检索结果-内蒙古大学图书馆

南京农业大学学报 2015年第2期38卷 189-196页

作者：黄菲艺唐君侯喜林马静王枫南京农业大学园艺学院/作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业部华东地区园艺作物生物学与种质创新重点实验室江苏南京210095 江苏省中国科学院植物研究所江苏南京210014

[目的]WRKY转录因子是植物特有的一类转录因子,广泛参与植物的生长发育、生物及非生物胁迫响应。克隆和鉴定不结球白菜共同响应ABA和低温的WRKY基因,对研究不结球白菜抗逆分子机制和改良其抗逆性具有重要意义。[方法]采用电子克隆的方法... 详细信息

[目的]WRKY转录因子是植物特有的一类转录因子,广泛参与植物的生长发育、生物及非生物胁迫响应。克隆和鉴定不结球白菜共同响应ABA和低温的WRKY基因,对研究不结球白菜抗逆分子机制和改良其抗逆性具有重要意义。[方法]采用电子克隆的方法在NCBI数据库中进行不结球白菜WRKY18基因全长拼接,然后在不结球白菜‘苏州青’中,克隆到1个与低温及ABA响应相关的WRKY基因,通过生物信息学手段和实时定量RT-PCR(qRT-PCR)技术分析了该基因的序列结构特征及其在低温和ABA处理下的表达变化。[结果]该基因全长为1080bp,含有978bp的开放阅读框,编码326个氨基酸,与油菜及拟南芥的WRKY18直系同源,氨基酸序列相似性分别为87%和73%,命名为BcWRKY18。序列分析表明,该编码蛋白为核蛋白,不含跨膜区,无信号钛,具有WRKYGQK基序(motif)约60个氨基酸残基的WRKY保守结构域,为WRKY转录因子家族成员。系统聚类分析指出了BcWRKY18蛋白的保守性及其在开花植物中的进化关系;序列结构和同源建模分析指出了BcWRKY18蛋白的保守结构域、蛋白质的二级及三级结构分布模型;qRT-PCR检测了BcWRKY18基因在ABA和低温胁迫下的表达,表明低温和ABA都能诱导BcWRKY18基因表达,其表达模式都存在相似的过程,且BcWRKY18基因对ABA的响应比对低温的响应更快、更明显。[结论]从不结球白菜中克隆获得1个新的WRKY类转录因子基因BcWRKY18,基因表达分析发现BcWRKY18可能存在对ABA和低温的共响应及自身反馈调控。

关键词：不结球白菜 WRKY18 低温 ABA 非生物胁迫序列分析实时定量RT-PCR

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不结球白菜乙烯响应因子基因的克隆与表达分析

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西北植物学报 2014年第12期34卷 2399-2404页

作者：王岩李树燕沈露露黄和喜侯喜林胡春梅南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室、农业部华东地区园艺作物生物学与种质创新重点实验室南京210095

采用cDNA-AFLP技术,以不结球白菜雄蕊突变系‘苏白2号’及其保持系花蕾为实验材料,分离出1条编码乙烯响应转录因子的基因,命名为NhccERF1。结果显示:(1)序列分析表明,NhccERF1基因长807bp,编码268个氨基酸。(2)RT-PCR分析发现,花期NhccE... 详细信息

采用cDNA-AFLP技术,以不结球白菜雄蕊突变系‘苏白2号’及其保持系花蕾为实验材料,分离出1条编码乙烯响应转录因子的基因,命名为NhccERF1。结果显示:(1)序列分析表明,NhccERF1基因长807bp,编码268个氨基酸。(2)RT-PCR分析发现,花期NhccERF1基因在花瓣、雄蕊及花柱中表达量均显著高于保持系。(3)实时定量荧光PCR(qPCR)发现,蕾期喷施乙烯(ET)能促进NhccERF1基因的表达,外施AgNO3抑制该基因表达。研究推测NhccERF1基因可能在雄蕊变异中发挥重要作用。

关键词：不结球白菜雄蕊突变乙烯响应因子(ERF) 基因表达

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芹菜NHL-like蛋白基因克隆与表达分析

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植物遗传资源学报 2014年第4期15卷 788-794页

作者：李岩王枫谭国飞贾晓玲蒋倩熊爱生南京农业大学园艺学院作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业部华东地区园艺作物生物学与种质创新重点实验室南京210095

植物生长发育过程中会遭遇各种病原物的攻击,植物为了应对这些危害并适应外界的生存竞争,逐渐演化出了复杂的防御机制.NHL基因家族庞大,部分NHL基因受病原物诱导后会过量表达,增强植物对多种病原菌的抗性,是与植物防御机制密切相关的蛋... 详细信息

植物生长发育过程中会遭遇各种病原物的攻击,植物为了应对这些危害并适应外界的生存竞争,逐渐演化出了复杂的防御机制.NHL基因家族庞大,部分NHL基因受病原物诱导后会过量表达,增强植物对多种病原菌的抗性,是与植物防御机制密切相关的蛋白.本研究以津南实芹和美国西芹2个芹菜品种为试验材料,分别克隆出NHL-like蛋白基因AgNHL.序列分析表明,上述2种芹菜的AgNHL基因序列均含636 bp的开放阅读框,编码211个氨基酸.2种芹菜碱基序列,只有第36位不同,津南实芹为T,美国西芹为C,2种碱基序列相似性高达99.84％,编码的氨基酸序列相同.进化分析显示,2种芹菜的NHL-like蛋白与葡萄、大豆等植物的相似度较高,在第80～185氨基酸间含一个LEA_2蛋白保守结构域.荧光定量PCR结果表明,AgNHL基因主要在芹菜茎中表达,根中表达量最低,有明显组织特异性,品种差异也很显著.对2种芹菜分别进行4℃低温、38℃高温、20％ PEG处理、0.2 mol/L NaCl处理2h表达分析显示,低温、盐处理下该基因表达量明显上升.

关键词：芹菜 NHL-like蛋白基因克隆荧光定量PCR 表达分析

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芹菜核酸内切酶CELI基因的克隆及其表达分析

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南京农业大学学报 2014年第4期37卷 39-45页

作者：田畅王枫蒋倩徐馨琰刘君熊爱生南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室/园艺学院江苏南京210095

CELI是一种单链特异性核酸酶(singlestrand specific nuclease),主要应用于清除DNA或RNA双链分子存在的单链.测定不同品种芹菜中CELI基因非生物胁迫诱导表达情况,以进一步研究芹菜中核酸内切酶的功能及应用.以芹菜(Apium raveolensL.)... 详细信息

CELI是一种单链特异性核酸酶(singlestrand specific nuclease),主要应用于清除DNA或RNA双链分子存在的单链.测定不同品种芹菜中CELI基因非生物胁迫诱导表达情况,以进一步研究芹菜中核酸内切酶的功能及应用.以芹菜(Apium raveolensL.)为试验材料,分别从‘六合黄心芹’和‘文图拉’中克隆出核酸内切酶CELI基因序列.通过生物信息学的方法对所得序列进行分析,通过实时定量PCR方法进行该基因在芹菜中表达分析.结果表明:来源于2种芹菜的CELI基因核苷酸序列高度保守,基因全长均为891 bp,分别编码296个氨基酸.2种芹菜的CELI基因核苷酸序列之间共有20个位点不同,导致3个氨基酸位点发生改变.2种芹菜该酶的蛋白质相对分子质量分别为33.88×103和33.92×103,pI值分别为6.51和6.37.进化分析显示,芹菜中的CELI与同属于伞形科的欧芹进化关系最近,伞形科CELI进化上更接近于菊科.实时定量PCR分析表明,芹菜中CELI基因在根、茎、叶、花不同组织及不同品种之间的表达量有明显差异.对2种芹菜分别进行4℃、38℃、0.2 mol· L-1 NaC1、200 g·L-1 PEG处理2h,表达分析显示,4种处理条件下芹菜中CELI基因表达量有明显差异,其中PEG处理表达量呈明显下降趋势.结论:通过逆境处理后的基因表达分析发现,芹菜中CELI基因对非生物胁迫有响应,‘六合黄心芹’中CELI基因的诱导表达量大于‘文图拉’.

关键词：芹菜核酸内切酶实时定量PCR 基因克隆表达分析

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3个芹菜品种Agnp-G3PDH基因的克隆及其序列和表达特性分析

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植物资源与环境学报 2014年第2期23卷 1-10页

作者：田畅蒋倩王枫李梦瑶贾晓玲熊爱生南京农业大学园艺学院作物遗传与种质创新国家重点实验室农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室江苏南京210095

从芹菜(Apium graveolens Linn.)品种‘六合黄心芹’(‘Liuhe Huangxinqin’)、‘津南实芹’(‘Jinnan Shiqin’)和‘文图拉’(‘Ventura’)中分别克隆获得非磷酸化甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因Agnp-G3PDH。3个品种的AgnpG3PDH基因序列均包... 详细信息

从芹菜(Apium graveolens Linn.)品种‘六合黄心芹’(‘Liuhe Huangxinqin’)、‘津南实芹’(‘Jinnan Shiqin’)和‘文图拉’(‘Ventura’)中分别克隆获得非磷酸化甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因Agnp-G3PDH。3个品种的AgnpG3PDH基因序列均包含1个全长1 491 bp的开放阅读框(ORF),编码496个氨基酸;存在84个碱基位点差异,导致14个氨基酸位点改变。由该基因编码的‘六合黄心芹’、‘津南实芹’和‘文图拉’的Agnp-G3PDH蛋白的理论相对分子质量分别为53 201.6、53 051.4和52 960.3,理论等电点分别为pI 7.49、pI 7.86和pI 8.12,氨基酸组成中碱性氨基酸数量大于酸性氨基酸数量;该蛋白质具有亲水性与疏水性双重特性,均为疏水性蛋白。多重比对结果表明:3个品种Agnp-G3PDH基因编码的氨基酸序列同源性达到99.09%,具有高度保守性;且与其他11种植物npG3PDH的氨基酸序列的相似度也较高。在基于np-G3PDH基因编码的氨基酸序列进化树上,3个芹菜品种聚在同一分支中,并与杨柳科(Salicaceae)种类毛果杨(Populus trichocarpa Torr.&Gray)聚在一起,表明它们的np-G3PDH进化关系较近。实时定量PCR分析结果表明:在3个芹菜品种的不同组织中Agnp-G3PDH基因的相对表达水平均有明显差异,其中,在‘津南实芹’的叶、‘文图拉’的花和‘六合黄心芹’的根中该基因的相对表达水平最高;经高温(38℃)、低温(4℃)和干旱(20%PEG)胁迫处理后3个品种Agnp-G3PDH基因的相对表达水平均极显著高于或低于对照,但经盐(0.2 mol·L-1NaCl)胁迫处理后仅品种‘津南实芹’Agnp-G3PDH基因的相对表达水平显著高于对照,品种‘六合黄心芹’和‘文图拉’Agnp-G3PDH基因的相对表达水平与对照无显著差异。表明该基因的表达具有组织特异性且与品种间的抗逆性差异有关。

关键词：芹菜 Agnp—G3PDH基因序列分析同源性非生物胁迫表达特性

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萝卜抽薹开花促进因子RsFPF1基因克隆与功能分析

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南京农业大学学报 2014年第4期37卷 31-38页

作者：许园园王燕柳李旺徐良王克磊张凤娇聂姗姗龚义勤南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室/园艺学院江苏南京210095 温州市农业科学院蔬菜科学研究所温州科技职业学院浙江温州325014

采用电子克隆与基因组步移策略分离出萝卜RsFPF1基因gDNA和cDNA及启动子序列,并进行表达特征分析及转基因功能验证。序列分析表明,RsFPF1基因长度为330 bp,编码109个氨基酸;蛋白同源分析表明,RsFPF1蛋白与拟南芥及白芥FPF1蛋白间亲缘关... 详细信息

采用电子克隆与基因组步移策略分离出萝卜RsFPF1基因gDNA和cDNA及启动子序列,并进行表达特征分析及转基因功能验证。序列分析表明,RsFPF1基因长度为330 bp,编码109个氨基酸;蛋白同源分析表明,RsFPF1蛋白与拟南芥及白芥FPF1蛋白间亲缘关系最近。RsFPF1基因5'上游启动子区序列长度为1 845 bp,采用PLACE和PlantCARE软件分析表明,该启动子序列含有典型调控元件及多个光响应顺式元件。半定量RT-PCR表达分析表明,开花前RsFPF1基因在茎尖表达量最高,开花后在花及花蕾中表达量最高。通过农杆菌介导的遗传转化获得转RsFPF1基因的烟草阳性植株,与野生型相比,转入RsFPF1基因的植株出现花期提前现象。结论:RsFPF1基因能够促进萝卜提早开花,其表达可能受光调控,在调控萝卜抽薹开花及花发生相关基因表达方面发挥着重要作用。

关键词：萝卜抽薹开花 RsFPF1基因启动子功能分析

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紫山药黄酮醇合成酶DaFLS1基因的克隆和表达分析

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江苏农业学报 2014年第6期30卷 1448-1455页

作者：闫瑞霞龚义勤殷剑美韩晓勇张培通柳李旺南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室/园艺学院江苏南京210095 江苏省农业科学院经济作物研究所江苏南京210014

为了解黄酮醇在紫山药中的合成特点,利用3'-和5'-RACE技术从紫山药中分离到黄酮醇合成酶Da FLS1基因编码序列(Gen Bank登录号:KJ022640)。Da FLS1基因编码序列全长为1 113 bp,其开放阅读框长度为1 005 bp,编码334个氨基酸。Da F... 详细信息

为了解黄酮醇在紫山药中的合成特点,利用3'-和5'-RACE技术从紫山药中分离到黄酮醇合成酶Da FLS1基因编码序列(Gen Bank登录号:KJ022640)。Da FLS1基因编码序列全长为1 113 bp,其开放阅读框长度为1 005 bp,编码334个氨基酸。Da FLS1蛋白质属于水溶性胞质不稳定蛋白质,无跨膜区和信号肽结构。保守区域分析结果显示,Da FLS1蛋白质属于α-酮戊二酸和二价铁离子依赖型的加氧酶家族[2OG-Fe(II)Oxygenase superfamily];Da FLS1氨基酸序列与水仙(AFS63900)同源性最近(75%),其次是洋葱(AAT68476,74%),与金鱼草(ABB53382)的同源性仅为66%。系统进化分析结果显示,紫山药与其他作物亲缘关系较远。Da FLS1在紫山药幼嫩叶片中表达水平最高,并且在紫山药幼叶中的表达有2个高峰期,而在其他组织中的表达量极低或不表达,即Da FLS1在紫山药中的表达情况符合黄酮醇合成酶基因(FLS)的特征。上述结果说明,得到的基因为紫山药黄酮醇合成酶基因Da FLS1,具有FLS基因的生物信息学特征和表达特征。

关键词：紫山药黄酮醇合成酶黄酮醇 Da FLS1基因

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利用转录组高通量测序进行萝卜抽薹开花相关miRNA及靶基因鉴定

利用转录组高通量测序进行萝卜抽薹开花相关miRNA及靶基因鉴定

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中国园艺学会十字花科蔬菜分会第十二届学术研讨会

作者：聂姗姗罗小波徐良李超张凤娇龚义勤谢洋柳李旺南京农业大学园艺学院作物遗传与种质创新国家重点实验室农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室南京210095

MicroRNA(miRNA)是一类内源的非编码小分子RNA,在植物生长发育过程起调控作用.本研究通过高通量测序技术,利用萝卜营养生长和生殖生长期叶片构建两个sRNA文库,以鉴定萝卜抽薹开花相关miRNA.结果显示,在两个文库中共鉴定出134个已知miRNA... 详细信息

MicroRNA(miRNA)是一类内源的非编码小分子RNA,在植物生长发育过程起调控作用.本研究通过高通量测序技术,利用萝卜营养生长和生殖生长期叶片构建两个sRNA文库,以鉴定萝卜抽薹开花相关miRNA.结果显示,在两个文库中共鉴定出134个已知miRNA和62个新型miRNA,分属于35和38个miRNA家族.差异表达分析鉴定到66个抽薹开花相关miRNA,包括42个已知和24个新型miRNA.利用qRT-PCR技术对9个miRNA及8个靶基因表达模式进行了验证;对43个miRNA家族的128个潜在靶基因进行了功能注释和分析,结果表明许多功能基因参与了萝卜抽薹开花过程和生长发育.本研究结果为解析miRNA介导的萝卜抽薹开花调控网络机制提供了重要参考.

关键词：萝卜抽薹开花微小RNA 靶基因高通量测序

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不结球白菜响应ABA和低温基因WRKY18的克隆及表达分析

不结球白菜响应ABA和低温基因WRKY18的克隆及表达分析

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中国园艺学会十字花科蔬菜分会第十二届学术研讨会

作者：黄菲艺唐君侯喜林马静王枫南京农业大学园艺学院/作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业部华东地区园艺作物生物学与种质创新重点实验室江苏南京210095

WRKY转录因子是植物特有的一类转录因子,广泛参与植物的生长发育、生物及非生物胁迫响应.克隆和鉴定不结球白菜共同响应ABA和低温的WRKY基因,对研究不结球白菜抗逆分子机制和改良其抗逆性具有重要意义.采用电子克隆的方法在NCBI数据库... 详细信息

WRKY转录因子是植物特有的一类转录因子,广泛参与植物的生长发育、生物及非生物胁迫响应.克隆和鉴定不结球白菜共同响应ABA和低温的WRKY基因,对研究不结球白菜抗逆分子机制和改良其抗逆性具有重要意义.采用电子克隆的方法在NCBI数据库中进行不结球白菜WRKY18基因全长拼接,然后在不结球白菜'苏州青'品种中,克隆到一个与低温及ABA响应相关的WRKY基因,通过生物信息学手段和实时定量RT-PCR技术分析了该基因的序列结构特征及其在低温和ABA处理下的表达变化.结果表明:该基因全长为1080bp,含有978bp的开放阅读框,编码326个氨基酸,与油菜及拟南芥的WRKY18直系同源,氨基酸序列相似性分别为87％和73％,命名为BcWRKY18.序列分析表明,该编码蛋白为核蛋白,不含跨膜区,无信号钛,具有WRKYGQK基序(motif)约60个氨基酸残基的WRKY保守结构域,为WRKY转录因子家族成员.系统聚类分析指出了BcWRKY18蛋白的保守性及其在开花植物中的进化关系;序列结构和同源建模分析指出了BcWRKY18蛋白的保守结构域、蛋白质的二级及三级结构分布模型;实时定量RT-PCR检测了BcWRKY18基因在ABA和低温胁迫下的表达,表明低温和ABA都能诱导BcWRKY18基因表达,其表达模式都表现为快速升高-下降稳定-再升高-下降的动态过程,且BcWRKY18基因对ABA的响应比对低温的响应更快、更明显.

关键词：不结球白菜 WRKY18基因脱落酸低温胁迫基因克隆序列分析

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大白菜ADF7和ADF10基因协同表达特点分析

大白菜ADF7和ADF10基因协同表达特点分析

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中国园艺学会十字花科蔬菜分会第十二届学术研讨会

作者：马清华陈晓峰牟晋华侯喜林南京农业大学园艺学院/作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业部华东地区园艺作物生物学与种质创新重点实验室江苏南京210095 南京农业大学园艺学院/作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业部华东地区园艺作物生物学与种质创新重点实验室江苏南京210095 中国农业大学烟台研究院山东烟台264670 中国农业大学烟台研究院山东烟台264670

肌动蛋白解聚因子(Actin Depolymerizing Factors,ADFs)作为一个重要的肌动蛋白调节因子在植物防御真菌侵染过程起重要作用.本研究对大白菜ADF7和ADF10基因进行了序列和诱导表达特征分析.序列分析表明大白菜的ADF7基因与物种ADF7基因有... 详细信息

肌动蛋白解聚因子(Actin Depolymerizing Factors,ADFs)作为一个重要的肌动蛋白调节因子在植物防御真菌侵染过程起重要作用.本研究对大白菜ADF7和ADF10基因进行了序列和诱导表达特征分析.序列分析表明大白菜的ADF7基因与物种ADF7基因有较高的同源性,并且大白菜中的ADF7和ADF10具有相似的分子量和等电点,都没有信号肽.实时定量PCR(RT-PCR)对大白菜ADFs基因受病原菌侵染诱导表达特点分析表明,灰霉病原菌侵染后,ADF7和ADF10基因均呈现双波表达特点,分别在侵染12h和48h时表达量出现高峰值,表明ADFs基因在调节肌动蛋白的聚合和解聚过程中起协同表达作用.

关键词：大白菜肌动蛋白解聚因子基因表达灰霉菌

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