检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2006年第5期46卷 789-795页

作者：贾爱卿刘维红郭爱珍陈焕春华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北省预防兽医学重点实验室

猪源鼠伤寒沙门氏菌临床分离株17Y,检测其对19种抗生素的耐药性,结果耐14种抗生素。用高温及高浓度SDS处理后,获得对11种抗生素的敏感性,该菌株命名为17S1。PCR检测证明,大部分耐药基因存在于质粒上,包括I型整合子携带耐药基因,且随着... 详细信息

猪源鼠伤寒沙门氏菌临床分离株17Y,检测其对19种抗生素的耐药性,结果耐14种抗生素。用高温及高浓度SDS处理后,获得对11种抗生素的敏感性,该菌株命名为17S1。PCR检测证明,大部分耐药基因存在于质粒上,包括I型整合子携带耐药基因,且随着质粒的消除而被消除。所鉴定的耐药基因有blaTEM、blaOXA-1、cat1、tet(B)、aacC2、aadA8b、dhfrXⅡ和sul1等。喹诺酮类药物的靶基因gyrA与parC位于染色体上。GyrA在耐药决定区第87位氨基酸突变(N78D),导致了喹诺酮类药物的耐药性逆转。敏感菌中扩增不到质粒毒力基因spv与rck。耐药性消除后的菌株17S1对小鼠的毒力降低(LD50增加10倍),在小鼠体内的增长与散速度也显著降低(P<0.05)。以上证据表明,鼠伤寒沙门氏菌的多重耐药性主要由质粒决定,研究开发新型质粒消除剂将对克服鼠伤寒沙门氏菌多重耐药性具有重要意义。

关键词：鼠伤寒沙门氏菌耐药性质粒消除细菌毒力整合子

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弓形虫MIC3基因真核表达质粒的构建及在IBRS-2细胞内的表达

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畜牧兽医学报 2007年第8期38卷 827-831页

作者：江涛张东林聂浩姚宝安赵俊龙华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院武汉430070

采用PCR技术从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码MIC3的基因,克隆入pMD18-T载体,转化至***5α感受态细胞,经抗性平板筛选、小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定后,亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1。然后筛选含有目的基因的重组质粒,并... 详细信息

采用PCR技术从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码MIC3的基因,克隆入pMD18-T载体,转化至***5α感受态细胞,经抗性平板筛选、小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定后,亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1。然后筛选含有目的基因的重组质粒,并转染IBRS-2细胞,在G418压力下进行筛选,利用SDS-PAGE、Western blot和ELISA检测表达情况。结果显示,扩增的MIC3基因与GenBank上相应基因序列(AJ132530)的一致性达99.9%,构建的真核表达质粒pcMIC3能在转染的IBRS-2细胞中表达分子量约为39.2ku的MIC3,且表达的蛋白质具有良好的免疫活性,为进一步研究该质粒的动物免疫试验奠定了基础。

关键词：刚地弓形虫 MIC3 基因克隆真核表达

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重组CFP-10／ESAT-6抗原ELISA法对活动性肺结核诊断的评估

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第9期28卷 847-850页

作者：詹枝华陈颖钰袁冶项杰周金海郭爱珍武汉市结核病医院 430083 华中农业大学动物医学院华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

目的以rCFP-10／ESAT-6融合蛋白抗原、植物血凝素（PHA）、生理盐水分别处理活动性肺结核患者外周血致敏T淋巴细胞，测定同一标本IFN-γ释放水平，探讨其对结核感染与发病的诊断意义。方法病例组111例为临床确诊肺结核患者，对照组292... 详细信息

目的以rCFP-10／ESAT-6融合蛋白抗原、植物血凝素（PHA）、生理盐水分别处理活动性肺结核患者外周血致敏T淋巴细胞，测定同一标本IFN-γ释放水平，探讨其对结核感染与发病的诊断意义。方法病例组111例为临床确诊肺结核患者，对照组292例为经胸部透视和结核菌素试验（PPD）筛选的大学生。入选对象取血3．0ml，均分为3份，每管1．0ml，分别加入rCFP-10／ESAT-6融合蛋白、PHA和生理盐水，孵育后ELISA法测定IFN-γ的吸光度（A）值及其抗体。结果rCFP-10／ESAT-6融合蛋白处理：IFN-γ测定值病例组x=1．3885±0．6236，对照组x=0．2944±0．0917，组间t′=16．4259，P〈0．05；以0．42为切割值，病例组阳性率93．58％，对照组阳性率13．07％。PHA处理：病例组x=1．2463±0．5541，对照组x=0．5613±0．0640，t′=19．1797，P〈0．05。生理盐水处理：病例组x=0．0772±0．0444，对照组x=0．0290±0．0235，t′=13．9487，P〈0．05。病例组抗体阳性率66．36％，对照组7．19％。结论利用rCFP-10／ESAT-6融合蛋白为特异性抗原，ELISA法测定外周血致敏淋巴细胞IFN-γ释放水平对结核感染诊断的敏感性〉90％，且无论特异性或非特异性处理，活动性肺结核患者IFN-γ释放水平均明显升高，血清抗体阳性率也高于对照组。

关键词：结核分枝杆菌结核病 rCFP-10/ESAT-6融合蛋白酶联免疫吸附法 γ-干扰素

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福美双诱发肉鸡胫骨软骨发育不良早期生长板消减cDNA文库的构建

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中国农业科学 2011年第4期44卷 829-834页

作者：宁官保田文霞王瑞覃平乔建钢李宏全李家奎毕丁仁潘思轶郭定宗山西农业大学动物科技学院华中农业大学动物医学院华中农业大学食品科技学院华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

【目的】为应用cDNA芯片技术筛选肉鸡胫骨软骨发育不良(TD)时序性差异表达基因,本研究构建了早期生长板消减cDNA文库。【方法】将7日龄AV肉鸡随机分为两组,对照组(control,C)饲以基础日粮,试验组(thiram diet-fed,T)饲以基础日粮添加福... 详细信息

【目的】为应用cDNA芯片技术筛选肉鸡胫骨软骨发育不良(TD)时序性差异表达基因,本研究构建了早期生长板消减cDNA文库。【方法】将7日龄AV肉鸡随机分为两组,对照组(control,C)饲以基础日粮,试验组(thiram diet-fed,T)饲以基础日粮添加福美双100 mg·kg-1,2 d后继续饲以基础日粮,诱发肉鸡TD。应用抑制消减杂交技术(SSH)构建正反向消减cDNA文库,用PCR验证两个文库中克隆的插入片段,随机抽取100个阳性克隆测序,对所测序列同源性分析和功能预测。【结果】从两个文库共获得2 227个有效阳性克隆,插入片段大小主要分布在200—1 000bp之间;所测序列中有97条ESTs与GenBank中的鸡基因序列同源性达到99%,且非冗余度达到68.7%;此外,有3条ESTs未找到同源序列。这些基因具有构成细胞外基质,参与软骨内骨化和骨的重构,调节骨发育,行使信号转导、血管发生,参与电子传递及能量代谢等功能。【结论】成功构建了消减cDNA文库,将为进一步点制cDNA芯片,筛选不同阶段的差异表达基因奠定了基础,也为肉鸡TD机理研究提供新线索。

关键词：消减cDNA文库胫骨软骨发育不良福美双抑制消减杂交(SSH) 差异表达基因

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DDM-BSA复合纳米材料的制备及对猪繁殖与呼吸综合征病毒增殖的抑制

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华中农业大学学报 2020年第3期39卷 82-88页

作者：蒋晓菡张晓桐梁建功肖少波华中农业大学理学院/农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院/农业微生物学国家重点实验室武汉430070

以牛血清白蛋白、(2,4-二羟基苯基)(2,6-二甲基苯基)甲酮(DDM)为原料,采用去溶剂化的方法,合成DDM-BSA复合纳米材料,通过紫外-可见光谱仪、透射电镜、激光粒度仪等对所合成的复合纳米材料进行表征。结果显示,所合成的复合纳米粒子尺寸... 详细信息

以牛血清白蛋白、(2,4-二羟基苯基)(2,6-二甲基苯基)甲酮(DDM)为原料,采用去溶剂化的方法,合成DDM-BSA复合纳米材料,通过紫外-可见光谱仪、透射电镜、激光粒度仪等对所合成的复合纳米材料进行表征。结果显示,所合成的复合纳米粒子尺寸分散均匀,平均粒径49.3 nm,对DDM药物的负载率为37.4%,80 h后体外释放率可达95.4%。在此基础上,评估了复合纳米粒子对MARC-145细胞的细胞毒性及对猪繁殖与呼吸综合征病毒增殖的影响。结果发现,当牛血清白蛋白负载的DDM质量浓度为12μg/mL时,MARC-145细胞的存活率超过90%,该质量浓度的复合纳米粒子可有效抑制PRRSV病毒的增殖,与单纯使用DDM相比,具有更好的抗病毒效果。

关键词：牛血清白蛋白复合纳米材料药物递送抗病毒药物靶向治疗猪繁殖与呼吸综合征病毒

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N-糖基化对乙型脑炎病毒感染与增殖的影响

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农业生物技术学报 2012年第3期20卷 316-320页

作者：张子重汪雪宋云峰陈焕春华中农业大学动物医学院动物传染病室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室

N-糖基化对于病毒的感染与增殖中均具有重要作用,切除病毒表面糖链或抑制病毒糖基化修饰的方法已成为登革热病毒等的潜在治疗方法。为阐明日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)表面的糖链在其感染和增殖过程中的作用,本... 详细信息

N-糖基化对于病毒的感染与增殖中均具有重要作用,切除病毒表面糖链或抑制病毒糖基化修饰的方法已成为登革热病毒等的潜在治疗方法。为阐明日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)表面的糖链在其感染和增殖过程中的作用,本研究用肽N-糖苷酶F(peptide N-glycosidase F,PNGase F)和内切糖苷酶H(endoglycosidase H,Endo H)处理乙型脑炎病毒,将酶切后的病毒用Western blot验证糖基化酶切的效果,将酶切的JEV接种BHK-21细胞进行蚀斑试验,观察蚀斑的大小及病毒滴度的变化情况。同时用衣霉素处理BHK-21细胞并同步接种JEV,进行蚀斑试验,观察蚀斑大小的变化与病毒增殖情况。结果显示,用Endo H和PNGase F处理JEV后,病毒形成的蚀斑均显著小于未处理的病毒对照,且病毒增殖滴度显著降低,说明病毒粒子表面的糖基化修饰对于病毒的侵染具有重要作用。衣霉素处理细胞后,病毒产生的蚀斑大小没有明显差异,但增殖滴度却显著降低,说明糖基化在JEV增殖过程中也具有重要的功能。本研究说明JEV的糖基化对于其感染和增殖均具有重要的作用,为开发抑制乙型脑炎病毒药物研究提供一个新的思路。

关键词：日本乙型脑炎病毒糖苷酶 N-糖基化感染增殖

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沙门菌脂多糖的结构修饰及其效应的研究进展

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畜牧兽医学报 2023年第4期54卷 1392-1402页

作者：田艳红于江旭焦宇洲高东阳蔡旭旺华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

沙门菌(Salmonella)是一种人畜共患病病原菌,对人类和动物的健康具有重大影响,同时给畜牧业造成了重大经济损失,因此其致病机制的深入研究是目前亟待解决的问题。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)位于沙门菌外膜,是一种重要的毒力因子,... 详细信息

沙门菌(Salmonella)是一种人畜共患病病原菌,对人类和动物的健康具有重大影响,同时给畜牧业造成了重大经济损失,因此其致病机制的深入研究是目前亟待解决的问题。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)位于沙门菌外膜,是一种重要的毒力因子,其结构的修饰会影响沙门菌免疫逃逸能力、抗性和毒力等多种特性。利用这一现象,人为修饰脂多糖后得到的突变体菌株可应用于沙门菌病的防控。此外,经修饰后的低毒性脂多糖因其具有免疫刺激性,因此可应用于疫苗佐剂。基于以上内容,本文将对沙门菌脂多糖的结构修饰及其效应、生物合成与转运、以及脂多糖的应用等方面进行综述,对于此研究进展的掌握有利于沙门菌致病机制的深入研究及沙门菌病的预防与控制。

关键词：沙门菌脂多糖结构修饰及效应生物合成及转运应用

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副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素的细胞毒性研究

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畜牧兽医学报 2011年第12期42卷 1750-1755页

作者：陈西王湘如徐晓娟郭凤娟陈焕春蔡旭旺华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

本研究旨在原核表达副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素(Cytolethal distending toxin,CDT),并作用于猪髋动脉内皮细胞(Pig iliac endothelial cells,PIEC),以研究其细胞毒性。根据本实验室完成的副猪嗜血杆菌SH 0165株(血清5型)全基因组序列... 详细信息

本研究旨在原核表达副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素(Cytolethal distending toxin,CDT),并作用于猪髋动脉内皮细胞(Pig iliac endothelial cells,PIEC),以研究其细胞毒性。根据本实验室完成的副猪嗜血杆菌SH 0165株(血清5型)全基因组序列,针对cdtA、cdtB和cdtC基因序列设计引物,扩增的基因片段大小分别约为681、834和531bp。将靶基因克隆到原核表达载体pET28a中,再转化到*** BL21(DE3),IPTG诱导表达3h,SDS-PAGE和Western blot检测证实表达产物以包涵体形式存在,大小分别约36、34和28ku。通过体外重构毒素与PIEC细胞作用3h,继续培养72h观察细胞形态学变化。结果表明,CdtABC全毒素致PIEC细胞膨胀、空泡形成、细胞凋亡等,而其他试验组变化不显著。结果提示,CDT毒素可能在细菌感染与致病中发挥着重要作用。

关键词：副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素毒素细胞毒性

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伪狂犬病毒在潜伏感染猪体内的组织分布

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畜牧兽医学报 2008年第5期39卷 645-651页

作者：龙晓婷刘俊磊郭洪习杨邱德新陈焕春周锐华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

潜伏感染是猪伪狂犬病防治和净化工作中的重要障碍之一。本研究用伪狂犬病毒(PRV)gG-/LacZ+标记毒株感染经过PRV灭活疫苗免疫的PRV阴性仔猪,建立了猪伪狂犬病毒潜伏感染动物模型,再用地塞米松激活PRV在猪体内的潜伏感染。运用免疫组织化... 详细信息

潜伏感染是猪伪狂犬病防治和净化工作中的重要障碍之一。本研究用伪狂犬病毒(PRV)gG-/LacZ+标记毒株感染经过PRV灭活疫苗免疫的PRV阴性仔猪,建立了猪伪狂犬病毒潜伏感染动物模型,再用地塞米松激活PRV在猪体内的潜伏感染。运用免疫组织化学SABC染色法研究了PRV在潜伏感染猪和潜伏感染激活猪体内部分组织的分布情况。结果显示,阳性细胞主要分布在神经系统的大脑、小脑、脑干、三叉神经和视神经以及非神经系统的扁桃体、肺和肾等部位。阳性细胞数量随着攻毒后时间的发展呈现减少的趋势,而注射地塞米松后,阳性细胞数量在上述组织中显著增加。

关键词：伪狂犬病毒潜伏感染地塞米松组织分布免疫组织化学染色

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重组蛋白H-NS对胸膜肺炎放线杆菌生物被膜形成的影响

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农业生物技术学报 2009年第3期17卷 381-385页

作者：达来宝力格金卉刘璨颖陈焕春周锐华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

在筛选胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)转座突变体库时,发现hns基因缺失突变可显著增强APP血清1型生物被膜的形成,该基因编码一种DNA结合蛋白(组蛋白样类核结构蛋白,H-NS)。为了进一步研究H-NS对APP生物被膜形... 详细信息

在筛选胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)转座突变体库时,发现hns基因缺失突变可显著增强APP血清1型生物被膜的形成,该基因编码一种DNA结合蛋白(组蛋白样类核结构蛋白,H-NS)。为了进一步研究H-NS对APP生物被膜形成的影响,实验以APP血清1型4074株基因组DNA为模板,PCR扩增了408bp的hns基因编码区,并克隆到原核表达载体pET-28c中获得重组质粒pET28c-hns,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),经IPTG诱导表达和组氨酸亲和层析柱纯化获得大小约19kD的重组蛋白rH-NS。将不同浓度的rH-NS添加到hns突变株1-21及其亲本菌株4074的培养基中,用微孔板法测定生物被膜的形成。结果显示,在不添加rH-NS时,4074株不能形成可见的生物被膜,而1-21株形成明显的生物被膜;在添加0.1～0.3μmol/LrH-NS的情况下,1-21株生物被膜的形成量随着rH-NS浓度的升高而降低,而4074株随着rH-NS浓度的升高而升高;rH-NS添加量超过0.4μmol/L对两个菌株生物被膜形成未见明显影响。结果表明H-NS蛋白负调控APP生物被膜的形成,并呈现一定的剂量效应。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌重组组蛋白样类核结构蛋白(H-NS) 生物被膜形成

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