检索结果-内蒙古大学图书馆

科学通报 2013年第18期58卷 1701-1705页

作者：年庆功孙伟姜涛张雨李靖祝庆余秦成峰军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室病毒学专业实验室北京100071

截至2013年5月1日,我国大陆地区共报告确诊人感染H7N9禽流感病毒病例127例,其中死亡26人,公共卫生安全受到严重威胁.历史上,H7亚型禽流感病毒曾多次感染人类.早期报告的人感染H7亚型禽流感病毒主要表现为结膜炎等温和疾病,而此次H7N9禽... 详细信息

截至2013年5月1日,我国大陆地区共报告确诊人感染H7N9禽流感病毒病例127例,其中死亡26人,公共卫生安全受到严重威胁.历史上,H7亚型禽流感病毒曾多次感染人类.早期报告的人感染H7亚型禽流感病毒主要表现为结膜炎等温和疾病,而此次H7N9禽流感病毒感染却表现为严重的急性呼吸道疾病,呈现出不同寻常的感染特征.本文对H7亚型禽流感病毒感染人组织嗜性特征及其决定因素进行了解析,以期为此次H7N9疫情的科学防控提供依据.

关键词： H7N9 禽流感病毒人类感染组织嗜性

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3种细菌气溶胶特性实验研究

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军事医学 2013年第1期37卷 30-32+42页

作者：李娜温占波杨文慧王洁李劲松胡凌飞刘克洋董晓凯军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室国家生物防护装备工程技术中心

目的了解金黄色葡萄球菌、黏质沙雷菌和枯草芽孢杆菌芽孢的耐冲击能力和耐雾化能力的强弱,观察3种细菌的空气生物学特性。方法使用AGI-30型全玻璃液体冲击采样器(AGI-30)对3种细菌进行耐冲击实验,在12.5 L/min的气流冲击5、10和15 min... 详细信息

目的了解金黄色葡萄球菌、黏质沙雷菌和枯草芽孢杆菌芽孢的耐冲击能力和耐雾化能力的强弱,观察3种细菌的空气生物学特性。方法使用AGI-30型全玻璃液体冲击采样器(AGI-30)对3种细菌进行耐冲击实验,在12.5 L/min的气流冲击5、10和15 min后测定采样液中细菌滴度和终末采样液体积,采用校正存活率评价3种细菌的耐冲击性。用DV40型气溶胶发生器对3种细菌进行耐雾化实验,分别测定不同雾化时间后的菌液浓度,计算雾化后细菌存活率,评价3种细菌的耐雾化性能。结果采样冲击实验表明,金黄色葡萄球菌的存活率最高,但是在冲击过程中其存活率不稳定,枯草菌芽孢经过15 min的冲击后,存活率为60%,黏质沙雷菌的存活率为72%。在耐雾化能力方面,不同时间的雾化过程中,枯草菌芽孢的存活率最高,经过60 min的雾化后,存活率为83.56%;黏质沙雷菌的相对存活率为40%,金黄色葡萄球菌在雾化过程中存活率状态不稳定。结论金黄色葡萄球菌耐冲击能力最强,但存活率低、稳定性较差;枯草菌芽孢耐雾化能力最强,但耐冲击性能最差,且其特性不适宜作为生物气溶胶的模式菌。3种细菌中,黏质沙雷菌最适于作为生物安全装备生物学评价的指示微生物。

关键词：生物气溶胶金黄色葡萄球菌黏质沙雷菌枯草芽孢杆菌耐冲击性耐雾化性

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一种定量测定副溶血弧菌溶血活性的方法

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军事医学 2013年第4期37卷 307-310页

作者：姜汉雯王开功张义全黄倩胡小许杨瑞馥周冬生贵州大学动物疫病研究所动物科学学院贵阳550025 北京微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立定量评价副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)溶血活性的实验方法。方法以大耳白兔红细胞为靶细胞,野生型VP标准株RIMD2210633(J5421)、opaR敲除株、toxR敲除株的菌体细胞为效应细胞,通过调节感染菌量及孵育时间来优化条件... 详细信息

目的建立定量评价副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)溶血活性的实验方法。方法以大耳白兔红细胞为靶细胞,野生型VP标准株RIMD2210633(J5421)、opaR敲除株、toxR敲除株的菌体细胞为效应细胞,通过调节感染菌量及孵育时间来优化条件,从而建立溶血活性评价模型。结果与结论 VP最佳溶血活性条件为红细胞终浓度5%条件下,用约3×106CFU的菌量感染靶细胞,37℃孵育2.5 h。opaR负调控VP的溶血活性,而ToxR正调控VP的溶血活性。本研究成功建立了定量测定VP溶血活性的方法。

关键词：副溶血弧菌溶血活性 opaR toxR

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免疫胶体金试剂检测布鲁菌苗接种牛血清结果分析

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军事医学 2013年第11期37卷 873-874页

作者：李岩伟程君生左庭婷韩雪莲何君朱虹毛开荣端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国兽医药品监察所北京100081

目的评价实验室研制的布鲁菌病抗体快速检测试剂(胶体金法)能否鉴别布鲁菌自然感染和免疫接种所产生的抗体。方法用胶体金试剂对272份接种S2和A19布鲁菌苗的牛血清进行检测,并以虎红平板凝集试验作为对照。结果与结论结果显示,两种方法... 详细信息

目的评价实验室研制的布鲁菌病抗体快速检测试剂(胶体金法)能否鉴别布鲁菌自然感染和免疫接种所产生的抗体。方法用胶体金试剂对272份接种S2和A19布鲁菌苗的牛血清进行检测,并以虎红平板凝集试验作为对照。结果与结论结果显示,两种方法一致率100%。布鲁菌病抗体快速检测试剂(胶体金法)不被疫苗免疫抗体干扰,可用于布鲁菌感染诊断。

关键词：布鲁菌病胶体金快速检测虎红平板凝集试验

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副溶血弧菌生物膜相关基因突变株的构建

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中华预防医学杂志 2013年第5期47卷 439-443页

作者：李迎丽张义全闫小娟刘梦颖杨瑞馥邱景富周冬生重庆医科大学公共卫生与管理学院 400016 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

目的构建副溶血弧菌生物膜相关基因突变株并进行验证。方法采用PCR方法扩增得到靶基因的上下游同源臂片段，然后以上下游同源臂片段为模板，PCR扩增得到同源臂融合片段。将同源臂融合片段经酶切处理后克隆到自杀质粒pDSl32中。通过结合... 详细信息

目的构建副溶血弧菌生物膜相关基因突变株并进行验证。方法采用PCR方法扩增得到靶基因的上下游同源臂片段，然后以上下游同源臂片段为模板，PCR扩增得到同源臂融合片段。将同源臂融合片段经酶切处理后克隆到自杀质粒pDSl32中。通过结合转移的方式将携带有同源臂融合片段的重组质粒转入副溶血弧菌RIMD2210633中，利用同源重组得到突变株。用PCR方法筛选和鉴定突变株，同时对突变株进行表型分析，从而在分子水平和表型试验上验证突变株是否构建成功。结果构建得到了分别携带副溶血弧菌生物膜相关基因vbfa、crp、hns、swrZ、swrT、cpsR融合同源臂片段的重组质粒，通过PCR扩增，分别得到了大小为1190、1128、1136、953、1242、1112bp的片段；用重组质粒构建了相应的突变株（AvbfR、Acrp、Ahns、AswrZ、AswrT和AcpsR），进行PCR鉴定时，突变株得到了大小分别为1190、1128、1136、953、1242、1112bp的扩增产物，比阳性对照分别小610、739、421、542、427、1367bp；用靶基因内部的引物进行扩增时，无扩增产物；选其中一株突变株Ahns进行生物膜形成能力表型分析，结果表明突变株Ahns生物膜形成量与野生株相比明显增加。结论构建得到了6株副溶血弧菌生物膜相关基因突变株，并从分子和表型试验上验证了突变株构建正确。

关键词：弧菌属质粒生物膜基因敲除技术突变

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突触小泡膜蛋白VAMP-2的原核表达、纯化及活性鉴定

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军事医学 2013年第4期37卷 250-253页

作者：罗森王琴房华丽王德慧李崭李涛王慧安徽医科大学合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的克隆突触小泡膜蛋白(VAMP-2)基因,原核表达、纯化并鉴定重组蛋白VAMP-2活性。方法根据GenBank中已报道的VAMP-2基因序列,设计特异性引物,通过RT-PCR从小鼠的全脑组织总RNA中获得基因。将去疏水区后的基因克隆至含有N端信号肽pelB序... 详细信息

目的克隆突触小泡膜蛋白(VAMP-2)基因,原核表达、纯化并鉴定重组蛋白VAMP-2活性。方法根据GenBank中已报道的VAMP-2基因序列,设计特异性引物,通过RT-PCR从小鼠的全脑组织总RNA中获得基因。将去疏水区后的基因克隆至含有N端信号肽pelB序列的原核表达载体pET-22b中,重组质粒转化BL21(DE3)Rosetta感受态细胞,IPTG诱导表达,表达产物经Ni-NTA亲和层析纯化,SDS-PAGE及Western印迹进行鉴定,并利用金属内肽酶BoNT/B轻链对该蛋白进行生物活性分析和酶活动力学测定。结果与结论成功构建pET-22b-VAMP-2表达质粒,并转化大肠杆菌BL21(DE3)Rosetta,Western印迹证实重组蛋白VAMP-2(残基Met 1-Met 94)获得可溶性表达。重组蛋白VAMP-2可被金属内肽酶BoNT/B特异性酶解,具有良好的生物学活性。

关键词：囊泡相关膜蛋白质2 金属内肽酶底物原核表达

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猪链球菌细胞壁蛋白SSU05_1000的表达、纯化及活性分析

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中国人兽共患病学报 2013年第8期29卷 757-761页

作者：王涛郑玉玲袁媛江华郝淮杰李雪琴姜永强安徽医科大学研究生学院合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国科学院微生物研究所病原微生物与免疫学重点实验室北京100101

目的构建猪链球菌细胞壁蛋白SSU05_1000基因的重组表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,并研究其对细胞间紧密连接的调控作用。方法以05ZYH33基因组为模板设计引物,构建pET30a-SSU05_1000重组表达质粒,转化到大肠杆菌中诱导表达,用... 详细信息

目的构建猪链球菌细胞壁蛋白SSU05_1000基因的重组表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,并研究其对细胞间紧密连接的调控作用。方法以05ZYH33基因组为模板设计引物,构建pET30a-SSU05_1000重组表达质粒,转化到大肠杆菌中诱导表达,用镍亲和层析的方法对目的蛋白进行纯化,Western blot检测其对人脑微血管内皮细胞紧密连接的调控。结果构建的SSU05_1000重组表达质粒能够在大肠杆菌中高效表达,纯化的SSU05_1000蛋白纯度达90%以上,Western blot结果显示其与人脑微血管内皮细胞(hCMEC/D3)相互作用后,可以下调细胞间紧密连接蛋白Claudin-5的表达。结论 SSU05_1000蛋白能够破坏人脑微血管内皮细胞的紧密连接结构,提示其在猪链球菌穿血脑屏障(BBB,bloodbrain barrier)过程中起重要作用。

关键词：猪链球菌 SSU05_1000 紧密连接

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免疫组化分析鼠疫疫苗免疫和鼠疫菌攻毒后恒河猴脾组织中T和B淋巴细胞增殖(英文)

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中国人兽共患病学报 2013年第1期29卷 1-9页

作者：吴小红田光邱业峰祁芝珍张青雯毕玉晶杨永海李豫川杨晓燕辛有全李存香崔白忠王祖郧王虎杨瑞馥王效义病原微生物生物安全国家重点实验室北京微生物流行病研究所北京100071 军事医学科学院实验动物中心北京100071 青海省地方病预防控制所西宁811602

目的在我们先前的研究中发现,鼠疫疫苗免疫的猕猴脾组织中B细胞和T细胞数量明显增加。然而,是否这些细胞是由鼠疫疫苗引起的增殖性B细胞和T细胞还不得而知。方法为回答这个问题,本研究使用免疫组化双标记方法检测了猕猴脾组织中T细胞和... 详细信息

目的在我们先前的研究中发现,鼠疫疫苗免疫的猕猴脾组织中B细胞和T细胞数量明显增加。然而,是否这些细胞是由鼠疫疫苗引起的增殖性B细胞和T细胞还不得而知。方法为回答这个问题,本研究使用免疫组化双标记方法检测了猕猴脾组织中T细胞和B细胞的增殖。应用Ki67抗体以及T细胞和B细胞特异性单克隆抗体的免疫组化双标法,对脾组织T细胞和B细胞增殖进行检测。脾组织分别来自于亚单位疫苗SV1(20μg F1+10μg rV270)免疫的猕猴以及分别通过SV2(200μg F1+100μg rV270)、减毒活疫苗EV和铝佐剂免疫并分别攻毒的猕猴。结果与正常动物相比,受试动物脾组织生发中心有较多的B细胞增殖,边缘区有较多的静止B细胞,在动脉周围淋巴鞘区有较多的静止T细胞,提示原始T细胞可能在免疫早期发生增殖。经SV1、SV2或EV76免疫并攻毒的动物脾组织生发中心较仅用SV1免疫动物的生发中心扩大。此外,铝佐剂免疫并攻毒的猕猴脾组织生发中心不完整,这可能归因于强毒株鼠疫菌感染引起的病理损伤。B细胞增殖、静止B细胞增加、静止T细胞增多及生发中心扩大是诱导特异性体液免疫和保持免疫记忆反应的标志。结论这些结果与我们先前的发现的SV1、SV2或者EV76免疫动物激发较高的抗体和IL-4分泌相一致。

关键词：鼠疫疫苗恒河猴免疫组化鼠疫耶尔森氏菌淋巴细胞增殖

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西尼罗病毒RNA复制子系统的建立与应用

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军事医学 2013年第2期37卷 114-117页

作者：张富军李晓峰曹飞赵慧邓永强朱舜亚姜涛秦鄂德秦成峰山东省日照市中医院山东日照276800 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建具有复制和表达活性的RNA形式的西尼罗病毒(WNV)复制子。方法在DNA形式的WNV复制子pWNrep的基础上,将其CMV启动子替换成SP6启动子,并在3'UTR端引入PacⅠ酶切位点,构建复制子克隆pSP6-WNrep。同时,将增强型绿色荧光蛋白(eGFP... 详细信息

目的构建具有复制和表达活性的RNA形式的西尼罗病毒(WNV)复制子。方法在DNA形式的WNV复制子pWNrep的基础上,将其CMV启动子替换成SP6启动子,并在3'UTR端引入PacⅠ酶切位点,构建复制子克隆pSP6-WNrep。同时,将增强型绿色荧光蛋白(eGFP)和海肾荧光素酶(***)报告基因分别插入上述复制子质粒中,获得含有报告基因的复制子pSP6-WNrep/eGFP和pSP6-WNrep/***。将上述克隆线性化后进行体外转录,将转录体RNA转染BHK-21细胞,观察不同时间点绿色荧光蛋白(GFP)的活性和***活性。结果与结论获得了WNV复制子pSP6-WNrep、pSP6-WNrep/eGFP和pSP6-WNrep/***,酶切和测序鉴定结果显示,序列与预期一致。将含有报告基因的复制子转染细胞72 h后仍能观察到荧光信号,***的活性随时间延长而增强。本研究成功构建了WNV Chin-01株的RNA复制子,该复制子能够在哺乳动物细胞中有效复制并表达外源蛋白,为下一步构建WNV单轮感染病毒样颗粒奠定了基础。

关键词： RNA 西尼罗病毒复制子转染

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病原微生物实验室Ⅱ级生物安全柜防护性能评价

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中国消毒学杂志 2013年第8期30卷 703-705,709页

作者：温占波胡凌飞李劲松杨文慧王洁李娜张柯殷喆董晓凯军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室国家生物防护装备工程技术中心北京100071

目的评价病原微生物实验室Ⅱ级生物安全柜的防护性能。方法采用安德森采样器采样方法和通过相关仪器,以粘质沙雷菌气溶胶为防护对象进行Ⅱ级生物安全柜防护性能评价。结果所评价的36台Ⅱ级生物安全柜下降气流的平均合格率为91.7%,流入... 详细信息

目的评价病原微生物实验室Ⅱ级生物安全柜的防护性能。方法采用安德森采样器采样方法和通过相关仪器,以粘质沙雷菌气溶胶为防护对象进行Ⅱ级生物安全柜防护性能评价。结果所评价的36台Ⅱ级生物安全柜下降气流的平均合格率为91.7%,流入气流合格率为43.7%,气流模型合格率为43.9%。人员保护合格率为72.2%,样品保护合格率为88.9%,交叉污染合格率为88.9%。结论所测试的Ⅱ级生物安全柜存在较大的气溶胶泄漏风险,对实验操作人员保护性能较差。

关键词： Ⅱ级生物安全柜气溶胶泄露病原微生物防护性能

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