检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农业科学 2016年第14期49卷 2844-2849页

作者：刘晓丽刘婷刘波程国富谷长勤张万坡胡薛英华中农业大学动物医学院

【目的】前人研究表明禽呼肠孤病毒可以经卵垂直传播,禽呼肠孤病毒能引起雏禽的病毒性关节炎、呼吸道和肠道疾病、肝炎、心肌炎、免疫抑制等。以实验室分离的鸭呼肠孤病毒HP080421株为研究对象,该毒株引起病变主要以鸭软脚为主要临床特... 详细信息

【目的】前人研究表明禽呼肠孤病毒可以经卵垂直传播,禽呼肠孤病毒能引起雏禽的病毒性关节炎、呼吸道和肠道疾病、肝炎、心肌炎、免疫抑制等。以实验室分离的鸭呼肠孤病毒HP080421株为研究对象,该毒株引起病变主要以鸭软脚为主要临床特征,病鸭肝脏和脾脏表面有大量的白色坏死灶、肾脏肿大、出血为主要病变特点。鸭呼肠孤病毒对鸡胚的致病性研究,旨在通过雏鸡的病理变化特点,探讨所分离的HP080421鸭呼肠孤病毒株是否也可感染鸡群,为鸡场鸭呼肠孤病毒感染的防控提供理论依据。【方法】运用华中农业大学兽医病理学实验室分离鉴定的HP080421株鸭呼肠孤病毒通过尿囊腔接种SPF鸡胚,建立SPF鸡胚鸭呼肠孤病毒感染模型,培养鸡胚至雏鸡出壳,运用临床观察、病理剖检、H.E染色和免疫组织化学染色等病理组织学检查方法,对鸭呼肠孤病毒感染SPF鸡胚进行病理学研究和致病性分析。【结果】研究发现病毒感染鸡胚孵化培养至22—23日龄均啄壳,但不能自主出壳,需人工剥壳。病理剖检可见雏鸡的肝脏、脾脏肿胀质脆,表面及实质分布有黄白色坏死灶;脑部组织肿胀,并可见出血点和出血斑。H.E染色的组织病理学观察可见接毒组雏鸡肝脏、脾脏的坏死灶周围有大量淋巴细胞浸润;法氏囊的滤泡髓质部和胸腺的髓质部淋巴细胞减少、缺失;脑、肺脏、肾脏存在不同程度的淤血、出血和水肿;免疫组织化学染色结果表明:病毒阳性信号主要分布于肝脏、脾脏、肺脏和法氏囊等器官,并且位于上皮细胞和巨噬细胞的细胞质和胞核内。【结论】鸭呼肠孤病毒株HP080421能够在SPF鸡胚中复制增殖,并使雏鸡主要器官发生明显的病理变化,病理变化主要集中在肝脏和淋巴器官,因此鸭呼肠孤病毒可通过垂直传播感染鸡群,还可导致雏鸡免疫抑制。本研究通过SPF鸡胚鸭呼肠孤病毒感染模型,阐述了鸭呼肠孤病毒感染鸡群的可能性,因此在实际养殖过程中,养殖户要防止鸭呼肠孤病毒对鸡胚的污染,切断传播途径,以达到预防鸡群感染鸭呼肠孤病毒的目的。

关键词：鸭呼肠孤病毒 SPF鸡胚病理剖检免疫器官 H.E染色

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猪圆环病毒2型ORF2基因在昆虫细胞中的表达及其特性

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生物工程学报 2005年第6期21卷 975-978页

作者：樊惠英陈焕春佟铁铸琚春梅吕建强黄红亮华中农业大学动物医学院动物病毒室武汉430070

利用BactoBac杆状病毒表达系统将圆环病毒2型的ORF2全基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBacTM1中,获得重组转移载体pFastOFR2,再将其转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,发生转座作用,经蓝白菌落筛选得到含ORF2基因的重组穿梭... 详细信息

利用BactoBac杆状病毒表达系统将圆环病毒2型的ORF2全基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBacTM1中,获得重组转移载体pFastOFR2,再将其转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,发生转座作用,经蓝白菌落筛选得到含ORF2基因的重组穿梭载体***2,以脂质体介导的方法将重组穿梭载体转染sf9细胞,获得重组病毒,命名为***2。间接免疫荧光分析表明,PCV2阳性血清能使***2感染的sf9昆虫细胞呈强的荧光着色;SDSPAGE与Westernblotting分析可见大小约为28kD的特异性带,表明***2在sf9细胞中成功表达了PCV2ORF2蛋白。将该表达蛋白纯化并经磷钨酸负染后,通过电镜观察可见形态与PCV2病毒粒子相似的病毒样颗粒(VLPs),其中某些颗粒由于中心浓染而似空衣壳,其直径也为17nm左右。

关键词：猪圆环病毒2型 ORP2蛋白昆虫细胞表达病毒样颗粒

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禽流感血凝素基因的原核表达及其在H9亚型诊断中的应用

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生物工程学报 2005年第2期21卷 315-319页

作者：张瑞华金梅林王贵华喻正军赵思婷李红超谭亚娣陈焕春华中农业大学动物医学院动物病毒室武汉430070

根据H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因序列设计并合成引物 ,从本室分离并保存的H9N2亚型禽流感病毒中扩增了预计约 16 83bp的血凝素基因 ,将此扩增产物克隆进pMD18_T载体 ,限制性酶切及序列测定后 ,进一步将其亚克隆到pGEX_KG中 ,与GST蛋... 详细信息

根据H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因序列设计并合成引物 ,从本室分离并保存的H9N2亚型禽流感病毒中扩增了预计约 16 83bp的血凝素基因 ,将此扩增产物克隆进pMD18_T载体 ,限制性酶切及序列测定后 ,进一步将其亚克隆到pGEX_KG中 ,与GST蛋白融合表达。SDS_PAGE和Western印迹表明缺失信号肽后的HA基因在大肠杆菌中获得了表达 ,表达产物具有免疫学活性 ,融合蛋白的分子量约为 90kD ,位于包涵体中。包涵体经变性、复性处理 ,利用复性产物作为抗原包被酶标板建立了检测H9亚型禽流感抗体ELISA方法。结果表明应用HA重组蛋白作为诊断H9亚型禽流感抗原具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点 ,可用于H9亚型禽流感抗体的检测。

关键词：禽流感病毒血凝素基因原核表达 ELISA

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麻鸭和樱桃谷鸭的CD3ε、CD4、CD8α基因ORF克隆及序列分析

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中国农业科学 2009年第12期42卷 4428-4434页

作者：李卫白家媛许媛媛谷长勤张万坡程国富陈敏胡薛英华中农业大学动物医学院

【目的】分析比较中国部分品种鸭的CD3ε、CD4和CD8α基因ORF序列,为研究CD3ε链、CD4和CD8α链的结构和功能及其抗体的应用提供依据。【方法】利用RT-PCR,对麻鸭、樱桃谷鸭的CD3ε、CD4和CD8α基因ORF序列克隆测定,应用Clustal(X1.83)... 详细信息

【目的】分析比较中国部分品种鸭的CD3ε、CD4和CD8α基因ORF序列,为研究CD3ε链、CD4和CD8α链的结构和功能及其抗体的应用提供依据。【方法】利用RT-PCR,对麻鸭、樱桃谷鸭的CD3ε、CD4和CD8α基因ORF序列克隆测定,应用Clustal(X1.83)和DNAstar生物学软件分别与GenBank上公布的北京鸭CD3ε(AF378704)、CD4(AF378701)和CD8α(AF378373)基因ORF序列进行序列分析。【结果】麻鸭、樱桃谷鸭、北京鸭CD3ε和CD4基因ORF序列及所编码的氨基酸同源性为99%;北京鸭和麻鸭CD8α基因ORF序列同源性为99%,与樱桃谷鸭的同源性为95%。麻鸭和北京鸭CD8α基因ORF序基因编码的氨基酸完全一致,与樱桃谷鸭的CD8α存在16处位点差异,其中胞外区有15个氨基酸的差异,使亲水性、抗原性以及此区域位于蛋白质表面的可能性都有明显差异。从遗传发生树得出樱桃谷鸭、北京鸭、麻鸭CD3ε和CD4的ORF序列相互之间的遗传关系近;樱桃谷鸭、麻鸭和北京鸭CD8α基因ORF序列之间的遗传关系较远。【结论】樱桃谷鸭、北京鸭、麻鸭CD3ε和CD4的ORF序列遗传变异性低,樱桃谷鸭与麻鸭和北京鸭CD8α基因ORF之间具有较高遗传变异性。

关键词： CD3ε CD4 CD8α 序列分析同源性

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鸭源呼肠孤病毒感染引起雏鸭免疫损伤的观察

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中国农业科学 2010年第21期43卷 4514-4520页

作者：李爽谷长勤白家媛张红张万坡程国富胡薛英华中农业大学动物医学院

【目的】观察鸭源呼肠孤病毒对雏鸭脾、法氏囊的病理损伤及相关免疫指标,初步阐明鸭源呼肠孤病毒对所引起的机体免疫器官损伤以及机体免疫抑制,为进一步探讨发病机理和免疫防治提供理论依据。【方法】7日龄樱桃谷雏鸭人工感染鸭源呼肠... 详细信息

【目的】观察鸭源呼肠孤病毒对雏鸭脾、法氏囊的病理损伤及相关免疫指标,初步阐明鸭源呼肠孤病毒对所引起的机体免疫器官损伤以及机体免疫抑制,为进一步探讨发病机理和免疫防治提供理论依据。【方法】7日龄樱桃谷雏鸭人工感染鸭源呼肠孤病毒,分别观察脾、法氏囊组织病理学变化,检测脾、法氏囊指数,外周血CD3+、CD8+T细胞阳性率,脾、法氏囊IgY生成细胞,并分析试验组及对照组差异显著性。【结果】感染鸭源呼肠孤病毒后,雏鸭脾出现明显坏死灶,之后出现肉芽肿结构,法氏囊固有层淋巴滤泡明显减少;脾、法氏囊指数降低;外周血CD3+、CD8+T细胞阳性率降低;脾IgY生成细胞数量增多、法氏囊IgY生成细胞数量减少。【结论】鸭源呼肠孤病毒感染可导致雏鸭免疫器官严重损伤并引起免疫抑制。

关键词：鸭源呼肠孤病毒病理变化免疫损伤免疫抑制

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非洲雏鸵鸟甲状腺的显微和超微结构研究

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畜牧兽医学报 2008年第1期39卷 91-96页

作者：李升和彭克美宋卉王岩位兰唐丽杜安娜靳二辉王家乡华中农业大学动物医学院

应用光镜和透射电镜技术,研究2月龄非洲雏鸵鸟甲状腺的显微和超微结构。结果表明,非洲雏鸵鸟甲状腺实质由甲状腺滤泡和滤泡旁细胞组成;甲状腺滤泡大小不一,直径20.0～280.0μm,平均69.9μm;滤泡主要由单层立方上皮细胞围成,上皮细胞高5.... 详细信息

应用光镜和透射电镜技术,研究2月龄非洲雏鸵鸟甲状腺的显微和超微结构。结果表明,非洲雏鸵鸟甲状腺实质由甲状腺滤泡和滤泡旁细胞组成;甲状腺滤泡大小不一,直径20.0～280.0μm,平均69.9μm;滤泡主要由单层立方上皮细胞围成,上皮细胞高5.0～15.0μm,平均9.4μm。电镜下,滤泡上皮细胞分为A、B两型,A型细胞呈立方形或低柱状,胞核较大,常染色质丰富;胞质内RER、线粒体、高尔基复合体和溶酶体等细胞器丰富;B型细胞呈扁平或低立方形,胞核扁椭圆形,异染色质较多;胞质内各种细胞器不发达。滤泡旁细胞卵圆形或多边形,数量较少,胞体较大,位于滤泡间或滤泡上皮细胞之间;胞质内RER、线粒体、高尔基复合体和分泌颗粒较多。研究结果提示2月龄非洲雏鸵鸟的甲状腺功能比较活跃,能够合成、分泌较多的甲状腺激素和一定量的降钙素。

关键词：鸵鸟甲状腺显微结构超微结构

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内皮素对肺动脉高压综合征肉鸡的影响

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中国农业科学 2004年第6期37卷 912-916页

作者：周东海郭定宗杨世锦李素华万春云华中农业大学动物医学院华中农业大学动物医学院武汉430070

利用高能日粮常规饲养大群艾维因肉鸡的方法,获得自然肺动脉高压综合征(PHS)肉鸡病例。应用放射免疫分析方法,分别测定了2～6 周龄正常组和肺动脉高压(PH)组肉鸡血浆及心、肝、肺、肾等组织中内皮素(endothelin-1,ET-1)的含量,并测定... 详细信息

利用高能日粮常规饲养大群艾维因肉鸡的方法,获得自然肺动脉高压综合征(PHS)肉鸡病例。应用放射免疫分析方法,分别测定了2～6 周龄正常组和肺动脉高压(PH)组肉鸡血浆及心、肝、肺、肾等组织中内皮素(endothelin-1,ET-1)的含量,并测定了腹水心脏指数(AHI)和平均肺动脉压(mPAP),同时还应用硝酸还原酶法测定了血浆中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)水平。结果显示:PH组AHI、mPAP极显著高于正常组(P<0.01); 从 3周龄开始,PH组ET-1水平开始显著或极显著高于正常组(P <0.05或 P< 0.01),6周龄时 PH组血浆、肺脏和肾脏ET-1水平略为下降,但仍极显著高于正常组(P<0.01);AHI、mPAP和ET-1均随肉鸡日龄的增长而升高;组织中ET-1含量高于血浆,肺组织中ET-1含量明显高于其它几种组织;mPAP变化与血浆ET-1含量变化之间存在显著正相关(P< 0.05),但与 NO 相关性不显著;两组血浆NO、NOS 水平均随日龄增长而升高,且PH 组 NO、NOS水平在后期显著高于正常组。本试验结果提示,ET-1、NO 参与了肉鸡PHS的形成和发展过程,并在其中起着重要作用。

关键词：内皮素一氧化氮肺动脉高压综合征肉鸡

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日本脑炎病毒NS1蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立

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农业生物技术学报 2020年第7期28卷 1322-1330页

作者：杨克露裴超刘朝霞周登元曹胜波陈焕春宋云峰华中农业大学动物医学院

日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）是危害人民健康的一种重要人畜共患病原,仍然缺乏敏感性高的抗原检测方法。NS1蛋白是JEV表达的一种分泌性蛋白,是该病毒诊断的理想靶标。本研究用构建的非结构蛋白1 （non-structural ... 详细信息

日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）是危害人民健康的一种重要人畜共患病原,仍然缺乏敏感性高的抗原检测方法。NS1蛋白是JEV表达的一种分泌性蛋白,是该病毒诊断的理想靶标。本研究用构建的非结构蛋白1 （non-structural protein 1, NS1）单克隆抗体,建立了可检测NS1蛋白的双抗体夹心酶联免疫吸附试验（double antibody sandwich ELISA, DAS-ELISA）方法。用针对JEV NS1蛋白不同位点的单克隆抗体杂交瘤细胞株（5H2和2F6）制备腹水,经Protein G纯化后,以5H2包被酶标板作为捕获抗体,HRP标记的2F6为检测抗体。ELISA条件优化的结果显示,捕获抗体和酶标抗体最佳浓度分别为25和2.296μg/mL。用该方法检测系列稀释的NS1蛋白,蛋白浓度范围在78.125～625.000 ng/mL时,检测OD;值和蛋白浓度之间具有良好的线性关系,说明该方法可用于NS1蛋白的定量检测。用该方法检测猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒等均显示阴性,说明特异性良好。重复性试验结果显示,该方法批内重复性为0.7%～2.6%,批间重复性为0.6%～2.1%。用该方法检测了JEV感染的小鼠（Mus musculus）脑组织匀浆,在小鼠发病期可明显检测到NS1蛋白。本研究建立了检测JEV NS1蛋白的ELISA方法,为该病毒的诊断提供了一种工具。

关键词：日本脑炎病毒 NS1蛋白单克隆抗体双抗体夹心ELISA

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福美双对肉鸡生长性能和胫骨软骨发育不良组织病理学变化的影响

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畜牧兽医学报 2008年第6期39卷 733-738页

作者：田文霞李家奎毕丁仁张艳红覃平华中农业大学动物医学院

用160羽1日龄健康AA肉鸡进行试验,研究福美双对肉鸡生长性能和胫骨软骨发育不良组织病理学变化的影响。将试验肉鸡预饲1周后随机分为2组。对照组饲以基础日粮;试验组饲以基础日粮添加福美双100mg/kg饲料,4 d后继续饲以基础日粮。试验期2... 详细信息

用160羽1日龄健康AA肉鸡进行试验,研究福美双对肉鸡生长性能和胫骨软骨发育不良组织病理学变化的影响。将试验肉鸡预饲1周后随机分为2组。对照组饲以基础日粮;试验组饲以基础日粮添加福美双100mg/kg饲料,4 d后继续饲以基础日粮。试验期23 d。在试验的第4、9、16、23天,计算平均日增重(ADG)和料重比(F/G);胫骨软骨发育不良(TD)评分,计算TD发病率,观察病理变化;并进行发病不同阶段组织病理学观察。结果表明,第4天试验组肉鸡TD发病率达到94.44%,料重比增加;第4和第9天肉鸡体增重显著下降,病理剖检症状典型。不同阶段组织病理学观察表明,福美双可促进软骨细胞极剧增殖,引起细胞大量死亡,挤压血管以致血管坏死,基质合成受阻,延缓软骨钙化,最终导致前肥大细胞大量聚集形成软骨栓。因此,对肉鸡短期饲喂福美双100mg/kg可显著影响AA肉鸡生长性能,提高TD发病率,引起与自然发生TD相同的形态学和组织病理学变化,是一个较为理想的研究TD发生发展、筛选各种微营养素预防TD的试验动物模型。

关键词：肉鸡福美双胫骨软骨发育不良生长性能组织病理学变化

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低温下阻遏蛋白MogR对单增李斯特菌鞭毛形成的影响

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微生物学报 2024年第5期64卷 1506-1520页

作者：汪国俊邓霞栗绍文刘梅华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

【目的】单核细胞增生李斯特菌(简称单增李斯特菌)(Listeria monocytogenes,Lm)是食源性病原菌,可以引发李斯特菌病(listeriosis)。Lm能在低温下生长,对冷藏食品的安全构成严重威胁,并对人类健康造成潜在的危害。Lm能低温生长与抑制鞭... 详细信息

【目的】单核细胞增生李斯特菌(简称单增李斯特菌)(Listeria monocytogenes,Lm)是食源性病原菌,可以引发李斯特菌病(listeriosis)。Lm能在低温下生长,对冷藏食品的安全构成严重威胁,并对人类健康造成潜在的危害。Lm能低温生长与抑制鞭毛基因表达以减少鞭毛的合成有关。MogR是Lm鞭毛基因转录的阻遏蛋白,在机体里或37℃环境下具有阻遏作用,Lm不产生鞭毛;然而,当Lm处于20-30℃时MogR无阻遏作用,Lm产生鞭毛。我们研究发现在4℃生长条件下Lm鞭毛合成减少,但具体的分子机制尚未明确。本文探究在4℃下Lm鞭毛合成少与MogR起阻遏作用的关系。【方法】以Lm ATCC 19115为亲本株,分别构建了MogR和鞭毛丝蛋白FlaA的缺失株ΔmogR和ΔflaA(作为无鞭毛对照株)及其回补株cΔmogR和cΔflaA,测定了菌株在4、28、37℃时的运动性、鞭毛产生情况和鞭毛基因表达量,并对所构建的菌株进行了4、28、37℃时生长曲线的测定。【结果】在4℃时,mogR缺失后,菌株运动性显著强于亲本株(P<0.01),鞭毛合成量显著多于亲本株(P<0.001),鞭毛基因转录水平显著高于亲本株(P<0.001);缺失株ΔmogR的生长能力显著弱于亲本株(P<0.05)。回补株cΔmogR的运动能力、鞭毛合成量和鞭毛基因转录水平与亲本株相比,无显著性差异。【结论】在4℃时,Lm鞭毛产量少与MogR对鞭毛基因起转录抑制作用有关,低温条件下Lm能生长繁殖与MogR对鞭毛基因表达的抑制作用有关。本研究结果为揭示Lm低温生长机制提供了新的信息。

关键词：单增李斯特菌 MogR 鞭毛低温生长

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