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鼠源抗B型肉毒毒素单链抗体噬菌体文库的构建筛选及抗体免疫学活性的初步研究

微生物学通报 2007年第6期34卷 1037-1041页

作者：杨秀清王慧史晶蔡昆侯晓军包士中荫俊军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

B型肉毒毒素重链C-端片段(BoNTB/Hc)经金属螯和层析法纯化后免疫Balb/c小鼠,从其脾淋巴细胞中提取总RNA,反转录成cDNA,用抗体可变区混合引物进行全套抗体重、轻链可变区基因的扩增,体外随机装配成单链抗体(scFv)。将其克隆至pCANTAB5E中... 详细信息

B型肉毒毒素重链C-端片段(BoNTB/Hc)经金属螯和层析法纯化后免疫Balb/c小鼠,从其脾淋巴细胞中提取总RNA,反转录成cDNA,用抗体可变区混合引物进行全套抗体重、轻链可变区基因的扩增,体外随机装配成单链抗体(scFv)。将其克隆至pCANTAB5E中,构建单链抗体噬菌体抗体库。结果表明经过4轮"吸附-洗脱-扩增"的富集过程,筛选获得高亲和力的克隆。序列测定符合抗体可变区结构特点。

关键词： B型肉毒毒素 scFv 噬菌体抗体库

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虫媒黄病毒基因组复制的分子机制研究进展

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军事医学科学院院刊 2007年第1期31卷 69-73页

作者：李晓峰秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

虫媒黄病毒包括多种重要的可导致人类疾病的病原体。对其基因组复制的分子机制的研究一直是此类病毒致病机制研究的重点。本文着重介绍病毒基因组末端与其复制相关的调控元件、病毒非结构蛋白及宿主蛋白在虫媒黄病毒基因组复制中的作用。

关键词：黄病毒基因组复制基因组结构 NS蛋白

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利用基因芯片技术对一种未知病毒的筛查与鉴定

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中华检验医学杂志 2007年第12期30卷 1360-1363页

作者：杨银辉朱晓光张永国刘伯华康晓平刘洪祝庆余军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的利用本研究室已建立的人类医学病毒属水平基因芯片筛查技术及主要虫媒病毒基因芯片检测技术,对2006年7月从山西临沂地区猪脑组织中分离到的未知病毒进行筛查与鉴定,确定其病原体。方法从猪脑组织中分离到病原体,接种金黄地鼠肾细胞(... 详细信息

目的利用本研究室已建立的人类医学病毒属水平基因芯片筛查技术及主要虫媒病毒基因芯片检测技术,对2006年7月从山西临沂地区猪脑组织中分离到的未知病毒进行筛查与鉴定,确定其病原体。方法从猪脑组织中分离到病原体,接种金黄地鼠肾细胞(BHK21细胞),能产生细胞病变(cytopathic effect,CPE)。收集病毒感染的细胞上清,提取 RNA,经逆转录及随机引物 PCR扩增后,与医学病毒属水平基因芯片进行杂交,初步确定其所在的病毒属之后,再与主要虫媒病毒基因检测芯片进行杂交,进一步将病毒鉴定到种。通过与其他鉴定结果相比较,确定其检测特异性。结果与医学病毒属水平基因芯片杂交结果显示,该病原体属于黄病毒属病毒。结合流行病学调查分析,该病毒可能是一种虫媒病毒,因此进一步与主要虫媒病毒基因芯片杂交,基本可以判断该病原体为乙型脑炎病毒,与本室 PCR 及基因序列测定结果一致。结论本研究室所建立的基因芯片筛查与鉴定技术可初步应用于对未知病毒的鉴定,为未知病毒性病原体的确定提供了一种新的技术方法。

关键词：微阵列分析脑炎病毒流行病学分子

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西方马脑炎的媒介、宿主及影响其传播的环境因素

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中国媒介生物学及控制杂志 2007年第6期18卷 530-533页

作者：汪中明赵彤言军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

西方马脑炎(WEE)是由西方马脑炎病毒(WEEV)引起,经蚊虫传播的人畜共患传染病。通常情况下,该病毒只在野鸟与蚊虫之间传播;环跗库蚊是WEE在北美地区的主要媒介;野鸟是其主要宿主。对蚊虫感染和传播WEEV最具影响的因素是温度。此外,风向... 详细信息

西方马脑炎(WEE)是由西方马脑炎病毒(WEEV)引起,经蚊虫传播的人畜共患传染病。通常情况下,该病毒只在野鸟与蚊虫之间传播;环跗库蚊是WEE在北美地区的主要媒介;野鸟是其主要宿主。对蚊虫感染和传播WEEV最具影响的因素是温度。此外,风向等因素都通过一定的方式影响着病毒的传播。

关键词：西方马脑炎病毒传播周环环跗库蚊野鸟传播能力影响因素

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炭疽AVA疫苗特异性抗体分泌细胞检测方法的建立

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免疫学杂志 2007年第4期23卷 452-455页

作者：吕进张松乐董梅何蕊江海燕张良艳邢丽杨海荣王希良军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的应用酶联免疫斑点（ELISPOT）技术,建立一种检测炭疽AVA免疫后特异性抗体分泌细胞的方法,用于检测和评价炭疽无菌培养滤液抗原特异性抗体形成细胞的功能.方法无菌分离小鼠脾细胞,建立一系列特异性ELISPOT检测炭疽无菌培养滤液抗... 详细信息

目的应用酶联免疫斑点（ELISPOT）技术,建立一种检测炭疽AVA免疫后特异性抗体分泌细胞的方法,用于检测和评价炭疽无菌培养滤液抗原特异性抗体形成细胞的功能.方法无菌分离小鼠脾细胞,建立一系列特异性ELISPOT检测炭疽无菌培养滤液抗原特异性抗体分泌细胞的参数：包括抗原最佳包被浓度、细胞最适孵育时间、反应体系中细胞浓度以及亲和素抗体工作浓度的确定,同时检测上清中抗体效价,并以不相关抗原包被,检验方法的敏感性和特异性.结果当抗原包被浓度为7.5μg/mL时,不同细胞浓度反应曲线最稳定细胞数为5×10^6/mL时,不同包被浓度形成的斑点数适量,易于计数且在抗体稀释度相同情况下,脾细胞孵育时间为3～6 h所获得的斑点数最清晰,背景着色最浅,容易被仪器识别同时,特异性抗原包被组所获得的斑点频数高于无关抗原包被组（P＜0.01）反应体系上清中未检测到抗原特异性抗体.结论该方法敏感、特异,可用于AVA抗原免疫后体液免疫评价.

关键词： AVA(炭疽无菌培养滤液佐剂吸附苗) ELISPOT(酶联免疫斑点) ASC(抗体分泌细胞) SFC(斑点形成细胞)

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炎性体研究进展

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军事医学科学院院刊 2007年第5期31卷 490-493页

作者：郭强孔毅荣付玲徐俊杰陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071

半胱天冬酶-1(caspase-1)活化导致白细胞介素(IL)-1β和IL-18等炎症细胞因子的切割和分泌,在机体天然免疫中起着重要作用。而caspase-1活化受到胞内多蛋白复合物——炎性体的调控。通过分析缺少炎性体组分的基因敲除小鼠,已经鉴定了多... 详细信息

半胱天冬酶-1(caspase-1)活化导致白细胞介素(IL)-1β和IL-18等炎症细胞因子的切割和分泌,在机体天然免疫中起着重要作用。而caspase-1活化受到胞内多蛋白复合物——炎性体的调控。通过分析缺少炎性体组分的基因敲除小鼠,已经鉴定了多种感受不同外界信号刺激的炎性体。本文对目前已经鉴定的炎性体的组成、激活、调控及其生物学作用等方面研究进展作一综述。

关键词：炎性体炎症半胱天冬酶-1 白细胞介素-1β

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人用禽流感疫苗H5N1株三级毒种库的建立

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军事医学科学院院刊 2007年第2期31卷 107-109,113页

作者：张松乐邢丽罗德炎何蕊杨海荣张钰王希良军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的：建立人用禽流感疫苗H5N1株三级毒种库，为生产疫苗提供毒种。方法：用SPF鸡胚培养病毒，对型别、滴度和无菌等各项检测合格后，建立人用禽流感疫苗H5N1株三级毒种库。结果：在33℃培养52h条件下，毒种滴度为1：640-1：1280；厌氧... 详细信息

目的：建立人用禽流感疫苗H5N1株三级毒种库，为生产疫苗提供毒种。方法：用SPF鸡胚培养病毒，对型别、滴度和无菌等各项检测合格后，建立人用禽流感疫苗H5N1株三级毒种库。结果：在33℃培养52h条件下，毒种滴度为1：640-1：1280；厌氧菌、细菌、真菌、支原体、血吸附病毒、非血吸附病毒和外源性禽白血病病毒检测均为阴性。将毒种在鸡胚上传至12代，滴度在1：320-1：640之间，中和抗体滴度在1：160以上，EID50在6．7以上；毒种HA、NA基因序列检测与公布的HA、NA基因序列的同源性达99．0％，代次之间达99．9％。结论：本工作为研制人用禽流感疫苗贮备了标准毒种。

关键词：流感禽鸡胚流感疫苗 H5N1 毒种库

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SARS-CoV细胞受体的研究进展

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军事医学科学院院刊 2007年第1期31卷 74-77页

作者：韩剑峰秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrom e,SARS)是由SARS冠状病毒(SARS coronavirus,SARS-CoV)感染引起的一种新发严重急性呼吸系统传染病。SARS-CoV受体的阐明对于了解病毒的宿主与组织嗜性具有重要意义,同时也有助于... 详细信息

严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrom e,SARS)是由SARS冠状病毒(SARS coronavirus,SARS-CoV)感染引起的一种新发严重急性呼吸系统传染病。SARS-CoV受体的阐明对于了解病毒的宿主与组织嗜性具有重要意义,同时也有助于了解病毒的致病机制以及研发阻止病毒结合受体的抗病毒药物。目前的研究发现SARS-CoV的受体包括血管紧张素转换酶2(ACE2)和CD209L,二者在SARS-CoV的感染致病过程中均发挥重要作用。本文综述了在SARS-CoV细胞受体结构与功能方面的研究进展。

关键词： SARS-CoV 病毒受体 ACE2 CD209L

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黄病毒基因组非编码区的研究进展

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解放军医学杂志 2007年第12期32卷 1319-1321页

作者：尉雁秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

黄病毒属(Flavivirus)是黄病毒科(Flaviviridae)的最大家族,分为8个血清学亚群,包括登革病毒(DENV)、乙型脑炎病毒(JEV)、蜱传脑炎病毒(TBEV)、西尼罗病毒(WNV)、Kunjin病毒(KUN)和黄热病毒(YEV)等70多种病毒,其中大多数是经蚊、蜱等媒... 详细信息

黄病毒属(Flavivirus)是黄病毒科(Flaviviridae)的最大家族,分为8个血清学亚群,包括登革病毒(DENV)、乙型脑炎病毒(JEV)、蜱传脑炎病毒(TBEV)、西尼罗病毒(WNV)、Kunjin病毒(KUN)和黄热病毒(YEV)等70多种病毒,其中大多数是经蚊、蜱等媒介传播的虫媒病毒。所引起的疾病以出血热和病毒性脑炎危害最大,常导致严重的公共卫生问题。我国目前已发现的黄病毒有乙型脑炎病毒,4个血清型登革病毒和蜱传脑炎病毒等。由于近二十年来全球气候变暖、国际交流频繁以及缺乏对蚊虫的有效控制措施等造成黄病毒感染有扩大趋势,每年登革病毒的感染人数近百万,西尼罗病毒的流行也引起较高的发病率和死亡率。[第一段]

关键词：黄病毒属非编码区基因组黄病毒科序列结构

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氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体残存组分Q热疫苗的免疫原性及免疫保护性研究

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中国人兽共患病学报 2007年第6期23卷 544-547页

作者：孙长俭陈梅玲杨晓温博海牛东升李青凤王锡乐军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的实验评价氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体残存组分(CMR)疫苗的免疫特性及免疫保护性。方法采用国内分离贝氏柯克斯体新桥株制备CMR疫苗,用CMR免疫Balb/c小鼠;采用间接免疫荧光法检测CMR免疫小鼠血清特异性抗体水平和用淋巴细胞增殖试验评... 详细信息

目的实验评价氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体残存组分(CMR)疫苗的免疫特性及免疫保护性。方法采用国内分离贝氏柯克斯体新桥株制备CMR疫苗,用CMR免疫Balb/c小鼠;采用间接免疫荧光法检测CMR免疫小鼠血清特异性抗体水平和用淋巴细胞增殖试验评价CMR疫苗体外刺激小鼠脾细胞增殖的能力;以贝氏柯克斯体攻击免疫小鼠和用贝氏柯克斯体特异的荧光定量PCR检测感染小鼠血和脾脏样本。结果CMR免疫第4周起,小鼠血清中检出高水平的特异性抗体,CMR加氢氧化铝佐剂免疫小鼠的血清特异性抗体显著高于未加佐剂组。CMR在体外刺激正常小鼠和免疫小鼠脾淋巴细胞增殖水平显著高于对照组,WCV则抑制正常脾淋巴细胞增殖。三种剂量(30μg、10μg、1μg/只)CMR免疫小鼠血和脾脏样本贝氏柯克斯体含量显著低于未免疫组,以30μg组及加佐剂免疫小鼠的样本含菌量更显著低于对照组。结论采用我国分离株制备的CMR疫苗能诱导机体产生高效特异性体液免疫和细胞免疫应答,使机体抵抗大剂量的贝氏柯克斯体感染,具有良好的免疫原性和免疫保护性;氢氧化铝佐剂能显著增强CMR疫苗的免疫保护效能。

关键词：贝氏柯克斯体 Q热疫苗氯仿-甲醇提取残存组分

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