检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：罗玥媛昆明医科大学

学位级别：硕士

[背景]药物成瘾是一种慢性的脑部疾病,长期大量吸食海洛因会造成严重的神经损伤如轴突变形、脱髓鞘改变等,进一步加重吸毒者的认知及记忆功能障碍甚至导致痴呆。目前,一般的实验技术难以动态观察成瘾后活体内的神经元损伤和轴突运输。[... 详细信息

[背景]药物成瘾是一种慢性的脑部疾病,长期大量吸食海洛因会造成严重的神经损伤如轴突变形、脱髓鞘改变等,进一步加重吸毒者的认知及记忆功能障碍甚至导致痴呆。目前,一般的实验技术难以动态观察成瘾后活体内的神经元损伤和轴突运输。[目的]利用锰离子增强磁共振成像(manganese-enhanced magnetic resonance imaging,MEMRI)动态监测海洛因成瘾后不同阶段的大脑轴突转运功能,进一步探究导致海洛因复吸模型大鼠认知障碍和轴突运输能力下降的原因。[方法]本研究方案获得昆明医科大学第三附属医院伦理委员会批准,所有动物实验程序均符合有关动物护理和使用的机构指南。自昆明医科大学实验动物中心购买成年Sprague-Dawley雄性大鼠60只,采用随机数字法将大鼠分入4组,分别是短期生理盐水对照组(简称“短期对照组”,n=15),长期生理盐水对照组(简称“长期对照组”,n=15),短期复吸大鼠组(简称“短期组”,n=15)和长期复吸大鼠组(简称“长期组”,n=15)。海洛因复吸方式如下:向大鼠腹腔内注射海洛因溶液,首次剂量为3 mg/kg,按体重逐日递增3 mg/kg,连续9天至剂量达到27 mg/kg,随后大鼠进行10天的自然戒断以帮助戒毒。短期组接受3次吸毒-戒毒周期,长期组接受6次吸毒-戒毒周期,同期对照组仅注射相同次数和剂量的生理盐水。通过注射纳洛酮溶液,在30分钟内观察大鼠的戒断症状,判断是否成功建立了海洛因生理依赖模型。戒断症状包括清理皮毛、齿颤、跳跃、扭体、湿狗样抖、站立等行为,记录戒断症状出现的次数进行评分。利用Morris水迷宫(MWM)评估海洛因对大鼠学习记忆的影响,使用智能红外线跟踪系统记录游泳速度、游泳路径、在目标象限花费的时间和穿越平台的次数。水迷宫结束后进行MEMRI扫描,根据图像中Mn2+信号的变化计算轴突运输速率、动态评估大鼠的海马轴突运输功能。利用Western blotting检测轴突结构和认知功能相关蛋白的表达。透射电镜观察大鼠海马区的线粒体、轴突、突触等超微结构变化。免疫荧光染色分析突触素核蛋白水平。所获得数据采用SPSS 22.0统计软件进行分析,各组数据用均数±标准误表示。独立样本t检验检验分析两组大鼠之间的显著差异,两两比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA)比较,采用重复测量方差分析对三组在水迷宫训练试验中的逃避潜伏期数据进行分析。P<0.05认为差异具有统计学意义。图像用Sigmaplot 14.0 和 Origin 8.0 软件进行制作。[结果]1.建立海洛因生理依赖模型纳洛酮属于阿片受体的拮抗剂,能阻断阿片类药的作用,因此纳洛酮常用于阿片类药物的戒断,本实验观察到注射纳洛酮催促成瘾大鼠出现明显的戒断症状,短期组戒断评分为14.16±1.32,长期组戒断评分为15.30±0.82,明显高于同期对照组的评分2.5±0.83;2.3±0.76(P<0.001),证明海洛因生理依赖大鼠模型已成功建立。2.大鼠进行MWM训练以探讨海洛因对记忆和认知功能的影响定向航行实验中,各组大鼠寻找水下平台的时间随着训练天数的增加而减少,但长期组大鼠的逃避潜伏期仍高于短期组与对照组(P<0.001)。在探针实验中,撤离平台后,短期组和长期组大鼠的跨越次数和平台区象限停留的时间与对照组相比均明显减少(P<0.05),而游泳速度在各组之间没有显著差异,提示海洛因会导致大鼠的学习和记忆功能发生改变。***显示大鼠的轴突转运功能与对照组相比,短期组大鼠在海马和丘脑Mn2+转运速率加快(P<0.001)。长期组大鼠对Mn2+的摄取和转运能力严重不足;与对照组大鼠相比,其轴突转运率显著降低(P<0.001)。4.各组病理学检测结果(1)突触、微管结构指标:与对照组相比,短期组大鼠的SYN、PSD-95、β-Tubulin水平减少(P<0.05),Tau的含量下降(P<0.01);与对照组相比,长期组中的 SYN、PSD-95、Tau、β-Tubulin均明显下降(P<0.001)(2)认知功能相关指标:与对照组相比,短期组大鼠的BDNF无明显变化,TrkB略升高(P<0.01),CREB蛋白的表达量减少(P<0.05);与对照组相比,长期组大鼠的BDNF、TrkB、CREB显著降低(P<0.001)(3)超微结构的变化:透射电镜显示海洛因暴露会导致大鼠脑超微结构异常。短期组大鼠神经元细胞轻度水肿、细胞膜完整,而长期组出现神经元细胞中-重度水肿,核皱缩凹陷;线粒体肿胀,嵴断裂,多数细胞器均肿胀,突触数量减低、结构被破坏。(4)免疫荧光染色:海洛因诱导短期、长期复吸模型大鼠中SYN的染色强度均显著降低(P<0.05)。[结论]1.海洛因成瘾后不断复吸,会导致大鼠中枢神经系统

关键词：海洛因毒品复吸锰离子增强磁共振轴突转运认知障碍

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橙皮素衍生物-16通过激活AMPK/SIRT3通路减轻CCl4诱导的炎症和肝纤维化

橙皮素衍生物-16通过激活AMPK/SIRT3通路减轻CCl4诱导的炎症和肝...

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作者：江贺春安徽医科大学

学位级别：硕士

芸香科柑橘属植物果实橙皮的最主要的有效成分之一——橙皮素,它是一种二氢黄酮类,性状主要是呈现淡黄色粉末或针状结晶。具有抗炎症反应、抗氧化反应、降低血脂作用、抗肿瘤作用、心血管保护作用和免疫系统调节作用等多种药理作用,肝... 详细信息

芸香科柑橘属植物果实橙皮的最主要的有效成分之一——橙皮素,它是一种二氢黄酮类,性状主要是呈现淡黄色粉末或针状结晶。具有抗炎症反应、抗氧化反应、降低血脂作用、抗肿瘤作用、心血管保护作用和免疫系统调节作用等多种药理作用,肝纤维化是一种慢性炎症性愈合反应,在没有有效干预的情况下会发展为肝硬化。橙皮素衍生物(HD-16)是一种衍生自橙皮苷的单体化合物,对一系列肝脏疾病具有抗炎和保肝作用。然而,HD-16在肝纤维化中的抗纤维化潜力及其潜在机制尚未阐明。在先前的研究基础上查阅文献,实验小组前期对橙皮素尝试进行结构的修饰或者化学合成反应从而生成了多种其衍生物,我们分别在体内和体外研究了HD-16对四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠肝纤维化和转化生长因子β(TGF-β1)刺激的LX-2细胞(人肝星状细胞>纤维化的抗纤维化作用。实验结果表明,HD-16是通过调节腺苷酸活化蛋白激酶去乙酰化酶3(AMPK/SIRT3)通路发挥抗纤维化作用。药效学结果表明,HD-16减轻了CCl4诱导的小鼠肝纤维化的损伤和炎症程度。同时,HD-16还有效抑制了TGF-β1激活的LX-2细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、α1Ⅰ型胶原(Col1α1)、α1Ⅲ型胶原(Col3α1)和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的表达。从机制上讲,HD-16促进了纤维化肝脏和活化的LX-2细胞中SIRT3的表达和活性。此外,沉默SIRT3减弱了HD-16的抗纤维化作用。然而,HD-16可以增加AMPK磷酸化,而抑制SIRT3表达不影响AMPK磷酸化。相反,AMPK沉默抑制SIRT3表达,表明SIRT3是肝纤维化中AMPK的下游靶标。总的来说,HD-16通过激活AMPK/SIRT3通路减轻CCl4诱导的肝脏炎症和纤维化,HD-16可能是治疗肝纤维化的潜在抗纤维化化合物。以上实验研究还未见相关报道,基于以上情况,本文研究要点是橙皮素衍生物HD-16对CCl4诱导小鼠的炎症和肝纤维化的药理作用及作用机制。具体研究包括以下几个部分:方法:1.小鼠肝纤维化模型建立与HD-16药理作用60只C57BL/6J小鼠(6-8周龄,18-22 g体重)随机分为六组(一组小鼠10只):载体对照(第1组)、CCl4(模型1第2组)、CCl4+25mg/kg HD-16(第3 组),CCl4+ 50mg/kg HD-l6(第4 组),CCl4+100mg/kg HD-16(第 5 组),阳性(第6组)。肝纤维化模型是通过腹腔注射含有10%CCl4(0.001 mL/g体重,每周两次)的橄榄油持续4周建立的。HD-16治疗的小鼠每天注射10%CCl4并灌胃给药HD-16(25 mg/kg、50mg/kg或100 mg/kg)。阳性对照组小鼠腹腔注射四氯化碳,并通过每日灌胃接受秋水仙碱(0.1 mg/kg),赋形剂对照组在腹腔(IP)注射橄榄油。检测各小组小鼠肝组织纤维化和炎症的损伤情况,分别使用丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)活性测定试剂盒评估ALT、AST和ALP的血清水平:羟脯氨酸含量测定评估与肝纤维化中的胶原代谢相关性;用苏木精-依红染色(HE)、马松(Masson)、天狼星染料染色及免疫组化呈现了代表性的肝脏切片;用Western blot和RT-PCR检测α-SMA、α(Ⅰ)原胶原、和β-肌动蛋白在肝纤维化小鼠肝组织和LX-2细胞中的蛋白和mRNA表达水平;实验研究观察到,橙皮素衍生物-16对四氯化碳诱导的小鼠肝脏炎症以及肝纤维化拥有确切的治疗作用。***-16减弱HSC的活化(体外)选取不同浓度的HD-16,采用MTT法测量在HD-16(0、2、4、8、16、32、64、128、256和512 μM)浓度时对LX-2细胞的细胞毒性的影响,用TGF-β1(10 ng/ml)刺激TGF-β1刺激组和HD-16处理组的细胞24小时,采取MTT方法检测细胞活力,筛选出药物的安全剂量。Western blot和RT-PCR检测HSC细胞α-SMA、α(Ⅰ)原胶原、和α-肌动蛋白表达水平。***-16对AMPK/SIRT3通路的作用通过LipofectamineTM2000分别沉默SIRT3和AMPK发现,AMPK通路是肝纤维化中SIRT3的上游调节因子。综上所述,HD-16增加了 AMPK磷酸化从而促进了肝纤维化中SIRT3的表达和活性,并激活了 LX-2细胞,HD-16通过调节AMPK/SIRT3通路减轻CCl4诱导的肝脏炎症和纤维化,HD-16有可能是一种潜在抗纤维化化合物。结果:病理学结果和血清学检测均显示HD-16能够改善CCl4诱导的小鼠肝脏炎症以及肝纤维化程度。转染实验发现HD-16增加了 AMPK磷酸化从而促进了肝纤维化中SIRT3的表达和活性,

关键词：橙皮素衍生物-16 肝纤维化炎症 SIRT3和AMPK

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小鼠脑出血模型衰老相关转录组和蛋白组学研究

小鼠脑出血模型衰老相关转录组和蛋白组学研究

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作者：李新慧重庆医科大学

学位级别：硕士

背景:脑出血(Intracerebral hemorrhage,ICH)是一类严重危害中国人健康的急性脑血管卒中,在所有卒中类型约占10%到20%,以治愈率低、死亡率高、致残率高为特点。有40%到50%的患者在患病后30天内死亡,超过半数患者出院后遗留严重残疾。高... 详细信息

背景:脑出血(Intracerebral hemorrhage,ICH)是一类严重危害中国人健康的急性脑血管卒中,在所有卒中类型约占10%到20%,以治愈率低、死亡率高、致残率高为特点。有40%到50%的患者在患病后30天内死亡,超过半数患者出院后遗留严重残疾。高龄作为常见的ICH危险因素,与不良预后独立相关,既往研究发现不同年龄段的ICH群体脑内有显著不同的病理改变,但其内部分子机制尚不清楚。方法:1.本研究采用胶原酶诱导的ICH小鼠模型,用高通量转录组和蛋白组学分析血肿周围组织,探讨高龄与ICH后不良预后之间的相互关系。2.鉴定出20-22月龄老年和8-10周龄青年小鼠ICH后差异表达基因(Differentially expressed genes,DEGs)和差异表达蛋白(Differentially expressed proteins,DEPs);***和DEPs的功能分析采用基因本体论(Gene Ontology,GO)和IPA通路分析(Ingenuity Pathway Analysis,IPA)、京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG);经蛋白质-蛋白质相互作用(Protein-protein interaction,PPI)分析后,在Cytoscape软件构建PPI网络,并用MCODE插件进行模块聚集后用DAVID数据库进行功能分析;4.用实时定量聚合酶链反应法(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR)验证筛选通路的关键DEGs。结果:1.在ICH后24小时,行为学实验中老年ICH小鼠的神经功能明显比青年ICH小鼠差,且体重减轻比老年假手术组明显。2.转录组学分析表明:与假手术相比,在青年ICH小鼠共鉴定出2337个DEGs(1608个上调,729个下调),老年ICH小鼠共鉴定出2005个DEGs(1446个上调,559个下调);生物信息学分析表明ICH导致老年小鼠细胞质DNA感受通路激活,且在ICH的作用下,通路下游分子I型干扰素(Interferon,IFN)介导的反应在老年小鼠中比在青年小鼠中激活更显著;RT-q PCR验证实验表明在老年小鼠中ICH组和对照组相比,环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cyclic GMP-AMP synthase,c GAS)、Z型脱氧核糖核酸结合蛋白1(Z-DNA-binding protein 1,ZBP1)和干扰素-β(Interferon-β,IFN-β)基因的表达明显上调。3.蛋白组学分析表明:ICH血肿周围组织发生了不同的改变;老年小鼠有糖酵解相关蛋白的改变,青年小鼠有脂代谢和核糖体相关蛋白的改变;老年和青年小鼠ICH后均激活铁稳态通路,但参与通路的蛋白分子不同。结论:研究表明,老年小鼠比青年小鼠对ICH反应更差。研究展示了青年和老年小鼠ICH后转录模式和蛋白表达模式的差异,这些发现可促进对ICH后脑内病理学的理解,并有助于将基础研究结果转化为临床应用。

关键词：衰老炎症脑出血转录组学蛋白组学

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组蛋白去乙酰化酶抑制剂通过调节FOXF2表达影响基底样乳腺癌生物学行为

组蛋白去乙酰化酶抑制剂通过调节FOXF2表达影响基底样乳腺癌生物...

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作者：庄慧萍天津医科大学

学位级别：硕士

背景基底样乳腺癌(basal-like breast cancers,BLBC)是恶性程度高且对内分泌治疗和HER2靶向治疗不敏感的乳腺癌亚型。表观遗传学的组蛋白修饰异常影响肿瘤的发展进程。组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase Inhibitors,HDACIs)... 详细信息

背景基底样乳腺癌(basal-like breast cancers,BLBC)是恶性程度高且对内分泌治疗和HER2靶向治疗不敏感的乳腺癌亚型。表观遗传学的组蛋白修饰异常影响肿瘤的发展进程。组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase Inhibitors,HDACIs)通过靶向组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs),发挥抑制细胞增殖、抑制血管生成和促进细胞凋亡等作用。HDACIs中的广谱性抑制剂SAHA和LBH589在多种血液肿瘤中已进行临床应用并显示了良好的治疗效果。对于包括乳腺癌在内的多种实体瘤,选择性抑制剂MS-275在体内外实验中显示了一定的抗癌作用。目前SAHA和LBH589在乳腺癌中的研究已进入临床Ⅱ期试验,MS-275已进入Ⅲ期临床试验阶段,但是结果显示其给药组的无进展生存期与对照组无异。有研究发现,在乳腺癌、前列腺癌和肺癌等癌症中,SAHA通过诱导肿瘤细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),增强了肿瘤细胞的转移潜能,但其机制尚不明确。因此SAHA、LBH589和MS-275对于BLBC的影响有待进一步研究。课题组前期研究发现,叉头框转录因子F2(forkhead box F2,FOXF2)在BLBC中异位高表达。FOXF2通过转录激活BMP4/SMAD1信号通路和骨相关基因的表达,促进EMT/上皮-成骨转化和骨转移;FOXF2的缺乏导致EMT相关转录因子(TWIST1、FOXQ1和FOXC2等)、TGF-β2/3和miR-182-5p的转录上调,促进EMT/上皮-成肌转化和内脏转移。SAHA、LBH589和MS-275对BLBC中FOXF2表达的影响及FOXF2介导HDACIs影响BLBC发生和发展的作用和机制尚未报道。目的本研究旨在探究已进入临床试验阶段的HDACIs SAHA、LBH589和MS-275对FOXF2表达的影响以及FOXF2介导HDACIs对BLBC生物学行为的作用,为靶向HDACs治疗BLBC的临床应用可行性提供理论基础和实验依据。方法 1、在人源BLBC细胞MDA-MB-231和鼠源BLBC细胞4T1中,通过慢病毒转染建立过表达外源性以及敲降内源性FOXF2/Foxf2的细胞及其对照细胞。采用HDACIs SAHA、LBH589和MS-275处理细胞;2、通过RT-qPCR和Western blot实验检测SAHA、LBH589和MS-275对BLBC细胞中FOXF2的mRNA和蛋白表达的影响;3、通过回复实验,进一步研究HDACIs对FOXF2下游靶基因FOXQ1、WNT2B、FZD1以及EMT相关标志物VIM和FN1的mRNA和蛋白表达的作用;4、通过MTT和平板克隆实验检测FOXF2介导HDACIs对MDA-MB-231和4T1细胞增殖能力的影响;5、通过Transwell和划痕实验检测FOXF2介导HDACIs对MDA-MB-231和4T1迁移和侵袭能力的影响;6、将4T1细胞及稳定敲降或过表达Foxf2的4T1细胞原位接种于雌性Balb/c小鼠右侧乳腺脂肪垫。将接种4T1-sh Foxf2和4T1-sh Control细胞的小鼠随机各自分成2组,分别随机选择1组设为对照组,另外一组灌胃给药MS-275;将接种4T1-Foxf2和4T1-Vector细胞的小鼠随机各自分成2组,分别随机选择1组设为对照组,另外一组腹腔注射SAHA。对照组分别给予同等体积的溶剂。每3天测量接种肿瘤细胞小鼠的原位瘤体积并绘制生长曲线,给药4周后处死并解剖小鼠,统计原位瘤体积,通过肺组织HE染色观察其病理学变化。结果 1、MS-275增加BLBC细胞中FOXF2 mRNA和蛋白的表达;SAHA抑制MDAMB-231细胞中FOXF2的表达;LBH589不影响FOXF2的表达;2、MS-275显著抑制BLBC细胞中FOXF2下游靶基因FOXQ1、WNT2B、FZD1和EMT相关标志物的mRNA和蛋白的表达,SAHA上调FOXF2下游靶基因和EMT相关标志物的mRNA和蛋白的表达;敲降FOXF2的表达,MS-275处理细胞后回复FOXF2下游靶基因和EMT相关标志物的表达的下调;过表达FOXF2,SAHA处理可回复FOXF2下游靶基因和EMT相关标志物的表达的上调;3、MS-275和SAHA处理后,MDA-MB-231和4T1细胞的增殖能力显著下降;敲降FOXF2/Foxf2的表达,MS-275处理后细胞的增殖能力无明显变化;过表达FOXF2/Foxf2,SAHA处理后细胞的增殖能力无明显变化;4、MS-275显著抑制MDA-MB-231和4T1细胞的迁移和侵袭能力,SAHA增

关键词：基底样乳腺癌组蛋白去乙酰化酶抑制剂 FOXF2 增殖转移

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逆撕A型主动脉夹层犬模型建立与验证及血管平滑肌细胞表型转换与夹层进展关系的实验研究

逆撕A型主动脉夹层犬模型建立与验证及血管平滑肌细胞表型转换与...

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作者：刘宗玮天津医科大学

学位级别：硕士

背景:主动脉夹层(aortic dissection,AD)是一种严重危害患者生命的急性主动脉事件,其中逆向撕裂Stanford A型AD(retrograde type A aortic dissection,RTAD)死亡率高达37.1%。开放手术是RTAD的经典治疗方法,但该手术围术期死亡率及并发... 详细信息

背景:主动脉夹层(aortic dissection,AD)是一种严重危害患者生命的急性主动脉事件,其中逆向撕裂Stanford A型AD(retrograde type A aortic dissection,RTAD)死亡率高达37.1%。开放手术是RTAD的经典治疗方法,但该手术围术期死亡率及并发症率高,高龄高危患者难以获得有效治疗。目前,对于RTAD的微创腔内治疗方法正在探索中。大动物RTAD模型可为新型腔内治疗器械的研发提供良好的实验平台,但目前缺乏手术成功率稳定、可重复性强的RTAD大动物模型建立方法,这使腔内微创治疗RTAD的推进面临巨大挑战。因此,构建具有稳定成功率的RTAD大动物模型可为腔内治疗器械的研发及AD相关基础研究提供必要的实验动物平台。目的: 本研究拟通过外科手术方式构建RTAD犬模型。比较RTAD犬模型与RTAD患者影像学及血流动力学改变的相似性,验证其作为研究人类主动脉夹层模型的可行性。进而通过该模型探索AD发生后血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)表型转换与AD进展过程中动脉增殖、炎症细胞浸润的相互关系。方法: 1.通过外科手术方式构建RTAD犬模型。选择本地健康成年杂种犬17只,月龄12-24个月,体重15-20kg,雌雄不限,分为对照组(n=6)及实验组(n=11)。实验组实验犬经外科手术方法构建RTAD模型,术后2h行血管CTA检查验证模型成功率。对照组实验犬仅暴露主动脉,不构建动脉夹层,以降低手术操作对实验的干扰。术后5天各取3只实验组(5day-AD组)及对照组(5day-control组)犬作为AD急性期研究对象。术后30天各取3只实验组(30day-AD组)及对照组(30day-control)犬作为AD亚急性期的研究对象。行IVUS、DSA、CTA等检查明确假腔是否存在、假腔面积占比及真假腔血流速度差异,对所有实验动物建模成功率、夹层撕裂范围及长度进行对比分析。 2.通过软件分析比较RTAD犬模型与RTAD患者影像学及血流动力学改变的相似性。收集RTAD患者与实验犬CTA图像的DICOM格式数据,将数据导入Mimics医学图像处理软件,通过Mask编辑以及阈值分割功能提取所需血管数据。利用3-Matic软件对Mimics导出的STL格式数据进行曲面拟合及平滑处理,最终形成便于流体力学分析的三维立体模型。使用ANSYS-Fluent-Meshing模块对所得模型划分面网格及体网格,使用ANSYS-Fluent-Solution模块进行流体力学分析。计算一个心动周期中收缩期峰值时血液流场流速线及壁面剪应力在主动脉真、假腔中的不同,对比RTAD动物模型与RTAD患者血流动力学参数的相似性。 3.获取实验组及对照组实验犬动脉组织,通过RT-q PCR、Western blot、免疫组织化学染色、免疫荧光染色等方法观察动脉壁中血管平滑肌表型转换分子(α-SMA、SM-22α、SPP1)的表达情况;观察细胞增殖相关蛋白(MCM2)及巨噬细胞标记因子(CD68)与SPP1表达的关系,使用HE、Masson、EVG染色观察组织病理学改变。结果: 1.经外科手术方法构建RTAD犬模型手术成功率为100%,存活率为81.8%(9/11),其中1只实验犬死于术后肺不张,1只死于术后严重心率失常。9例完成术后2h CTA检测,假腔总长度(179.88±9.41)mm,以术中制作的主动脉破口为起始点测量逆血流方向假腔撕裂长度(71.90±3.76)mm、顺血流方向假腔长度(107.93±5.64)mm。其中近心端逆撕假腔累及升主动脉9例(100%)、累及头臂动脉9例(100%)、累及锁骨下动脉9例(100%),远心端顺撕假腔累及腹腔干动脉3例(33.3%)。术后30天DSA造影结果显示实验犬主动脉真腔显影变细、假腔显影不良,考虑假腔内大量血栓形成。术后30天CDFI检查可见主动脉夹层破口明显、动脉中膜层分离。逆撕假腔血流速度(9.77±0.21)cm/s显著小于逆撕真腔血流速度(15.85±0.51)cm/s(F=357.840,P<0.001);自主动脉破口以远5cm处假腔流速(7.08±0.52)cm/s显著低于真腔血流速度(23.74±1.07)cm/s(F=588.216,P<0.001),且假腔内血流方向紊乱。术后30天IVUS结果显示假腔面积占管腔面积比例从术中制造破口到主动脉远端破口(主动脉假腔最远端)逐渐增大(F=269.817,P<0.001)且血栓含量增多。术后5天及30天处死实验犬后获取动脉组织可见主动脉呈紫红色,动脉管腔呈真假腔分离状态,假腔近心端累及升主动脉,远心端累及至腹腔干动脉。 2.实验犬模型与人类

关键词：逆撕A型主动脉夹层犬模型平滑肌表型转换血流动力学

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5,6,7,4′-四羟基异黄酮-5′-磺酸钠防治缺血性脑卒中的作用机理研究

5,6,7,4′-四羟基异黄酮-5′-磺酸钠防治缺血性脑卒中的作用机理...

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作者：曾丝丝西南医科大学

学位级别：硕士

目的:缺血性脑卒中是一类严重危害人类身体健康的心脑血管疾病。目前尚缺乏能有效防治该病的药物。5,6,7,4′-四羟基异黄酮-5′-磺酸钠(YCL)是在中药川射干有效成分射干苷元基础上合成的化合物,本研究拟通过相关实验评价其对缺血性脑卒... 详细信息

目的:缺血性脑卒中是一类严重危害人类身体健康的心脑血管疾病。目前尚缺乏能有效防治该病的药物。5,6,7,4′-四羟基异黄酮-5′-磺酸钠(YCL)是在中药川射干有效成分射干苷元基础上合成的化合物,本研究拟通过相关实验评价其对缺血性脑卒的作用及其作用机理,以期发现一个能有效防治缺血性脑卒中的创新药物。方法:1、中药射干抗脑卒中有效成分筛选研究:将待筛选川产道地药材射干中分离出来的黄酮类成分单体化合物-14、18和35号化合物,选择HO损伤的PC12细胞作为本实验的氧化损伤模型,通过3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)实验,建立HO氧化损伤模型,确定HO的作用浓度以及作用时间,再通过乳酸脱氢酶(LDH)和MTT实验,验证待选化合物是否对HO损伤的PC12细胞具有保护作用;最后通过体外对乙酰胆碱酶和对丁酰胆碱酶活性检测,筛选化合物是否有体外抗乙酰胆碱酶和对丁酰胆碱酶活性能力。2、YCL在大鼠体内的药物动力学研究:采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用方法(UPLC-QQQ-MS)技术,检测大鼠腹腔注射YCL200mg·kg后不同时间点血浆及脑组织YCL原型成分、其主要代谢物水平及其动力学参数。3、5,6,7,4′-四羟基异黄酮-5′-磺酸钠(YCL)防治缺血性脑卒中作用研究:1)选择雄性SD大鼠,通过线栓法复制大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注大鼠模型,按神经功能缺损评分标准和氯化三苯四氮唑(TTC)染色法评价大鼠行为学和梗死面积;腹主动脉取血测定生化指标超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、还原性谷胱甘肽(GSH)及一氧化氮(NO)活性,以及对大鼠脑组织的病理学观察来进一步评价YCL防治大鼠缺血性脑卒中(CIS)的作用;2)选择雄性KM小鼠,通过小鼠急性脑缺血缺氧实验模型-小鼠断头实验的行为学和生化指标检测,初步评价YCL防治小鼠急性脑缺血缺氧的作用。4、YCL防治缺血性脑卒中作用机理研究:通过亚硝酸钠中毒致小鼠缺氧损伤模型和记忆力巩固障碍模型初步评价YCL的药理作用;然后通过YCL体外抗氧化实验进一步探索YCL抗缺血性脑卒中的作用机理。结果:1、通过化合物对PC12毒性作用实验发现:14号化合物的安全浓度范围为0-1μg·m L,35号化合物安全浓度范围为0-10μg·m L,而18号化合物对PC12细胞几乎无抑制作用。MTT法实验发现:当HO的浓度为60μmol·L,14号化合物药物浓度为0.125μg·m L时,能显著提高细胞的存活率,对HO损伤的PC12细胞有明显的保护作用;当HO的浓度为100μmol·L,18号化合物药物浓度为1μg·m L、10μg·m L和35号化合物药物浓度为0.1μg·m L、0.01μg·m L时,能显著提高细胞的存活率,对HO损伤的PC12细胞有明显的保护作用。最后再通过LDH和MTT法得出,14、18和35号化合物对HO引起的细胞损伤都具有一定的保护作用,而都对乙酰胆碱酶和丁酰胆碱酶活性没有作用。总之,体外筛选发现川产道地药材射干中分离出来的黄酮类成分单体化合物-14、18和35号化合物在PC12细胞氧化应激损伤中都具有一定的神经保护作用,其中14号化合物取名为YCL。2、YCL在大鼠体内药代动力学研究结果显示YCL 200 mg·kg在大鼠血浆中和脑组织中的T分别是9.167±4.916 min和0.253±0.165 h,t分别是29.42±13.169 min和0.342±0.027 h,CL分别是243.592±88.919 m L/min/kg和1520.988±558.296 m L/h/kg,且发现其主要二相代谢产物为2种葡萄糖醛酸化代谢物。说明YCL在大鼠血浆和脑中呈现吸收快、消除快等特点,有利于其快速入血和入脑发挥药效,同时提示在进行药物的药效学研究时,除了原型化合物,还应该关注代谢物之间相互转化的情况。3、通过MCAO再灌注大鼠模型实验发现,5,6,7,4′-四羟基异黄酮-5′-磺酸钠(YCL)各剂量组减轻了MCAO引起的神经功能缺损、缩小了梗死面积,可提高SOD活力,其中YCL-50和YCL-100组可降低MDA含量。同时YCL-200组可降低脑组织含水量、减轻脑水肿,减轻大脑中动脉闭塞诱导的大鼠大脑病变程度、降低损伤发生率,对大脑中动脉闭塞诱导的大鼠大脑损伤有较好的治疗作用。表明YCL对MCAO模型大鼠的缺血性脑损伤具有改善作用。通过小鼠急性脑缺血缺氧模型—小鼠断头实验发现,YCL不能延长小鼠的呼吸时间,对小鼠急性脑缺血缺氧无明显作用。4、YCL对亚硝酸钠中毒致小鼠缺氧损伤实验发现,YCL不能延长小鼠的呼吸时间;YCL对亚硝酸钠致小鼠记忆力巩固障碍实验发现,YCL-100和YCL-200组潜伏期明显增加,错误次数明显减少,能明显改善

关键词： 5,6,7,4′-四羟基异黄酮-5′-磺酸钠(YCL) 药代动力学脑缺血再灌注抗氧化作用机制

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黄芪甲苷抗肝癌作用及调控pSmad3C/L和Nrf2/HO-1信号通路的探究

黄芪甲苷抗肝癌作用及调控pSmad3C/L和Nrf2/HO-1信号通路的探究

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作者：李利利安徽医科大学

学位级别：硕士

背景肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）是病死率较高的恶性肿瘤之一。HCC由各种复杂的危害因素引发,多形成于慢性肝病或肝硬化的基础上。目前,针对肝细胞癌的治疗有限,大多数患者总体预后较差。因此,仍需进一步探索更多针对HCC... 详细信息

背景肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）是病死率较高的恶性肿瘤之一。HCC由各种复杂的危害因素引发,多形成于慢性肝病或肝硬化的基础上。目前,针对肝细胞癌的治疗有限,大多数患者总体预后较差。因此,仍需进一步探索更多针对HCC的防治策略。近年来,研究表明一些中药单体对癌细胞增殖、转移及癌组织血管生成具有显著的抑制作用,且具有无副作用及不良反应等优势。黄芪甲苷（Astragaloside IV,AS-IV）是中药黄芪的单体,在一些恶性肿瘤中表现出良好的抗癌作用。目前,仅有研究表明AS-IV对肝癌细胞和荷瘤小鼠具有一定的抑制作用。然而,AS-IV对DEN/CCl4/C2H5OH诱导的C57BL/6J小鼠肝癌发生发展的影响仍不明确。本课题组前期研究表明复方芪参在体内外通过调控p Smad3C/L通路抑制肝细胞癌进展,而AS-IV作为复方芪参的有效成分之一是否也通过调控p Smad3C/L通路发挥肝癌抑制作用仍有待探究。另外,有研究发现,AS-IV通过增加Nrf2的转录激活,并增强HO-1的表达减轻了对乙酰氨基酚诱导的小鼠肝毒性。那么,AS-IV抗HCC作用是否涉及调控Nrf2/HO-1信号通路?带着这些疑问,本研究使用DEN/CCl4/C2H5OH诱导的C57BL/6J小鼠肝癌模型、TGF-b1刺激的人肝癌Hu H-7细胞,从体内、外角度观察AS-IV对HCC的影响,并对其作用机制进行探究。目的1.明确AS-IV对DEN/CCl4/C2H5OH诱导的C57BL/6J小鼠肝癌的影响,并探究AS-IV作用机制是否与调控p Smad3C/L及Nrf2/HO-1信号通路有关。2.明确AS-IV对TGF-b1刺激的Hu H-7细胞增殖、迁移、侵袭的影响,并探究AS-IV作用机制是否与调控p Smad3C/L及Nrf2/HO-1信号通路有关。方法***-IV对DEN/CCl4/C2H5OH诱导的C57BL/6J小鼠肝癌的影响及机制探究分组如下:对照组、模型组、AS-IV（20 mg/kg）组、AS-IV（40 mg/kg）组、AS-IV（80 mg/kg）组、Colchicine（0.1 mg/kg）组。除对照组外,其余组采用DEN/CCl4/C2H5OH联合诱导小鼠肝癌。AS-IV各剂量组和Colchicine组每天灌胃给予相应剂量的药物,其余组给予相应溶媒。于第20周末进行小鼠取材,收集小鼠血清和肝组织样本。用试剂盒检测ALT、AST、SOD、MDA、TGF-β1水平;HE染色察看组织病理学变化;Western blot检测GST-P1、AFP、TGF-β1、p Smad3C、p21、p Smad3L、c-Myc、Nrf2/p Nrf、HO-1蛋白水平;免疫荧光法检测p Smad3C/L的表达。***-IV对TGF-β1刺激的Hu H-7细胞增殖、迁移、侵袭的影响及机制探究分组如下:对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AS-IV（5μM）组、TGF-β1+AS-IV（10μM）组、TGF-β1+AS-IV（20μM）组。除对照组外,其余组采用TGF-β1（9或40 p M）刺激Hu H-7细胞。AS-IV各浓度组加入相应终浓度的药物处理24 h,其余组加入等体积溶媒。CCK-8法、细胞划痕法、Transwell小室法分别检测细胞增殖、迁移、侵袭能力;DCFH-DA法检测细胞内ROS水平;Western blot检测p Smad3C、p21、p Smad3L、c-Myc、Nrf2/p Nrf2、HO-1蛋白水平;细胞免疫荧光法检测p Smad3C、Nrf2的表达和分布。结果***-IV减缓DEN/CCl4/C2H5OH诱导的小鼠肝癌病理进程观察各组小鼠肝脏,模型组可见肿瘤病灶和结节斑块,AS-IV给药组肿瘤病灶和结节斑块数量有所减少。HE染色显示,模型组小鼠肝细胞排列紊乱,可见蓝染明显、大小不一的异型细胞核,大范围可见肝癌细胞病灶区;与模型组相比,AS-IV给药组肝组织病变程度有所改善。检测肝癌标志蛋白AFP、GST-P1发现,与对照组相比较,DEN/CCl4/C2H5OH诱导小鼠肝组织中AFP、GST-P1蛋白水平显著升高;而随着AS-IV给药剂量的增加,小鼠肝组织中AFP、GST-P1蛋白水平逐渐降低,进一步验证了AS-IV对小鼠肝癌的抑制作用。另外,肝功能指标（ALT、AST）和氧化应激损伤指标（SOD、MDA）检测结果表明,DEN/CCl4/C2H5OH诱导小鼠出现了显著的肝功能损伤和氧化应激损伤;而AS-IV给药后,小鼠肝功能损伤和氧化应激损伤程度逐渐得到减轻。***-IV调控p Smad3C/L通路相关蛋白减缓小鼠肝癌病理进程2.1 AS-IV降低肝癌小鼠血清和肝组织中TGF-β1水平通过EL

关键词：黄芪甲苷肝癌 pSmad3C/L Nrf2/HO-1

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类沸石咪唑框架衍生的催化剂在活性氧和黄酮类药物测定中的应用研究

类沸石咪唑框架衍生的催化剂在活性氧和黄酮类药物测定中的应用研...

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作者：李秋霞广州医科大学

学位级别：硕士

背景:肿瘤、心血管疾病、糖尿病等重大疾病的发生,与机体的氧化和抗氧化生理过程密切相关。生物组织内活性氧浓度过高,则容易引起氧化应激,诱发疾病。而黄酮类药物,具有清除活性氧自由基、抗炎、抗肿瘤、降压降脂等药理作用,被广泛应用... 详细信息

背景: 肿瘤、心血管疾病、糖尿病等重大疾病的发生,与机体的氧化和抗氧化生理过程密切相关。生物组织内活性氧浓度过高,则容易引起氧化应激,诱发疾病。而黄酮类药物,具有清除活性氧自由基、抗炎、抗肿瘤、降压降脂等药理作用,被广泛应用于疾病治疗和机体保健。因此,分析检测活性氧与黄酮类药物,对于氧化应激的病理生理学过程研究、疾病的预防和诊断以及机体健康的监护意义重大。在传统的分析检测技术中,如色谱法和光谱法虽然能够达到准确测定的目的,但是这些方法存在设备复杂、操作步骤繁琐、测定过程耗时以及检测成本高等不足。与传统技术相比,电化学分析法具有操作简单、响应快、灵敏度高、检测便捷和成本可控等特点,是一种应用前景广泛的分析方法。在整个电化学分析体系中,最为关键且极具挑战性的工作就是开发高性能的电化学催化剂,新型高效的催化剂是电化学分析研究的核心和热点。目的: 本论文以经典的类沸石咪唑框架化合物（Zeolite imidazole frameworks,ZIFs）为模板,通过高温热解的方法,合成新型高效的电催化剂。并将所得电催化剂应用于活性氧及黄酮类药物的电催化反应,探究催化的过程和机理。籍此为基础,构建新型电化学传感器,实现活性氧及黄酮类药物的高效电化学分析检测。方法: 以ZIFs-67为模板,采用两步氧化-还原热解方法,控制调节ZIFs-67的碳化和热解过程,得到两种ZIFs-67衍生的催化剂:（1）内嵌Co@Co3O4核-壳纳米颗粒的氮掺杂碳多面体催化剂（Co@Co3O4-NC）;（2）嵌入氧化钴纳米颗粒的中空多孔碳十二面体催化剂（HPND-CN）。使用场发射扫描电镜、高分辨透射电镜、粉末X射线衍射仪、X射线光电子能谱仪和氮气吸附-脱附测试仪对所得催化剂的形貌、结构、组成元素和多孔性进行表征。随后,将Co@Co3O4-NC作为催化剂应用于经典的活性氧分子——过氧化氢（H2O2）的氧化还原反应电催化,构建高效分析H2O2的电化学传感器;把HPND-CN用于经典的黄酮类药物,包括芦丁、槲皮素和二氢杨梅素的反应电催化,构建高效分析检测黄酮类药物的电化学传感器。结果: 本论文合成的Co@Co3O4-NC催化剂含碳、氮、氧、钴元素,且具有多孔结构、比表面积大、氮掺杂碳异质结、均匀内嵌的Co@Co3O4核-壳纳米颗粒等特点。以Co@Co3O4-NC修饰玻碳电极构建的电化学传感器（Co@Co3O4-NC/GCE）,对H2O2氧化和H2O2还原具有较强的电催化性能。对于H2O2的氧化,Co@Co3O4-NC/GCE的电流响应快（2 s）、检出限低（0.056μM）和检测线性范围宽（0.1μM～40.0 m M）。对于H2O2还原,Co@Co3O4-NC/GCE也具有快速的电流响应（4s）、较低的检测限（0.96μM）和较宽的线性范围（0.2μM～60.0 m M）。此外,Co@Co3O4-NC/GCE还表现出显著的抗干扰能力、重现性、重复性和长期稳定性。制备的HPND-CN催化剂由碳、氮、氧、钴元素组成,且具有轮廓清晰的十二面体形貌、中空多孔的内部结构、较大的比表面积、独特的内嵌氧化钴纳米颗粒和丰富的氮掺杂活性位点等。将HPND-CN修饰于玻碳电极表面制备的电化学传感器（HPND-CN/GCE）对芦丁、槲皮素和二氢杨梅素具有良好的电催化作用。在最佳实验条件下,芦丁检测的线性范围是0.007～1.0μM,检测限为5.07 n M。槲皮素检测的线性范围是0.1～50.0μM,检测限为0.03μM。二氢杨梅素的线性范围是0.2～150.0μM,检测限为0.05μM。此外,HPND-CN/GCE还表现出较好的抗干扰能力、重现性、重复性和稳定性。HPND-CN/GCE用于实际样品,如:复方芦丁片中的芦丁的含量测定,结果准确可靠。结论: 以ZIFs-67为模板,通过两步还原-氧化高温热解法,成功合成了ZIFs衍生的高性能催化剂:Co@Co3O4-NC和HPND-CN。以Co@Co3O4-NC为催化剂,实现了H2O2氧化和H2O2还原反应的高效电化学催化,并构建了新型的H2O2电化学传感器,精确测定了活性氧——H2O2;以HPND-CN为催化剂,实现了黄酮类药物反应的高效催化过程,构建高效分析黄酮类药物的电化学传感器,并应用于黄酮类药物片剂的含量测定。以上工作为活性氧的分析监测以及黄酮类药物的检测提供了可供参考的方法和数据。

关键词：类沸石咪唑框架化合物过氧化氢黄酮类药物电化学传感器

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原花青素B2通过抑制NLRP3活性减轻过氧化氢对H9c2细胞的损伤

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中国药理学通报 2020年第11期36卷 1552-1557页

作者：姚鹏梅刘倩倩金婷唐富天刘义锦州医科大学附属第一医院内科辽宁锦州121001 锦州医科大学基础医学院药理学教研室辽宁锦州121001 兰州大学第二医院心血管研究所甘肃兰州730030

目的研究原花青素B2(procyanidin B2,PCB2)对过氧化氢(H2O2)诱导的H9c2心肌细胞损伤的作用和机制。方法将H9c2细胞分为5组,分别是对照(control)组,H2O2组,H2O2+PCB2(5 mg·kg^-1)组,H2O2+PCB2(15 mg·kg^-1)和H 2O 2+PCB2(45 mg·kg^-1)组。测定细胞NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱天冬酶-1(caspase-1)、白细胞介素(IL)-1β和IL-18蛋白表达。测定细胞活性氧(ROS)含量,丙二醛(MDA)含量,乳酸脱氢酶(LDH)、总抗氧化酶(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果与Control组相比,H2O2组H9c2细胞活力下降,LDH释放增加。与H2O2组相比,PCB2能够增加细胞活力和降低LDH释放,且作用具有剂量依赖性。PCB2还能够剂量依赖性地下调H2O2作用后细胞中NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达水平,减少MDA和ROS含量,增加T-AOC、SOD、CAT和GSH-Px活性。结论PCB2能够减轻H2O2引起的H9c2细胞损伤,该作用与其抑制氧化应激介导的NLRP3活化有关。

关键词：原花青素B2 过氧化氢 H9c2细胞 NLRP3 抗氧化酶丙二醛

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ApoE-/-小鼠在中医抗动脉粥样硬化研究中的应用及进展

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淮海医药 2023年第2期41卷 209-211页

作者：江雨晨安徽医科大学生命科学学院安徽合肥230032

在全球范围内,心血管疾病已成为威胁人类健康的“头号杀手”,而动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是心血管疾病共同的病理生理基础,已成为欧美国家第一大死亡原因;在中国,随着经济水平及生活方式的改变,其发病率也呈逐年上升趋势。ApoE... 详细信息

在全球范围内,心血管疾病已成为威胁人类健康的“头号杀手”,而动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是心血管疾病共同的病理生理基础,已成为欧美国家第一大死亡原因;在中国,随着经济水平及生活方式的改变,其发病率也呈逐年上升趋势。ApoE-/-小鼠由美国洛克菲勒大学生化遗传与代谢实验室和北卡罗莱纳大学病理遗传实验室应用胚胎干细胞基因敲除技术于1992年培育成功。ApoE-/-小鼠是动脉粥样硬化研究的经典动物模型,可在自然膳食的情况下形成严重的高脂血症,并自发形成纤维斑块和复合斑块,病理学改变与人类极为相似,因而被广泛应用于中医抗AS的研究。

关键词：动脉粥样硬化小鼠,ApoE-/- 中医抗AS 应用及进展综述

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