检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2019年第10期49卷 1277-1282页

作者：周岩岩李玲霞吴锦艳余树芳李娇阳刘丹冯倩孙晶晶何苗魏凡华尚佑军宁夏大学农学院宁夏银川750021 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036

为开发可用于小反刍兽疫病毒(PPRV)诊断及其抗原的检测方法,参考GenBank中PPRV Nigeria75/1株N基因序列设计引物,采用RT-PCR方法获得目的基因后连接到载体pCzn1中,转化到大肠杆菌DH5α克隆菌株,经PCR和双酶切鉴定测序后,将阳性克隆转化... 详细信息

为开发可用于小反刍兽疫病毒(PPRV)诊断及其抗原的检测方法,参考GenBank中PPRV Nigeria75/1株N基因序列设计引物,采用RT-PCR方法获得目的基因后连接到载体pCzn1中,转化到大肠杆菌DH5α克隆菌株,经PCR和双酶切鉴定测序后,将阳性克隆转化至大肠杆菌BL21 (DE3)菌株后采用IPTG进行诱导表达。结果表明,成功地构建了含有小反刍兽疫病毒N基因的重组质粒pCzn1-N;诱导条件经过优化后N蛋白为可溶性表达,重组蛋白大小约为64 ku,能够与PPRV阳性血清较好地反应;制备的家兔多克隆抗体效价为1∶128 000,经过纯化后抗体效价为1∶64 000且具有较高的结合特异性;用间接ELISA和Western-blot对N蛋白纯化后制备的家兔多克隆抗体进行分析,发现重组N蛋白的免疫原性良好,且制备的多克隆抗体特异性良好。这表明重组的N蛋白具有较高的特异性及反应活性。

关键词：小反刍兽疫病毒 N基因原核表达

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一例犬吉氏巴贝斯虫病的诊治

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畜牧兽医杂志 2022年第1期41卷 84-86,89页

作者：王品雪杜嘉玥要慧中周璐露刘光远林青西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 家畜疫病病原生物学国家重点实验室(中国农业科学院兰州兽医研究所) 西安西北农林科大动物医院

3岁雄性贵宾犬,体重3.20 kg,免疫完全,未绝育,从未进行过体内外驱虫,院内散养。主诉最近2周发现犬的精神状态渐差,进食量逐渐减少。为了对其进行诊治,采用体格检查、血液学检查以及影像学检查的方法进行诊断,并根据诊断结果进行治疗,结... 详细信息

3岁雄性贵宾犬,体重3.20 kg,免疫完全,未绝育,从未进行过体内外驱虫,院内散养。主诉最近2周发现犬的精神状态渐差,进食量逐渐减少。为了对其进行诊治,采用体格检查、血液学检查以及影像学检查的方法进行诊断,并根据诊断结果进行治疗,结果表明,该犬感染吉氏巴贝斯虫且并发肝脏损伤,通过采取输血、驱虫等治疗措施,患犬的临床症状消失,镜检外周血虫体消失,治疗后未见复发。说明临床上可通过血液学检测对犬的吉氏巴贝斯虫感染进行确诊,且输血结合驱虫治疗可有效治疗该病。

关键词：犬吉氏巴贝斯虫巴贝斯虫病诊断治疗

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猪圆环病毒3型Cap蛋白单克隆抗体的制备及其在免疫组化试验中的初步应用

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中国预防兽医学报 2019年第2期41卷 174-178页

作者：赵冬王小波高清清郇长超王万彬高崧刘秀梵农业部禽用生物制品创制重点实验室江苏扬州225009 农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 扬州大学农业科技发展研究院江苏扬州225009 扬州大学兽医学院江苏扬州225009 江苏省研究生工作站江苏泰州225511

为制备猪圆环病毒3型(PCV3)Cap蛋白单克隆抗体(MAb),并初步应用于感染细胞或组织样品中PCV3抗原的间接免疫荧光试验(IFA)或免疫组化(IHC)检测,本研究将PCV3 Cap蛋白的去核定位信号肽基因克隆于原核表达载体pET-28a中,经IPTG诱导表达了... 详细信息

为制备猪圆环病毒3型(PCV3)Cap蛋白单克隆抗体(MAb),并初步应用于感染细胞或组织样品中PCV3抗原的间接免疫荧光试验(IFA)或免疫组化(IHC)检测,本研究将PCV3 Cap蛋白的去核定位信号肽基因克隆于原核表达载体pET-28a中,经IPTG诱导表达了具有免疫原性的融合蛋白。以表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,共获得8株能够稳定分泌针对PCV3 Cap蛋白的MAb杂交瘤细胞株。Western blot与IFA试验结果显示,8株MAbs均能够与真核表达的重组Cap蛋白反应。选取3株杂交瘤细胞制备3株MAbs,小鼠腹水效价分别为1∶409 600、1∶204 800和1∶409 600。利用3株MAbs对自然感染PCV3临床病猪的腹股沟淋巴结进行IHC检测,结果显示3株MAbs的腹水均能够与感染PCV3的临床样品发生特异性的免疫反应。本研究制备的MAbs具有较好的特异性,为深入研究Cap蛋白的结构和PCV3快速诊断奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒3型 Cap蛋白单克隆抗体免疫组化

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基于网络药理学探究马齿苋缓解结肠炎的作用机制

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世界中医药 2020年第24期15卷 3748-3760页

作者：张子越殷斌连锐锐张璐刘译心李真孙传熙刘月月杨世发李桂明傅剑赵增成黄中利林树乾刘远飞万仁忠山东农业大学动物科技学院泰安271018 山东省农业科学院家禽研究所新兽药研发室济南250023

目的:利用网络药理学探究马齿苋活性成分缓解结肠炎的作用机制。方法:基于TCMSP数据库获得其活性成分和对应靶标,利用STRING进行靶标间互作分析并筛选核心靶标,经KEGG富集分析得到马齿苋治疗疾病的相关信号通路。基于Drugbank数据库获... 详细信息

目的:利用网络药理学探究马齿苋活性成分缓解结肠炎的作用机制。方法:基于TCMSP数据库获得其活性成分和对应靶标,利用STRING进行靶标间互作分析并筛选核心靶标,经KEGG富集分析得到马齿苋治疗疾病的相关信号通路。基于Drugbank数据库获取结肠炎的相关疾病靶标,与马齿苋成分靶标进行映射,得到马齿苋治疗结肠炎的作用机制。结果:共筛选获得马齿苋活性成分花生四烯酸、β-谷甾醇、山柰酚、木犀草素、异甜菜素、槲皮素等10个,其对应靶标共187个,核心靶标共62个,经KEGG富集分析发现核心靶标与癌症、病毒感染、炎症性肠炎和免疫调节相关通路密切相关,并通过ABCC4、ABCG2、ACAT1、ALB、ALOX5、CYP3A4、IFNG、IKKA、MPO、NOS2、NQO1、NR1I2、PPARG、PTGS1、PTGS2、TNF、XDH起到治疗结肠炎的作用。结论:马齿苋可通过抗炎、抗氧化和调节细胞增殖与凋亡发挥多靶点、多通路缓解结肠炎的作用。

关键词：马齿苋网络药理学结肠炎作用机制

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TsGAD基因沉默对旋毛虫抗酸影响及其间接ELISA方法建立

TsGAD基因沉默对旋毛虫抗酸影响及其间接ELISA方法建立

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作者：张妍东北农业大学

学位级别：硕士

旋毛虫病是由旋毛形线虫（Trichinella spiralis）引起的一种危害严重的人兽共患线虫病,旋毛虫病对畜牧业及人类健康造成了严重危害,是目前世界范围内投入防控费用最高的食源性人兽共患寄生虫病之一。人和动物感染旋毛虫病主要是因为富... 详细信息

旋毛虫病是由旋毛形线虫（Trichinella spiralis）引起的一种危害严重的人兽共患线虫病,旋毛虫病对畜牧业及人类健康造成了严重危害,是目前世界范围内投入防控费用最高的食源性人兽共患寄生虫病之一。人和动物感染旋毛虫病主要是因为富含肌幼虫包囊的肉被其吞食导致。包囊在胃酸的作用下,释放出感染性肌幼虫,肌幼虫经数小时后钻入小肠,在小肠内产生新生幼虫继续其下一阶段生活史。旋毛虫的致病过程类似于大肠杆菌进入机体要经过胃部极酸性环境。近年来,关于致病性大肠杆菌抗酸系统的研究成果尤为显著。加强对旋毛虫病的检验与诊断,是控制该病的唯一有效途径。本研究利用siRNA干扰技术抑制旋毛虫TsGAD基因的表达,进而研究谷氨酸依赖型抗酸系统在旋毛虫抗酸机制中作用。同时,以旋毛虫的谷氨酸脱羧酶（TsGAD）、谷氨酰胺酶（TsGLS）为包被抗原成功建立两种间接ELISA方法。本研究根据NCBI已发表的TsGAD mRNA序列,设计3条靶向沉默TsGAD的干扰序列siRNAs:GAD-siRNA1、GAD-siRNA2和GAD-siRNA3及一条阴性对照:control siRNA。通过浸染法在Lipofectin 2000的作用下将siRNAs导入旋毛虫体内,利用免疫荧光技术确定转染时间为12 h。应用实时荧光定量PCR（qPCR）技术、Western blot（WB）技术检测RNA干扰技术对TsGAD基因表达量的影响。qPCR和WB的结果显示,三条siRNAs序列均能抑制TsGAD基因的表达,其中GAD-siRNA1序列对TsGAD基因的抑制效果最好,抑制率为51.70%56.70%。同时,通过qPCR和WB实验确立siRNA最适转染浓度为2μM。体外酸性环境培养TsGAD基因沉默的旋毛虫,从TsGAD基因的表达量、TsGAD酶活性、虫体存活率和培养基pH值变化等方面研究旋毛虫的抗酸机制。研究结果表明,酸性环境可以诱导TsGAD基因的表达,相同pH条件下,干扰组的酶活性比PBS组低;酸性条件下酶活性高。在同一pH值的培养液中,随着培养时间的增加,各组旋毛虫的存活率降低;在pH 6.6时各组旋毛虫的存活率最高;相同培养时间和相同pH下,GAD-siRNA1组旋毛虫的存活率明显低于PBS组。GAD-siRNA1组与PBS相比,培养基pH值升高不明显。用TsGAD基因沉默后的旋毛虫感染小鼠,从旋毛虫成虫的减虫率、RCI、LPG、肌幼虫减虫率和肌幼虫保姆细胞壁的厚度等方面研究TsGAD基因沉默后的旋毛虫感染小鼠的能力。研究结果显示,与PBS组相比,GAD-siRNA1组成虫减虫率为31.50%,RCI为62.51±7.32,LPG为1250.22±146.48;肌幼虫的减虫率为49.15%;F1代保姆细胞壁增厚,周围有大量炎性物质。以上研究结果揭示,TsGAD基因在旋毛虫抗酸过程中起到非常重要作用。将TsGAD基因沉默后旋毛虫的F1代肌幼虫酸性条件下培养,研究结果为F1代肌幼虫在pH 2.5的培养基中培养2 h后的存活率为57%,与F0代旋毛虫的存活率差异显著,说明siRNA的干扰效果不可以延续给下一代。本研究分别以旋毛虫TsGAD、TsGLS重组蛋白作为包被抗原,建立两种检测旋毛虫血清抗体的间接ELISA方法。分别对抗原包被量、血清稀释度、抗原包被条件、封闭液的选择与封闭时间、酶标二抗的稀释度与孵育时间和TMB作用时间等条件进行了优化。研究结果显示TsGAD重组抗原间接ELISA方法的最适抗原包被量为50 ng,最适血清稀释度为1:200,最适抗原包被条件为4℃过夜包被,最适封闭液为5%脱脂乳,最适封闭时间为37℃封闭2 h,酶标二抗的最适稀释度为1:5000,最适孵育时间为37℃封闭1 h,TMB作用时间为15 min;TsGLS重组抗原间接ELISA方法的最适抗原包被量为100 ng,最适血清稀释度为1:800,最适抗原包被条件为4℃过夜包被,最适封闭液为5%脱脂乳,最适封闭时间为37℃封闭2 h,酶标二抗的最适稀释度为1:5000,最适孵育时间为37℃封闭1 h,TMB作用时间为15 min。TsGAD重组抗原间接ELISA方法的阴阳性临界值判定标准为0.848,TsGLS重组抗原间接ELISA方法的阴阳性临界值判定标准为0.963。通过重复性实验、敏感性实验、特异性实验和对比实验检测了本研究建立的两种间接ELISA方法的准确性。研究结果显示,TsGAD重组抗原间接ELISA方法批内重复性实验的最大变异系数为5.647%,批间重复性实验最大变异系数6.049%,均小于10%,重复性好;当旋毛虫阳性血清稀释3200倍时,测得P/N值大于2.1,显示阳性,表明敏感性高;对猪蛔虫、华支睾吸虫、血吸虫和弓形虫阳性血清进行了检测,均无交叉反应,表明该方法

关键词：旋毛虫 RNA干扰 TsGAD TsGLS 间接ELISA

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大片吸虫钙结合蛋白2基因的克隆表达及其表达产物的免疫活性研究

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中国兽医科学 2019年第3期49卷 294-300页

作者：袁晓丹张念章黄思扬马元元王春仁朱兴全黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 扬州大学兽医学院江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

通过克隆、表达大片吸虫钙结合蛋白2(FgCaBP2)基因,旨在探索其作为诊断抗原的可行性。在分析大片吸虫蛋白组数据的基础上,根据肝片吸虫CaBP2基因组序列和转录组数据,设计以NdeⅠ和XhoⅠ作为酶切位点的引物。以大片吸虫总RNA为模板,通过R... 详细信息

通过克隆、表达大片吸虫钙结合蛋白2(FgCaBP2)基因,旨在探索其作为诊断抗原的可行性。在分析大片吸虫蛋白组数据的基础上,根据肝片吸虫CaBP2基因组序列和转录组数据,设计以NdeⅠ和XhoⅠ作为酶切位点的引物。以大片吸虫总RNA为模板,通过RT-PCR获得FgCaBP2基因,对其进行测序、生物信息学分析。构建pET-30a-FgCaBP2重组表达载体,在大肠杆菌Transetta(DE3)感受态细胞中完成诱导、表达;对纯化的目的蛋白进行SDS-PAGE和Western-blot分析,并用目的蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体。结果表明,FgCaBP2基因的开放阅读框长570 bp,编码189个氨基酸残基。生物信息学预测显示,FgCaBP2主要以α螺旋为主,β折叠较少,有7个β转角、4个较长的无规则卷曲、含有4个亲水区、具有较多的B细胞抗原表位。SDS-PAGE分析表明,FgCaBP2呈现出可溶性表达。Western-blot分析表明,25 ku大小的特异性目的蛋白条带能够很好地被大片吸虫感染的阳性水牛血清识别,具有良好的免疫反应性。本研究成功克隆了FgCaBP2基因,并获得了可溶性重组蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性,是潜在的大片吸虫病诊断抗原。

关键词：大片吸虫钙结合蛋白2(CaBP2) 克隆表达诊断候选抗原

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大片吸虫钙结合蛋白-2(CaBp2)基因的克隆、表达及免疫反应性研究

大片吸虫钙结合蛋白-2(CaBp2)基因的克隆、表达及免疫反应性研究

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第十一届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会

作者：袁晓丹侯俊玲田艾灵黄思扬王春仁朱兴全黑龙江八一农垦大学动物科技学院中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室扬州大学兽医学院/江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心

目的克隆、表达大片吸虫钙结合蛋白-2(Ca Bp2),并探索其作为诊断抗原的可行性。方法鉴定大片吸虫后,以肝片吸虫Ca Bp2的基因序列为模板,设计以Nde 1和Xho 1作为酶切位点的Ca Bp2蛋白的引物。提取大片吸虫总RNA,利用RT-PCR克隆出目的基因... 详细信息

目的克隆、表达大片吸虫钙结合蛋白-2(Ca Bp2),并探索其作为诊断抗原的可行性。方法鉴定大片吸虫后,以肝片吸虫Ca Bp2的基因序列为模板,设计以Nde 1和Xho 1作为酶切位点的Ca Bp2蛋白的引物。提取大片吸虫总RNA,利用RT-PCR克隆出目的基因,对其进行测序鉴定、生物信息学分析、系统进化分析。构建p ET-30a-Fg Ca Bp2重组表达载体后,在大肠杆菌Transetta(DE3)感受态细胞中完成诱导、表达;对纯化的目的蛋白进行SDS-PAGE和Western-blot分析;目的蛋白免疫家兔后,制备多克隆抗体。结果大片吸虫Ca Bp2开放阅读框为570 bp,编码189个氨基酸残基。生物信息学预测表明,CaBp2主要以α螺旋为主,β折叠较少;具有较多B细胞抗原表位。Ca Bp2呈现出可溶性表达。Western blotting检测结果表明所表达的蛋白在25 kD处存在特异性条带,其具有良好的免疫反应性。结论成功克隆大片吸虫Ca Bp2基因,其表达产物能与该蛋白的特异性多克隆抗体产生良好的免疫反应性,是潜在的大片吸虫病诊断抗原。

关键词：大片吸虫钙结合蛋白-2(CaBp2) 克隆表达诊断候选抗原

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒依赖Caspase途径诱导仔猪胸腺细胞凋亡

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中国预防兽医学报 2016年第12期38卷 930-933页

作者：张冲赵识非王刚于颖刘永刚常亚飞涂亚斌王淑杰姜成刚蔡雪辉吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物疫病诊断中心黑龙江哈尔滨150069

为研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Hu N4株诱导断奶仔猪胸腺细胞凋亡的分子机制,本实验通过免疫荧光技术、流式细胞术、荧光定量PCR和western blot等方法检测HP-PRRSV感染仔猪胸腺内细胞凋亡相关因子Caspase-8、Caspase-9... 详细信息

为研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Hu N4株诱导断奶仔猪胸腺细胞凋亡的分子机制,本实验通过免疫荧光技术、流式细胞术、荧光定量PCR和western blot等方法检测HP-PRRSV感染仔猪胸腺内细胞凋亡相关因子Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3表达量的变化。结果显示:HP-PRRSV感染仔猪后,胸腺内表达凋亡相关蛋白Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3的细胞比例显著升高,并且凋亡相关蛋白Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3表达量也明显升高。以上结果表明:HP-PRRSV感染仔猪引起胸腺细胞凋亡是通过Caspase依赖性通路介导。本研究为进一步了解HP-PRRSV感染机制提供了实验依据。

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞凋亡 Caspase-8 Caspase-9 Caspase-3

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大肠埃希菌F4菌毛凝集性单抗制备及抗原表位差异

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2017年第1期38卷 12-15,34页

作者：马琰王一亭赵静权国梅宗秋芳包文斌夏芃芃朱国强扬州大学兽医学院/江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009

采用杂交瘤单克隆抗体制备技术,获得4株能稳定分泌产肠毒素大肠埃希菌(ETEC)F4菌毛特异性抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为8EH2、8EH3、9E10、11D4。免疫印迹和凝集反应结果表明:这4株单抗均能与纯化的F4菌毛蛋白发生特异性反应,且与F4大... 详细信息

采用杂交瘤单克隆抗体制备技术,获得4株能稳定分泌产肠毒素大肠埃希菌(ETEC)F4菌毛特异性抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为8EH2、8EH3、9E10、11D4。免疫印迹和凝集反应结果表明:这4株单抗均能与纯化的F4菌毛蛋白发生特异性反应,且与F4大肠埃希菌不同血清型变异株F4ab、F4ac和F4ad发生特异性肉眼可见的凝集反应;而与F18、F6(987P)、F5(K99)产肠毒素大肠埃希菌参考株、分离株以及肠炎沙门氏菌参考株50336、分离株等多种肠杆菌科细菌无任何交叉反应。对单抗亚类的特性检测结果显示,这4株单抗均属于IgG1抗体,且主要识别F4ac的抗原表位,其中,8EH2、8EH3、9E10也能够较好地识别F4ab的抗原表位。结果说明F4菌毛凝集性单克隆抗体为ETEC F4感染的快速特异诊断提供技术基础。

关键词：产肠毒素大肠埃希菌F4 凝集性单克隆抗体抗原表位

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兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌复合PCR方法的建立及临床应用

兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌复合PCR方法的建立及临床...

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中国畜牧兽医学会养兔学分会成立大会暨第一届学术交流大会

作者：范志宇魏后军胡波宋艳华王芳薛家宾徐为中苏国清江苏省农业科学院兽医研究所·农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心

本研究旨在建立检测家兔多杀性巴氏杆菌（Pm）和支气管败血波氏杆菌（Bb）的复合PCR方法。本实验室已经建立了支气管败血波氏杆菌PCR检测方法,特异性引物为P1:5'-TGAACAATGGCGTGAAAGC-3',P2:5'-TCGATAGTAGGACGGGAGGAT-3... 详细信息

本研究旨在建立检测家兔多杀性巴氏杆菌（Pm）和支气管败血波氏杆菌（Bb）的复合PCR方法。本实验室已经建立了支气管败血波氏杆菌PCR检测方法,特异性引物为P1:5'-TGAACAATGGCGTGAAAGC-3',P2:5'-TCGATAGTAGGACGGGAGGAT-3',预期扩增的DNA产物片段大小为425 bp。根据GenBank中多杀性巴氏杆菌ATP合成酶（atpB）基因的保守序列,设计一对特异性引物,P1:5'-TTCTGTTCGCTTCATCCT-3',P2:5'-CTGTTCTGTTCGCTTCATC-3',预期扩增的DNA产物片段大小为1141 bp,成功建立巴氏杆菌PCR检测方法。将两种PCR方法进行合并,对PCR反应中的Mg浓度、Taq酶浓度、DNA模板量、退火温度等进行筛选优化。反应体系:Taq DNA聚合酶0.5μL,10×PCR buffer 2.5μL,25mM MgCl2.5μL,2.5mM dNTPs2.0μL,P3、P4各1.0μL,DNA模板4.0μL,ddHO11.5μL。反应条件:94℃预热5 min;94℃变性30 s,53.9℃退火30 s,72℃复性80 s,30个循环;72℃延伸10min。经反应条件的优化,成功建立Pm、Bb复合PCR诊断方法。将Pm和Bb的DNA模板做10倍梯度稀释,连续稀释8个梯度,每个梯度取8μL模板加入复合PCR反应体系(单个反应体系含有支气管败血波氏杆菌和多杀性巴氏杆菌分别为4×10～5×10CFU)进行敏感性试验。结果显示,该方法检出的最小Pm和Bb菌数分别为40CFU和4CFU。对兔源产气荚膜梭菌、大肠杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、猪鼻支原体、链球菌的检测结果均为阴性,说明该方法具有良好的特异性。用建立的方法对2012年度至2014上半年在江苏、浙江、安徽及广东四省采集的临床鼻拭子样本共712份进行检测。结果显示,Pm阳性率为25.56%,Bb阳性率为34.55%,双阳性率为13.20%;各年度、各地区、不同品种的鼻拭子样品均能检测到支气管败血波氏杆菌和多杀性巴氏杆菌。肉兔品种的阳性率显著低于獭兔和毛兔,可能由于獭兔和毛兔比肉兔的饲养周期长有关;对南京市某兔场不同月份呼吸道鼻拭子样本检测。结果显示,在天气状况较好的4、10、11月（春秋季）和天气较热的6、7月（夏季）,Bb阳性率分别为31.21%和25.61%,Pm阳性率分别为21.47%和22.56%,Pm的检出率没有明显变化。而Bb检出率有明显差别,春秋季明显高于夏季。不同场次的临床样品检测显示,Bb的阳性率均明显高于Pm,有的阳性率甚至达到50%,可能是由于多杀性巴氏杆菌有疫苗可以用于免疫,而波氏杆菌暂时没有疫苗提供。综上结果显示,该复合PCR方法能快速、敏感地从家兔鼻拭子样品中检出Pm和Bb,为临床疾病检测和流行病学调查提供技术保障。

关键词：兔支气管败血波氏杆菌多杀性巴氏杆菌复合PCR

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