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川金丝猴(Rhinopithecus roxellana)基因组微卫星的鉴定与多态性分子标记筛选的研究

川金丝猴(Rhinopithecus roxellana)基因组微卫星的鉴定与多态性...

第十四届全国野生动物生态与资源保护学术研讨会暨第九届中国动物学会兽类学分会全国代表大会

作者：蔡延森余浩洋刘三许侯伟刘选珍李静四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室四川成都610041 成都动物园，四川成都，610081 西南医科大学基础医学院医学细胞生物学与遗传学教研室四川泸州646000 四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室四川成都610041 成都动物园四川成都610081

微卫星序列,又称为短串联重复序列(SSRs),一般重复单位为1～6bp,广泛存在于真核、原核和病毒基因组中。微卫星既是基因组的重要组成,也是种群遗传学中运用最广泛的遗传标记。

关键词：川金丝猴微卫星全基因组遗传管理谱系鉴定

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针对小鼠Chmp1b基因的可诱导shRNA表达转基因载体的构建及功能鉴定

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中国医科大学学报 2016年第11期45卷 968-972,976页

作者：蔡莹刘柳连博文陈澄中国医科大学基础医学院发育细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110122

目的设计构建针对小鼠Chmp1b基因的可诱导shRNA表达转基因载体,以用于制备相关转基因小鼠,并在体外验证其有效性。方法剔除pc DNA3.1载体的CMV启动子以及多克隆位点,然后接入带有LacZ-fLoxP插入失活的小鼠U6启动子并引入适当的酶切位点... 详细信息

目的设计构建针对小鼠Chmp1b基因的可诱导shRNA表达转基因载体,以用于制备相关转基因小鼠,并在体外验证其有效性。方法剔除pc DNA3.1载体的CMV启动子以及多克隆位点,然后接入带有LacZ-fLoxP插入失活的小鼠U6启动子并引入适当的酶切位点,装入设计好的shRNA片段,测试shRNA抑制Chmp1b表达的效率与专一性,检查Cre重组酶介导位点特异性重组去除LoxP位点之间的lac基因后U6启动子活性恢复情况。结果设计的shRNA片段可明显降低Chmp1b的表达,抑制效率达90%以上;成功构建针对小鼠Chmp1b基因的可诱导shRNA表达转基因载体,插入U6启动子中的LacZ-fLoxP片段既可以控制U6启动子活性又可以起到报告基因的作用。结论针对小鼠Chmp1b基因的可诱导shRNA表达转基因载体可以用于制备相关转基因小鼠。

关键词： shRNA Chmp1b Cre/LoxP 转基因载体构建

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腮腺炎病毒核蛋白原核表达及其血清学检测方法的建立

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中国病毒病杂志 2017年第3期7卷 185-190页

作者：陈红利曹蕾郉文月崔爱利祝双利毛乃颖许文波扈瑞平内蒙古医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室内蒙古呼和浩特010110 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

目的可溶性表达具有良好抗原性的腮腺炎病毒核蛋白(nuclear protein,NP),并建立特异性的腮腺炎病毒IgG抗体血清学检测方法。方法提取腮腺炎病毒RNA,用RT-PCR法扩增NP基因全长,并连接至pET-32a(+)载体,构建重组表达质粒pET-32a(+)-NP,鉴... 详细信息

目的可溶性表达具有良好抗原性的腮腺炎病毒核蛋白(nuclear protein,NP),并建立特异性的腮腺炎病毒IgG抗体血清学检测方法。方法提取腮腺炎病毒RNA,用RT-PCR法扩增NP基因全长,并连接至pET-32a(+)载体,构建重组表达质粒pET-32a(+)-NP,鉴定正确后转化大肠埃希菌BL21(DE3)菌株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,可溶性成分经饱和硫酸铵沉淀粗提后,再利用镍柱进行亲和层析纯化,获得高纯度的NP蛋白,并用Western blot方法进行鉴定。包被纯化后NP抗原建立间接酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA)检测方法 (NP ELISA法),并检测了348份健康儿童血清中抗腮腺炎病毒IgG抗体水平,与维润腮腺炎病毒ELISA IgG抗体检测试剂盒(维润ELISA法)进行平行比较。结果本研究建立的NP ELISA法和维润ELISA法符合率为78.45%(273/348);与维润ELISA法比较灵敏性为72.58%(135/186),特异性为85.19%(138/162)。两种方法检测348份健康儿童血清腮腺炎病毒IgG抗体的阳性率分别为45.69%(159/348)和53.45%(186/348)。结论利用原核表达的方法成功制备出具有腮腺炎抗原特性的NP抗原,并建立了腮腺炎病毒IgG抗体ELISA检测方法,为腮腺炎病毒人群血清流行病学调查奠定了基础,但需进一步使用中和试验评估两种方法的敏感性和特异性。

关键词：腮腺炎病毒血清学间接ELISA检测方法 Western blot

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胶质瘤细胞H4中与多梳蛋白NSPc1相互作用的长链非编码RNA的鉴定

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武警后勤学院学报（医学版） 2017年第2期26卷 113-117,130页

作者：王玉梁梁之孔李辉林彦琛正午龚燕华武警后勤学临床医学系院生物化学与分子生物教研室天津300309 武警8730部队医院广东广州510800 武警后勤学院附属医院神经内一科天津300162 河北医科大学基础研究院河北石家庄050017 武警后勤学院临床医学系人体解剖与组织胚胎学教研室天津300309 武警交通指挥部北京100029

【目的】鉴定胶质瘤H4细胞系中与多梳家族(polycomb group)蛋白NSPc1可能相互作用的长链非编码RNA(long noncoding RNA,lnc RNA)。【方法】在胶质瘤H4细胞系中,利用RNA结合蛋白免疫共沉淀RIP(RNA binding protein immunoprecipitation,IP)技术联合实时定量PCR技术在生物信息学预测与NSPc1蛋白结合评分较高的候选lnc RNAs中验证相互作用的lnc RNAs。【结果】鉴定出MALAT1、MEG3和SOX2OT可能与NSPc1蛋白相互作用。【结论】胶质瘤细胞中多梳蛋白NSPc1可能通过与lnc RNAs相互作用参与着肿瘤的发生发展、迁移、侵袭甚至肿瘤干细胞干性的维持。

关键词：胶质瘤 NSPc1 长链非编码RNA

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DNMT1、DNMT3A和蛋白磷酸酶1γmRNA在低氧预适应晚期相小鼠海马组织变化

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泰山医学院学报 2017年第2期38卷 121-125页

作者：谢伟张柱霞贾小娥姜树原石蕊刘晓蕾许文强张颜波邵国包头医学院生物医学研究中心内蒙古包头014060 包头医学院基础医学与法医学院细胞生物与遗传学教研室内蒙古包头014060 泰山医学院附属医院神经内科山东泰安271000 首都医科大学宣武医院北京100053

目的研究小鼠低氧预适应模型中DNA甲基化和PP1γ基因表达伴随低氧后时间的变化机制,阐明低氧是否通过DNA甲基化来调控PP1γ表达,发挥其脑保护作用。方法小鼠侧脑室注射5-aza-cdR(10μM,5μl),之后进行低氧处理,分别于低氧后0、1、2、3、... 详细信息

目的研究小鼠低氧预适应模型中DNA甲基化和PP1γ基因表达伴随低氧后时间的变化机制,阐明低氧是否通过DNA甲基化来调控PP1γ表达,发挥其脑保护作用。方法小鼠侧脑室注射5-aza-cdR(10μM,5μl),之后进行低氧处理,分别于低氧后0、1、2、3、4天处死小鼠,利用实时荧光定量PCR检测甲基转移酶DNMTs和PP1γmRNA的表达变化。结果低氧后1天DNMT1和低氧后2天DNMT3A的mRNA表达受到抑制(P<0.05),且不受甲基转移酶活性的影响。5-aza-cdR对DNMT1的表达没有影响(P>0.05);但明显抑制DNMT3A的表达(P<0.05)。低氧抑制PP1γmRNA表达(P<0.05),且有低氧后时间依赖性。甲基转移酶对PP1γ表达有抑制作用(P<0.05),且与低氧后时间有关。结论随着低氧后时间的延长,低氧通过改变DNA甲基化,尤其是DNMTs表达变化,调控PP1γ基因表达,实现其脑保护作用。

关键词：蛋白磷酸酶1 DNA甲基化 DNA甲基转移酶低氧预适应小鼠

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一个功能丰富的转录调控分子——下游调控元件拮抗分子

一个功能丰富的转录调控分子——下游调控元件拮抗分子

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庆祝《生理学报》创刊90周年大会

作者：伏紫冰段旭博李丽娜雷小康蒋烨王晨许寒晓张银连姜交华柴睿超贾熙华于常海星形胶质细胞功能研究实验室北京大学神经科学研究所北京大学医学部基础医学院神经生物系国家卫生和计划生育委员会/教育部神经科学重点实验室贵州医科大学人体解剖学教研室

下游调控元件拮抗分子(downstream regulatory element antagonist modulator,DREAM)与钙衰蛋白(Calsenilin)和钾通道辅助亚基(potassium channel interacting protein 3,KChIP3),三者同属于神经钙感受器蛋白(neuronal calcium sensor,NCS)家族,由同一基因编码,但亚细胞定位不同且执行不同功能,其中DREAM定位于细胞核,有4个EF手型结构域(EF-hand-like motifs)能与钙离子可逆结合,诱导蛋白空间结构变化,结合到多种基因的下游调控元件(downstream regulatory element,DRE)位点发挥基因转录调节作用。DREAM在中枢神经系统(central nervous system,CNS)尤其是小脑皮层中高表达,通过调控N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR)影响学习和记忆,也参与阿尔兹海默症发病、炎症反应、血栓形成。随着更多DREAM新功能的发现,其在CNS中的生物功能受到更多关注。本文回顾DREAM的发现历史,分析该蛋白的结构功能特点、组织分布,讨论了近些年来在DREAM入核的调控、以及特有的钙依赖的基因调控机理方面研究进展,重点关注了DREAM-强啡肽原(prodynorphin,PDYN)-强啡肽(dynorphin,DYN)通路调节慢性疼痛的可能机制。

关键词： DREAM 转录调节疼痛 DRE位点钙信号

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CUEDC2通过上皮-间质转化促进人乳腺癌MCF-7细胞侵袭转移

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现代肿瘤医学 2016年第11期24卷 1681-1683页

作者：李彦姝汤丽娜张红艳高云凌李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的:探讨CUE结构域2(CUE domain-containing 2,CUEDC2)蛋白对人乳腺肿瘤细胞侵袭转移的作用机制。方法:人乳腺肿瘤细胞MCF-7转染的Myc-CUEDC2真核表达载体,提取转染细胞的总蛋白和总RNA进行蛋白免疫印迹和实时定量PCR检测上皮-间质转化... 详细信息

目的:探讨CUE结构域2(CUE domain-containing 2,CUEDC2)蛋白对人乳腺肿瘤细胞侵袭转移的作用机制。方法:人乳腺肿瘤细胞MCF-7转染的Myc-CUEDC2真核表达载体,提取转染细胞的总蛋白和总RNA进行蛋白免疫印迹和实时定量PCR检测上皮-间质转化(EMT)标志物上皮-钙黏蛋白(E-cadherin)和转录因子SLUG的表达。结果:过表达CUEDC2蛋白能够下调E-cadherin蛋白和基因的表达,而上调转录因子SLUG基因和蛋白的表达。结论:CUEDC2可能参与调节乳腺肿瘤细胞发生上皮-间质转化,促进乳腺肿瘤侵袭转移的发生,CUEDC2可能是人乳腺肿瘤侵袭转移的治疗靶点。

关键词：乳腺肿瘤 CUE结构域2 上皮-间质转化侵袭转移

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p21活化激酶4在乳腺癌细胞中的表达及定位

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现代肿瘤医学 2016年第19期24卷 3010-3012页

作者：李彦姝张红艳汤丽娜高云凌李丰中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110122

目的:研究p21激活激酶4(PAK4)在人乳腺癌细胞和组织中的表达和定位。方法:蛋白印迹法检测PAK4在人乳腺癌细胞系中蛋白和基因的表达,激光共聚焦扫描显微镜检测内源PAK4在MCF-7乳腺癌细胞中的定位。结果:PAK4在人乳腺肿瘤细胞系中蛋白和... 详细信息

目的:研究p21激活激酶4(PAK4)在人乳腺癌细胞和组织中的表达和定位。方法:蛋白印迹法检测PAK4在人乳腺癌细胞系中蛋白和基因的表达,激光共聚焦扫描显微镜检测内源PAK4在MCF-7乳腺癌细胞中的定位。结果:PAK4在人乳腺肿瘤细胞系中蛋白和基因表达水平增高,激光共聚焦扫描显微镜观察发现PAK4主要定位于MCF-7细胞质中。结论:PAK4在人乳腺癌细胞系中高表达,主要定位于乳腺癌组织细胞质内,可能是人乳腺癌重要的调节因子。

关键词： p21激活激酶4 乳腺癌免疫印迹分析定位

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DIXDC1的生物学特性及其与肿瘤的关系

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解剖科学进展 2016年第5期22卷 526-530页

作者：祝旭东李晓东中国医科大学辽宁沈阳110122 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室暨教育部医学细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110122

DIXDC1是一种含有Dishevelled-Axin(DIX)和coiled-coil(MTH)两种结构域的蛋白,也是Wnt信号通路的正向调节分子,在细胞周期、神经系统发育和行为认知等方面均发挥着重要作用。DIXDC1在多种肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用,能够激活PI3K... 详细信息

DIXDC1是一种含有Dishevelled-Axin(DIX)和coiled-coil(MTH)两种结构域的蛋白,也是Wnt信号通路的正向调节分子,在细胞周期、神经系统发育和行为认知等方面均发挥着重要作用。DIXDC1在多种肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用,能够激活PI3K/AKT信号通路,促进结肠癌细胞的增殖;激活PI3K-AKT/AP-1信号通路,促进肺癌组织细胞的侵袭和迁移;激活Wnt信号通路,调节β-catenin入核,进而促进胃癌细胞的侵袭和迁移。由于DIXDC1在肿瘤中产生的巨大作用,为肿瘤治疗提供了一个潜在靶点。

关键词：信号通路 DIXDC1 生物学特性细胞周期结肠癌细胞神经系统发育 catenin 神经细胞迁移神经胶质细胞过磷酸化

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TGF-β与CTGF在大鼠低压缺氧时右心室心肌纤维化中的作用

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第三军医大学学报 2016年第9期38卷 927-931页

作者：梁潇黄缄官立彬崔宇李晓栩宓保梅沈宜重庆医科大学基础医学院干细胞与组织工程研究室病理生理学教研室重庆400016 第三军医大学高原军事医学系高原生理学与高原生物学教研室、高原医学教育部重点实验室、全军高原医学重点实验室重庆400038

目的探讨转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在低压缺氧条件下发生右心室心肌纤维化与肥大中的作用。方法将50只8周龄雄性SD大鼠[体质量(188.6±19.3)g... 详细信息

目的探讨转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在低压缺氧条件下发生右心室心肌纤维化与肥大中的作用。方法将50只8周龄雄性SD大鼠[体质量(188.6±19.3)g]随机分为常氧喂养对照组与低压缺氧喂养3、7、14和28 d实验组(n=10),低压缺氧大鼠置于模拟海拔6 000 m的低压舱内饲养。分离右心室,称量法计算右心室肥厚指数。采用荧光定量PCR与免疫印迹法分别检测右心室心肌组织中Ⅰ型胶原、TGF-β和CTGF的mRNA与蛋白表达水平,并分析低压缺氧相同天数TGF-β和CTGF与Ⅰ型胶原表达水平、右心室肥厚指数的相关性。结果与常氧组相比,右心室心肌组织中低压缺氧各组右心室肥厚指数均升高,其中低压缺氧7、14、28 d组右心室肥厚指数显著升高(P<0.05)。与常氧组相比,右心室心肌组织中低压缺氧各组Ⅰ型胶原水平均升高,其中低压缺氧7、14、28 d组水平显著升高(P<0.05)。与常氧组相比,低压缺氧3 d组右心室心肌组织中TGF-β(3.68±0.17)、CTGF(8.73±0.96)蛋白表达量均显著升高(P<0.05),低压缺氧28 d组右心室心肌组织中TGF-β(0.93±0.15)、CTGF(12.62±0.14)蛋白水平均显著升高(P<0.05),而低压缺氧7、14 d组两细胞因子表达量与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。随低压缺氧时间增加,右心室心肌组织中两生长因子mRNA表达水平与右心室肥厚指数呈显著正相关(P<0.05),与Ⅰ型胶原的mRNA水平也呈显著正相关(P<0.05,低压缺氧28 d组除外);随低压缺氧时间增加,TGF-β的mRNA水平与CTGF的mRNA水平呈显著正相关(P<0.05)。结论随低压缺氧时间增加,右心室心肌组织中TGF-β、CTGF先增加后降低再增加的表达变化,参与了低压缺氧时右心室心肌纤维化、心肌肥大的过程。

关键词：低压缺氧右心室心肌纤维化心肌肥大转化生长因子β 结缔组织生长因子

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