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武汉大学学报（医学版） 2009年第3期30卷 290-293,F0002页

作者：何凡陈知水徐胜元蔡明吴敏李红洲华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部/教育部重点实验室湖北武汉430030

目的:探讨不同T细胞在门静脉输注诱导耐受中的作用。方法:门静脉输注经丝裂霉素处理过的C57小鼠脾细胞给BALB/c,7 d后分离受鼠脾细胞,流式分选其中CD3+、CD4+、CD8+T细胞,过继输注给另一BALB/c,并同时行C57或C3H来源的心脏移植,观察并... 详细信息

目的:探讨不同T细胞在门静脉输注诱导耐受中的作用。方法:门静脉输注经丝裂霉素处理过的C57小鼠脾细胞给BALB/c,7 d后分离受鼠脾细胞,流式分选其中CD3+、CD4+、CD8+T细胞,过继输注给另一BALB/c,并同时行C57或C3H来源的心脏移植,观察并比较心脏移植物存活时间。结果:过继输注PVI鼠T细胞后,可以转移耐受;过继输注PVI鼠CD4+T细胞,可使供体来源的C57供心存活时间延长,而对第三系C3H供心存活时间无明显延长。过继输注PVI鼠CD8+T细胞无此效应。结论:在门静脉输注诱导耐受的模型中,CD4+T细胞可以转移耐受,且此耐受为抗原特异性,CD8+T细胞无此效应。

关键词： T细胞门静脉输注免疫耐受

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CD3/CD46共刺激通路调控同种移植免疫反应的实验研究

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中国免疫学杂志 2009年第1期25卷 68-71页

作者：陈栋张驰张艳黄亚冰朱珉刘斌陈刚张伟杰陈知水陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院综合医疗科武汉430030

目的:探讨CD3/CD46共刺激通路对同种移植免疫反应的调控作用及其机制。方法:分离转人CD46的C57BL/6小鼠的脾脏淋巴细胞,采用MACS免疫磁珠分选CD4+T细胞,以阴性对照组作为对照,体外检测CD3、ConA、CD3/CD28、CD3/CD46、CD3/CD28/CD46共... 详细信息

目的:探讨CD3/CD46共刺激通路对同种移植免疫反应的调控作用及其机制。方法:分离转人CD46的C57BL/6小鼠的脾脏淋巴细胞,采用MACS免疫磁珠分选CD4+T细胞,以阴性对照组作为对照,体外检测CD3、ConA、CD3/CD28、CD3/CD46、CD3/CD28/CD46共刺激对CD4+T细胞增殖的作用效果,并检测其细胞上清液中白细胞介素2(IL-2),γ-干扰素(γ-IFN),白细胞介素10(IL-10)和转化生长因子β(TGFβ-)的水平,并以BALB/c小鼠的脾细胞作为刺激细胞,以转人CD46的C57BL/6小鼠的淋巴细胞作为反应细胞进行同种混合淋巴细胞培养,MMT法检测淋巴细胞增殖活性。结果:与CD3组或阴性对照组相比,ConA、CD3/CD28、CD3/CD46和CD3/CD28/CD46共刺激后,CD4+T细胞均出现显著增殖反应(P<0.05),而且CD3/CD28/CD46共刺激组的增殖活性较CD3/CD28或CD3/CD46共刺激组显著增高(P<0.05)。CD3/CD28共刺激后,IL-2和γ-IFN水平较阴性对照组和CD3组显著升高(P<0.05),CD3/CD46共刺激后,IL-10和TGFβ-水平较阴性对照组、ConA组、CD3组和CD3/CD28共刺激组显著升高(P<0.05)。CD3/CD46共刺激后可以显著地抑制同种混合淋巴细胞的增殖反应(P<0.05)。结论:CD3/CD46共刺激通路可以诱导CD4+T细胞产生IL-10和TGFβ-,抑制同种移植免疫反应的发生。

关键词： CD46 共刺激分子同种移植

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反义ERK2基因对结缔组织生长因子诱导肾小管上皮细胞向间充质转化的调控效应

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华中科技大学学报（医学版） 2009年第2期38卷 153-157页

作者：丁召陈知水宫念樵陈曦林蔡明郭晖华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部重点实验室武汉430030

目的研究细胞外信号调节激酶2(ERK2)信号转导通路对结缔组织生长因子(CTGF)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)向间充质细胞转化的调控效应。方法腺病毒介导的反义ERK2基因(Adanti-ERK2)按感染强度50、100、200转染HK-2细胞,确定最适感染强度... 详细信息

目的研究细胞外信号调节激酶2(ERK2)信号转导通路对结缔组织生长因子(CTGF)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)向间充质细胞转化的调控效应。方法腺病毒介导的反义ERK2基因(Adanti-ERK2)按感染强度50、100、200转染HK-2细胞,确定最适感染强度。按作用因素的不同将HK-2细胞分为对照组、Ad-LacZ组、CTGF组和Adanti-ERK2组。免疫组织化学检测E-Cadherin和Vi mentin的表达,Western blot法检测E-Cadherin、Vi mentin及ERK2的表达变化;细胞接种Boyden小室1、3、5 d时检测各组HK-2细胞迁移数目的变化。结果①Adanti-ERK2转染HK-2细胞最适感染强度为100。②HK-2细胞在CTGF刺激下E-Cadherin蛋白表达明显减少,Vi mentin表达增加,同时细胞内的ERK2蛋白表达显著增加;而Adanti-ERK2组E-Cadherin和Vi mentin表达变化不明显,ERK2蛋白表达较对照组明显减少。③接种5 d,HK-2细胞在CTGF刺激下细胞运动能力显著高于其他各组,而Adanti-ERK2组与对照组和Ad-LacZ组相比差异无显著性意义。结论以反义ERK2基因治疗可以有效阻断CTGF诱导的肾小管上皮细胞向间充质转化。提示ERK2信号转导通路在该转化中发挥重要作用。

关键词：反义ERK2基因结缔组织生长因子上皮细胞-间充质转化纤维化

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肥大细胞体外诱生CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞的作用

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现代免疫学 2009年第6期29卷 453-457页

作者：张维娜吴轲周鸿敏何文涛高英汪理林星光方泽民蔡兰军周巧丹雒真龙陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部重点实验室武汉430030

探索小鼠骨髓源性肥大细胞能否在体外诱生CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞。从小鼠股骨获取骨髓细胞,加入完全RPMI 1640培养基(含IL-3和SCF各10 ng/ml)诱导4周。用甲苯胺蓝染色法观察肥大细胞异染颗粒;流式检测CD117和FcεRIα双阳性细胞比... 详细信息

探索小鼠骨髓源性肥大细胞能否在体外诱生CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞。从小鼠股骨获取骨髓细胞,加入完全RPMI 1640培养基(含IL-3和SCF各10 ng/ml)诱导4周。用甲苯胺蓝染色法观察肥大细胞异染颗粒;流式检测CD117和FcεRIα双阳性细胞比例。将肥大细胞与同基因来源的T细胞按不同比例(1∶2、1∶1、2∶1)置于48孔培养板中培养,作为三个实验组;未加肥大细胞的单独T细胞组作对照组。四个组均加入CD3抗体和CD28抗体各2μg/ml,IL-2 1 000U/ml,5 d后流式检测Foxp3表达情况。RT-PCR,免疫组化法检测肥大细胞中TGF-β1的表达。与对照组相比,实验组Foxp3表达均升高(对照组:3.37%±0.40%;实验组为:8.23%±0.80%、10.87%±1.25%、13.63%±0.55%)。RT-PCR和免疫组化均检出TGF-β1表达。肥大细胞能在体外诱导T细胞转化为CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞,可能与肥大细胞表达TGF-β1有关。

关键词：小鼠肥大细胞 CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞 TGF-β1

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大鼠胰岛的分离和纯化

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华中科技大学学报（医学版） 2009年第3期38卷 413-416页

作者：侯凌尹注增向莹李俊华陈实陈刚罗小平华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部重点实验室武汉430030

目的探讨获得足够数量和较高纯度大鼠胰岛的分离和纯化方法。方法采用Ⅴ型胶原酶灌注消化法分离成年大鼠胰岛,Ficoll400非连续密度梯度法纯化胰岛。双硫腙(DTZ)染色鉴定培养的胰岛细胞,锥虫蓝染色检测细胞活性。葡萄糖刺激胰岛素释放试... 详细信息

目的探讨获得足够数量和较高纯度大鼠胰岛的分离和纯化方法。方法采用Ⅴ型胶原酶灌注消化法分离成年大鼠胰岛,Ficoll400非连续密度梯度法纯化胰岛。双硫腙(DTZ)染色鉴定培养的胰岛细胞,锥虫蓝染色检测细胞活性。葡萄糖刺激胰岛素释放试验评价胰岛细胞的功能。结果分离纯化后大鼠胰岛平均收获量为(480±30)IEQ,纯度大于90%,活性大于90%。在低糖和高糖刺激下,胰岛素分泌量分别为(12.28±0.89)mIU/L、(19.01±1.49)mIU/L,二者相比较,差异有统计学意义(P<0.05),刺激指数为(1.55±0.01)。结论胶原酶Ⅴ逆行灌注消化胰腺和Ficoll400非连续密度梯度纯化法,可获得高纯度高活率的大鼠胰岛。

关键词：大鼠胰岛分离纯化

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Nrp1^＋T细胞对淋巴细胞增殖的调节作用以及对同种异体移植物的影响

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解放军医学杂志 2009年第11期34卷 1276-1280页

作者：蔡明刘畅周鸿敏裴向克石炳毅陈忠华解放军第309医院全军器官移植中心泌尿外科北京100091 华中科技大学同济医学院附属同济医院心胸外科华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部、卫生部重点实验室

目的探讨表达神经纤毛蛋白质1(Nrp1)的T细胞(Nrp+T细胞)对体内外反应性淋巴细胞增殖的调节作用以及对同种异体移植物的影响。方法采用流式细胞术分选近交系C57BL/6j小鼠脾脏中的Nrp1+T细胞作为调节细胞,在刀豆蛋白A(Co-nA)的刺激下与标... 详细信息

目的探讨表达神经纤毛蛋白质1(Nrp1)的T细胞(Nrp+T细胞)对体内外反应性淋巴细胞增殖的调节作用以及对同种异体移植物的影响。方法采用流式细胞术分选近交系C57BL/6j小鼠脾脏中的Nrp1+T细胞作为调节细胞,在刀豆蛋白A(Co-nA)的刺激下与标记了羧基荧光素乙酰乙酸(CFSE)的C57BL/6j小鼠脾脏单个核细胞等比例共培养5d,对比观察反应细胞的增殖情况。采用流式细胞术分选C57BL/6j小鼠脾脏的Nrp1+T细胞、CD4+CD25+Treg细胞和CD4+CD25-T细胞各1×106个,分别经尾静脉注入到以Balb/C小鼠作为供者,以C57BL/6j小鼠作为受者行皮肤移植的小鼠体内,另外建立供、受体均为C57BL/6j小鼠的同品系对照组(注入等体积的RPMI1640培养基)。对比观察各组移植皮肤的存活情况。结果加入Nrp1+T细胞的实验组增殖指数为50.92%±2.30%,明显低于未加入调节性T细胞的对照组(90.31%±1.83%,P=0.0169)。实验组移植皮肤存活时间注入Nrp1+T细胞者为20.66±1.11d,注入Nrp1-T细胞者为13.20±0.76d,注入CD4+CD25+Treg者为17.67±1.0d,均明显高于对照组(9.70±1.23d,P<0.01)。结论Nrp1作为一种新型的T细胞表面分子,在淋巴细胞增殖体系中起着重要作用;与注入CD4+CD25+Treg相比,注入Nrp1+T细胞可明显延长小鼠移植皮肤的存活时间。

关键词： T淋巴细胞,调节性皮肤移植细胞增殖神经纤毛蛋白质1

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补体调节蛋白CD46对CD4^＋T细胞的免疫调控

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实用医学杂志 2009年第15期25卷 2413-2415页

作者：陈栋张艳李明张弛黄亚冰刘斌陈刚张伟杰陈知水陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部／教育部器官移植重点实验室武汉市430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院综合医疗科武汉市430030

目的:探讨CD46分子对CD4+T细胞的免疫调控作用及其机制。方法:分离人CD4+T淋巴细胞,体外检测CD3、ConA、CD3/CD28、CD3/CD46、CD3/CD28/CD46共刺激对CD4+T细胞的作用效果,并检测其细胞上清液中白细胞介素-2(IL-2)、γ-干扰素(IFN-γ)、... 详细信息

目的:探讨CD46分子对CD4+T细胞的免疫调控作用及其机制。方法:分离人CD4+T淋巴细胞,体外检测CD3、ConA、CD3/CD28、CD3/CD46、CD3/CD28/CD46共刺激对CD4+T细胞的作用效果,并检测其细胞上清液中白细胞介素-2(IL-2)、γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-10(IL-10)和转化生长因子-β(TGF-β)的水平。结果:与CD3组或阴性对照组相比,ConA、CD3/CD28、CD3/CD46和CD3/CD28/CD46共刺激后,CD4+T细胞均出现显著增殖反应(P<0.05),而且CD3/CD28/CD46共刺激组的增殖活性较CD3/CD28或CD3/CD46共刺激组显著增高(P<0.05)。CD3/CD28共刺激后,IL-2和IFN-γ水平较阴性对照组和CD3组显著升高(P<0.05),CD3/CD46共刺激后,IL-10和TGF-β水平较阴性对照组、ConA组、CD3组和CD3/CD28共刺激组显著升高(P<0.05)。结论:补体调节蛋白CD46可以诱导CD4+T细胞的增殖反应并产生IL-10和TGF-β,有可能抑制同种移植免疫反应。

关键词：补体 CD46 CD4+T细胞

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单肺移植治疗肺淋巴管平滑肌瘤病一例

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中华器官移植杂志 2009年第8期30卷 499-500页

作者：昌盛孙威严华汤应雄陈孝平朱学海周鸿敏付向宁周平华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部重点实验室武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院普胸外科武汉430030

2006年11月，我院对1例肺淋巴管平滑肌瘤病患者成功施行了右侧单肺移植，目前受者存活良好，现报道如下。

关键词：肺淋巴管平滑肌瘤病单肺移植移植治疗

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大鼠原位肝移植手术技巧探讨

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医学研究生学报 2009年第1期22卷 57-60页

作者：蔡明潘桃李红洲陈知水华中科技大学同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室湖北武汉430030

目的:探讨建立稳定的大鼠原位肝移植模型的外科技巧。方法:在Kamada二袖套法基础上,着重对供肝分离、灌注、肝上下腔静脉切取,肝上下腔静脉吻合,袖套和胆道处理等手术方法作了进一步改进。结果:共建立40例大鼠原位肝移植模型,手术成功率... 详细信息

目的:探讨建立稳定的大鼠原位肝移植模型的外科技巧。方法:在Kamada二袖套法基础上,着重对供肝分离、灌注、肝上下腔静脉切取,肝上下腔静脉吻合,袖套和胆道处理等手术方法作了进一步改进。结果:共建立40例大鼠原位肝移植模型,手术成功率80%,7 d存活率达70%。结论:在娴熟细致的外科操作基础上进一步缩短无肝期,可顺利完成大鼠肝移植模型的建立。

关键词：原位肝移植二袖套法动物模型大鼠

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无心跳供体肾移植前处理研究进展

无心跳供体肾移植前处理研究进展

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第二届全国器官捐献与移植学术研讨会

作者：高英蔡兰军何文涛林星光徐利军张维娜雒真龙周鸿敏陈忠华教育部器官移植重点实验室卫生部器官移植重点实验室华中科技大学同济医学院同济医院器官移植研究所

来自NHBD的肾脏均不可避免地经历了热缺血，冷保存及缺血再灌注损伤，在移植前采取的干预措施对移植肾脏的成活，功能和预后产生重要影响。目前对无心跳供体移植前处理主要包括供肾切取手术中处理，机器灌注保存处理，药物处理，缺血预... 详细信息

来自NHBD的肾脏均不可避免地经历了热缺血，冷保存及缺血再灌注损伤，在移植前采取的干预措施对移植肾脏的成活，功能和预后产生重要影响。目前对无心跳供体移植前处理主要包括供肾切取手术中处理，机器灌注保存处理，药物处理，缺血预处理等几个方面。

关键词：肾移植机器灌注缺血预处理药物处理无心跳供体

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