检索结果-内蒙古大学图书馆

中国动物传染病学报 2024年第3期32卷 79-87页

作者：潘珂张静莫心宇申邦方瑞胡敏赵俊龙周艳琴华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070

本研究利用制备的GRA7单克隆抗体为基础建立猪弓形虫病的阻断ELISA方法。以rGRA7重组蛋白免疫小鼠,取脾细胞进行细胞融合,筛选出4株能够稳定产生单克隆抗体的阳性单克隆细胞株。经对此单克隆抗体进行IFA和Western blot检测确认成功制备G... 详细信息

本研究利用制备的GRA7单克隆抗体为基础建立猪弓形虫病的阻断ELISA方法。以rGRA7重组蛋白免疫小鼠,取脾细胞进行细胞融合,筛选出4株能够稳定产生单克隆抗体的阳性单克隆细胞株。经对此单克隆抗体进行IFA和Western blot检测确认成功制备GRA7蛋白的单克隆抗体后,以重组蛋白为包被抗原对阻断ELISA方法进行优化后,经过重复性、交叉性、符合性实验验证本方法具有可重复性,与MAT符合性高。初步应用于288份临床样品检测,检出率为11.46%,与MAT检测结果重合率为84.8%。本研究成功制备弓形虫GRA7蛋白的单克隆抗体,并建立了一种猪弓形虫病的阻断ELISA方法,为弓形虫病的检测提出了新的方案。

关键词：弓形虫 GRA7蛋白单克隆抗体阻断ELISA

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河南省和湖北省部分地区鸡球虫分离株对磺胺氯吡嗪钠耐药性调查

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动物医学进展 2023年第4期44卷 125-129页

作者：耿天天罗莉妍王雅乐申邦方瑞胡敏赵俊龙周艳琴华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070

为了解河南省和湖北省鸡球虫对磺胺氯吡嗪钠的耐药现状,选取河南省18个地区和湖北省17个地区的地方分离株进行鸡体笼养试验,以抗球虫指数(Anticoccidial index,ACI)来评价各虫株耐药性。研究结果显示,在所研究的93株鸡球虫分离株中,河... 详细信息

为了解河南省和湖北省鸡球虫对磺胺氯吡嗪钠的耐药现状,选取河南省18个地区和湖北省17个地区的地方分离株进行鸡体笼养试验,以抗球虫指数(Anticoccidial index,ACI)来评价各虫株耐药性。研究结果显示,在所研究的93株鸡球虫分离株中,河南省共计虫株52株,湖北省共计虫株41株。在河南省52株分离虫株中,有25株对磺胺氯吡嗪钠完全耐药(ACI<160),16株中度耐药(160≤ACI≤180),11株敏感(ACI>180);在湖北省共计41株鸡球虫分离虫株中,有9株完全耐药,9株中度耐药,23株敏感。研究结果为河南省和湖北省鸡球虫的耐药性提供了数据支撑。

关键词：鸡球虫耐药性磺胺氯吡嗪钠,鸡体笼养试验

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3株鸭疫里氏杆菌的分离鉴定与药敏试验

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中国畜牧兽医 2023年第3期50卷 1250-1258页

作者：陈栋张言浩张阳李森周祖涛李自力华中农业大学动物医学院预防兽医学系武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070 农业微生物学国家重点实验室武汉430070

【目的】了解湖北地区鸭疫里氏杆菌病的分布流行与耐药情况,为该地区肉鸭养殖场鸭疫里氏杆菌病的临床用药提供参考。【方法】对武汉周边区县(江夏区、黄陂区、黄梅县)肉鸭养殖场的鸭疫里氏杆菌疑似病例进行采样并分离病原菌,对分离菌的... 详细信息

【目的】了解湖北地区鸭疫里氏杆菌病的分布流行与耐药情况,为该地区肉鸭养殖场鸭疫里氏杆菌病的临床用药提供参考。【方法】对武汉周边区县(江夏区、黄陂区、黄梅县)肉鸭养殖场的鸭疫里氏杆菌疑似病例进行采样并分离病原菌,对分离菌的形态学、染色特性、生化特性、16S rRNA进行鉴定,并对鉴定为鸭疫里氏杆菌的分离株进行血清型和耐药性分析。利用标志基因整合酶的特异性引物PCR鉴定分离菌基因组,判断是否整合有50K基因岛。【结果】分离鉴定了3株鸭疫里氏杆菌,3株分离菌均能在TSA平皿培养基中生长为光滑的半透明状菌落,革兰氏染色为阴性、瑞氏染色可观察到两极浓染;生化试验结果显示,3株鸭疫里氏杆菌均不发酵多种糖类,过氧化氢酶阳性,不产硫化氢,不能液化明胶。16S rRNA鉴定结果显示,获得大小为1480 bp的目的条带,血清型均为1型;50K基因岛标志基因PCR扩增结果显示,仅黄梅分离株(HM株)含有该基因岛。最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)试验与纸片扩散(Kirby-Bauer,K-B)试验测定耐药性结果显示,3株分离菌株均对青霉素、阿莫西林、头孢曲松、头孢噻肟、氟苯尼考及庆大霉素敏感,对萘啶酮酸、壮观霉素、恩诺沙星、多黏菌素B表现出不同程度的耐药性。【结论】分离鉴定了3株血清1型鸭疫里氏杆菌,药敏试验结果对本地区鸭疫里氏杆菌病的防治及流行病学研究提供一定的理论指导。

关键词：鸭疫里氏杆菌分离鉴定血清型 50K基因岛药物敏感性

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副猪嗜血杆菌Flp-FRT双基因敲除方法的建立与优化

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畜牧兽医学报 2022年第1期53卷 219-230页

作者：肖静肖坤雪王翘楚陈焕春蔡旭旺徐晓娟华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070

本研究旨在利用Flp-FRT位点特异性重组系统建立副猪嗜血杆菌(Glaesserella parasuis)的无抗性标记基因敲除方法,为***的毒力因子、致病机制和基因工程疫苗研究提供有力的遗传操作工具。首先利用λ噬菌体cI857/P_(RM)/P_(R)基因表达调控... 详细信息

本研究旨在利用Flp-FRT位点特异性重组系统建立副猪嗜血杆菌(Glaesserella parasuis)的无抗性标记基因敲除方法,为***的毒力因子、致病机制和基因工程疫苗研究提供有力的遗传操作工具。首先利用λ噬菌体cI857/P_(RM)/P_(R)基因表达调控系统调控Flp重组酶的表达,实现抗性突变体中抗性基因的消除;然后将Flp表达质粒电转化引入*** CF7066,再自然转化介导同源重组的自杀性质粒获得有抗性标记的基因缺失突变株,调节Flp酶表达并筛选无抗突变株,提高培养温度消除表达Flp酶的温敏质粒;进一步通过筛选突变FRT位点以保证基因敲除的效率。结果表明成功构建了温敏穿梭质粒pSHG5C-Flp,证实了λcI857/P_(RM)/P_(R)表达系统可调控Flp重组酶在***中表达并切除抗性突变株ΔnanH::Kan_(R)中的抗性基因;然后用Flp重组酶表达质粒pSHG5C-Flp电转化*** CF7066,再用自杀性质粒pKF-ΔnanH和pKF-Δapd2对其进行两次连续自然转化,依次在自然转化的初代转化子中筛选并获得了无抗的单基因缺失株ΔnanH和双基因缺失株ΔnanHΔapd,提高培养温度至42℃培养消除了Flp重组酶表达质粒。尽管该系统实现了***两个基因的连续敲除,但敲除第2个基因时的效率明显下降,这很可能源于细菌细胞中Flp重组酶表达的积累,对转化质粒介导的同源重组产生了干扰。因此,作者筛选了突变的FRT位点、构建自杀性质粒pKFM-Δapd进行自然转化,显著提高了自然转化后获得突变株的效率,从而保证了该敲除系统的有效性和稳定性。本研究首次报道了可用于***的无抗性标记双基因缺失突变系统,为其分子致病基因与基因工程疫苗的研究奠定了基础。

关键词：副猪嗜血杆菌表达调控 Flp-FRT 基因敲除无抗缺失

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应用四引物扩增阻滞突变体系PCR技术检测柔嫩艾美耳球虫二氢蝶酸合酶N377D突变

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中国兽医学报 2023年第1期43卷 93-97页

作者：耿天天王雅乐罗莉妍申邦方瑞胡敏赵俊龙周艳琴华中农业大学、动物医学院、农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室湖北武汉430070

面对严重鸡球虫病的磺胺耐药性,传统检测磺胺耐药的方法已无法满足临床应用,因此建立一种新的磺胺耐药柔嫩艾美耳球虫检测方法具有重要意义。本研究建立了一种使用四引物扩增阻滞突变体系PCR技术(amplification refractory mutation sys... 详细信息

面对严重鸡球虫病的磺胺耐药性,传统检测磺胺耐药的方法已无法满足临床应用,因此建立一种新的磺胺耐药柔嫩艾美耳球虫检测方法具有重要意义。本研究建立了一种使用四引物扩增阻滞突变体系PCR技术(amplification refractory mutation system-PCR,ARMS-PCR)用于准确区分柔嫩艾美耳球虫二氢蝶酸合酶(dihydropteroate synthase,DHPS)基因中的点突变(A1129G)。对ARMS-PCR反应进行优化,最佳内外引物工作浓度比是5∶1,Mg^(2+)的最优工作浓度为10 mmol/L,dNTP的最优工作浓度为0.15 mmol/L,最佳Taq酶体积为0.1μL,最佳退火温度为62℃。本研究发现在合适的PCR体系下,能够检测出含有磺胺耐药柔嫩艾美耳球虫的最低检测限为40 fg,表明该方法灵敏度良好;通过在1对内引物(F-inner377s/R-inner377r)上倒数第3位碱基上分别引进错配,使该方法的特异性提高。因此,ARMS-PCR方法是一种简单快速的用以区分临床分离株单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)的基因分型方法。

关键词：鸡球虫病耐药性四引物扩增阻滞突变体系PCR技术单核苷酸多态性

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羊弓形虫病间接ELISA诊断方法的建立

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中国动物传染病学报 2022年第1期30卷 127-133页

作者：李迎迎侯伦王敏李亚琼李明俊周艳琴赵俊龙申邦华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070

为比较5种弓形虫抗原的诊断效果,建立实用的羊弓形虫病诊断方法,本研究制备了弓形虫速殖子全虫抗原和4个重组蛋白(GRA1、MIC3、MAG、BAG1),正交试验比较其免疫反应性,从中筛选出相对优势抗原并建立羊弓形虫病间接ELISA(iELISA)诊断方法... 详细信息

为比较5种弓形虫抗原的诊断效果,建立实用的羊弓形虫病诊断方法,本研究制备了弓形虫速殖子全虫抗原和4个重组蛋白(GRA1、MIC3、MAG、BAG1),正交试验比较其免疫反应性,从中筛选出相对优势抗原并建立羊弓形虫病间接ELISA(iELISA)诊断方法,用于检测弓形虫特异的IgG抗体。研究结果表明:除BAG1外上述4种抗原均具有较好的免疫反应性,综合考虑选择致密颗粒蛋白1(GRA1)作为诊断抗原建立了GRA1-iELISA,其检测弓形虫抗体灵敏度大于1∶100(血清稀释度),且不与羊莫氏巴贝斯虫、吕氏泰勒虫、捻转血毛线虫阳性血清发生交叉反应,特异性良好;运用建立的方法和改良凝集试验分别对采自山羊屠宰场的80份血清样品进行检测,测得的弓形虫感染阳性率分别为28.75%(23/80)和31.25%(25/80),二者总符合率为82.5%。本研究建立的ELISA检测方法对羊弓形虫病的诊断以及商业化试剂盒的开发具有重要参考价值。

关键词：羊弓形虫病 GRA1 间接ELISA

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一株猪流行性腹泻病毒变异株的分离、鉴定与全基因组序列分析

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湖北农业科学 2024年第7期63卷 134-140页

作者：刘曦贾相超李晨曦李自力华中农业大学动物医学院武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070 农业微生物学国家重点实验室武汉430070

江苏省某猪场疑似发生猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED),采集病料后,经RT-PCR检测PEDV呈阳性。病毒感染Vero细胞能够引起明显的细胞病变,间接免疫荧光鉴定结果显示病毒感染细胞后能被抗PEDV N蛋白的特异性单克隆抗体识别。... 详细信息

江苏省某猪场疑似发生猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED),采集病料后,经RT-PCR检测PEDV呈阳性。病毒感染Vero细胞能够引起明显的细胞病变,间接免疫荧光鉴定结果显示病毒感染细胞后能被抗PEDV N蛋白的特异性单克隆抗体识别。通过全基因组序列分析,鉴定该毒株为PEDV G2b亚型变异株,并将其命名为PEDV JS-B株。

关键词：猪流行性腹泻病毒分离鉴定变异毒株分段测序序列分析

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河南省和湖北省部分地区鸡球虫分离株对地克珠利耐药性调查

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动物医学进展 2022年第7期43卷 129-133页

作者：耿天天叶成雷振宇申邦方瑞胡敏赵俊龙周艳琴华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室湖北武汉430070

为了解河南省和湖北省鸡球虫对地克珠利的耐药现状,选取河南省11个地区和湖北省11个地区的地方分离株进行笼养试验,以最适抗球虫活性(POAA)、病变积分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)和抗球虫指数(ACI)4项指标综合评价各虫株耐药性。结... 详细信息

为了解河南省和湖北省鸡球虫对地克珠利的耐药现状,选取河南省11个地区和湖北省11个地区的地方分离株进行笼养试验,以最适抗球虫活性(POAA)、病变积分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)和抗球虫指数(ACI)4项指标综合评价各虫株耐药性。结果显示,河南省34株分离虫株中,有1株对地克珠利轻度耐药,4株对地克珠利中度耐药,29株高度耐药;湖北省35株分离虫株中,有1株中度耐药,34株高度耐药。结果表明,河南省和湖北省鸡球虫对地克珠利均存在耐药现象。

关键词：鸡球虫病耐药性地克珠利笼养试验

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环介导等温扩增技术检测柔嫩艾美耳球虫二氢蝶酸合酶N377D突变

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中国兽医学报 2022年第8期42卷 1607-1611页

作者：耿天天王雅乐罗莉妍申邦方瑞胡敏赵俊龙周艳琴华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室湖北武汉430070

面对日益严重的磺胺类药物的耐药性,传统的耐药性检测方法已不能满足临床需求,因此开发一种磺胺耐药柔嫩艾美耳球虫检测方法十分必要。本试验建立一种使用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)来准确区分柔嫩... 详细信息

面对日益严重的磺胺类药物的耐药性,传统的耐药性检测方法已不能满足临床需求,因此开发一种磺胺耐药柔嫩艾美耳球虫检测方法十分必要。本试验建立一种使用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)来准确区分柔嫩艾美耳球虫二氢蝶酸合酶(dihydropteroate synthase,DHPS)基因中的点突变(A1129G)的方法。对LAMP反应进行优化,发现在68℃,60 min时,反应的灵敏度和特异性均达到最佳。此时,该方法的最低检测限40 fg,并对5种病原体显示出特异性。在检测的所有46个现场样品中,有43个为阳性结果。

关键词：鸡球虫病耐药性环介导等温核酸扩增技术单核苷酸多态性

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表达三拷贝糖蛋白的狂犬病新型疫苗SAD-tOG株的研发

表达三拷贝糖蛋白的狂犬病新型疫苗SAD-tOG株的研发

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第21次全国犬业科技学术研讨会

作者：吴颖张程光赵剑清汪宗梅王平宋文藏周明傅振芳赵凌华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院湖北省预防兽医学重点实验室武汉科前生物股份有限公司

狂犬病是由狂犬病病毒感染引起的一种重要的人兽共患传染病,狂犬病一旦出现临床症状死亡率接近100%。犬、猫是狂犬病的主要传染源,当前我国宠物犬、猫数量超过1.2亿只,但宠物犬、猫用的狂犬疫苗多数来自于进口,价格高昂。因此,研发安全... 详细信息

狂犬病是由狂犬病病毒感染引起的一种重要的人兽共患传染病,狂犬病一旦出现临床症状死亡率接近100%。犬、猫是狂犬病的主要传染源,当前我国宠物犬、猫数量超过1.2亿只,但宠物犬、猫用的狂犬疫苗多数来自于进口,价格高昂。因此,研发安全、有效、廉价的犬、猫通用狂犬病疫苗对保障人类健康和公共卫生安全具有重要意义。本研究通过反向遗传技术获得表达3个拷贝密码子优化G基因的重组狂犬病毒SAD-tOG株,该毒株免疫原性优于亲本毒株SAD。纯化SAD-tOG病毒与佐剂混合后免疫犬、猫无副反应,且具有良好的免疫原性,可作为狂犬病疫苗候选株。

关键词：狂犬病病毒重组病毒犬猫模型免疫原性疫苗

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