目的表达2-型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,SS2)的谷氨酸脱氢酶(glutamatedehydrogenase,GDH),研究其免疫学活性,探讨其作为疫苗候选分子的可能性。方法用聚合酶链反应(PCR)技术从SS2临床分离株05ZYH33的基因组DNA中扩增出gd...
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目的表达2-型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,SS2)的谷氨酸脱氢酶(glutamatedehydrogenase,GDH),研究其免疫学活性,探讨其作为疫苗候选分子的可能性。方法用聚合酶链反应(PCR)技术从SS2临床分离株05ZYH33的基因组DNA中扩增出gdh基因片段,插入表达载体pET-30b(+)中,构建重组表达载体pET30b-gdh。该载体经酶切鉴定和DNA测序鉴定后,转化*** Rosetta,IPTG诱导表达,镍离子亲和层析纯化重组蛋白。蛋白免疫印迹(western blot)证实目的蛋白的分子量和免疫反应原性。重组蛋白免疫小鼠后收集多抗血清,间接原位末端标记法(ELISA)检测其效价。结果 PCR扩增的gdh基因长度约为1300碱基对(bp),所构建重组表达载体酶切鉴定无误、测序证实碱基序列100%正确且保持正确读框。IPTG诱导表达,目的蛋白表达量约占菌体总蛋白的14.2%。亲和层析获得目的蛋白,纯度达80%以上。Western blot检测证实该蛋白能与感染SS2的患者血清发生阳性反应。重组蛋白免疫小鼠后血清效价达1∶25600以上。结论成功构建了表达载体pET30b-gdh,可在工程菌*** Rosetta中表达;表达蛋白具有良好的免疫学活性。
98年和2005年,我国江苏省和四川省分别发生两起猪链球菌(***)2型暴发流行感染猪和人的公共卫生事件,临床病人出现了国内外从未报导过的中毒性休克综合征(STSS)。为了对造成这两次公共卫生事件的S. suis 2流行菌株的致病性进行深入研究,...
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98年和2005年,我国江苏省和四川省分别发生两起猪链球菌(***)2型暴发流行感染猪和人的公共卫生事件,临床病人出现了国内外从未报导过的中毒性休克综合征(STSS)。为了对造成这两次公共卫生事件的S. suis 2流行菌株的致病性进行深入研究,本室(南京军区军事医学研究所)选择1998年江苏流行的强致病株98HAH12和2005年四川流行的强致病株05ZYH33(两株均分离自STSS病人)及无毒株05JYS68(分离自江苏健康猪)进行了全基因组测序,现测序已全部完成并对基因组进行了初步注释(待发表)。将98HAH12和05ZYH33基因组与Sanger研究中心公布的标准株P1/7全基因组序列进行比较后发现,三者的同源性很高,均属于S. suis 2血清型。
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