39卷 699-710页

作者：赵蓉宾文刁有江杨剑刘涛彭俊平金奇中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室北京100176 中国医学科学院病原生物学研究所北京100730

红色毛癣菌是最常见的人类浅部真菌病病原体之一,可引起皮肤和指甲慢性感染.为研究抗真菌药物作用下特异表达的基因,用cDNA芯片技术分析了5-氟胞嘧啶作用下的红色毛癣菌表达谱.从红色毛癣菌表达序列标签文库中挑选基因制备cDNA芯片,测... 详细信息

红色毛癣菌是最常见的人类浅部真菌病病原体之一,可引起皮肤和指甲慢性感染.为研究抗真菌药物作用下特异表达的基因,用cDNA芯片技术分析了5-氟胞嘧啶作用下的红色毛癣菌表达谱.从红色毛癣菌表达序列标签文库中挑选基因制备cDNA芯片,测定5-氟胞嘧啶的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),进行芯片杂交和数据分析,选取有代表性的7个基因用实时定量反转录多聚酶链反应技术(real-time reverser transcription polymerase chain reaction,Real-timeRT-PCR)进行验证.数据分析表明,有474个基因发生了差异性表达,196个基因表达上调,278个基因表达下调.核酸代谢途径中的CDC21,核酸转录因子E2F1,RNA代谢途径中的SGN1,RIM4和NOP1等基因出现明显下调表达.其他参与了信号转导、分子伴侣活性、离子转运、次级代谢途径、氨基酸转运、脂质转运和潜在耐药机制等作用途径的基因表达也发生相应改变.所选基因的Real-timeRT-PCR结果验证了芯片结果的可信性.本研究得到了第1个5-氟胞嘧啶作用下的红色毛癣菌表达谱,为进一步研究5-氟胞嘧啶的药物作用机制和耐药机理提供了有价值的信息.

关键词：红色毛癣菌(Trichophyton rubrum)cDNA芯片 5-氟胞嘧啶基因表达

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双抗体夹心酶联免疫吸附实验检测诺如病毒

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中华预防医学杂志 2008年第5期42卷 361-363页

作者：郭丽周红莉田蓉江涛屈建国计融王健伟洪涛中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052 中国医学科学院病原生物学研究所病毒基因工程国家重点实验室解放军空军总医院营养与食品安全所

诺如病毒属于杯状病毒科，是引起急性非细菌性胃肠炎的主要病原，广泛分布于世界各地。虽然诺如病毒胃肠炎是温和的、自限性的疾病，但是它发病率高，感染广泛，导致住院和死亡人数的增加。危害人类的诺如病毒可分为GGI和GGII两个遗传组... 详细信息

诺如病毒属于杯状病毒科，是引起急性非细菌性胃肠炎的主要病原，广泛分布于世界各地。虽然诺如病毒胃肠炎是温和的、自限性的疾病，但是它发病率高，感染广泛，导致住院和死亡人数的增加。危害人类的诺如病毒可分为GGI和GGII两个遗传组（genogroup），近来的研究表明，GGI和GGII至少分别由14和17个遗传型（genotype）组成。目前全世界范围内流行的诺如病毒毒株绝大部分是GGII组，GGI在我国很少见，因此，GGII组应为诺如病毒的主要防控对象。

关键词：双抗体夹心酶联免疫吸附诺如病毒实验检测急性非细菌性胃肠炎世界范围杯状病毒科死亡人数自限性

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改良法构建Ⅱ型重组腺相关病毒介导人TIMP1基因及鉴定

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中国普外基础与临床杂志 2008年第12期15卷 898-902,909页

作者：李明皓吴小兵严律南宁夏医学院附属医院肝胆外科银川750004 中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100052 四川大学华西医院普外科成都610041

目的改良法构建携带金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)基因的Ⅱ型重组腺相关病毒(rAAV2)。方法采用PCR法从pDNR-LIB质粒中扩增人全长TIMP1基因,利用基因重组的方法将TIMP1全长cDNA插入通用型AAV2载体质粒pSNAV的多克隆位点,构建成pSNAV-TIMP1;... 详细信息

目的改良法构建携带金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)基因的Ⅱ型重组腺相关病毒(rAAV2)。方法采用PCR法从pDNR-LIB质粒中扩增人全长TIMP1基因,利用基因重组的方法将TIMP1全长cDNA插入通用型AAV2载体质粒pSNAV的多克隆位点,构建成pSNAV-TIMP1;用脂质体转染的方法将重组质粒转入BHK-21细胞中,G418细胞筛选得到转入重组质粒并能表达目的基因的细胞系BHK-21/rAAV2-TIMP1;用具有rAAV2包装功能的重组Ⅰ型单纯疱疹病毒(rHSV1-rc/△UL2)感染BHK-21/rAAV2-TIMP1,纯化后得到rAAV2-TIMP1。结果用改良法成功构建rAAV2-TIMP1,病毒滴度达到1×1012v.g./ml。结论成功构建rAAV2-TIMP1,为其进一步应用于基因治疗的研究提供实验基础。

关键词： Ⅱ型重组腺相关病毒金属蛋白酶抑制剂1 肝细胞癌基因治疗

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携带血红素加氧酶1基因的重组腺相关病毒的制备

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武汉大学学报（医学版） 2007年第4期28卷 409-412,425页

作者：何祥虎王焱林王成夭吴小兵代乐李娜武汉大学中南医院麻醉科湖北武汉430071 中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100052

目的:制备携带大鼠血红素加氧酶1(rHO-1)基因的重组腺相关病毒(AAV)。方法:通过RT-PCR的方法,从大鼠脾脏组织中扩增rHO-1基因,克隆入通用型AAV载体质粒pSNAV中构建重组质粒pSNAV-rHO-1,通过酶切和测序鉴定。利用Lipofectamine将pSNAV-rH... 详细信息

目的:制备携带大鼠血红素加氧酶1(rHO-1)基因的重组腺相关病毒(AAV)。方法:通过RT-PCR的方法,从大鼠脾脏组织中扩增rHO-1基因,克隆入通用型AAV载体质粒pSNAV中构建重组质粒pSNAV-rHO-1,通过酶切和测序鉴定。利用Lipofectamine将pSNAV-rHO-1转染BHK-21细胞,G418筛选得到表达外源基因的细胞系BHK/rHO-1。用具有能表达Rap和Cap及包装重组AAV功能的一种重组单纯疱疹病毒HSV1-rc/△UL2分别感染这株细胞系后收获并纯化病毒,DNA斑点杂交检测重组病毒滴度。结果:扩增了rHO-1基因,测序证实与GenBank中的一致,病毒滴度为1.5×1015v.g/L。结论:成功获得了高滴度、高纯度的重组AAV-rHO-1,这为以后心血管系统疾病的基因治疗研究奠定了基础。

关键词：血红素加氧酶1 腺相关病毒斑点杂交

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改良法构建二型重组腺相关病毒介导人TMP1基因构建及鉴定

改良法构建二型重组腺相关病毒介导人TMP1基因构建及鉴定

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中国医师协会外科医师分会成立大会暨第十二届全国普通外科学术会议

作者：李明皓严律南王树人吴小兵宁夏医学院附属医院肝胆外科，银川750004 四川大学华西医学中心，成都 610041 中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室，北京 100052

目的：改良法构建二型重组腺相关病毒(rAAV2)介导的金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)构建及鉴定。方法：采用PCR法从pDNR-LIB质粒种扩增人全长TIMP1基因，利用基因重组的方法将全长TIMP1插入表达质粒pSNAV的多克隆位点，构建成pSNAV-TIMP1... 详细信息

目的：改良法构建二型重组腺相关病毒(rAAV2)介导的金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)构建及鉴定。方法：采用PCR法从pDNR-LIB质粒种扩增人全长TIMP1基因，利用基因重组的方法将全长TIMP1插入表达质粒pSNAV的多克隆位点，构建成pSNAV-TIMP1;用脂质体转染的方法将重组的质粒转入BHK-21细胞中，G418筛选得到转入重组质粒并能表达目的基因的细胞系BHK-TIMP1;用具有rAAV2包装功能的1型单纯疱疹病毒(HSV1-rc/△UL2)感染BHK-TIMP1，纯化后得到rAAV2-TIMP1;采用“一种病毒感染一种载体细胞株”，用“感染”的方式代替传统的“转染”方式，使每个细胞产生的rAAV2-TIMP1比传统方式提高了2个数量级以上。结果：用改良法成功rAAV2-TIMP1，用PCR检测到目的基因TIMP1，病毒滴度达到1×1012v．g/ml。结论：构建的rAAV2-TIMP1可望能有效地将TIMP1基因导入人肝癌细胞株，为进一步研究肝癌浸润和转移机理以及探讨抑制肝癌浸润和转移的方法提供实验基础。

关键词：重组腺病毒基因重组脂质体转染肝癌肿瘤转移机理

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乙型肝炎表面抗原基因重组2型腺相关病毒的免疫原性研究

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中国热带医学 2005年第5期5卷 932-934页

作者：欧程山胡贵方陈清吴小兵俞守义南方医科大学公共卫生和热带医学学院广东广州510515 中国预防医学科学院病毒学研究所基因工程国家重点实验室北京100052

目的观察含乙型肝炎表面抗原(HBsAg)基因的2型重组腺相关病毒(rAAV-2-HBsAg)在Balb/c小鼠体内的免疫原性。方法以5×1011的重组病毒颗粒单次注射Balb/c小鼠,RT-PCR扩增肝脏组织中HBsAg基因cD-NA:ELISA检测肝组织中HBsAg的表达;RIA... 详细信息

目的观察含乙型肝炎表面抗原(HBsAg)基因的2型重组腺相关病毒(rAAV-2-HBsAg)在Balb/c小鼠体内的免疫原性。方法以5×1011的重组病毒颗粒单次注射Balb/c小鼠,RT-PCR扩增肝脏组织中HBsAg基因cD-NA:ELISA检测肝组织中HBsAg的表达;RIA法检测血清中表面抗体(抗一HBs)滴度;51Cr释放分析检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性。结果外源性HBsAg基因己整合到肝细胞染色体DNA并有效地转录和翻译,表达水平最高可达33.8pg/(mglivertissue),rAAV-HBsAg免疫小鼠后可以诱导机体产生表面抗体并激发特异性CTL。结论外源性HBsAg基因可以转移到小鼠肝细胞并稳定表达;rAAV-2-HBsAg免疫小鼠可以同时诱导体液和细胞免疫反应的出现。提示基于rAAV-2载体的乙型肝炎(HBV)疫苗,对于防止HBV感染,尤其是作为慢性乙型肝炎的治疗性疫苗可能只有潜在的应用价值,值得做进一步的系统研究。

关键词：乙型肝炎表面抗原,基因表达 2型重组腺相关病毒,细胞毒性T淋巴细胞活性

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rAAV-2-HBsAg和rAAV-2-GM-CSF共感染增强人外周血单核细胞来源树突状细胞免疫刺激功能

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第三军医大学学报 2004年第1期26卷 22-24页

作者：胡贵方俞守义吴小兵尹芳陈清候云德第一军医大学流行病学教研室广州510515 中国预防医学科学院病毒学研究所基因工程国家重点实验室北京100052 第一军医大学南方医院血液科广州510515

目的　探讨rAAV 2 HBsAg(表达乙肝表面抗原的重组腺相关病毒 )和rAAV 2 GM CSF(表达粒细胞 /巨嗜细胞-集落刺激因子的重组腺相关病毒 )共感染对人外周血单核细胞来源树突状细胞 (DC)免疫刺激功能的影响。方法　用rAAV 2 HBsAg和rAAV ... 详细信息

目的　探讨rAAV 2 HBsAg(表达乙肝表面抗原的重组腺相关病毒 )和rAAV 2 GM CSF(表达粒细胞 /巨嗜细胞-集落刺激因子的重组腺相关病毒 )共感染对人外周血单核细胞来源树突状细胞 (DC)免疫刺激功能的影响。方法　用rAAV 2 HBsAg和rAAV 2 GM CSF同时感染新分离的树突状细胞 ;CytoTox 96 Non RadioactiveCtoxicityAssay试剂盒检测细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)反应 ;混合白细胞反应 (MLR)检测DC刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力 ;流式细胞仪检测DC表面分子CD80、CD83、CD86和HLA DR。结果　rAAV 2 HBsAg和rAAV 2 CM CSF共感染的DC刺激同种异体淋巴细胞增值的能力和激发的自身淋巴细胞的CTL效应增强 ,CD83表达水平提高。结论　内源性表达的GM CSF能促进DC成熟。

关键词：重组腺相关病毒,Ⅱ型肝炎表面抗原,乙型粒细胞/巨嗜细胞-集落刺激因子树突状细胞免疫治疗

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我国虫媒病毒研究10年回顾

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中国公共卫生 2003年第4期19卷 473-476页

作者：王环宇梁国栋中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100052

虫媒病毒(Arbovirus)是通过吸血的节肢动物叮咬敏感的脊椎动物,使脊椎动物发病从而传播疾病的一类病毒.其特点是病毒在节肢动物体内繁殖,但是动物自身却不发病.虫媒病毒性疾病大多数是自然疫源性疾病,由于节肢动物叮咬人、畜引起疾病,... 详细信息

虫媒病毒(Arbovirus)是通过吸血的节肢动物叮咬敏感的脊椎动物,使脊椎动物发病从而传播疾病的一类病毒.其特点是病毒在节肢动物体内繁殖,但是动物自身却不发病.虫媒病毒性疾病大多数是自然疫源性疾病,由于节肢动物叮咬人、畜引起疾病,因此虫媒病毒属于人畜共患病毒.

关键词：虫媒病毒研究人畜共患病毒分类生物学特性

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