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华中农业大学学报 2021年第3期40卷 75-84页

作者：柴本杰黄菲裴捷周明田大勇傅振芳赵凌华中农业大学农业微生物学国家重点实验室/华中农业大学动物医学院武汉430070 上海青赛生物科技有限公司上海201506

狂犬病是由狂犬病病毒感染中枢神经系统引起的一种古老的人兽共患传染病,人和动物感染后一旦出现临床症状,死亡率几乎100%,至今仍无有效的治疗方法。当前,接种疫苗是预防狂犬病最为有效的途径。因此,狂犬病疫苗研发一直是狂犬病研究领... 详细信息

狂犬病是由狂犬病病毒感染中枢神经系统引起的一种古老的人兽共患传染病,人和动物感染后一旦出现临床症状,死亡率几乎100%,至今仍无有效的治疗方法。当前,接种疫苗是预防狂犬病最为有效的途径。因此,狂犬病疫苗研发一直是狂犬病研究领域的热点之一,进而不断涌现出新型疫苗。本文对近期狂犬病新型灭活疫苗、弱毒疫苗、核酸疫苗、亚单位疫苗、病毒样颗粒疫苗、口服疫苗等基因工程疫苗研究进展进行系统梳理,以期把握狂犬病疫苗研究现状,为研发更为有效的狂犬病新型疫苗提供新思路。

关键词：狂犬病狂犬病病毒灭活疫苗弱毒疫苗核酸疫苗亚单位疫苗病毒样颗粒疫苗口服疫苗基因工程

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哺乳仔猪轮状病毒和肠产毒性大肠杆菌混合感染病例的诊治

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黑龙江畜牧兽医 2023年第22期 76-82,142,143页

作者：祁松张哲玮朱晶罗宇山董德文贝为成华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 广西翔仪生物工程有限公司南宁530000 湖北洪山实验室武汉430070 生猪健康养殖协同创新中心武汉430070

2022年8月中旬广西地区某规模化养猪场产房中7~15日龄哺乳仔猪发生严重腹泻和呕吐,甚至死亡,且死亡率较高。为查明病因和控制该病,试验首先根据临床症状和病理剖检结果进行初步判断;然后采集病料,分别对病毒性病原和细菌性病原进行进一... 详细信息

2022年8月中旬广西地区某规模化养猪场产房中7~15日龄哺乳仔猪发生严重腹泻和呕吐,甚至死亡,且死亡率较高。为查明病因和控制该病,试验首先根据临床症状和病理剖检结果进行初步判断;然后采集病料,分别对病毒性病原和细菌性病原进行进一步检测,并针对细菌性病原进行药敏试验;最后根据诊断结果进行有针对性的治疗。结果表明:腹泻哺乳仔猪小肠壁呈薄的半透明状,部分肠段呈灰黄色和灰黑色;肠壁充血,内容物为絮状的黄色或灰色液体;胃内充满黄色液体,可见少量凝乳块;初步判断为轮状病毒(RV)或猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)和大肠杆菌的混合感染。进一步检测发现,病料中A群轮状病毒(RVA)呈阳性,猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和PDCoV呈阴性。从病料中分离到1株肠产毒性大肠杆菌(ETEC);该分离株对头孢曲松、庆大霉素和卡那霉素敏感,对氟苯尼考、多西环素和恩诺沙星中介,对阿莫西林、替米考星、泰万菌素和新霉素耐药。对产房腹泻仔猪按2~3 mL/头的剂量灌服10%庆大霉素进行治疗,每天1次,连续3 d,仔猪腹泻情况得到了有效控制。说明导致该场哺乳仔猪发生严重腹泻的主要原因为RV和ETEC混合感染,采取的治疗措施具有良好的效果。

关键词：哺乳仔猪轮状病毒(RV) 肠产毒性大肠杆菌(ETEC) 腹泻混合感染诊治

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环介导等温扩增技术检测柔嫩艾美耳球虫二氢蝶酸合酶N377D突变

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中国兽医学报 2022年第8期42卷 1607-1611页

作者：耿天天王雅乐罗莉妍申邦方瑞胡敏赵俊龙周艳琴华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室湖北武汉430070

面对日益严重的磺胺类药物的耐药性,传统的耐药性检测方法已不能满足临床需求,因此开发一种磺胺耐药柔嫩艾美耳球虫检测方法十分必要。本试验建立一种使用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)来准确区分柔嫩... 详细信息

面对日益严重的磺胺类药物的耐药性,传统的耐药性检测方法已不能满足临床需求,因此开发一种磺胺耐药柔嫩艾美耳球虫检测方法十分必要。本试验建立一种使用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)来准确区分柔嫩艾美耳球虫二氢蝶酸合酶(dihydropteroate synthase,DHPS)基因中的点突变(A1129G)的方法。对LAMP反应进行优化,发现在68℃,60 min时,反应的灵敏度和特异性均达到最佳。此时,该方法的最低检测限40 fg,并对5种病原体显示出特异性。在检测的所有46个现场样品中,有43个为阳性结果。

关键词：鸡球虫病耐药性环介导等温核酸扩增技术单核苷酸多态性

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河南省和湖北省部分地区鸡球虫分离株对地克珠利耐药性调查

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动物医学进展 2022年第7期43卷 129-133页

作者：耿天天叶成雷振宇申邦方瑞胡敏赵俊龙周艳琴华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 湖北省预防兽医学重点实验室湖北武汉430070

为了解河南省和湖北省鸡球虫对地克珠利的耐药现状,选取河南省11个地区和湖北省11个地区的地方分离株进行笼养试验,以最适抗球虫活性(POAA)、病变积分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)和抗球虫指数(ACI)4项指标综合评价各虫株耐药性。结... 详细信息

为了解河南省和湖北省鸡球虫对地克珠利的耐药现状,选取河南省11个地区和湖北省11个地区的地方分离株进行笼养试验,以最适抗球虫活性(POAA)、病变积分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)和抗球虫指数(ACI)4项指标综合评价各虫株耐药性。结果显示,河南省34株分离虫株中,有1株对地克珠利轻度耐药,4株对地克珠利中度耐药,29株高度耐药;湖北省35株分离虫株中,有1株中度耐药,34株高度耐药。结果表明,河南省和湖北省鸡球虫对地克珠利均存在耐药现象。

关键词：鸡球虫病耐药性地克珠利笼养试验

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一株猪源盖塔病毒的分离鉴定及遗传演化分析

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病毒学报 2022年第6期38卷 1405-1410页

作者：严伟东杨郑欣马宁宁张梦佳邵伟何启盖李文涛华中农业大学动物科学技术学院动物医学院武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 武汉科前生物股份有限公司武汉4300072 生猪健康养殖协同创新中心武汉430070 湖北洪山实验室武汉430070

盖塔病毒(Getah virus,GETV)是一种人畜共患病毒,近年来在动物中的感染时有发生,监测其流行情况以及控制其传播对公共卫生方面至关重要。本研究对一猪场流产胎儿脾脏样品进行二代测序,与NCBI数据库比对后,发现该序列与GETV HNJZ-S2毒株... 详细信息

盖塔病毒(Getah virus,GETV)是一种人畜共患病毒,近年来在动物中的感染时有发生,监测其流行情况以及控制其传播对公共卫生方面至关重要。本研究对一猪场流产胎儿脾脏样品进行二代测序,与NCBI数据库比对后,发现该序列与GETV HNJZ-S2毒株的基因组高度相似。对组织样品进行无菌处理,接种至PK-15细胞,经连续传代培养和空斑纯化,获得一株能在PK-15细胞上稳定生长的分离物,命名为GETV-YL株,并对其进行电镜观察与遗传演化分析。电镜结果显示,病毒颗粒呈球状,直径约为70 nm,有囊膜,表面有甲病毒典型的纤突结构。遗传演化分析结果显示,GETV-YL基因组全长11689bp,与GenBank中现有的30株GETV全基因组序列相似性为94.4%~99.8%,与中国猪源毒株HNJZ-S2序列相似性最高(99.8%)并处于同一分支。在本研究中,从感染的猪中检测并分离到了GETV,表明该地区应加强对该病毒在猪群中流行情况的监测,并对该地区的蚊子进行病原检测。

关键词：猪盖塔病毒分离鉴定遗传演化分析

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猪多杀性巴氏杆菌OmpW、TbpA蛋白的原核表达及免疫原性研究

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中国畜牧兽医 2023年第4期50卷 1489-1498页

作者：张哲玮代小童韦祖丹陈云鹏甘晶贝为成华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 湖北洪山实验室武汉430070 广西扬翔农牧有限责任公司贵港537100 生猪健康养殖协同创新中心武汉430070

【目的】研究猪多杀性巴氏杆菌OmpW和TbpA蛋白的免疫原性,探索其作为疫苗候选抗原的可能。【方法】对NCBI中不同血清群猪多杀性巴氏杆菌中OmpW和TbpA蛋白氨基酸序列进行相似性比对,并对OmpW和TbpA蛋白进行生物信息学分析。基于此,构建... 详细信息

【目的】研究猪多杀性巴氏杆菌OmpW和TbpA蛋白的免疫原性,探索其作为疫苗候选抗原的可能。【方法】对NCBI中不同血清群猪多杀性巴氏杆菌中OmpW和TbpA蛋白氨基酸序列进行相似性比对,并对OmpW和TbpA蛋白进行生物信息学分析。基于此,构建重组表达菌株pET28a-OmpW-BL21和pET28a-TbpA-BL21,重组OmpW和TbpA蛋白经镍柱亲和层析纯化后与氢氧化铝佐剂混匀制备亚单位疫苗,免疫小鼠后使用猪多杀性巴氏杆菌GX-PmD4菌株攻毒,评估OmpW和TbpA蛋白的免疫原性。【结果】相似性比对发现,OmpW和TbpA蛋白在不同血清群猪多杀性巴氏杆菌中高度保守;SignalP 6.0 Server和TMHMM Server v.2.0软件预测发现OmpW蛋白有信号肽和跨膜区,而TbpA蛋白有信号肽无跨膜区;ABCpred软件分析显示,OmpW和TbpA蛋白分别有14和22个B细胞抗原表位;SOPMA和SWISS-MODEL软件进一步预测蛋白结构表明:OmpW和TbpA蛋白的α-螺旋、β-转角、延伸链和无规则卷曲分别占16.18%、5.39%、36.76%、41.67%和40.42%、5.69%、16.77%、37.13%。经原核表达获得的重组OmpW和TbpA蛋白均具有较强的抗原性。在免疫小鼠后的14和28 d,与对照组相比,血清中OmpW、TbpA特异性抗体水平极显著上升(P<0.01)。小鼠免疫攻毒试验结果显示,重组OmpW组和TbpA组的小鼠存活率分别为50.0%和37.5%。【结论】本研究成功表达了猪多杀性巴氏杆菌OmpW和TbpA蛋白,且重组OmpW蛋白免疫原性较强,可作为猪多杀性巴氏杆菌亚单位疫苗的有效候选抗原。

关键词：猪多杀性巴氏杆菌 OmpW TbpA 表达免疫原性

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牛无绿藻乳腺炎的研究现状

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动物医学进展 2023年第1期44卷 122-126页

作者：张海艳许顺鑫陈秋慧李政志严蕊胡秀秀郭爱珍胡长敏陈洁武汉市农业科学院畜牧兽医研究所湖北武汉430208 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 长江大学动物科学学院湖北荆州434025

牛无绿藻是引起牛乳腺炎的一种重要病原,它在全世界范围内广泛存在,并且给奶牛养殖行业造成了巨大的经济损失。牛无绿藻耐高温,可与其他病原菌共同感染牛乳腺,对其使用巴氏消毒法杀灭后仍有部分存活。牛无绿藻乳腺炎在夏季高温季节多发... 详细信息

牛无绿藻是引起牛乳腺炎的一种重要病原,它在全世界范围内广泛存在,并且给奶牛养殖行业造成了巨大的经济损失。牛无绿藻耐高温,可与其他病原菌共同感染牛乳腺,对其使用巴氏消毒法杀灭后仍有部分存活。牛无绿藻乳腺炎在夏季高温季节多发,它的发病率高、临床症状缺乏特异性、病原学检查易被忽视,目前关于它的有效治疗手段匮乏。为提高人们对牛无绿藻乳腺炎的认识,论文从牛无绿藻乳腺炎的病原学、流行病学、发病机制、临床症状、病理变化、诊断、防治与展望等方面进行综述,希望能为牛无绿藻乳腺炎的临床诊治及进一步深入的科学研究拓展思路。

关键词：奶牛乳腺炎牛无绿藻发病机制诊治

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一例猪蓝耳病病毒、猪圆环病毒2型和猪链球菌血清2型混合感染的诊断及防控

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黑龙江畜牧兽医 2021年第6期 55-59,146页

作者：陈晓雨于学祥孙琪库旭钢范盛先何启盖华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物疫病诊断中心检测实验室武汉430070

2019年11月底湖北某商品猪场育肥猪只出现咳嗽、喘气、呼吸困难等症状,为了查找病因、控制疫情、减少损失,采用流行病学调查、临床检查、病理剖检和实验室检测方法进行综合诊断,并根据诊断结果及猪场具体问题提出了防控建议。结果表明:... 详细信息

2019年11月底湖北某商品猪场育肥猪只出现咳嗽、喘气、呼吸困难等症状,为了查找病因、控制疫情、减少损失,采用流行病学调查、临床检查、病理剖检和实验室检测方法进行综合诊断,并根据诊断结果及猪场具体问题提出了防控建议。结果表明:该猪场育肥猪感染了猪蓝耳病病毒NADC30-like毒株、猪圆环病毒2型,同时混合感染了血清2型猪链球菌,分离菌对头孢类药物(头孢曲松、头孢喹肟、头孢他啶)、大观霉素及氨苄西林高敏,通过实施综合防控措施后病情得到了有效控制。说明该猪场育肥猪只发病的主要原因为猪蓝耳病病毒NADC30-like毒株和猪圆环病毒2型及猪链球菌血清2型混合感染,应加强防控。

关键词：猪呼吸道疾病综合征猪蓝耳病猪圆环病毒2型育肥猪混合感染疫苗防控

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猪多杀性巴氏杆菌和链球菌混合感染的诊治及防控

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黑龙江畜牧兽医 2021年第9期 78-82,87,164页

作者：阮胜男于学祥孙琪库旭钢何启盖江云波华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物疫病诊断中心检测实验室武汉430070

为了确定湖北省某规模化猪场病死猪的发病原因,试验调查了猪场大体概况,解剖发病猪采集肺脏、气管等病料,并进行细菌分离、纯化,采用分子生物学方法进行核酸检测及血清型鉴定,利用药敏试验分析分离菌对常用抗菌药物的耐药性并提出防治... 详细信息

为了确定湖北省某规模化猪场病死猪的发病原因,试验调查了猪场大体概况,解剖发病猪采集肺脏、气管等病料,并进行细菌分离、纯化,采用分子生物学方法进行核酸检测及血清型鉴定,利用药敏试验分析分离菌对常用抗菌药物的耐药性并提出防治方案。结果表明:从样品中未检测到病毒核酸,仅检测到细菌核酸,经测定该猪场病死猪混合感染了猪多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)和猪链球菌(Streptococcus suis,SS),其中Pm的荚膜多糖基因型为D型,SS为血清9型;分离株Pm-D和SS-9对氧氟沙星、强力霉素、恩诺沙星、头孢拉定较敏感。根据药敏试验结果并结合该猪场情况提出综合防控意见,采用后发病猪病情得到有效控制。说明毒力较强的细菌原发致病可造成较大危害,药敏试验对于细菌性疾病的快速治疗和预防起到了至关重要的作用。

关键词：多杀性巴氏杆菌猪链球菌混合感染耐药诊断防控

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2株Cluster 3鹅源坦布苏病毒的分离鉴定及其致病性研究

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中国畜牧兽医 2025年第4期52卷 1750-1762页

作者：陈作鑫陈宇欣潘彦林黄允真李林林董嘉文向勇徐志宏孙敏华张俊勤黄淑坚廖明广东省农业科学院动物卫生研究所农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室广东省畜禽疫病防治研究重点实验室广东省动物疫病野外科学观测研究站广州510640 佛山大学生命科学与工程学院佛山528225 仲恺农业工程学院动物科技学院广州510225 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

【目的】明确Cluster 3鹅源坦布苏病毒(Tembusu virus, TMUV)基因组变异情况及其对鹅的致病性,为Cluster 3 TMUV的防控提供参考。【方法】利用BHK-21细胞对感染TMUV的鹅肝脏组织样品进行病毒分离,通过RT-PCR、间接免疫荧光试验(IFA)、... 详细信息

【目的】明确Cluster 3鹅源坦布苏病毒(Tembusu virus, TMUV)基因组变异情况及其对鹅的致病性,为Cluster 3 TMUV的防控提供参考。【方法】利用BHK-21细胞对感染TMUV的鹅肝脏组织样品进行病毒分离,通过RT-PCR、间接免疫荧光试验(IFA)、透射电镜观察进行鉴定,并测定分离株的生长曲线。对分离株完成全基因组扩增后,使用ModelFinder、MrBayes等软件对其进行遗传进化分析,并对分离株的E蛋白进行氨基酸突变位点分析;测定分离株病毒滴度后,攻毒30日龄鹅,观察鹅各组织器官临床剖检病变及组织病理变化,使用实时荧光定量PCR检测鹅各组织脏器中的病毒载量。【结果】RT-PCR成功鉴定得到2份TMUV核酸阳性病料,接种至BHK-21细胞后,60 h即可观察到明显病变。将3代病毒液IFA检测可观察到明显红色荧光,透射电镜可观察到直径约50 nm、有囊膜的病毒粒子。从发病鹅肝脏组织成功分离得到2株TMUV,分别命名为JM3与JM1205。病毒一步生长曲线结果显示,JM3和JM1205株分别在培养60和48 h时病毒滴度最高。全基因扩增结果显示,JM3和JM1205株基因组全长均为10 994 bp。遗传进化树显示,JM3和JM1205株均为Cluster 3 TMUV成员,与Cluster 3 TMUV鸡源分离株CTLN遗传距离最近。氨基酸突变位点分析结果显示,与GenBank中最早上传的TMUV毒株MM1775株相比,JM3和JM1205株的E蛋白存在多个氨基酸位点突变,其中V157A突变可能与TMUV毒力增强相关。攻毒后1 d后鹅开始出现排绿色稀粪症状,攻毒后7 d开始出现神经症状。JM3组在攻毒后14 d仍持续排毒,JM1205组排毒持续至攻毒后11 d。攻毒后6 d,鹅出现体重增长减缓、下降的情况,至10 d开始恢复缓慢上升。剖检发现攻毒组鹅出现不同程度的脾脏肿大、胰脏坏死、肝脏发白、大脑充血;此外JM3株攻毒组鹅出现卵巢出血、心包积液;JM1205株攻毒组鹅出现心脏出血。攻毒后各时间点脾脏病毒载量均最高,在攻毒后3 d达到峰值,随后逐渐下降。【结论】本研究自广东地区养鹅场分离得到2株Cluster 3 TMUV:JM3和JM1205,2株分离株均对鹅有致病性,可在鹅体内多个器官复制,引起鹅共济失调、体重下降等症状。

关键词：坦布苏病毒(TMUV) 分支3 分离鉴定鹅致病性

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