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第十一届全国神经病学学术会议

作者：李昕王鹏李尧华何欣于顺首都医科大学宣武医院北京老年病研究所神经生物学研究室北华大学医学院基础医学部人体解剖学教研室首都医科大学宣武医院低氧医学研究

α-突触核蛋白(α-Synuclein,α-Syn)是在神经系统中表达丰富的蛋白质,存在于神经元的突触前终末、轴突、胞体和细胞核中。α-Syn的突变和异常表达与帕金森病的发病机制密切相关,但该蛋白有何生理功能尚不十分清楚。体外研究提示,α-Sy... 详细信息

α-突触核蛋白(α-Synuclein,α-Syn)是在神经系统中表达丰富的蛋白质,存在于神经元的突触前终末、轴突、胞体和细胞核中。α-Syn的突变和异常表达与帕金森病的发病机制密切相关,但该蛋白有何生理功能尚不十分清楚。体外研究提示,α-Syn可以促进γ-tubulin组装成微管。鉴于微管是神经元突起形成的重要细

关键词： α-突触核蛋白原代培养神经元促生长作用

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脑功能区自动提取法对99mTc-ECD脑显像63个脑区的灰度分析

脑功能区自动提取法对99mTc-ECD脑显像63个脑区的灰度分析

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第十四届全国临床医学影像学术会议

作者：郭万华张剑戈江旭峰申景涛贾支俊许守林王成南京大学医学院附属南京鼓楼医院核医学科江苏南京 210008 上海交通大学基础医学部生物医学工程教研室上海 200025 上海交通大学附属瑞金医院核医学科上海 200025

目的：验证脑解剖功能区的自动提取法在99mTc-ECD脑显像中提取位置准确性，并初步探讨63个功能区药物相对摄取分布。方法：采用图像配准和图像形变方法，将99mTc-ECD脑SPECT图像标化到标准的Talairach坐标空间，按各脑部功能区对全... 详细信息

目的：验证脑解剖功能区的自动提取法在99mTc-ECD脑显像中提取位置准确性，并初步探讨63个功能区药物相对摄取分布。方法：采用图像配准和图像形变方法，将99mTc-ECD脑SPECT图像标化到标准的Talairach坐标空间，按各脑部功能区对全脑中坐标点分类，计算每个脑区摄取信息即平均灰度，并计算其与全脑平均灰度比值，比较左右半球及不同脑区间摄取比值差异。结果：该方法成功地将目标图像与标准坐标空间配准，提取的脑功能区通过不同透视显示与实际目测的功能区吻合，通过对63个脑解剖区分析，人的大脑左右对99mTc-ECD摄取是不对称的，各个脑区间的分布悬殊也很大，枕叶楔前叶、舌回以及顶下小叶等在脑内99mTc-ECD摄取最高，而眶回、胼胝体以及尾状核尾部摄取最低。结论：脑功能区自动提取法对99mTc-ECD脑显像对特定脑区分析显示快速，准确，重现性好的特点，不但适合多样本统计分析，也适宜于单个样本的处理，为研究特定脑感兴趣区提供了一个客观、细致的分析方法。

关键词：体层摄影术图像配准图像形变脑功能区自动提取法

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感染细胞内问号钩端螺旋体吞噬泡形成及其与溶酶体的融合

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第9期27卷 792-796页

作者：刘云英罗冬娇郑伟李立伟严杰浙江大学医学院病原生物学系杭州310058 杭州师范学院基础医学部病原生物学教研室

目的了解问号钩端螺旋体(简称钩体)感染宿主细胞后吞噬泡形成、吞噬泡与溶酶体融合及感染细胞超微结构改变。方法用问号钩体黄疸出血群赖型56601株感染小鼠单核巨噬样细胞J774A.1和猴肾成纤维细胞Cos-7。采用透射电镜观察J774A.1细胞和C... 详细信息

目的了解问号钩端螺旋体(简称钩体)感染宿主细胞后吞噬泡形成、吞噬泡与溶酶体融合及感染细胞超微结构改变。方法用问号钩体黄疸出血群赖型56601株感染小鼠单核巨噬样细胞J774A.1和猴肾成纤维细胞Cos-7。采用透射电镜观察J774A.1细胞和Cos-7细胞胞内钩体吞噬泡的形成及感染细胞超微结构的改变。采用免疫双荧光染色法和激光共聚焦显微镜,观察含钩体吞噬泡与溶酶体融合情况。结果问号钩体56601株感染J774A.1细胞30 min、感染Cos-7细胞15 min即可在胞浆中发现膜包绕的含钩体吞噬泡,吞噬泡内钩体均保持原有生理弯曲。56601株问号钩体感染Cos-7细胞2h后,钩体吞噬泡膜开始消失,但未发现J774A.1细胞内钩体吞噬泡膜消失的现象。J774A.1细胞内钩体吞噬泡与溶酶体发生共区域化,表明吞噬泡与溶酶体发生融合。J774A.1细胞感染钩体后出现染色质浓缩形成的凋亡小体样结构、细胞空泡变性、线粒体肿胀等超微结构病变,但Cos-7细胞感染钩体后其超微结构基本正常。结论问号钩体感染J774A.1细胞和Cos-7细胞后可迅速形成吞噬泡并可能与钩体Ⅲ型分泌系统产物有关。J774A.1细胞内钩体吞噬泡可与溶酶体发生融合。不同细胞的钩体吞噬泡膜消失及超微结构改变有明显差异。

关键词：问号钩端螺旋体 J774A.1细胞/Cos-7细胞吞噬泡/溶酶体融合超微结构改变

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Galectin-3在CCl_4致肝损伤及对GRP78调控的作用

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世界华人消化杂志 2007年第33期15卷 3468-3473页

作者：张鸿具英花刘晓湘平贺紘一方秀斌中国医科大学基础医学院神经生物学教研室辽宁省沈阳市110001 日本富山医科药科大学医学部

目的:探讨Galectin-3对CCl_4致急性肝损伤时GRP78的调控作用.方法:选择ICR系的♂Galectin-3基因敲除型[Gal-3(-/-)]和其野生型[Gal(+/+)1小鼠,一次灌胃给予CCl_4,观察给药后10,24,48和72 h的肝组织病理改变和检测其血清谷草转氨酶(AST)... 详细信息

目的:探讨Galectin-3对CCl_4致急性肝损伤时GRP78的调控作用.方法:选择ICR系的♂Galectin-3基因敲除型[Gal-3(-/-)]和其野生型[Gal(+/+)1小鼠,一次灌胃给予CCl_4,观察给药后10,24,48和72 h的肝组织病理改变和检测其血清谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)活性,并检测肝细胞不同细胞组分中的GRP78蛋白表达.结果:与Gal(+/+)型鼠比较,CCl_4对Gal-3(-/-)型鼠的肝组织病理损伤出现时间早、损伤程度重.Gal-3(-/-)型鼠在CCl_4灌胃后10和24 h的血清ALT活性(1 860±191 U/L vs 1356±177 U/L,t=6.12,P<0.01;2789±236 U/L vs 2468±221 U/L,f=3.14,P<0.01)及CCl_4灌胃后10 h的血清AST活性(946±89 vs 623±73 U/L,t=8.87,P<0.01)与Gal(+/+)型鼠比较显著升高.对照组中Gal-3(+/+)型鼠的微粒体组分(Mic)中的GRP78蛋白表达显著高于Gal-3(-/-)型鼠(140.9±21.1 vs 76.1±9.5,t=8.86,P<0.01).在CCl_4 ig后24 h,Gal-3(+/+)型鼠的肝细胞线粒体组分(Mt)和Mic中的GRP78蛋白表达明显升高,并显著高于Gal-3(-/-)型鼠(Mt:127.0±18.8 vs 49.1±6.3,P<0.01;Mic:166.5±23.4 vs 87.7±11.6,P<0.01).结论:Galectin-3蛋白在CCl_4致急性肝损伤中可能具有一定的保护作用.上调Mic和Mt中的GRP78蛋白表达可能是Galectin-3在CCl_4对肝细胞损伤中发挥保护作用的一个途径.

关键词： Galectin一3 四氯化碳肝损伤葡萄糖调节蛋白78

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葡萄球菌肠毒素A基因原核表达系统的构建及其表达产物的鉴定

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中国病理生理杂志 2007年第1期23卷 163-167页

作者：徐水凌毛亚飞张梅光罗冬娇严杰浙江大学医学院病原生物学教研室浙江杭州310031 嘉兴学院医学院微生物与免疫学教研室浙江嘉兴314001 杭州师范学院基础医学部浙江杭州310018

目的:构建葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因原核表达系统,了解重组表达产物rSEA促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用。方法:采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌ATCC13565株DNA中扩增全长SEA基因片段,T-A克隆后测序,构建SEA基因原核表达系统***21DE... 详细信息

目的:构建葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因原核表达系统,了解重组表达产物rSEA促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用。方法:采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌ATCC13565株DNA中扩增全长SEA基因片段,T-A克隆后测序,构建SEA基因原核表达系统***21DE3。采用SDS-PAGE检测rSEA表达量,Ni-NTA亲和层析法提纯rSEA。采用TCID50法测定rSEA对Vero细胞的细胞毒性并计算TCIC50值。采用MTT比色法分别检测不同浓度rSEA体外对小鼠脾细胞、人外周血单个核细胞(PBMC)的促增殖作用以及对HepG2细胞(人肝癌细胞)、HeLa细胞(人宫颈癌上皮细胞)的生长抑制作用。结果:与公布的相关序列比较,所克隆的SEA基因核苷酸序列相似性为100%。rSEA表达量约为细菌总蛋白的25%。rSEA对Vero细胞的TCIC50为3.14μg。1.0-20.0mg/L的rSEA对小鼠脾细胞和人PBMC均有明显的促增殖作用(P<0.05)。5.0-20.0mg/LrSEA作用的人PBMC上清均能有效地抑制HepG2细胞和HeLa细胞生长(P<0.05)。结论:成功地构建了rSEA原核表达系统。rSEA仍然具有生物学活性。所建立的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用的检测方法,为以后减毒rSEA突变体的筛选奠定了基础。

关键词：葡萄球菌肠毒素A 基因表达原核表达 HepG2细胞 HeLa细胞 Veto细胞

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问号钩端螺旋体病人血清中LipL21抗体检测

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第3期27卷 291-292页

作者：罗冬娇郭宗琪孙百莉蒋晓崎周金成严杰杭州师范学院基础医学部 310018 四川省疾病预防控制中心浙江大学医学院病原生物学教研室

寻找钩体属特异性保护抗原，对于研制通用型钩体疫苗及实验室诊断试剂盒均有重要价值。Cullen等首先报告了致病性问号钩体均具有属特异性lipL21脂蛋白基因。我们也曾证实我国15群15型问号钩体参考标准株均含有序列保守的lipL21基因。已... 详细信息

寻找钩体属特异性保护抗原，对于研制通用型钩体疫苗及实验室诊断试剂盒均有重要价值。Cullen等首先报告了致病性问号钩体均具有属特异性lipL21脂蛋白基因。我们也曾证实我国15群15型问号钩体参考标准株均含有序列保守的lipL21基因。已知钩体病免疫保护作用主要依赖血清抗体为主的体液免疫。我们采用显微镜凝集试验（MAT）检测了156份钩体病人血清的凝集效价，并建立rLipL21-IgM／IgG-ELISAs对血清标本中LipL21的IgG和IgM型抗体进行了检测。

关键词：抗体检测病人血清问号钩端螺旋体 lipL21基因显微镜凝集试验特异性保护钩体疫苗免疫保护作用

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戒断对吗啡依赖小鼠自发活动及场景性恐惧条件化表达的影响

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第二军医大学学报 2007年第4期28卷 385-388页

作者：宋赠宋娟欧阳新平高军付爱文田绍文南华大学医学院生理学教研室衡阳421001 第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433 山东省阳信县计划生育服务站阳信251800

目的:研究不同戒断期对吗啡依赖小鼠自发活动及场景性恐惧条件化表达的影响。方法:以剂量递增法连续皮下注射(sc)盐酸吗啡7 d建立吗啡依赖小鼠模型,随机分成吗啡戒断1 d、吗啡戒断7 d、吗啡戒断21 d组,并设立生理盐水戒断1、7、21 d组... 详细信息

目的:研究不同戒断期对吗啡依赖小鼠自发活动及场景性恐惧条件化表达的影响。方法:以剂量递增法连续皮下注射(sc)盐酸吗啡7 d建立吗啡依赖小鼠模型,随机分成吗啡戒断1 d、吗啡戒断7 d、吗啡戒断21 d组,并设立生理盐水戒断1、7、21 d组作为对照,每组12～13只。戒断后采用旷场实验观察小鼠自发活动(检测穿梭格数、直立次数、理毛时间、中央区活动时间、进入中央次数及外周时间等指标);随后对小鼠进行场景性恐惧条件化,并于24 h后进行恐惧反应(僵直)的检测。结果:与生理盐水对照组相比,吗啡戒断1 d、7 d组小鼠的水平活动度(P<0．001,P<0．001)和进入中央区次数(P<0．001, P<0．05)明显降低;戒断1 d组小鼠垂直运动也显著下降(P<0．001);吗啡戒断1 d组的理毛行为增加(P<0．05);但各吗啡戒断组的中央区、外周活动时间无显著差异。吗啡处理还选择性损害了戒断1 d组小鼠的场景性恐惧条件化表达(P<0．05)。结论:戒断早期降低了吗啡依赖小鼠部分自发活动,同时损害了场景性恐惧条件化表达。

关键词：吗啡依赖物质戒断综合征自发活动恐惧

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关于生物安全三级实验室管理体系构建的思考

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中国医药生物技术 2007年第6期2卷 467-468页

作者：李勇鲁凤民张凤民傅江南赖小敏樊为民邢文革王建华北京兴原伟业管理咨询中心 100039 北京大学医学部基础医学院哈尔滨医科大学基础医学院暨南大学医学院实验动物中心中山大学医学院微生物教研室中国疾病预防控制中心性病艾滋病中心天津出入境检验检疫局动植食检验中心

　　自2003年暴发SARS疫情以来,我国政府以及相关职能部门对境内病原微生物实验室的管理给予了高度重视,陆续从政府层面上出台了一系列法律、法规和相关标准,国务院各相关职能部门层面上提出了有关具体要求,明确了生物安全三级、四级实... 详细信息

　　自2003年暴发SARS疫情以来,我国政府以及相关职能部门对境内病原微生物实验室的管理给予了高度重视,陆续从政府层面上出台了一系列法律、法规和相关标准,国务院各相关职能部门层面上提出了有关具体要求,明确了生物安全三级、四级实验室必须通过中国合格评定国家认可委员会的认可后方可使用的严格政策.……

关键词：生物安全三级实验室病原微生物管理体系构建国家认可四级体系规范卫生系统认可委员会高压灭菌器

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我国主要问号钩端螺旋体血清群lipL21基因序列及其产物免疫反应性分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第11期26卷 979-984页

作者：罗冬娇胡野孙百莉田菊霞胡美多严杰杭州师范学院基础医学部 310018 浙江金华职业技术学院医学院浙江大学医学院病原生物学教研室

目的分析我国15群15型问号钩端螺旋体(简称钩体)参考标准株外膜脂蛋白lipL21基因序列,构建该基因原核表达系统并鉴定表达产物的免疫原性,了解lipL21基因自然表达状况。方法高保真PCR扩增上述问号钩体株及双曲钩体Patoc型PatocⅠ株基因组... 详细信息

目的分析我国15群15型问号钩端螺旋体(简称钩体)参考标准株外膜脂蛋白lipL21基因序列,构建该基因原核表达系统并鉴定表达产物的免疫原性,了解lipL21基因自然表达状况。方法高保真PCR扩增上述问号钩体株及双曲钩体Patoc型PatocⅠ株基因组DNA中全长lipL21基因片段,T-A克隆后测序并构建其原核表达系统。分别用钩体TR/PatocⅠ和rLipL21兔抗血清为一抗的Western blot鉴定目的重组蛋白rLipL21的免疫原性,显微镜凝集试验(MAT)检测rLipL21兔抗血清的交叉凝集效价。以盐变-去垢剂处理法提取钩体外膜蛋白,用SDS-PAGE和免疫印迹法检测上述钩体株lipL21基因自然表达情况。结果上述钩体株均存在序列高度保守的lipL21基因,其核苷酸和氨基酸序列相似性分别为98．75％～99．82％和99．46％～100％。rLipL21能与TR/PatocⅠ及rLipl21兔抗血清发生结合反应。rLipL21免疫家兔能产生抗体,该抗体对上述15株问号钩体MAT效价为1：16～1：128。问号钩体外膜标本中均可检出LipL21,双曲钩体则否。结论我国钩体群参考标准株均含有序列保守的lipL21基因并自然表达于外膜,双曲钩体PatocⅠ株虽含有lipL21基因但未表达。rLipL21具有良好的抗原性和免疫反应性,有可能作为新型钩体疫苗或检测试剂盒的候选属特异性表面抗原之一。

关键词：钩端螺旋体 lipL21基因属特异性蛋白抗原重组表达外膜蛋白免疫原性

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肿瘤来源的抑制性细胞因子影响树突状细胞的微观流变特性并导致免疫应答恶化

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生物化学与生物物理进展 2006年第6期33卷 548-555页

作者：曾柱王国涛许晓风龙金华邢俊杰张颖娱肖俊段学燕唐岩唐军民孙大公北京大学基础医学院生物物理系北京100083 北京大学基础医学院解剖学和组织胚胎学系北京100083 贵州省黔东南州人民医院肿瘤科凯里556000 贵州省贵阳医学院物理教研室贵阳550004 北京大学医学部公共教学部医学物理教研室北京100083

现已证明,在肿瘤发生过程中,司职抗原呈递的树突状细胞的功能存在缺陷和紊乱,从而导致了免疫系统的显著受抑和肿瘤的免疫逃逸.为了探索肿瘤的免疫逃逸机制,利用生物物理学和微观流变学的方法研究了肿瘤来源因素对树突状细胞(dendriticce... 详细信息

现已证明,在肿瘤发生过程中,司职抗原呈递的树突状细胞的功能存在缺陷和紊乱,从而导致了免疫系统的显著受抑和肿瘤的免疫逃逸.为了探索肿瘤的免疫逃逸机制,利用生物物理学和微观流变学的方法研究了肿瘤来源因素对树突状细胞(dendriticcells,DCs)分化过程的影响.发现来源于肿瘤微环境的细胞因子等成分,导致DCs的渗透脆性增加、细胞膜脂流动性显著下降,而且细胞的转录水平和能量状态也明显改变,导致DCs的抗原摄取能力和活化幼稚T细胞的能力显著下降.所以,DCs的微观流变特性的改变也许是肿瘤免疫逃逸机制的一个方面.

关键词：树突状细胞肿瘤来源的抑制性细胞因子免疫逃逸机制渗透脆性膜流动性细胞基因的转录水平和能量状态免疫应答

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