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汉坦病毒核酸疫苗的研究进展

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医药导报 2006年第7期25卷 601-603页

作者：王燚燕张徐凯黄汉菊华中科技大学同济医学院病原生物系微生物教研室武汉430030

汉坦病毒引起肾综合征出血热,是我国重点防治疾病之一。针对汉坦病毒M和S片段的核酸疫苗对预防肾综合征出血热具有显著效果,具有广阔的应用前景。

关键词：汉坦病毒核酸疫苗预防

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防治跨种属的禽流感

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医药导报 2006年第7期25卷 607-609页

作者：张徐凯钱东彬王燕黄汉菊华中科技大学同济医学院病原生物系微生物教研室武汉430030

易发于野生鸟类和家禽中流行的禽流感病毒可引起禽流感(avianinfluenza)。禽流感病毒属正粘病毒科甲型流感病毒属。预防禽流感要加强禽类疾病的监测。对疑似和确诊患者应进行隔离治疗和对症治疗,加强支持治疗,密切观察,监测并预防并发... 详细信息

易发于野生鸟类和家禽中流行的禽流感病毒可引起禽流感(avianinfluenza)。禽流感病毒属正粘病毒科甲型流感病毒属。预防禽流感要加强禽类疾病的监测。对疑似和确诊患者应进行隔离治疗和对症治疗,加强支持治疗,密切观察,监测并预防并发症的发生。

关键词：禽流感病毒致病性预防疫苗

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FADDdel-GFP基因修饰在胰岛细胞移植中的作用

FADDdel-GFP基因修饰在胰岛细胞移植中的作用

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中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议

作者：胡萍李君武文雪黄鹤叶嗣颖林绍强李小兰雷萍朱慧芬沈关心暨南大学医学院微生物和免疫学教研室暨南大学医学院微生物和免疫学教研室华中科技大学同济医学院华中科技大学同济医学院暨南大学医学院微生物和免疫学教研室暨南大学医学院微生物和免疫学教研室暨南大学医学院微生物和免疫学教研室华中科技大学同济医学院华中科技大学同济医学院华中科技大学同济医学院

目的:本研究将缺失氨基端死亡效应域(DED)的Fas相关死亡域(FADD)突变体(FADDdel)与绿色荧光蛋白(GFP)的融合基因pFADDdel-GFP导入小鼠胰岛细胞NIT-1,将其移植入糖尿病模型小鼠体内,探讨融合蛋白FADDdel-GFP在胰岛细胞移植治疗1型糖尿病... 详细信息

目的:本研究将缺失氨基端死亡效应域(DED)的Fas相关死亡域(FADD)突变体(FADDdel)与绿色荧光蛋白(GFP)的融合基因pFADDdel-GFP导入小鼠胰岛细胞NIT-1,将其移植入糖尿病模型小鼠体内,探讨融合蛋白FADDdel-GFP在胰岛细胞移植治疗1型糖尿病中的作用。

关键词： FADD 1型糖尿病转染移植

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核糖核酸干扰抑制生存素表达诱导小鼠结肠癌细胞凋亡

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中华实验外科杂志 2006年第7期23卷 792-794页

作者：李喆赵平王建军盛援廖小玲戚中田第二军医大学长海医院普通外科上海200433 第二军医大学长海医院基础部微生物学教研室上海200433 华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科

目的筛选强效抑制生存素Survivin基因表达的小干扰核糖核酸(siRNA),探讨Sur- vivin基因抑制对小鼠结肠癌细胞凋亡的影响。方法根据siRNA的设计规则和Survivin序列,设计3段侯选siRNA,聚合酶链反应(PCR)法制备表达框；将siRNA表达框与Surv... 详细信息

目的筛选强效抑制生存素Survivin基因表达的小干扰核糖核酸(siRNA),探讨Sur- vivin基因抑制对小鼠结肠癌细胞凋亡的影响。方法根据siRNA的设计规则和Survivin序列,设计3段侯选siRNA,聚合酶链反应(PCR)法制备表达框；将siRNA表达框与Survivin-绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因表达质粒(pSurvivin-EGFP)共转染293T细胞,24～48 h后根据荧光强度筛选强效siRNA；再制备其表达质粒转染小鼠结肠癌CT26细胞,应用实时荧光定量(FQ)-聚合酶链反应和蛋白印迹(Western blot)法分析Survivin基因的表达；DNA末端标记(TUNEL)法和流式细胞仪(FCM)Annexin V/丙化碘锭(PI)双染色法检测细胞凋亡。结果筛选出1段高效抑制Survivin表达的siRNA,可使CT26细胞内Survivin mRNA拷贝数明显减少,抑制率为86．9%；蛋白表达水平亦显著降低；TUNEL检测显示转染48 h后RNA干扰组和对照组凋亡细胞数分别为(60．13±5．71)个和(5．47±0．63)个,两组差异有统计学意义(P＜0．01)；FCM检测转染后1、2、3、4 d凋亡细胞比率分别为2．1%、4．9%、11．7%和32．6%,对照组4个时间点凋亡率均低于1．5%,两组差异有统计学意义(P＜0．01)。结论siRNA能有效抑制小鼠结肠癌CT26细胞内Survivin基因表达并诱导结肠癌细胞凋亡。

关键词： Survivin RNA干扰结肠癌脱噬作用

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幽门螺杆菌致胃癌分子机制的研究

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临床消化病杂志 2006年第2期18卷 119-121页

作者：蔡明黄文广蔡昌学华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科武汉430022 华中科技大学同济医学院病原生物系微生物学教研室

幽门螺杆菌(Hp)是一种微需氧革兰氏染色阴性的、呈S形或弧形弯曲的细菌,它可以持续性、特异性地自然定植于入胃黏膜或食管的胃黏膜化生区,大量研究表明,Hp是慢性胃炎、十二指肠溃疡的独立致病因子,它与胃癌的发生有着密切的关系[1,2].... 详细信息

幽门螺杆菌(Hp)是一种微需氧革兰氏染色阴性的、呈S形或弧形弯曲的细菌,它可以持续性、特异性地自然定植于入胃黏膜或食管的胃黏膜化生区,大量研究表明,Hp是慢性胃炎、十二指肠溃疡的独立致病因子,它与胃癌的发生有着密切的关系[1,2].国际癌症研究机构(IARC)早在1994年就已经将Hp列为人类第一类致癌因子[3].但是Hp确切的致癌机制目前尚不清楚.现将Hp致胃癌发生的可能机制作一简要综述.

关键词：幽门螺杆菌胃癌癌前病变

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三氧化二砷抗胃癌作用机制的研究

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临床消化病杂志 2006年第4期18卷 222-225,228页

作者：蔡明黄文广蔡昌学华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科武汉430022 华中科技大学同济医学院病原生物系微生物学教研室武汉430030

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对人胃癌细胞株MKN-28抑制生长及诱导凋亡的生物学效应。方法采用光镜观察、溴化二甲噻唑二苯四氮唑(MTT)还原法、流式细胞仪(FCM)检测法检测As2O3在不同作用时间、不同给药浓度时对MKN-28细胞生长的影响。结... 详细信息

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对人胃癌细胞株MKN-28抑制生长及诱导凋亡的生物学效应。方法采用光镜观察、溴化二甲噻唑二苯四氮唑(MTT)还原法、流式细胞仪(FCM)检测法检测As2O3在不同作用时间、不同给药浓度时对MKN-28细胞生长的影响。结果MKN-28细胞经As2O3作用后,细胞增殖受到明显抑制,而且呈浓度-作用时间依赖关系。流式细胞仪检测结果显示DNA直方图上出现典型的亚二倍体凋亡峰,细胞周期分析发现药物作用后MKN-28细胞的生长周期受到明显阻滞。结论As2O3既能有效地抑制人胃癌细胞株MKN-28的生长,又能诱导该细胞凋亡,而且呈浓度依赖性和作用时间依赖性。

关键词：胃癌细胞三氧化二砷细胞凋亡

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结核病血清学诊断进展

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微生物与感染 2006年第3期1卷 170-173页

作者：刘来成卢贤瑜范雄林重庆医科大学临床免疫学教研室重庆400016 华中科技大学同济医学院微生物学教研室

结核病的细菌学检查目前是结核病实验室诊断的金标准。由于痰涂片阳性率较低，镜检需要经验，难以区分环境分枝杆菌造成的假阳性；痰培养需时太长，因此细菌学检查对结核病的诊断价值有限。随着分子生物学技术的迅速发展，用高度敏感的... 详细信息

结核病的细菌学检查目前是结核病实验室诊断的金标准。由于痰涂片阳性率较低，镜检需要经验，难以区分环境分枝杆菌造成的假阳性；痰培养需时太长，因此细菌学检查对结核病的诊断价值有限。随着分子生物学技术的迅速发展，用高度敏感的方法检测结核分枝杆菌（简称结核杆菌）及其特异性DNA片段，如聚合酶链反应（PCR）、生物探针和基因芯片等，需要相应的检测设备和检测费用高而未能广泛推广。

关键词：结核病血清学诊断结核分枝杆菌分子生物学技术细菌学检查聚合酶链反应检测设备实验室诊断

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芽孢杆菌外毒素保护性抗原与上游强启动子穿梭载体的构建

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中国热带医学 2006年第9期6卷 1546-1548页

作者：刘蓉娜黄汉菊徐静华华中科技大学同济医学院基础医学院病原生物学系微生物学教研室湖北武汉430030 中国药品生物制品检定所北京100050

目的构建携带炭疽芽孢杆菌保护性抗原(PA)的两种穿梭载体与上游强启动子。方法将解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶启动子克隆到载体pbluescript-sk(+)上,构建载体pBLKSP;以A16R疫苗株(Tox+,Cap-,弱毒株)DNA为模板,设计合成内外侧引物巢式PCR... 详细信息

目的构建携带炭疽芽孢杆菌保护性抗原(PA)的两种穿梭载体与上游强启动子。方法将解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶启动子克隆到载体pbluescript-sk(+)上,构建载体pBLKSP;以A16R疫苗株(Tox+,Cap-,弱毒株)DNA为模板,设计合成内外侧引物巢式PCR扩增获得保护性抗原(PA)的全基因,先克隆到载体pBLKSP,再将其和质粒PUB110重组构建成两种穿梭载体。结果酶切鉴定显示所切下的片段大小均与预计相符。测序结果与文献报道序列及预计结果一致。结论成功构建了带有强启动子的两种穿梭载体。为在无毒炭疽疫苗株中的高效表达和炭疽芽孢杆菌的分子疫苗研究奠定了基础。

关键词：炭疽芽孢杆菌穿梭载体重组基因

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H22肿瘤细胞aptamer的筛选与结构分析

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重庆医科大学学报 2006年第6期31卷 841-844,909页

作者：周宇凡张桂梅冯作化袁野张志仁重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016 华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学教研室武汉430030

目的:获得与H22肿瘤细胞特异性结合的aptamer。方法:利用SELEX技术,以小鼠DC细胞为反筛选细胞,以H22肿瘤细胞为靶细胞,从体外合成的80bp随机单链DNA文库中筛选出能与H 22肿瘤细胞特异结合的aptamer。采用荧光标记引物法检测aptamer与H 2... 详细信息

目的:获得与H22肿瘤细胞特异性结合的aptamer。方法:利用SELEX技术,以小鼠DC细胞为反筛选细胞,以H22肿瘤细胞为靶细胞,从体外合成的80bp随机单链DNA文库中筛选出能与H 22肿瘤细胞特异结合的aptamer。采用荧光标记引物法检测aptamer与H 22肿瘤细胞的亲和力。所获得的aptamer采用MACAWv2.05软件进行aptamer序列的一级结构同源序列比较,用DNASIS v2.5软件计算分析序列最低二级结构能量值,获得其二级结构模拟图。结果:本实验设计的文库序列:5′-CGTCGCTGCACATTCCG-N46-CGCACAGCTGGGA GTAC-3′具有较高的扩增效率,适合于aptamer与以细胞为靶物质的筛选。经过11轮循环筛选,随机单链DNA文库与靶细胞结合的荧光强度从1%上升到59%,结合曲线进入平台期,表明结合已基本处于稳定状态,因此可以判断aptamer与靶细胞的结合基本已经处于饱和状态。对所获得的32个aptam er进行测序,然后进行一级结构和二级结构分析。一级结构分析获得5个保守序列:AGGGA、AGAAGG、GTGAXAA、ATAGT、CAAGG,其余10个aptamer无同源序列。二级结构分析表明,aptamer形成的茎环、凸环结构可能是与H 22肿瘤细胞特异性结合的结构基础。亲和力检测结果表明第24号aptamer具有最强的亲和力。结论:利用随机单链寡核苷酸文库成功获得与H22肿瘤细胞特异结合的aptamer,其一级和二级结构与亲和力密切相关。

关键词： H22肿瘤细胞 SELEX Aptamer

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弓形虫GRA4基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究

弓形虫GRA4基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究

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全国人畜共患病学术研讨会

作者：林绮萍吴少庭翁亚彪高世同张仁利黄达娜袁仕善雷明军温见翔潘晖榕秦莉华南农业大学兽医学院深圳市疾病预防控制中心华中科技大学同济医学院广东医学院微生物学教研室

目的用pVAC2GRA4真核表达重组质粒免疫小鼠,观察诱导的免疫应答及对弓形虫感染的保护作用。方法大量制备pVAC2GRA4真核表达重组质粒,经基因枪腹部皮内注射免疫BALB/c小鼠3次,以pVAC空质粒及不经任何处理的空白组为对照。于末次免疫4周... 详细信息

目的用pVAC2GRA4真核表达重组质粒免疫小鼠,观察诱导的免疫应答及对弓形虫感染的保护作用。方法大量制备pVAC2GRA4真核表达重组质粒,经基因枪腹部皮内注射免疫BALB/c小鼠3次,以pVAC空质粒及不经任何处理的空白组为对照。于末次免疫4周后作免疫指标测定(包括MTT法测定小鼠脾脏T淋巴细胞增殖活性、间接免疫荧光法测定T淋巴细胞亚群数目、双夹心EL ISA法测定细胞因子IFN2γ及IL24含量、间接ELISA法测定IgG抗体滴度),并观察攻毒试验后小鼠存活情况。结果脾淋巴细胞增殖各组间差异无显著性(P>0.05);pVAC2GRA4组CD4+T细胞百分率无明显变化(P>0.05),CD8+T细胞百分率明显增加(与pVAC对照组比较P<0.05,与空白对照组比较P<0.01),CD4+/CD8+比值也较空白对照组明显降低(P<0.01);pVAC2GRA4免疫组IFN2γA值比对照组略高,但差异无显著性(P>0.05),IL24 A值各组间无明显变化(P>0.05);pVAC2GRA4组可诱导产生特异性IgG抗体,但滴度不高;pVAC2GRA4免疫组小鼠存活率显著高于两对照组,死亡小鼠的平均存活时间延长(与空白对照组比较P<0.05)。结论用pVAC2GRA4重组质粒DNA免疫小鼠,可诱导产生以细胞免疫为主的免疫应答及对弓形虫攻击感染的部分保护作用。

关键词：弓形虫 GRA4 DNA免疫小鼠

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