检索结果-内蒙古大学图书馆

A549和MDCK细胞外源性表达人APOBEC-3F和APOBEC-3G对流感病毒复制和突变的影响

癌变．畸变．突变 2010年第5期22卷 346-351页

作者：王革非彭程曾祥兴张驰李康生汕头大学医学院微生物学与免疫学教研室广东高校免疫病理重点实验广东汕头515041 华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科湖北武汉430030

目的:研究人载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽-3F(human apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic-polypeptide 3F,hA3F)和hA3G对流感病毒的复制和突变的影响。方法:外源性hA3F和hA3G通过脂质体转染至A549和MDCK细胞中,经Western blotting和间接免疫荧光鉴定后,用流感病毒进行感染,通过检测半数组织培养感染剂量(50% tissue culture infective dose,TCID50)和空斑实验确定病毒滴度;使用不同初始感染剂量,绘制动态的病毒生长曲线,以确认hA3F和hA3G对流感病毒复制的影响。Western blotting检测流感病毒感染后转染细胞表达外源性hA3F和hA3G的情况。病毒在转染细胞和对照细胞中连续传代,RT-PCR和测序分析其血凝素HA基因的突变频率。结果:TCID50检测和空斑实验结果表明在hA3F和hA3G表达细胞中,流感病毒的滴度与对照细胞间差异无统计学意义(P>0.05);病毒生长曲线表明,不同初始感染剂量、不同感染时相,转染hA3F和hA3G的细胞对人流感病毒的抑制作用与对照细胞间的差异无统计学意义(P>0.05)。Western blotting结果表明感染后48h仍能够在MDCK细胞中检测到hA3F和hA3G的重组蛋白。病毒HA片段的测序分析表明,转染hA3F和hA3G的细胞对流感病毒基因组的致突变频率与对照细胞间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:本研究表明hA3F和hA3G这两个重要的APOBEC成员,对人流感病毒的复制效率及突变频率无明显作用。

关键词： APOBEC-3F APOBEC-3G 流感病毒复制突变 A549

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人免疫缺陷病毒TAT蛋白转导肽与人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白质3F/3G串联锌结合域的融合表达

引用

汕头大学医学院学报 2010年第2期23卷 84-88页

作者：王革非彭程张驰曾祥兴李康生汕头大学医学院微生物学与免疫学教研室广东省高校免疫病理学重点实验室广东汕头515041 华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科湖北武汉430030

目的:分析载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白质3F和3G(APOBEC3F/3G)的蛋白基序,获得具有细胞转导潜力的抗病毒基序融合蛋白。方法:用MotifScan软件对APOBEC3F/3G进行生物信息学分析,找出APOBEC3F/3G中的锌结合域(ZBRs)。通过PCR及多... 详细信息

目的:分析载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白质3F和3G(APOBEC3F/3G)的蛋白基序,获得具有细胞转导潜力的抗病毒基序融合蛋白。方法:用MotifScan软件对APOBEC3F/3G进行生物信息学分析,找出APOBEC3F/3G中的锌结合域(ZBRs)。通过PCR及多步酶切克隆得到APOBEC3F/3G的3个串联ZBRs基因片段,并将其与人免疫缺陷病毒(HIV)的TAT蛋白转导域基因克隆至原核表达载体(pET32a),转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达。结果:酶切和测序鉴定,得到含有HIV-TAT和3个ZBRs基因的重组质粒;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测分析,融合蛋白在BL21(DE3)中获得表达,占菌体总蛋白的20%。结论:获得含HIV-TAT和3个ZBRs的融合表达重组蛋白,为进一步研究APOBEC3F/3G抗病毒机制,也为其在抗病毒治疗中的应用打下基础。

关键词：载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白质3F/3G 锌结合域蛋白转导

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

抗人ASGPR大亚基异构体蛋白H1b多克隆抗体的制备和鉴定

引用

细胞与分子免疫学杂志 2009年第10期25卷 917-919页

作者：刘嘉丁红晖杨燕胡斌余源黄红平陆蒙吉杨东亮华中科技大学同济医学院附属同济医院临床免疫研究室华中科技大学同济医学院附属同济医院实验医学研究中心华中科技大学同济医学院微生物教研室湖北武汉430030

目的:制备小鼠抗人ASGPR大亚基异构体蛋白H1b的多克隆抗体,并鉴定其特异性。方法:合成H1b特异性多肽,以匙孔血蓝蛋白(KLH)作为载体构建多肽免疫原,通过致敏小鼠,制备小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体;ELISA法检测抗体效价,通过Western blot... 详细信息

目的:制备小鼠抗人ASGPR大亚基异构体蛋白H1b的多克隆抗体,并鉴定其特异性。方法:合成H1b特异性多肽,以匙孔血蓝蛋白(KLH)作为载体构建多肽免疫原,通过致敏小鼠,制备小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体;ELISA法检测抗体效价,通过Western blot和免疫组织化学检测,鉴定抗体的特异性与适用范围。结果:得到小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体,效价达1∶105。纯化后的抗体用于Western blot可高特异性识别真核表达的H1b蛋白,并可用于免疫组织化学实验。结论:成功制备小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体,该抗体具有较高的效价以及特异性,能区分ASG-PR大亚基的两种剪接异构体,从而为进一步研究H1b蛋白的生理功能及其在人类疾病中的意义提供了有利工具。

关键词：去唾液酸糖蛋白受体多克隆抗体剪接异构体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

食管癌与螺杆菌感染及炎性信号通路关系

引用

中国公共卫生 2009年第1期25卷 90-92页

作者：顾文珍叶嗣颖张正茂田拥军张丽周密李春艳华中科技大学同济医学院基础医学院病原生物系微生物教研室武汉430030

目的研究食管癌中是否存在螺杆菌感染及其与炎性信号通路的关系，探讨螺杆菌感染以及所产生的慢性炎症在人食管癌发生发展中的作用。方法随机收集食管癌标本37例和正常食管标本10例，采用聚合酶链反应（PCR）扩增螺杆菌16S rDNA，并进... 详细信息

目的研究食管癌中是否存在螺杆菌感染及其与炎性信号通路的关系，探讨螺杆菌感染以及所产生的慢性炎症在人食管癌发生发展中的作用。方法随机收集食管癌标本37例和正常食管标本10例，采用聚合酶链反应（PCR）扩增螺杆菌16S rDNA，并进行基因测序及与幽门螺杆菌（Hp）同源性比较。阳性者再扩增Hp特异性毒力基因（cagA，babA2，vacA）。随后将Hp标准株NCTC11639和NCTC11637分别与食管鳞癌细胞株EC109共培养不同的时间，蛋白印迹（Westem blot）检测炎性信号通路中P—IκB—α蛋白表达的变化。结果食管癌组织中螺杆菌16S rRNA基因的检出率为31．6％（12／37），正常人食管组织均元阳性表达。对阳性标本16S rRNA基因测序及同源性比较，食管癌组织中螺杆菌序列与Hp的16S rDNA序列同源性达99％～100％。12例阳性标本中分别有cagA阳性4例，babA2阳性8例，vacA阳性3例，阳性率分别为33％，67％，25％。EC109与Hp标准株共培养不同时间后，P—IκB-α显著升高。结论食管癌组织中存在螺杆菌感染，该螺杆菌可能为Hp或者其他亚种。螺杆菌感染导致食管粘膜慢性炎症在食管癌的发生发展中可能发挥重要的作用，其中P—IκB-α炎性信号通路的持续作用可能为分子机制之一。

关键词：食管癌螺杆菌 16S rDNA 炎性信号通路P—iKb-α

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

Livin基因和Survivin基因联合靶向siRNA诱导结肠癌细胞凋亡的作用

引用

中华胃肠外科杂志 2009年第4期12卷 399-403页

作者：蔡明王国斌陶凯雄蔡昌学华中科技大学同济医学院附属协和医院普通外科武汉430022 华中科技大学同济医学院病原生物系微生物学教研室

目的探讨Livin基因和Survivin基因联合靶向小干扰（si）RNA对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响。方法构建Livin和Survivin联合靶向的siRNA重组表达载体并转染结肠癌细胞．通过RT—PCR和蛋白质印迹方法分别检测Livin和Survivin的表达．通过MT... 详细信息

目的探讨Livin基因和Survivin基因联合靶向小干扰（si）RNA对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响。方法构建Livin和Survivin联合靶向的siRNA重组表达载体并转染结肠癌细胞．通过RT—PCR和蛋白质印迹方法分别检测Livin和Survivin的表达．通过MTT法检测siRNA对细胞增殖的抑制作用．利用流式细胞仪检测处理后细胞的凋亡效应。结果经酶切鉴定和测序分析证实Livin和Survivin联合靶向的siRNA重组表达载体构建成功。这种联合靶向SiRNA对Livin mRNA及蛋白表达的抑制率分别为27．9％和22．3％．对Survivin mRNA及蛋白表达的抑制率分别为32．2％和40．9％。与对照组相比，联合靶向siRNA可降低肿瘤细胞增殖率．增加细胞凋亡率，但其细胞生长抑制作用和促细胞凋亡作用均弱于单独干扰Livin或Survivin基因．结论Livin和Survivin基因联合靶向siRNA能降低结肠癌细胞中Livin和survivin基因的表达．抑制结肠癌细胞的增殖．并诱导结肠癌细胞的凋亡．但此协同抑制作用较单独干扰Livin或survivin基因为弱。

关键词：结肠肿瘤基因,Livin 基因,Survivin RNA干扰细胞凋亡基因治疗

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

Livin靶向SiRNA协同5-氟尿嘧啶对大肠癌细胞的化疗增敏作用

引用

中华实验外科杂志 2009年第9期26卷 1159-1162页

作者：韩高雄蔡明王国斌陶凯雄蔡昌学华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科武汉430022 华中科技大学同济医学院病原生物系微生物学教研室

目的构建Livin靶向SiRNA重组表达载体，研究其对人大肠癌细胞生长的抑制作用和对5-氟尿嘧啶（5-Fu）的化疗增敏作用。方法构建Livin靶向siRNA重组表达载体并转染大肠癌细胞；通过逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blot方法检测... 详细信息

目的构建Livin靶向SiRNA重组表达载体，研究其对人大肠癌细胞生长的抑制作用和对5-氟尿嘧啶（5-Fu）的化疗增敏作用。方法构建Livin靶向siRNA重组表达载体并转染大肠癌细胞；通过逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blot方法检测Livinsi RNA对大肠癌细胞Livin mRNA和蛋白表达的抑制率；采用噻唑蓝（MTT）比色法分别于转染后24、48、72h用自动酶标读数仪（波长490nm）测定每孔A值来计算大肠癌细胞抑制率；采用流式细胞仪于转染后48h在488nm波长下检测细胞的凋亡率的变化。结果经酶切鉴定和测序结果证实Livin靶向SiRNA重组表达载体构建成功。RT—PCR检测和Western blot方法检测Livin siRNA对大肠癌细胞Livin mRNA和蛋白表达的抑制率为分别为30．18％和28．88％，可以协同5-Fu增强对大肠癌细胞生长的抑制。结论Livin靶向siRNA重组表达载体构建成功，它能有效抑制Livin基因表达并能协同5-Fu增强对大肠癌细胞的杀伤作用和诱导凋亡作用。

关键词： Livin RNA干扰基因治疗化疗

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人APOBEC-3F和-3G的克隆表达、亚细胞定位及其抑制HBV的研究

引用

生物化学与生物物理进展 2009年第3期36卷 331-338页

作者：王革非彭程李卫中辛岗苏芸陈幼莹林桂梅李康生汕头大学医学院微生物学与免疫学教研室汕头515041 汕头大学医学院广东省免疫病理重点实验室汕头515041 华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科武汉430030

载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽(apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic-polypeptide,APOBEC)家族成员,是近年来发现的具有抗病毒作用的天然免疫分子,对HIV和HBV等多种病毒具有抑制作用,为研究APOBEC的抗病毒作用,对APOBEC-3F和-3G进行克隆、表达及亚细胞定位分析.HBV主要的生物合成发生于细胞核中,利用核定位信号(NLS)及二联核定位信号(B-NLS)与APOBEC-3F和-3G融合表达,以进一步了解APOBEC-3F和-3G的亚细胞定位及功能.利用RT-PCR从植物凝集素(PHA)刺激的人外周血淋巴细胞RNA中,对APOBEC-3F和-3G进行克隆,利用HindⅢ和KpnⅠ双酶切插入到pcFlag载体中,脂质体转染MDCK细胞后利用免疫荧光检测APOBEC重组蛋白的亚细胞定位.电泳结果表明,RT-PCR扩增得到APOBEC-3F和-3G基因,双酶切鉴定结果表明,APOBEC真核表达载体构建成功,基因序列经DNA测序证实.免疫荧光结果表明,转染表达后的APOBEC-3F和-3G均定位于细胞胞浆中.APOBEC-3F和-3G可以在HepG2.2.15细胞中显著抑制HBV的复制.可以有效转运绿色荧光蛋白(GFP)入核的NLS及B-NLS,不能将APOBEC-3F和-3G有效地转运至核中.成功地对APOBEC家族中的两个重要成员APOBEC-3F和-3G进行了克隆、表达及亚细胞定位研究,为进一步利用APOBEC家族蛋白开发抗HIV及HBV药物提供基础.

关键词：载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽表达亚细胞定位 HBV 核定位信号

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

大鼠肠道内ACh能、SP、VIP-肽能和NO能神经的分布模式及相互关系

引用

华中科技大学学报（医学版） 2009年第5期38卷 575-580页

作者：李林茹立强江汉大学医学院组织胚胎学教研室武汉430056 华中科技大学同济医学院基础医学院神经生物学系武汉430030

目的比较观察大鼠肠道内乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)、P物质(substance P,SP)、血管活性肠肽(vasoactive intestinal polypeptide,VIP)和一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)4种阳性神经元的分布特征及其相互关系。方法应用酶组织化学和免疫组织化学技术,分别观察AChE、NOS、SP、VIP阳性神经元在大鼠十二指肠、空肠、回肠、结肠和直肠的分布。结果4种阳性神经元(胞体和纤维)遍布肠壁各层,其分布状态有相随性和相似性规律,即从十二指肠、空肠到回肠逐渐增多,从结肠到直肠逐渐减少;AChE阳性神经元在肠壁各层都十分丰富,NOS和SP阳性神经元以肠肌丛较为丰富,VIP阳性神经元以黏膜下神经丛和黏膜层较为丰富;分布密度依次为AChE>NOS>VIP>SP。4种神经元彼此有共染(递质共存)现象,肠肌丛内神经元互相有突触样联系。结论AChE、SP、VIP和NOS阳性神经元胞体及神经纤维在不同肠段的分布密度有明显差异,而肠肌丛内各种神经元在形态学上有密切联系,由此推论在肠动力功能调节上它们可能起协调作用。

关键词：乙酰胆碱酯酶 P物质血管活性肠肽一氧化氮合酶大鼠肠道

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

survivin靶向SiRNA协同5-FU对结直肠癌细胞的化疗增敏作用

引用

中国普通外科杂志 2009年第4期18卷 343-347页

作者：蔡明王国斌陶凯雄蔡昌学华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科湖北武汉430022 华中科技大学同济医学院病原生物系微生物学教研室湖北武汉430030

目的探讨survivin靶向SiRNA重组表达载体对人结直肠癌细胞生长的抑制作用和对5-氟尿嘧啶(5-FU)的化疗增敏作用。方法构建survivin靶向SiRNA重组表达载体并转染结肠癌细胞,通过RT-PCR和westernblot方法检测survivin的表达;采用MTT法和流... 详细信息

目的探讨survivin靶向SiRNA重组表达载体对人结直肠癌细胞生长的抑制作用和对5-氟尿嘧啶(5-FU)的化疗增敏作用。方法构建survivin靶向SiRNA重组表达载体并转染结肠癌细胞,通过RT-PCR和westernblot方法检测survivin的表达;采用MTT法和流式细胞仪检测SiRNA对不同浓度5-FU的化疗增敏作用。结果经酶切鉴定和测序结果证实survivin靶向SiRNA重组表达载体构建成功;其对结直肠癌细胞survivinmRNA和蛋白的表达抑制率分别为36.33%和44.65%,可以协同增强5-FU对结直肠癌细胞生长的抑制作用。结论survivin靶向SiRNA重组表达载体能有效抑制survivin基因表达,并能协同增强5-FU对结直肠癌细胞的杀伤作用和诱导凋亡作用。

关键词：结直肠肿瘤 survivin RNA干扰基因治疗化疗

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

小鼠sST2基因真核表达及其对LPS活化RAW264.7巨噬细胞的调节作用

引用

细胞与分子免疫学杂志 2009年第7期25卷 654-656页

作者：尹辉龚权杨衡熊平郑芳龚非力广东药学院微生物学与免疫学教研室广东广州510224 华中科技大学同济医学院免疫学系湖北武汉430030

目的:克隆并构建含小鼠sST2和人IgGFc融合基因的真核表达质粒,初步探讨其表达产物sST2-Fc融合蛋白对LPS刺激小鼠巨噬细胞生物学活性的影响。方法:借助RT-PCR技术,从小鼠脾脏总RNA中扩增全长sST2cDNA,构建sST2与hIgGFc段融合基因的真核... 详细信息

目的:克隆并构建含小鼠sST2和人IgGFc融合基因的真核表达质粒,初步探讨其表达产物sST2-Fc融合蛋白对LPS刺激小鼠巨噬细胞生物学活性的影响。方法:借助RT-PCR技术,从小鼠脾脏总RNA中扩增全长sST2cDNA,构建sST2与hIgGFc段融合基因的真核表达载体(psST2-Fc)。应用脂质体将重组质粒psST2-Fc转染CHO细胞,经G418筛选,获得稳定表达sST2-Fc融合蛋白的CHO细胞株。细胞培养上清经蛋白A亲和层析纯化后,采用Western blot进行鉴定,应用FACS检测sST2-Fc与RAW264.7巨噬细胞表面相应受体结合情况;ELISA法检测sST2-Fc对LPS刺激RAW264.7巨噬细胞分泌TNF-α和IL-6的影响。结果:测序证实克隆和构建的小鼠sST2-FccDNA阅读框序列正确,Western blot证实sST2-Fc融合蛋白的表达,sST2-Fc抑制LPS诱导巨噬细胞分泌的炎性细胞因子TNF-α和IL-6。结论:成功构建sST2-Fc融合基因并获得稳定表达,sST2-Fc通过与其特异性受体结合可抑制巨噬细胞介导的炎性反应。

关键词：小鼠sST2-Fc 真核表达 RAW264.7 TNF-α IL-6

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：