检索结果-内蒙古大学图书馆

中国感染控制杂志 2020年第10期19卷 864-870页

作者：赵跃丽饶清孙强明张兰胜大理大学药学与化学学院云南大理671000 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的构建诺如病毒GⅡ(Norovirus GenogroupⅡ,NoV GⅡ)拷贝数标准质粒及其检测体系。方法将合成高度保守的NoV GⅡ基因序列片段克隆至pUC57载体上,构建NoV GⅡ标准质粒,采用聚合酶链反应(PCR)进行验证。通过实时荧光定量PCR扩增曲线结... 详细信息

目的构建诺如病毒GⅡ(Norovirus GenogroupⅡ,NoV GⅡ)拷贝数标准质粒及其检测体系。方法将合成高度保守的NoV GⅡ基因序列片段克隆至pUC57载体上,构建NoV GⅡ标准质粒,采用聚合酶链反应(PCR)进行验证。通过实时荧光定量PCR扩增曲线结果绘制C t值与病毒拷贝数的标准曲线,求得其相应的标准曲线方程。采用建立的标准质粒及其检测体系对2018年12月昆明市儿童医院4份临床粪便标本进行检测。结果经PCR验证,NoV GⅡ拷贝数的标准质粒构建正确。采用实时荧光定量PCR的扩增曲线获得C t值与病毒拷贝数相对应的标准曲线方程为Y=-3.972X+39.03,R^2=0.991,4份粪便标本原液NoV GⅡ病毒拷贝数分别为30443.45、9468.40、53176.69、4493.12 copies/μL。结论成功建立用于检测粪便标本中NoV GⅡ病毒拷贝数的标准质粒及其检测体系,可为疾病的预防控制和相关试验研究提供有效的定量检测方法。

关键词：诺如病毒GⅡ 病毒拷贝数实时荧光定量PCR 标准曲线

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柯萨奇病毒B组2型(CVB2)病毒蛋白转染上皮细胞后诱导的免疫应答信号分子的特征分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2019年第5期39卷 321-326页

作者：牟唐维吴化叶柳蕾王建斌张莹李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的分析柯萨奇病毒B组2型(coxsackievirus B2,CVB2)病毒蛋白转染上皮细胞后诱导的免疫应答信号分子特征。方法构建CVB2结构蛋白重组真核表达质粒转染16HBE细胞,收集转染后的16HBE细胞培养上清和裂解物。利用RT-Q-PCR技术检测转染后的16... 详细信息

目的分析柯萨奇病毒B组2型(coxsackievirus B2,CVB2)病毒蛋白转染上皮细胞后诱导的免疫应答信号分子特征。方法构建CVB2结构蛋白重组真核表达质粒转染16HBE细胞,收集转染后的16HBE细胞培养上清和裂解物。利用RT-Q-PCR技术检测转染后的16HBE细胞中与固有免疫应答相关的信号分子的mRNA表达水平。利用ELISPOT检测转染后的16HBE细胞上清和裂解物与T细胞共培养后该T细胞的增殖效应。结果CVB2结构蛋白VP1~VP4转染16HBE细胞后与固有免疫相关的信号分子如TAK、NIK、IKKα、IFN-β等基因表达量均发生了不同程度的上调;CVB2 VP1~VP4转染后的16HBE细胞上清和裂解物与T细胞共培养发现,均能刺激T细胞增殖。结论CVB2结构蛋白VP1~VP4可以不同程度地激活与固有免疫相关信号分子的表达,并且对适应性免疫的激活具有促进作用。

关键词：柯萨奇病毒B组2型结构蛋白免疫应答

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固有淋巴细胞研究进展

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中华微生物学和免疫学杂志 2019年第5期39卷 389-395页

作者：王建斌李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

固有淋巴细胞(innate lymphoid cells,ILCs)是一群新近发现的具有适应性免疫功能的固有免疫细胞,分化源于共同淋巴祖细胞(common lymphoid progenitor,CLP),存在于全身多个组织中。根据其分泌的细胞因子和表达的转录因子可以分为3个亚群... 详细信息

固有淋巴细胞(innate lymphoid cells,ILCs)是一群新近发现的具有适应性免疫功能的固有免疫细胞,分化源于共同淋巴祖细胞(common lymphoid progenitor,CLP),存在于全身多个组织中。根据其分泌的细胞因子和表达的转录因子可以分为3个亚群:ILC1s、ILC2s和ILC3s,这些异质性免疫细胞群在机体不同组织中发挥着不同的作用,参与组织重塑、修复愈合,抗寄生虫、致病菌感染,并与肿瘤的发生、机体代谢的稳定以及共生菌免疫耐受的形成等有关。本文就ILC的分类、分化发育来源及最新功能研究进展做一综述。

关键词：固有淋巴细胞分类分化发育功能

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候选无细胞百白破-Sabin株灭活脊髓灰质炎联合疫苗在大鼠上的免疫保护效果研究

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中国医药生物技术 2020年第1期15卷 18-24页

作者：姬秋彦江文文梁疆莉顾琴高娜马艳牟大超史荔孙明波中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的观察候选无细胞百白破-Sabin株灭活脊髓灰质炎联合疫苗(DTaP-sIPV)在大鼠中的免疫保护效果,为疫苗临床前研究提供依据。方法将候选疫苗DTaP-sIPV、无细胞百白破-灭活脊髓灰质炎-b型流感嗜血杆菌联合疫苗(DTaP-IPV/Hib)、吸附无细胞... 详细信息

目的观察候选无细胞百白破-Sabin株灭活脊髓灰质炎联合疫苗(DTaP-sIPV)在大鼠中的免疫保护效果,为疫苗临床前研究提供依据。方法将候选疫苗DTaP-sIPV、无细胞百白破-灭活脊髓灰质炎-b型流感嗜血杆菌联合疫苗(DTaP-IPV/Hib)、吸附无细胞百白破-b型流感嗜血杆菌联合疫苗(DTaP/Hib)、百日咳疫苗效力参考品(全细胞疫苗,wP)按0、30、60 d 3剂免疫程序免疫Wistar大鼠,检测各组大鼠每剂免疫后的血清中各组分抗体水平。在免疫完成后3周,用百日咳18323株通过气雾攻击的方式感染大鼠。在感染后的第3、7、14、21和28天检测各组白细胞数、肺部菌落克隆形成数以及百日咳疫苗组分抗体变化水平。结果候选疫苗组3剂次免疫完成后PT抗体几何平均滴度(GMT,log2)为16.74,FHA抗体GMT为18.44,PRN抗体GMT为10.75,DT抗体GMT为17.34,TT抗体GMT为17.84,针对3种Sabin脊髓灰质炎病毒株(Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型)的抗体的GMT分别为7.57、8.41和9.70,均达到100%阳转。候选疫苗抗原组分抗体除了PRN和I型IPV外,其他组分抗体水平均与疫苗对照组相比无显著性差异。在基础免疫完成后3周对大鼠进行百日咳杆菌气雾攻击,各疫苗组均表现较好的保护效果,白细胞水平都呈现平稳状态,虽然在肺部也检测到少量细菌定植,但各疫苗组间差异不明显,且在感染后第28天都清除至检测限;而空白对照组在肺部则检测到了大量细菌定植,且在感染后第28天都并未清除至检测限,百日咳特异性的FHA和PRN抗体在感染后的第14天也出现了相应的升高。结论候选疫苗在Wistar大鼠模型上具有较好的免疫保护效果。

关键词：无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗免疫感染保护效果

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2019年昆明市手足口病病原学及其分子特征分析

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职业与健康 2021年第18期37卷 2505-2508页

作者：李丽张磊张名马绍辉昆明市妇幼保健院检验科云南昆明650031 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所医学遗传室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的了解2019年云南省昆明市手足口病的病原学及其分子特征,为手足口病防治提供一定参考依据。方法采用半巢式逆转录聚合酶链式扩增(reverse transcription-pdy merase chain reaction,RT-PCR)方法对242份临床标本进行检测,对通用引物... 详细信息

目的了解2019年云南省昆明市手足口病的病原学及其分子特征,为手足口病防治提供一定参考依据。方法采用半巢式逆转录聚合酶链式扩增(reverse transcription-pdy merase chain reaction,RT-PCR)方法对242份临床标本进行检测,对通用引物检测结果为阳性的PCR产物进行测序和生物信息学分析以鉴定其型别及分子特征。结果从收集到粪便样品242份中检出肠道病毒阳性166份,总阳性率为68.60%;共检测到8种肠道病毒A群病毒,其中柯萨奇病毒A6型(CV-A6,30.72%)和A4型(CV-A4,15.06%)为2个主要优势病原体,并分别属于D3和F基因型;另外,男性肠道病毒阳性率多于女性(P<0.05),且以<5岁为主。结论昆明地区存在多种肠道病毒感染或流行,且CV-A6和CV-A4为HFMD的主要病原并同属于中国流行株。

关键词：手足口病病原学肠道病毒A群流行病学

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一株柯萨奇病毒A组6型毒株RYN-A1205的分子特征及其在KMB17细胞上的遗传稳定性研究

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中国病毒病杂志 2020年第2期10卷 102-108页

作者：刘红波张捷许丹菡丛山日黄小琴孙浩杨昭庆马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的研究1株手足口病相关柯萨奇病毒A组6型(coxsackievirus A6,CV-A6)毒株RYN-A1205的分子特征及其在KMB17细胞中连续传代的遗传稳定性。方法利用MEGA7.0软件并采用neighborjoining法对RYN-A1205株及65株CV-A6代表株基于全长VP1序列进... 详细信息

目的研究1株手足口病相关柯萨奇病毒A组6型(coxsackievirus A6,CV-A6)毒株RYN-A1205的分子特征及其在KMB17细胞中连续传代的遗传稳定性。方法利用MEGA7.0软件并采用neighborjoining法对RYN-A1205株及65株CV-A6代表株基于全长VP1序列进行种系进化分析。另外,将RYNA1205株以MOI=1接种至KMB17细胞中于37℃连续传代培养,提取适应前及适应后第1、5、10、15代毒株的RNA,以其为模板,RT-PCR分段扩增全基因组序列并进行测序分析。结果RYN-A1205株属于D3基因亚型中的D3a分支,能较好地适应KMB17细胞。与适应前毒株相比,适应后毒株共发生15个碱基突变,造成12个氨基酸替换。适应后各代次病毒全基因核苷酸及氨基酸序列同源性分别为99.97%~100%和99.90%~100%,其中,P10代在VP2和3D编码区各发生1个氨基酸的替换,P15代氨基酸突变情况与P10代一致。结论RYN-A1205株与我国近几年的CV-A6内地流行株在进化树中属于同一分支,在KMB17细胞上适应后保持良好的遗传稳定性,这为后续CV-A6疫苗的研发提供参考。

关键词：柯萨奇病毒A组6型分子特征 KMB17细胞遗传稳定性

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细胞工厂中F基因型腮腺炎病毒SP-A株在人二倍体细胞上的增殖研究

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微生物学免疫学进展 2020年第1期48卷 63-68页

作者：王微邱恒杨振清丁开云樊会青李琦涵王晶晶中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的利用细胞工厂,探讨F基因型腮腺炎病毒SP-A株在KMB17细胞上的增殖特性,为腮腺炎疫苗的研制提供基础数据。方法分别以体积分数为10%、8%和5%的血清浓度将细胞培养至单层后,观察病毒接种后细胞病变情况,初步确定最低血清含量后;在不含... 详细信息

目的利用细胞工厂,探讨F基因型腮腺炎病毒SP-A株在KMB17细胞上的增殖特性,为腮腺炎疫苗的研制提供基础数据。方法分别以体积分数为10%、8%和5%的血清浓度将细胞培养至单层后,观察病毒接种后细胞病变情况,初步确定最低血清含量后;在不含血清培养基条件下,按照不同接种感染复数(multiplicity of infection,MOI)接种细胞,确定病毒增殖峰值后,进一步观察不同吸附条件对病毒增殖的影响;同时进行荧光实时定量PCR,验证病毒增殖变化。结果在体积分数为5%的血清条件下,细胞可生长成致密单层;高MOI(0.500)感染细胞后,在4~5 d内进入增殖高峰,中MOI(0.050)、低MOI(0.005)感染细胞后,在5~6 d进入增殖高峰,维持48 h后,呈现缓慢下降趋势;在比较37℃吸附试验中,非吸附组病毒增殖高峰明显迟于吸附组,荧光实时定量PCR检测结果显示在病毒感染细胞6 d时病毒载量达到峰值。结论5%新生牛血清即可获得生长状态良好的细胞,MOI对腮腺炎病毒在KMB17细胞株中的增殖有较大的影响,当使用适宜范围的MOI(0.01~0.02),在非吸附的条件下,腮腺炎病毒SP-A株在KMB17株中能够良好地增殖,在病毒培养至7~9 d可获得高滴度的病毒收获液。

关键词：腮腺炎病毒 F基因型病毒增殖人二倍体细胞细胞工厂

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体外研究脊髓灰质炎病毒Ⅰ型疫苗株结构蛋白对人呼吸道上皮细胞内天然免疫反应系统的作用及其免疫学意义

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病毒学报 2019年第2期35卷 225-232页

作者：吴化叶牟唐维王建斌柳蕾程继帅冯敏王丽春张莹李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

尽管针对脊髓灰质炎病毒已经有长达数百年的研究并成功研制出了预防性疫苗,但是对于该病毒如何启动机体天然免疫反应,进而激活获得性免疫反应这一过程的具体分子机理仍有诸多空白。本研究通过体外分析脊髓灰质炎病毒Sabin减毒株Ⅰ型的... 详细信息

尽管针对脊髓灰质炎病毒已经有长达数百年的研究并成功研制出了预防性疫苗,但是对于该病毒如何启动机体天然免疫反应,进而激活获得性免疫反应这一过程的具体分子机理仍有诸多空白。本研究通过体外分析脊髓灰质炎病毒Sabin减毒株Ⅰ型的结构蛋白对人呼吸道上皮细胞内天然免疫反应信号分子的影响,了解脊髓灰质炎病毒在上皮细胞中启动免疫信号的具体分子机制。采用PCR方法扩增脊髓灰质炎病毒四种结构蛋白VP1、VP2、VP3和VP4,经酶切纯化后与pcDNA3.1+真核表达载体连接,分别构建含目的基因的四种重组质粒。将重组质粒分别转染至人呼吸道上皮细胞16HBE中,48h后收集培养上清、细胞。提取细胞的总RNA,利用Q-PCR法分别检测四种结构蛋白表达所诱导的天然免疫信号分子的mRNA表达量。同时,上清、细胞裂解物分别与人T细胞共培养,检测其对T细胞增殖的影响。体外在16HBE细胞中分别表达SabinⅠ病毒VP1～VP4四种结构蛋白均可刺激如LTα3、NIK等NF-κB天然免疫信号通路相关分子的表达,并且表达这四种蛋白的细胞裂解物与T细胞共培养后均表现出刺激T细胞非特异性增殖的效应。但是,仅有VP1、VP2表达所诱导分泌相关因子的培养上清才表现出间接刺激T细胞增殖的能力。SabinⅠ毒株的四种结构蛋白可激活NF-κB信号通路,促进T细胞的非特异性增殖,从而激活适应性免疫应答。

关键词：脊髓灰质炎脊髓灰质炎病毒(PV) 结构蛋白信号通路 NF-κB

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东南亚地区寨卡病毒的流行及结构蛋白分子进化特征分析

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中国生物制品学杂志 2019年第9期32卷 958-964页

作者：林垚洪珊蓝青萍孙强明中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的分析寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)在东南亚地区的感染传播情况,探讨其分子水平上的进化特征。方法用关键词和主题词检索ZIKV在东南亚地区暴发感染流行情况。在GenBank中获取ZIKV东南亚病毒株全基因序列,采用BIOEDIT软件进行比对;利用M... 详细信息

目的分析寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)在东南亚地区的感染传播情况,探讨其分子水平上的进化特征。方法用关键词和主题词检索ZIKV在东南亚地区暴发感染流行情况。在GenBank中获取ZIKV东南亚病毒株全基因序列,采用BIOEDIT软件进行比对;利用MEGA 7. 0软件绘制系统进化树;将结构蛋白核苷酸翻译获得其相应的氨基酸序列,分析突变情况;统计不同株型间结构蛋白核苷酸突变和氨基酸替代位点;预测包膜蛋白第三结构域(envelop domainⅢ,ED-Ⅲ)的二级结构。结果 ZIKV在东南亚国家均有血清学感染或回顾性检测阳性报道,其中越南、泰国和新加坡ZIKV感染病例较多,疾病负担较为严重。系统进化树表明,东南亚ZIKV株均属于亚洲型,2016年新加坡株(序列号:KY241788)与2015年巴西株亲缘关系最近,1966年分离的马来西亚株与其他东南亚株亲缘关系较远。东南亚ZIKV各株型间衣壳蛋白(capsid protein,C)的碱基突变点为22处,突变率为6. 36%,造成非同义氨基酸突变点为19处,突变率为16. 52%。前膜蛋白(pre-membrane protein,prM)的碱基突变点为51处,突变率为10. 12%,造成非同义氨基酸突变点为37处,突变率为22. 02%。包膜蛋白(envelope protein,E)的碱基突变点为141处,突变率为9. 33%,造成非同义氨基酸突变点为101处,突变率为20. 04%。ED-Ⅲ二级结构预测结果显示,在该区域2株代表株有相同数量的蛋白结合位点,代表株2(1966 Malaysia KX377336)存在1个蛋白结合位点富集区(ED-Ⅲ:55-63),而代表株1(2014 Thailand KU681081)蛋白结合位点分布较均匀,代表株2的ED-Ⅲ存在1个二硫键,而代表株1不存在,代表株1(ED-Ⅲ:79-80)存在1个解螺旋,而代表株2不存在。结论通过病例统计分析、系统发育分析、蛋白质核苷酸及氨基酸序列比较分析、ED-Ⅲ二级结构预测,为研究东南亚地区ZIKV不同株型间的生物学和流行致病性差异提供参考。

关键词：寨卡病毒东南亚流行结构蛋白分子特征

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复合免疫佐剂在疫苗开发中的应用研究进展

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国际免疫学杂志 2020年第2期43卷 201-208页

作者：李慧宋杰董少忠中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

随着新型疫苗的不断发展,研发能与疫苗安全高效配伍增强免疫应答的新型佐剂已迫在眉睫。目前研究表明单一佐剂很容易引发一种特定单一类型的辅助T细胞(helper T cell,Th)1或Th2反应,难以引起理想的免疫反应。复合佐剂作为疫苗佐剂研发... 详细信息

随着新型疫苗的不断发展,研发能与疫苗安全高效配伍增强免疫应答的新型佐剂已迫在眉睫。目前研究表明单一佐剂很容易引发一种特定单一类型的辅助T细胞(helper T cell,Th)1或Th2反应,难以引起理想的免疫反应。复合佐剂作为疫苗佐剂研发的新趋势和热点,将两种或两种以上的免疫佐剂进行联合应用,协调发挥各自的优势,实现最大的佐剂效应,展现了复合佐剂协同作用的有利优势,为进一步开发新型佐剂提供了新的思考方向。

关键词：复合佐剂疫苗研究

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