检索结果-内蒙古大学图书馆

西北植物学报 2016年第7期36卷 1294-1301页

作者：刘堰珺马静王广龙黄蔚王枫熊爱生南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室园艺学院农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室南京210095

该实验采用RT-PCR技术,从胡萝卜‘黑田五寸’中克隆获得了编码肉桂醇脱氢酶(Cinnamyl alcohol dehydrogenase,CAD)的基因DcCAD。DcCAD序列长1 074bp,编码357个氨基酸。亲水/疏水性分析表明,DcCAD属于亲水性蛋白。系统进化分析显示,DcCA... 详细信息

该实验采用RT-PCR技术,从胡萝卜‘黑田五寸’中克隆获得了编码肉桂醇脱氢酶(Cinnamyl alcohol dehydrogenase,CAD)的基因DcCAD。DcCAD序列长1 074bp,编码357个氨基酸。亲水/疏水性分析表明,DcCAD属于亲水性蛋白。系统进化分析显示,DcCAD与番茄CAD(XP_010314515.1)亲缘关系最近。荧光定量PCR结果显示,DcCAD基因在胡萝卜根、叶片和叶柄中的表达量差异显著,其相对表达量为叶片>根>叶柄。DcCAD基因对高温(38℃)、低温(4℃)、干旱(20%PEG)和盐(0.2mol·L-1 NaCl)胁迫均有响应,尤其对高温胁迫和低温胁迫响应明显,而且高温处理后1h和低温处理后2h表达量最高。研究推测,DcCAD基因对胡萝卜抗逆性具有一定的作用。

关键词：肉桂醇脱氢酶同源分析非生物胁迫表达分析胡萝卜

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不结球白菜抗坏血酸合成基因BcGME的同源克隆及胁迫下的表达分析

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南京农业大学学报 2016年第2期39卷 205-212页

作者：李妍王雪花陈忠文段伟科侯喜林李英南京农业大学园艺学院/作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业部华东地区园艺作物生物学与种质创新重点实验室江苏南京210095

[目的]本文旨在探究逆境下BcGME基因与抗坏血酸(As A)含量的关系,为培育高品质的不结球白菜品种奠定理论基础。[方法]以不结球白菜‘苏州青’为材料,同源克隆了BcGME基因的全长,应用生物信息学分析了其氨基酸序列,通过实时荧光定量PCR... 详细信息

[目的]本文旨在探究逆境下BcGME基因与抗坏血酸(As A)含量的关系,为培育高品质的不结球白菜品种奠定理论基础。[方法]以不结球白菜‘苏州青’为材料,同源克隆了BcGME基因的全长,应用生物信息学分析了其氨基酸序列,通过实时荧光定量PCR技术测定了BcGME基因在过氧化氢胁迫和水淹胁迫下的表达水平,利用高效液相色谱(HPLC)测定了相应的抗坏血酸含量。[结果]BcGME基因包含一个长度为1 137 bp的开放式阅读框(ORF),编码379个氨基酸。推测其蛋白理论相对分子质量为42.97×103,理论等电点p I值为5.84,分子式为C1907H2949N519O570S22,属于不稳定蛋白。总平均疏水指数为-0.440,属于亲水蛋白。亚细胞定位预测该蛋白分布在细胞质中。BcGME氨基酸序列与十字花科大部分植物的相似性为90%以上,不结球白菜BcGME与十字花科的大白菜、甘蓝型油菜、拟南芥相应蛋白的进化距离较近。过氧化氢胁迫下,As A含量在6 h达到峰值,同时BcGME基因的表达量也达到最高;水淹胁迫下,1 d时As A含量最高为12.99μg·g^(-1),随后As A含量急速下降,1 d时的BcGME基因表达量是0 d的1.5倍。[结论]过氧化氢胁迫和水淹胁迫下,不结球白菜植株中BcGME基因的表达量变化趋势与As A含量变化趋势一致,说明GME可能是不结球白菜抗坏血酸合成途径中的关键调控基因。

关键词：不结球白菜 BcGME 抗坏血酸序列分析非生物胁迫

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芹菜肉桂酰辅酶A还原酶基因的克隆与表达分析

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南京农业大学学报 2016年第6期39卷 907-914页

作者：吴蓓李梦瑶王广龙黄蔚熊爱生南京农业大学园艺学院/作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室江苏南京210095

[目的]肉桂酰辅酶A还原酶CCR(cinnamoyl-Co A reductase)在植物木质素代谢中起重要的作用,能够将羟基肉桂酸还原生成肉桂醛。本文目的是研究不同芹菜中肉桂酰辅酶A还原酶基因AgCCR在芹菜中组织表达和非生物胁迫过程中的响应情况。[方法]... 详细信息

[目的]肉桂酰辅酶A还原酶CCR(cinnamoyl-Co A reductase)在植物木质素代谢中起重要的作用,能够将羟基肉桂酸还原生成肉桂醛。本文目的是研究不同芹菜中肉桂酰辅酶A还原酶基因AgCCR在芹菜中组织表达和非生物胁迫过程中的响应情况。[方法]以2个芹菜品种‘六合黄心芹’和‘文图拉’为材料,分别克隆出编码肉桂酰辅酶A还原酶的基因AgCCR。利用荧光定量PCR分析不同芹菜组织和2种芹菜在高温、低温、干旱和盐胁迫下AgCCR的表达情况。[结果]序列分析表明,‘六合黄心芹’和‘文图拉’中AgCCR基因均含有1个长度为1 014 bp的开放阅读框,编码337个氨基酸,二者的核苷酸位点有3个位点的差异,编码的氨基酸有1个位点的差异。对2个芹菜中的AgCCR基因进行多重比对并绘制进化树,发现其编码的氨基酸序列与其他15种植物的CCR蛋白同源性较高,氨基酸高度保守。荧光定量PCR(qRT-PCR)分析表明,芹菜AgCCR基因在‘六合黄心芹’和‘文图拉’叶中的表达水平较高,AgCCR基因在高温和低温下表达上调,在干旱处理下表达下调。[结论]芹菜AgCCR基因对多种非生物胁迫均有响应。特别是低温下该基因响应明显,表明AgCCR基因或许与芹菜抗寒机制相关。

关键词：芹菜肉桂酰辅酶A还原酶基因序列分析非生物胁迫基因表达

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灰霉菌侵染大白菜后ADF7和ADF10基因表达分析

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南京农业大学学报 2015年第5期38卷 742-747页

作者：马清华陈晓峰牟晋华侯喜林南京农业大学园艺学院/作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业部华东地区园艺作物生物学与种质创新重点实验室江苏南京210095 中国农业大学烟台研究院山东烟台264670

[目的]本文旨在研究大白菜ADF7和ADF10基因对真菌侵染的响应。[方法]从拟南芥基因组数据库中找到全部的At ADF7和At ADF10基因,通过与大白菜基因组数据库序列比对分析,得到对应的基因序列。利用生物信息学分析其特性,通过半定量和定量分... 详细信息

[目的]本文旨在研究大白菜ADF7和ADF10基因对真菌侵染的响应。[方法]从拟南芥基因组数据库中找到全部的At ADF7和At ADF10基因,通过与大白菜基因组数据库序列比对分析,得到对应的基因序列。利用生物信息学分析其特性,通过半定量和定量分析2个基因在受到真菌侵染的大白菜中的表达情况。[结果]系统进化树分析表明,大白菜ADF7基因与其他近似植物的ADF7基因有较高的同源性。对大白菜ADF7和ADF10编码的蛋白进行二级结构分析,它们具有相近的相对分子质量和等电点,都没有信号肽。采用半定量检测大白菜受灰霉菌侵染前后ADF基因表达特点,结果显示:ADF7和ADF10在未受侵染的根、茎、叶中几乎不表达,在灰霉菌侵染的叶中表达量最高,茎次之,根中表达不明显。实时荧光定量PCR(qRTPCR)分析进一步验证了基因的组织特异性表达,病原菌侵染大白菜后,ADF7和ADF10在根、茎、叶中均呈现双波表达特点且表达趋势一致,在侵染12和48 h后均出现表达高峰值且在‘新烟杂3号’的表达量明显高于‘包头莲’。[结论]ADF7和ADF10在根、茎、叶中具有组织差异表达特性,并且在抗病品种中的表达较高。这为进一步研究生物胁迫情况下肌动蛋白的聚合和解聚机制奠定了理论基础。

关键词：大白菜肌动蛋白解聚因子灰霉菌实时定量PCR

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萝卜硝酸还原酶基因的克隆与表达分析

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南京农业大学学报 2015年第2期38卷 205-211页

作者：武悦徐良王娟娟龚义勤谢洋柳李旺南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室/园艺学院江苏南京210095 全国农业技术推广服务中心北京100125

[目的]为揭示萝卜（Raphanus sativus L.）硝酸还原酶基因（RsNR）的分子特征,降低硝酸盐含量,对萝卜RsNR基因进行分离与表达特性研究。[方法]基于本实验室转录组测序所得unigene序列分离RsNR基因cDNA,利用生物信息学方法进行序列分析,... 详细信息

[目的]为揭示萝卜（Raphanus sativus L.）硝酸还原酶基因（RsNR）的分子特征,降低硝酸盐含量,对萝卜RsNR基因进行分离与表达特性研究。[方法]基于本实验室转录组测序所得unigene序列分离RsNR基因cDNA,利用生物信息学方法进行序列分析,采用RT-qPCR方法对不同浓度KNO3（0、5、20、30和50mmol·L^-1）和不同时间（0、4、8、12和24h）处理的萝卜中RsNR基因表达进行检测,并测定硝酸盐含量和硝酸还原酶活性（NRA）。[结果]获得萝卜RsNR基因cDNA序列（GenBank登录号：KM272859）,开放阅读框为2742bp,编码913个氨基酸,RsNR与油菜NR基因（D38219）氨基酸序列相似性为95%。在30mmol·L^-1NO3^--N诱导下,萝卜叶片和根中RsNR基因表达量最高。在30mmol·L^-1NO3^--N诱导初期,叶片和根中RsNR表达量4h达到最大值,随后呈下降趋势;随着硝酸盐处理浓度升高,NRA、硝酸盐含量和RsNR基因表达量均呈先升后降趋势,0～4h内叶片和根中三者均上升,4～24h内NRA和RsNR基因表达下降,而硝酸盐含量呈上升趋势。[结论]NO3^--N可能在转录水平上调控萝卜RsNR基因表达,进而影响其硝酸盐含量和NRA。

关键词：萝卜基因表达硝酸还原酶基因(NR) NO3^--N处理

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不结球白菜响应ABA和低温基因WRKY18的克隆及表达分析

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南京农业大学学报 2015年第2期38卷 189-196页

作者：黄菲艺唐君侯喜林马静王枫南京农业大学园艺学院/作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业部华东地区园艺作物生物学与种质创新重点实验室江苏南京210095 江苏省中国科学院植物研究所江苏南京210014

[目的]WRKY转录因子是植物特有的一类转录因子,广泛参与植物的生长发育、生物及非生物胁迫响应。克隆和鉴定不结球白菜共同响应ABA和低温的WRKY基因,对研究不结球白菜抗逆分子机制和改良其抗逆性具有重要意义。[方法]采用电子克隆的方法... 详细信息

[目的]WRKY转录因子是植物特有的一类转录因子,广泛参与植物的生长发育、生物及非生物胁迫响应。克隆和鉴定不结球白菜共同响应ABA和低温的WRKY基因,对研究不结球白菜抗逆分子机制和改良其抗逆性具有重要意义。[方法]采用电子克隆的方法在NCBI数据库中进行不结球白菜WRKY18基因全长拼接,然后在不结球白菜‘苏州青’中,克隆到1个与低温及ABA响应相关的WRKY基因,通过生物信息学手段和实时定量RT-PCR(qRT-PCR)技术分析了该基因的序列结构特征及其在低温和ABA处理下的表达变化。[结果]该基因全长为1080bp,含有978bp的开放阅读框,编码326个氨基酸,与油菜及拟南芥的WRKY18直系同源,氨基酸序列相似性分别为87%和73%,命名为BcWRKY18。序列分析表明,该编码蛋白为核蛋白,不含跨膜区,无信号钛,具有WRKYGQK基序(motif)约60个氨基酸残基的WRKY保守结构域,为WRKY转录因子家族成员。系统聚类分析指出了BcWRKY18蛋白的保守性及其在开花植物中的进化关系;序列结构和同源建模分析指出了BcWRKY18蛋白的保守结构域、蛋白质的二级及三级结构分布模型;qRT-PCR检测了BcWRKY18基因在ABA和低温胁迫下的表达,表明低温和ABA都能诱导BcWRKY18基因表达,其表达模式都存在相似的过程,且BcWRKY18基因对ABA的响应比对低温的响应更快、更明显。[结论]从不结球白菜中克隆获得1个新的WRKY类转录因子基因BcWRKY18,基因表达分析发现BcWRKY18可能存在对ABA和低温的共响应及自身反馈调控。

关键词：不结球白菜 WRKY18 低温 ABA 非生物胁迫序列分析实时定量RT-PCR

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番茄中受TYLCV诱导上调表达基因tetraspanin3的功能分析

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南京农业大学学报 2015年第6期38卷 896-900页

作者：裴延飞刘廷利连梓伊杨郁文陈天子王金彦张保龙柳李旺南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室/园艺学院江苏南京210095 江苏省农业科学院江苏省农业生物学重点实验室江苏南京210014

[目的]本文旨在研究tetraspanin3基因在抗番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)病中的作用及对番茄生长发育的影响。[方法]通过MEG 5.0软件构建进化树,分析tetraspanin3基因的进化;采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测tetraspanin3在番茄各个器官中... 详细信息

[目的]本文旨在研究tetraspanin3基因在抗番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)病中的作用及对番茄生长发育的影响。[方法]通过MEG 5.0软件构建进化树,分析tetraspanin3基因的进化;采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测tetraspanin3在番茄各个器官中的表达量及对TYLCV诱导的响应;通过病毒诱导基因沉默技术(VIGS)将番茄中的tetraspanin3沉默,测定基因沉默后番茄的抗病性并观测沉默植株表型。[结果]构建的进化树显示:番茄的tetraspanin3基因与葡萄同源基因在一个独立的进化分支上。tetraspanin3基因在各器官中均有表达,在茎、老叶、花中表达量较高,在根、果实中表达量较低,在新叶中的表达量处于中间水平。tetraspanin3受TYLCV诱导后上调表达。沉默tetraspanin3后的植株出现了叶片扭曲,并且在接种TYLCV后,TYLCV病毒量降低50%以上。[结论]tetraspanin3与番茄叶片的生长发育有关,并且对TYLCV侵染番茄植株起正调控作用。

关键词：番茄黄化曲叶病毒跨膜蛋白病毒诱导的转基因沉默功能分析

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芹菜NHL-like蛋白基因克隆与表达分析

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植物遗传资源学报 2014年第4期15卷 788-794页

作者：李岩王枫谭国飞贾晓玲蒋倩熊爱生南京农业大学园艺学院作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业部华东地区园艺作物生物学与种质创新重点实验室南京210095

植物生长发育过程中会遭遇各种病原物的攻击,植物为了应对这些危害并适应外界的生存竞争,逐渐演化出了复杂的防御机制.NHL基因家族庞大,部分NHL基因受病原物诱导后会过量表达,增强植物对多种病原菌的抗性,是与植物防御机制密切相关的蛋... 详细信息

植物生长发育过程中会遭遇各种病原物的攻击,植物为了应对这些危害并适应外界的生存竞争,逐渐演化出了复杂的防御机制.NHL基因家族庞大,部分NHL基因受病原物诱导后会过量表达,增强植物对多种病原菌的抗性,是与植物防御机制密切相关的蛋白.本研究以津南实芹和美国西芹2个芹菜品种为试验材料,分别克隆出NHL-like蛋白基因AgNHL.序列分析表明,上述2种芹菜的AgNHL基因序列均含636 bp的开放阅读框,编码211个氨基酸.2种芹菜碱基序列,只有第36位不同,津南实芹为T,美国西芹为C,2种碱基序列相似性高达99.84％,编码的氨基酸序列相同.进化分析显示,2种芹菜的NHL-like蛋白与葡萄、大豆等植物的相似度较高,在第80～185氨基酸间含一个LEA_2蛋白保守结构域.荧光定量PCR结果表明,AgNHL基因主要在芹菜茎中表达,根中表达量最低,有明显组织特异性,品种差异也很显著.对2种芹菜分别进行4℃低温、38℃高温、20％ PEG处理、0.2 mol/L NaCl处理2h表达分析显示,低温、盐处理下该基因表达量明显上升.

关键词：芹菜 NHL-like蛋白基因克隆荧光定量PCR 表达分析

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3个芹菜品种Agnp-G3PDH基因的克隆及其序列和表达特性分析

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植物资源与环境学报 2014年第2期23卷 1-10页

作者：田畅蒋倩王枫李梦瑶贾晓玲熊爱生南京农业大学园艺学院作物遗传与种质创新国家重点实验室农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室江苏南京210095

从芹菜(Apium graveolens Linn.)品种‘六合黄心芹’(‘Liuhe Huangxinqin’)、‘津南实芹’(‘Jinnan Shiqin’)和‘文图拉’(‘Ventura’)中分别克隆获得非磷酸化甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因Agnp-G3PDH。3个品种的AgnpG3PDH基因序列均包... 详细信息

从芹菜(Apium graveolens Linn.)品种‘六合黄心芹’(‘Liuhe Huangxinqin’)、‘津南实芹’(‘Jinnan Shiqin’)和‘文图拉’(‘Ventura’)中分别克隆获得非磷酸化甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因Agnp-G3PDH。3个品种的AgnpG3PDH基因序列均包含1个全长1 491 bp的开放阅读框(ORF),编码496个氨基酸;存在84个碱基位点差异,导致14个氨基酸位点改变。由该基因编码的‘六合黄心芹’、‘津南实芹’和‘文图拉’的Agnp-G3PDH蛋白的理论相对分子质量分别为53 201.6、53 051.4和52 960.3,理论等电点分别为pI 7.49、pI 7.86和pI 8.12,氨基酸组成中碱性氨基酸数量大于酸性氨基酸数量;该蛋白质具有亲水性与疏水性双重特性,均为疏水性蛋白。多重比对结果表明:3个品种Agnp-G3PDH基因编码的氨基酸序列同源性达到99.09%,具有高度保守性;且与其他11种植物npG3PDH的氨基酸序列的相似度也较高。在基于np-G3PDH基因编码的氨基酸序列进化树上,3个芹菜品种聚在同一分支中,并与杨柳科(Salicaceae)种类毛果杨(Populus trichocarpa Torr.&Gray)聚在一起,表明它们的np-G3PDH进化关系较近。实时定量PCR分析结果表明:在3个芹菜品种的不同组织中Agnp-G3PDH基因的相对表达水平均有明显差异,其中,在‘津南实芹’的叶、‘文图拉’的花和‘六合黄心芹’的根中该基因的相对表达水平最高;经高温(38℃)、低温(4℃)和干旱(20%PEG)胁迫处理后3个品种Agnp-G3PDH基因的相对表达水平均极显著高于或低于对照,但经盐(0.2 mol·L-1NaCl)胁迫处理后仅品种‘津南实芹’Agnp-G3PDH基因的相对表达水平显著高于对照,品种‘六合黄心芹’和‘文图拉’Agnp-G3PDH基因的相对表达水平与对照无显著差异。表明该基因的表达具有组织特异性且与品种间的抗逆性差异有关。

关键词：芹菜 Agnp—G3PDH基因序列分析同源性非生物胁迫表达特性

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芹菜核酸内切酶CELI基因的克隆及其表达分析

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南京农业大学学报 2014年第4期37卷 39-45页

作者：田畅王枫蒋倩徐馨琰刘君熊爱生南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室/园艺学院江苏南京210095

CELI是一种单链特异性核酸酶(singlestrand specific nuclease),主要应用于清除DNA或RNA双链分子存在的单链.测定不同品种芹菜中CELI基因非生物胁迫诱导表达情况,以进一步研究芹菜中核酸内切酶的功能及应用.以芹菜(Apium raveolensL.)... 详细信息

CELI是一种单链特异性核酸酶(singlestrand specific nuclease),主要应用于清除DNA或RNA双链分子存在的单链.测定不同品种芹菜中CELI基因非生物胁迫诱导表达情况,以进一步研究芹菜中核酸内切酶的功能及应用.以芹菜(Apium raveolensL.)为试验材料,分别从‘六合黄心芹’和‘文图拉’中克隆出核酸内切酶CELI基因序列.通过生物信息学的方法对所得序列进行分析,通过实时定量PCR方法进行该基因在芹菜中表达分析.结果表明:来源于2种芹菜的CELI基因核苷酸序列高度保守,基因全长均为891 bp,分别编码296个氨基酸.2种芹菜的CELI基因核苷酸序列之间共有20个位点不同,导致3个氨基酸位点发生改变.2种芹菜该酶的蛋白质相对分子质量分别为33.88×103和33.92×103,pI值分别为6.51和6.37.进化分析显示,芹菜中的CELI与同属于伞形科的欧芹进化关系最近,伞形科CELI进化上更接近于菊科.实时定量PCR分析表明,芹菜中CELI基因在根、茎、叶、花不同组织及不同品种之间的表达量有明显差异.对2种芹菜分别进行4℃、38℃、0.2 mol· L-1 NaC1、200 g·L-1 PEG处理2h,表达分析显示,4种处理条件下芹菜中CELI基因表达量有明显差异,其中PEG处理表达量呈明显下降趋势.结论:通过逆境处理后的基因表达分析发现,芹菜中CELI基因对非生物胁迫有响应,‘六合黄心芹’中CELI基因的诱导表达量大于‘文图拉’.

关键词：芹菜核酸内切酶实时定量PCR 基因克隆表达分析

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