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医药导报 2006年第7期25卷 604-606页

作者：陈兆聪梁勋厂华中科技大学同济医学院生化及分子生物学教研室武汉430030 华中科技大学同济医学院神经生物学教研室武汉430030

理想的癌症治疗应该是选择性地杀伤或抑制癌细胞而不伤害正常的组织,即癌症的靶向治疗。基因组学和蛋白质组学研究的巨大成就正在使这个理想逐步走向现实。目前在小分子化合物及单克隆抗体的研究上已经取得某些突破性的成果。基因治疗... 详细信息

理想的癌症治疗应该是选择性地杀伤或抑制癌细胞而不伤害正常的组织,即癌症的靶向治疗。基因组学和蛋白质组学研究的巨大成就正在使这个理想逐步走向现实。目前在小分子化合物及单克隆抗体的研究上已经取得某些突破性的成果。基因治疗及免疫治疗也正在全力开展之中。癌症干细胞的观点是癌症生物学及治疗学研究的新动向。

关键词：靶向治疗小分子化合物单克隆抗体肿瘤干细胞

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先天性巨结肠症及其同源病手术中组织化学快速诊断方法

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中华胃肠外科杂志 2006年第5期9卷 456-457页

作者：周峻魏明发冯杰雄王果茹立强张艳史慧芬华中科技大学同济医学院附属同济医院小儿外科华中科技大学同济医学院附属同济医院神经生物学教研室 361003 华中科技大学同济医学院附属同济医院解剖学教研室 361003

目的探讨术中诊断先天性巨结肠症(HD)及其同源病的最佳方案。方法联合应用改进的乙酰胆碱酯酶(AChE)和乳酸脱氢酶(LDH)染色等组织化学方法对HD及其同源病手术中取得的新鲜组织进行快速诊断。结果58例患儿中共诊断HD 34例、肠神经发育不... 详细信息

目的探讨术中诊断先天性巨结肠症(HD)及其同源病的最佳方案。方法联合应用改进的乙酰胆碱酯酶(AChE)和乳酸脱氢酶(LDH)染色等组织化学方法对HD及其同源病手术中取得的新鲜组织进行快速诊断。结果58例患儿中共诊断HD 34例、肠神经发育不良症(IND)10例、HD合并IND 4例、神经节细胞减少症4例和神经节细胞未成熟症3例。每例经过几种方法检查的结果均与术后病理检查一致,而快速诊断总共所需时间不超过30 min。结论改进的AChE和LDH染色联合应用在HD的根治手术中,能快速地作出诊断并准确判断病变肠段的范围。

关键词：先天性巨结肠症诊断组织化学

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大鼠背根切断后脊髓后角Ⅰ～Ⅲ层和外侧脊核区内鸟核苷酸调节蛋白的改变(英文)

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中国临床康复 2006年第12期10卷 177-179页

作者：邓兆宏曹福元邓云平茹立强李玉莲郧阳医学院解剖学教研室湖北省十堰市442000 华中科技大学同济医学院神经生物学教研室湖北省武汉市430030 西南师范大学外国语学院重庆市400715

背景:在国内本实验室曾首次报道脊髓胶状质及外侧脊核核区出现强的αo免疫反应性,与一些参与感觉调控的神经肽在该区的分布类似,提示鸟核苷酸调节蛋白可能与一级传入信息的传递有关。目的:采用切断大鼠单侧背根后观察胶状质内αo免疫反... 详细信息

背景:在国内本实验室曾首次报道脊髓胶状质及外侧脊核核区出现强的αo免疫反应性,与一些参与感觉调控的神经肽在该区的分布类似,提示鸟核苷酸调节蛋白可能与一级传入信息的传递有关。目的:采用切断大鼠单侧背根后观察胶状质内αo免疫反应性的改变。设计:随机对照动物实验。单位:华中科技大学同济医学院神经生物学教研室。材料:实验于1995-12/1996-12在华中科技大学同济医学院神经生物学教研室完成。选择SD健康成年大鼠15只,随机分为3组:①正常组5只(未经任何处理)。②切断背根组10只(右侧)。③对照组(未切断背根的左侧作为对照)。方法:大鼠在100g/L水合氯醛(300mg/kg)腹腔注射麻醉下,切断右侧腰1～3脊神经背根,术后存活48～60h。用兔抗鸟核苷酸调节蛋白αo亚单位多克隆抗血清,采用免疫组织化学方法来观察大鼠脊髓内αo免疫反应性,对鸟核苷酸调节蛋白进行定位,观察其在切断脊神经背根后的改变情况。主要观察指标:①正常鼠和对照组鼠脊髓后角Ⅰ～Ⅲ层及外侧脊核区的αo免疫反应性。②切断背根组鼠脊髓后角Ⅰ～Ⅲ层及外侧脊核区的αo免疫反应性。结果:15只大鼠均进入结果分析。①正常鼠和对照组鼠脊髓后角浅层(Ⅰ～Ⅲ)均出现强的αo免疫反应性,第二层(胶状质)最为密集,外侧脊核区也出现αo免疫反应性纤维网。切断背根后胶状质内αo免疫反应性明显降低。②αo免疫反应性吸光度定量分析,对照组内侧区0.847±0.081,切断背根组内侧区0.633±0.073(t=5.71,P<0.001);对照组中间区0.823±0.089,切断背根组中间区0.6604±0.074(t=6.90,P<0.001);对照组外侧区0.915±0.090,切断背根组外侧区0.656±0.077(t=10.31,P<0.001);对照组平均值0.852±0.084,切断背根组平均值0.639±0.078(t=10.23,P<0.001)。结论:胶状质内与一级伤害性刺激传入有关的神经元末梢内鸟核苷酸调节蛋白部分来源于一级感觉神经元,提示鸟核苷酸调节蛋白可能参与调控一级感觉的传递。

关键词：脊髓脊神经神经元,传入

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大鼠脑挫伤后脑组织β-APP表达的研究

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法律与医学杂志 2006年第2期13卷 115-118页

作者：何光龙贾冬梅周亦武孙来晶邓伟年戴甲培刘良徐小虎华中科技大学同济医学院法医学系湖北武汉430030 华中科技大学同济医学院神经生物学教研室湖北武汉430030 汕头大学医学院法医学教研室广东汕头515031

目的观察大鼠实验性脑挫伤后CNS内β-APP蛋白表达时空性规律。方法采用自由落体撞击法致大鼠脑挫伤模型,用免疫组化技术观察伤后β-APP蛋白在不同时间(0.5h、2h、6h、12h、24h、3d、7d、14d)的表达情况,并用计算机图像分析技术作定量统... 详细信息

目的观察大鼠实验性脑挫伤后CNS内β-APP蛋白表达时空性规律。方法采用自由落体撞击法致大鼠脑挫伤模型,用免疫组化技术观察伤后β-APP蛋白在不同时间(0.5h、2h、6h、12h、24h、3d、7d、14d)的表达情况,并用计算机图像分析技术作定量统计分析。结果(1)皮质内β-APP蛋白在伤后表达呈一定波动性,0.5h表达明显增加后,逐渐下降,12h降至最低,低于对照组,随后再次表达增加,3d达高峰;(2)伤后24h海马区β-APP表达开始逐渐下降,3d降至最低,14d回到对照组水平;(3)齿状回(DG)内β-APP蛋白在伤后12h低于对照组。结论实验性脑挫伤后皮质β-APP表达时序性规律可为脑损伤时间推断提供一个新的参考指标,但海马区及DGβ-APP变化规律在脑损伤时间推断方面价值不大。

关键词：脑挫伤 β淀粉样前体蛋白损伤时间免疫组织化学法医病理学

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H22肿瘤细胞aptamer的筛选与结构分析

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重庆医科大学学报 2006年第6期31卷 841-844,909页

作者：周宇凡张桂梅冯作化袁野张志仁重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016 华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学教研室武汉430030

目的:获得与H22肿瘤细胞特异性结合的aptamer。方法:利用SELEX技术,以小鼠DC细胞为反筛选细胞,以H22肿瘤细胞为靶细胞,从体外合成的80bp随机单链DNA文库中筛选出能与H 22肿瘤细胞特异结合的aptamer。采用荧光标记引物法检测aptamer与H 2... 详细信息

目的:获得与H22肿瘤细胞特异性结合的aptamer。方法:利用SELEX技术,以小鼠DC细胞为反筛选细胞,以H22肿瘤细胞为靶细胞,从体外合成的80bp随机单链DNA文库中筛选出能与H 22肿瘤细胞特异结合的aptamer。采用荧光标记引物法检测aptamer与H 22肿瘤细胞的亲和力。所获得的aptamer采用MACAWv2.05软件进行aptamer序列的一级结构同源序列比较,用DNASIS v2.5软件计算分析序列最低二级结构能量值,获得其二级结构模拟图。结果:本实验设计的文库序列:5′-CGTCGCTGCACATTCCG-N46-CGCACAGCTGGGA GTAC-3′具有较高的扩增效率,适合于aptamer与以细胞为靶物质的筛选。经过11轮循环筛选,随机单链DNA文库与靶细胞结合的荧光强度从1%上升到59%,结合曲线进入平台期,表明结合已基本处于稳定状态,因此可以判断aptamer与靶细胞的结合基本已经处于饱和状态。对所获得的32个aptam er进行测序,然后进行一级结构和二级结构分析。一级结构分析获得5个保守序列:AGGGA、AGAAGG、GTGAXAA、ATAGT、CAAGG,其余10个aptamer无同源序列。二级结构分析表明,aptamer形成的茎环、凸环结构可能是与H 22肿瘤细胞特异性结合的结构基础。亲和力检测结果表明第24号aptamer具有最强的亲和力。结论:利用随机单链寡核苷酸文库成功获得与H22肿瘤细胞特异结合的aptamer,其一级和二级结构与亲和力密切相关。

关键词： H22肿瘤细胞 SELEX Aptamer

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芽孢杆菌外毒素保护性抗原与上游强启动子穿梭载体的构建

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中国热带医学 2006年第9期6卷 1546-1548页

作者：刘蓉娜黄汉菊徐静华华中科技大学同济医学院基础医学院病原生物学系微生物学教研室湖北武汉430030 中国药品生物制品检定所北京100050

目的构建携带炭疽芽孢杆菌保护性抗原(PA)的两种穿梭载体与上游强启动子。方法将解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶启动子克隆到载体pbluescript-sk(+)上,构建载体pBLKSP;以A16R疫苗株(Tox+,Cap-,弱毒株)DNA为模板,设计合成内外侧引物巢式PCR... 详细信息

目的构建携带炭疽芽孢杆菌保护性抗原(PA)的两种穿梭载体与上游强启动子。方法将解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶启动子克隆到载体pbluescript-sk(+)上,构建载体pBLKSP;以A16R疫苗株(Tox+,Cap-,弱毒株)DNA为模板,设计合成内外侧引物巢式PCR扩增获得保护性抗原(PA)的全基因,先克隆到载体pBLKSP,再将其和质粒PUB110重组构建成两种穿梭载体。结果酶切鉴定显示所切下的片段大小均与预计相符。测序结果与文献报道序列及预计结果一致。结论成功构建了带有强启动子的两种穿梭载体。为在无毒炭疽疫苗株中的高效表达和炭疽芽孢杆菌的分子疫苗研究奠定了基础。

关键词：炭疽芽孢杆菌穿梭载体重组基因

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IFN-γ鼻黏膜免疫耐受治疗EAMG的实验研究

IFN-γ鼻黏膜免疫耐受治疗EAMG的实验研究

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第五届全国感染与免疫及生物制品学术研讨会

作者：孙博李呼伦徐欣吕桂香彭海生金连弘哈尔滨医科大学神经生物学教研室哈尔滨医科大学神经生物省高校重点实验室黑龙江哈尔滨150086 哈尔滨医科大学神经生物学教研室哈尔滨医科大学神经生物省高校重点实验室黑龙江哈尔滨150086 华中科技大学同济医学院附属医院神经内科湖北武汉430000

探讨鼻黏膜给予少量IFN-γ对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)鼻黏膜免疫耐受的逆转作用.在用自身抗原乙酰胆碱受体(AChR)和完全弗氏佐剂(CFA)免疫Lewis大鼠之前,通过鼻黏膜分别给予重组大鼠IFN-γ(5 000 U/只);AChR+IFN-γ或单独给予A... 详细信息

探讨鼻黏膜给予少量IFN-γ对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)鼻黏膜免疫耐受的逆转作用.在用自身抗原乙酰胆碱受体(AChR)和完全弗氏佐剂(CFA)免疫Lewis大鼠之前,通过鼻黏膜分别给予重组大鼠IFN-γ(5 000 U/只);AChR+IFN-γ或单独给予AChR,另外给予等量AChR的同时,腹膜注射IFN-γ(5 000 U/只).评估不同组对EAMG发病的影响.可见,鼻黏膜单独给予AChR有效诱导EAMG免疫耐受,而同时给予AChR和IFN-γ与对照组(只给予PBS)相比扩大了T、B细胞对AChR的免疫应答,出现了与对照组相似的临床症状.相反,AChR+IFN-γ i.p.不影响对EAMG的耐受,鼻黏膜单独给予IFN-γ对EAMG的临床症状没有影响.经不同途径给予IFN-γ对免疫耐受有不同的影响:鼻黏膜给予少量IFN-γ可以打破免疫耐受;而经腹腔给予IFN-γ不会影响免疫耐受.

关键词：实验性自身免疫重症肌无力(EAMG) 鼻黏膜耐受 IFN-γ 自身免疫

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阿司匹林保护大鼠脑缺血再灌注后神经元损伤的作用途径

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中国临床康复 2005年第45期9卷 42-44页

作者：孟宪芳施静刘晓春李玲俐张静华中科技大学同济医学院神经生物学教研室湖北省武汉市430030

目的:观察阿司匹林对缺血再灌注损伤时脑水肿以及p53表达的影响,以探讨阿司匹林的神经保护作用。方法:实验于2004-04/07在同济医学院神经生物学教研室完成。①分组:将健康SD大鼠72只随机分成假手术组12只、缺血再灌注组20只、阿司匹林20... 详细信息

目的:观察阿司匹林对缺血再灌注损伤时脑水肿以及p53表达的影响,以探讨阿司匹林的神经保护作用。方法:实验于2004-04/07在同济医学院神经生物学教研室完成。①分组:将健康SD大鼠72只随机分成假手术组12只、缺血再灌注组20只、阿司匹林20mg/kg组20只和40mg/kg组20只。缺血再灌注各组分别在缺血再灌注24h和48h处死动物,每个时间点10只,5只用于脑水含量测定,5只用于p53表达的测定。假手术组12只于对应时间段分别处死,每个时间点6只,3只用于脑水含量测定,3只用于p53表达的测定。②模型制备:应用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型,假手术组:结扎各血管,不阻塞大脑中动脉。③给药:阿司匹林20mg/kg组和40mg/kg组分别于缺血30min、24h和48h腹腔注射20mg/kg,40mg/kg阿司匹林。缺血再灌注组在相应时间点腹腔注射生理盐水。采用干、湿重法测定脑组织水含量的变化。应用免疫组织化学方法检测大脑皮质p53表达的变化。结果:72只大鼠均进入结果分析。①缺血30min再灌注24h后,全部大鼠均行神经功能缺损评分,缺血再灌注组、阿司匹林20mg/kg组和40mg/kg组的神经功能重度缺损率分别为85%,60%和30%。②缺血再灌注时,大脑中动脉闭塞大鼠脑水含量逐渐增加,到48h达到高峰,与假手术组相比,差异有显著性意义[(86.32±0.61)%,(77.65±0.30)%,P<0.05]。而阿司匹林20mg/kg组与阿司匹林40mg/kg组与缺血再灌注组相比,脑水含量逐渐降低,差异有显著性意义[(83.27±0.35)%,(78.57±0.13)%,(86.32±0.61)%,P<0.05]。③免疫组织化学结果表明:缺血再灌注48h时,阿司匹林可明显降低大脑皮质p53阳性细胞数,与假手术组相比差异有显著性(P<0.05)。结论:阿司匹林可能通过降低缺血再灌注时脑水肿程度和p53的表达而实现其神经元的保护作用。

关键词：脑缺血再灌注阿司匹林神经元细胞保护

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钩藤碱对human ether-a-go-go相关基因通道的抑制作用(英文)

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生理学报 2005年第5期57卷 648-652页

作者：桂乐李之望杜戎袁国会李伟任法鑫李婧杨钧国南通大学附属医院心内科华中科技大学同济医学院神经生物学教研室华中科技大学同济医学院协和医院心血管病研究所

将human ether-a-go-go相关基因(HERG)cRNA注射到非洲爪蟾卵母细胞,采用双电极电压钳技术,观察钩藤碱对表达电流的影响。结果显示:(1)钩藤碱抑制HERG通道的表达是浓度依赖性的,IC50为(773．4±42．5)μmol／L。(2)钩藤碱抑制HERG... 详细信息

将human ether-a-go-go相关基因(HERG)cRNA注射到非洲爪蟾卵母细胞,采用双电极电压钳技术,观察钩藤碱对表达电流的影响。结果显示:(1)钩藤碱抑制HERG通道的表达是浓度依赖性的,IC50为(773．4±42．5)μmol／L。(2)钩藤碱抑制HERG通道的表达是电压依赖性的,最大抑制率在-20 mV,为15％。上述结果提示,钩藤碱抑制HERG编码的钾通道, 导致心室复极时间延长,揭示了与钩藤碱相关的心肌钾通道的分子生物学基础。

关键词： human ether-a-go-go相关基因钩藤碱卵母细胞双电极电压钳

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重组核酸疫苗诱导小鼠抗血吸虫感染的免疫学研究

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中华医学杂志 2005年第3期85卷 193-197页

作者：甘燕石佑恩卜玲毅宁长修朱红刚华中科技大学同济医学院寄生虫学教研室武汉430030 中国协和医科大学基础医学院病原生物学系

目的为日本血吸虫病的防治寻求新的高效联合基因免疫策略。方法构建共表达日本血吸虫相对分子质量23000表膜蛋白(Sj23)基因与鼠IL12基因的核酸疫苗质粒pVIVO2IL12Sj23,转染HEK293细胞,通过RTPCR,Westernblot及ELISA法检测Sj23和IL12蛋... 详细信息

目的为日本血吸虫病的防治寻求新的高效联合基因免疫策略。方法构建共表达日本血吸虫相对分子质量23000表膜蛋白(Sj23)基因与鼠IL12基因的核酸疫苗质粒pVIVO2IL12Sj23,转染HEK293细胞,通过RTPCR,Westernblot及ELISA法检测Sj23和IL12蛋白的表达。接种并攻击感染BALB/c小鼠,以减虫率和减卵率评价其免疫保护力,同时设攻击感染对照组、空白质粒pVIVO2组、pVIVO2IL12组和pVIVO2Sj23组。用ELISA法和WesternBlot分析免疫小鼠血清中抗体。以脾细胞培养法检测经SEA刺激后,小鼠脾细胞分泌IFNγ和IL4的水平。并以FCM分析脾细胞亚群。结果经瞬时转染HEK293细胞证明质粒pVIVO2IL12Sj23能在体外进行表达。免疫小鼠后获得了4553%的减虫率和5835%的减卵率,较单价DNA疫苗pVIVO2Sj23免疫效果好(P<005)。ELISA法和WesternBlot检测抗体结果表明免疫小鼠产生了抗Sj23特异性IgG抗体。pVIVO2IL12Sj23免疫组IFNγ的水平较对照组显著升高而IL4水平较对照组低。攻击感染后各实验组小鼠脾细胞的CD4+,CD8+亚群比率无显著差别(P>005)。结论pVIVO2IL12Sj23DNA疫苗具有诱导BALB/c小鼠产生较好的抗血吸虫感染免疫保护效果。细胞因子IL12作为基因佐剂,具有诱导Th1型免疫反应从而增强DNA疫苗免疫保护性的作用。

关键词：感染脾细胞抗血吸虫免疫小鼠 ELISA法诱导 DNA疫苗免疫保护力核酸疫苗免疫保护效果

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