检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2014年第12期44卷 1273-1278页

作者：杨勃兰喜杨彬柳纪省单兴娜刘伟王恩丽张韵马小军甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

为获得猪源札幌病毒(SaV)衣壳蛋白(VP1),以SaV CH430株的RNA为模板,采用RT-PCR扩增VP1基因;将其克隆到原核表达载体pET-30a中,并将成功构建的原核表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。结果显示,获得的VP1基因全长为1 635bp... 详细信息

为获得猪源札幌病毒(SaV)衣壳蛋白(VP1),以SaV CH430株的RNA为模板,采用RT-PCR扩增VP1基因;将其克隆到原核表达载体pET-30a中,并将成功构建的原核表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。结果显示,获得的VP1基因全长为1 635bp,编码545个氨基酸。SDS-PAGE结果显示,目的条带大小为63ku,与预期结果相符。重组菌在37℃、IPTG终浓度为0.8mmol/L、诱导表达6h时重组蛋白的表达量达到最大值,表达的目的蛋白主要以包涵体的形式存在。将纯化的VP1重组蛋白免疫家兔,得到了超免疫血清。Western-blot分析表明,该重组蛋白与超免疫血清具有良好的反应原性。上述试验结果为深入研究VP1蛋白的功能和研制ELISA诊断试剂盒奠定了基础。

关键词：猪札幌病毒衣壳蛋白原核表达

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西尼罗病毒NS1与E基因重组腺病毒的构建及免疫原性研究

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中国预防兽医学报 2014年第11期36卷 881-884页

作者：刘二战赵国辉孙恩成崔焕忠杨涛徐青元孙晶孙亮席娜魏天吴东来吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为构建串联表达西尼罗病毒(WNV)NS1和E基因的重组腺病毒,本研究利用口蹄疫病毒具有自我切割功能的2A蛋白的编码序列将NS1和E基因串联,构建穿梭载体p Shuttle-WNV-NS1-2A-E,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒DNA,经脂质体转染AD293细胞,... 详细信息

为构建串联表达西尼罗病毒(WNV)NS1和E基因的重组腺病毒,本研究利用口蹄疫病毒具有自我切割功能的2A蛋白的编码序列将NS1和E基因串联,构建穿梭载体p Shuttle-WNV-NS1-2A-E,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒DNA,经脂质体转染AD293细胞,在细胞内完成病毒粒子的组装制备重组腺病毒。通过间接免疫荧光和western blot检测表明:重组腺病毒中的外源基因表达的融合蛋白NS1-2A-E可以自我裂解为NS1和E蛋白。将构建的重组腺病毒免疫小鼠,结果表明该重组病毒可以诱导机体产生良好的体液免疫应答。本实验为WNV重组腺病毒活载体疫苗的研制奠定了基础。

关键词：西尼罗病毒 NS1 E 重组腺病毒体液免疫

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羊口疮病毒B2L蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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中国兽医科学 2014年第7期44卷 704-709页

作者：孔汉金张克山刘永杰尚佑军刘湘涛吴斌华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物医学院湖北武汉430070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为制备抗羊口疮病毒B2L蛋白的单克隆抗体,应用PCR扩增羊口疮病毒B2L基因并将其克隆到原核表达载体pET-30a进行表达。以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,并利用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。结果显示,获得了4株稳定分泌抗羊口疮病毒... 详细信息

为制备抗羊口疮病毒B2L蛋白的单克隆抗体,应用PCR扩增羊口疮病毒B2L基因并将其克隆到原核表达载体pET-30a进行表达。以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,并利用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。结果显示,获得了4株稳定分泌抗羊口疮病毒B2L蛋白的单克隆抗体细胞株,其抗体亚类均为IgG1。Western-blot鉴定结果和间接荧光抗体试验表明,4株单克隆抗体均能特异性识别羊口疮病毒。经鉴定,4株单克隆抗体细胞培养上清效价为1∶640~1∶1 280,腹水效价为1∶25×211~1∶25×212。染色体计数表明,4株杂交瘤细胞均是SP2/0细胞与脾细胞的杂交产物。结果表明,抗羊口疮病毒单克隆抗体的成功制备,为进一步研究羊口疮病毒的生物学特性及羊口疮快速诊断方法的建立奠定了基础。

关键词：羊口疮病毒杂交瘤单克隆抗体 ELISA 鉴定

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高致病性PRRSV HuN4株不同代次病毒对仔猪胸腺损伤的研究

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中国预防兽医学报 2014年第5期36卷 343-345,382页

作者：陶冶王刚刘永刚李莉李爱东于颖涂亚斌王淑杰姜成刚蔡雪辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物疫病诊断中心黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100

为研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)不同致弱代次病毒对断奶仔猪胸腺的损伤,本研究选用HP-PRRSV HuN4株在Marc-145细胞中传代致弱的F5、F15、F23、F30代及弱毒疫苗HuN4 F112代分别接种30日龄的PRRSV抗原及抗体阴性健康断... 详细信息

为研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)不同致弱代次病毒对断奶仔猪胸腺的损伤,本研究选用HP-PRRSV HuN4株在Marc-145细胞中传代致弱的F5、F15、F23、F30代及弱毒疫苗HuN4 F112代分别接种30日龄的PRRSV抗原及抗体阴性健康断奶仔猪。实验结果显示:HuN4 F30感染组胸腺的眼观病变、胸腺重量、病理组织学变化、病毒载量及胸腺细胞凋亡比例均与F23感染组有显著差别(p<0.05)。本实验结果表明,HuN4 F23代仍然能够引起仔猪胸腺萎缩并导致机体免疫抑制,而F30代已不能引起断奶仔猪胸腺萎缩现象。因此,HP-PRRSV HuN4 F23、F30代可以作为研究HP-PRRSV HuN4致胸腺萎缩的分子机制的关键代次。本研究为进一步研究HP-PRRSV感染诱导仔猪胸腺萎缩和胸腺细胞凋亡的分子机制奠定了基础。

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株致弱病毒胸腺萎缩细胞凋亡

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A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的表达纯化及活性检测

A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的表达纯化及活性检测

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中国畜牧兽医学会2013年学术年会

作者：刘畅卢清侠杨继飞王世红王寅彪郭官鹏邓瑞广张改平河南农业大学河南省农业科学院农业部动物免疫学重点开放实验室河南省动物免疫学重点实验室

前言口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(FMD virus,FMDV)引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。FMD的传播途径广泛,传染性强,曾在一些地区和国家多次发生大流行,严重威胁畜牧业发展,被国际兽医局列为A类... 详细信息

前言口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(FMD virus,FMDV)引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。FMD的传播途径广泛,传染性强,曾在一些地区和国家多次发生大流行,严重威胁畜牧业发展,被国际兽医局列为A类传染病之首。FMDV有7个血清型,分别为:A、O、C、Asia1、SAT1、SAT2和SAT3型。其中,O型、A型及Asia1型在我国呈现出交替流行的态势,且涉及面广,疫情复杂,破坏性强。FMDV结构蛋白VP1暴露于病毒衣壳表面,含有大量能够刺激机体产生体液免疫和细胞免疫的抗原决定簇,能诱导机体产生中和抗体。其在促进抗原变异上有允许产生高度的序列变异和使它同其他外壳蛋白间的结构交流更容易的作用。因此,VP1成为研究各种FMD基因工程疫苗的首要候选蛋白。材料方法以A型vp1重组质粒pMD19T-A--vp1为模板,利用PCR扩增得到A型FMDV vp1基因片段,将此基因片段与原核表达载体pET28a连接,构建重组质粒pET-Avp1。经IPTG诱导表达含重组质粒pET-A-vp1的*** BL21(DE3)菌后,通过对IPTG浓度及诱导时间进行优化,通过Western-Blot、ELISA检测VP1包涵体蛋白经洗涤纯化后的活性。结果经IPTG诱导表达含重组质粒pET-A-vp1的E coliBL21(DE3)菌后,SDS-PAGE显示VP1蛋白以包涵体形式获得高效表达,蛋白分子质量约为29ku。通过对IPTG浓度及诱导时间进行优化,发现在37℃条件下,IPTG终浓度为0.3mmol/L,诱导表达6h后,VP1蛋白的表达量最大。Western-.Blot分析表明,VP1重组蛋白能够被A型口蹄疫阳性血清特异性识别。ELISA检测结果显示VP1包涵体蛋白经洗涤纯化,尿素浓度梯透析复性后具有较高的活性。A型FMDV VPI活性蛋白的成功表达为进一步研制口蹄疫基因工程疫苗和诊断试剂盒奠定了基础。

关键词： A型口蹄疫病毒 VP1蛋白原核表达蛋白纯化活性鉴定

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绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)丙酮酸脱氢酶E1-α亚单位基因(pdha)的克隆、表达及其免疫学活性测定

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农业生物技术学报 2012年第3期20卷 275-282页

作者：许健储岳峰高鹏程赵萍贺英剡根强逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃省生物检测工程技术研究中心石河子大学动物科技学院

丙酮酸脱氢酶α-亚单位（PDHA）在病原体丙酮酸脱氢酶的催化过程中发挥着重要作用。为表达绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae）PDHA蛋白并测定其免疫学活性,应用PCR方法扩增出绵羊肺炎支原体pdha基因并对其序列进行分析,将pdha... 详细信息

丙酮酸脱氢酶α-亚单位（PDHA）在病原体丙酮酸脱氢酶的催化过程中发挥着重要作用。为表达绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae）PDHA蛋白并测定其免疫学活性,应用PCR方法扩增出绵羊肺炎支原体pdha基因并对其序列进行分析,将pdha基因中色氨酸密码子TGA优化为TGG后进行全基因合成,插入到pET32-a（+）载体上,构建了pET32-a（+）-pdha重组质粒,将重组质粒转化到大肠杆菌（Escherichia coli）BL21中诱导表达PDHA蛋白,并通过免疫印迹及小鼠（Mus musculus）免疫试验对其免疫学活性进行测定。结果pdha基因全长1125bp,编码375aa,（G+C）%为34.76%,第304;06位、379;81位、586;88位、592;94位、625;27位、811;13位、889;91位及964;66位TGA在支原体中编码色氨酸而不是作为终止密码子;基因序列比对及进化树分析显示,绵羊肺炎支原体pdha基因与10种支原体的pdha基因序列同源性为32.6%;5.3%,氨基酸序列同源性为39.3%;0.6%,基因序列和氨基酸序列均与猪肺炎支原体（***）有同源性,分别为85.3%和90.6%;绵羊肺炎支原体pdha基因在33℃、IPTG0.25mmol/L诱导6h的表达条件下,表达量最高;重组的PDHA蛋白可与绵羊肺炎支原体高免血清具有免疫印迹条带,在免疫小鼠后血清抗体效价与对照组相比,均显著升高（P<0.05）。本实验首次成功克隆表达了绵羊肺炎支原体pdha基因,并证明其重组PDHA蛋白具有较好的免疫学活性。为绵羊支原体肺炎基因工程疫苗及诊断研究提供候选靶标。

关键词：绵羊肺炎支原体 pdha基因克隆 PDHA蛋白表达免疫学活性

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表达H5亚型禽流感同义(Consensus)HA蛋白的重组质粒构建及体外表达

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中国预防兽医学报 2012年第7期34卷 510-513页

作者：常晓飞赵双成田石柳金雄王靖飞曾显营胡永浩姜永萍陈化兰甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730007 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所疫病诊断与技术服务中心黑龙江哈尔滨150001

为研究禽流感病毒(AIV)H5亚型同义Consensus HA(Cons-HA5)基因的重组表达质粒在体外的表达情况,本研究通过对从NCBI流感数据库中获得的5000条H5亚型AIV的HA蛋白的序列比对、分析获得一条同义HA蛋白,将其相对应的核苷酸序列进行鸡体偏嗜... 详细信息

为研究禽流感病毒(AIV)H5亚型同义Consensus HA(Cons-HA5)基因的重组表达质粒在体外的表达情况,本研究通过对从NCBI流感数据库中获得的5000条H5亚型AIV的HA蛋白的序列比对、分析获得一条同义HA蛋白,将其相对应的核苷酸序列进行鸡体偏嗜性密码子优化,人工合成Cons-HA5基因并克隆于真核表达载体pCAGGS中构建重组表达质粒pCACons-HA5。将重组质粒转染293-T细胞,在激光共聚焦显微镜下观察转染后不同时间HA蛋白的表达情况,同时在转染后24 h、48 h后分别进行表达蛋白的western blot检测。结果表明,pCACons-HA5转染293-T细胞后,其表达的HA蛋白先分布于细胞质中,而后转移至细胞膜表面;westernblot鉴定结果表明,Cons-HA5重组蛋白可以与AIV多克隆血清反应分子量约为70 ku。该重组质粒的构建将为进一步Cons-HA5核酸免疫对H5亚型不同抗原群AIV的交叉保护免疫效力研究奠定基础。

关键词： H5亚型禽流感病毒同义HA基因表达

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动物卫生风险分析与管理资源合理配置经济学评价的探讨

动物卫生风险分析与管理资源合理配置经济学评价的探讨

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中国技术经济论坛2012暨浙江省社会科学界首届学术年会

作者：陆昌华胡肄农谭业平臧一天江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

针对近年来国内外发生的一系列食品安全事件,为有效保障动物产品的供给与公共卫生安全,以稳步提升中国动物卫生安全水平为目标.本文从动物卫生风险分析与风险管理决策的基本步骤与方法进行阐述,指出风险管理决策评估的难点.以猪场疫病... 详细信息

针对近年来国内外发生的一系列食品安全事件,为有效保障动物产品的供给与公共卫生安全,以稳步提升中国动物卫生安全水平为目标.本文从动物卫生风险分析与风险管理决策的基本步骤与方法进行阐述,指出风险管理决策评估的难点.以猪场疫病传入的暴露评估模型为实例,阐述经济学在动物疫病损失及控制措施评估中的应用,指出经济学评估是以流行病学为基础,针对不同疫病和动物种类的特性和规律,分析不同层面的经济影响,需进一步进行动物疫病风险与经济学评估相结合的探讨.与此同时,针对中国现行风险管理机制的不足,展望未来,提出根据动物卫生风险管理机制的核心，分别对兽医管理体制、动物疫病防控体系及动物食品安全控制体系的现状及各自存在的一系列问题通过收集文献及专家访谈进行研究剖析与陈述，以确立现今动物卫生风险管理机制在运行过程中出现的问题。研究发现，动物卫生风险管理机制在具体形式上主要存在三个最突出的问题，即管理模式、法律法规、人才队伍。总之，不论是从动物卫生风险管理机制本身所具有的原则及程序角度，还是从动物卫生风险管理机制的核心目标及概念角度，实行动物及其产品风险的统一管理模式是解决动物卫生风险管理机制中各问题的必须途径，若要实现动物卫生及其产品安全，必须由单一部门针对动物及其产品卫生的各环节，在定期的风险评估后，进行动物卫生风险管理，解决各政府部门独立不协调及企业里“多妈与多爸”林立问题，从而提高动物卫生和食品安全预警能力和防控水平，促进动物及其产品的国际贸易，形成我国有效的动物卫生风险管理机制。

关键词：食品安全动物卫生风险管理资源配置经济学评估

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蓝舌病病毒重组VP7蛋白单克隆抗体制备及竞争ELISA检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2012年第5期34卷 388-392页

作者：耿宏伟秦永丽李俊平杨涛孙恩成刘霓红白安斌徐青元王凌凤赵晶覃绍敏林俊郭怡璠吴东来东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省农业科学院黑龙江哈尔滨150086 广西兽医研究所广西南宁530001 广西大学广西南宁530004

为了建立蓝舌病(BT)的血清学诊断方法,本研究利用原核表达的蓝舌病病毒(BTV)血清型12型VP7纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备2株单克隆抗体(MAb),分别命名为BTV-2D10和BTV-4H7。IFA试验表明,2株MAb均能与BTV 24个血清型发生特异性反应,而与... 详细信息

为了建立蓝舌病(BT)的血清学诊断方法,本研究利用原核表达的蓝舌病病毒(BTV)血清型12型VP7纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备2株单克隆抗体(MAb),分别命名为BTV-2D10和BTV-4H7。IFA试验表明,2株MAb均能与BTV 24个血清型发生特异性反应,而与茨城病病毒(IBAV)、中山病病毒(CV)、赤羽病病毒(AKAV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛轮状病毒(BRV)、牛肠道病毒(BEV)、牛呼肠孤病毒(RV)及口蹄疫病毒(FMDV)无交叉反应,表明2株MAb均为BTV群特异性抗体。采用重组表达的VP7蛋白作为包被抗原建立的竞争ELISA方法证明,BTV-4H7 MAb对不同血清型BTV阳性血清具有良好的阻断效果,而对AKAV、IBAV、BRV和FMDV阳性血清无阻断作用。本研究建立的竞争ELISA方法与IDEXX公司的试剂盒检测包括65份已知背景血清和322份采自广西省的山羊血清样品,检测结果符合率分别达100%和98%。该竞争ELISA方法的建立为BTV抗体的监测提供了安全、快速、准确的技术手段。

关键词：蓝舌病病毒重组VP7蛋白群特异性单克隆抗体竞争ELISA

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大肠杆菌O157:H7单克隆抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制

大肠杆菌O157:H7单克隆抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：夏兴霞王永山孟祥升朱国强张雪寒何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心扬州大学兽医学院

用*** O157:H7菌体免疫BALB/c鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了16株分泌单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株。其中,ID3、2E7和2H7三株为O157:H7特异单克隆抗体,Ig亚类分别为IgMκ、IgG2bκ和IgG2bκ,腹水抗体ELISA效价分别为... 详细信息

用*** O157:H7菌体免疫BALB/c鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了16株分泌单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株。其中,ID3、2E7和2H7三株为O157:H7特异单克隆抗体,Ig亚类分别为IgMκ、IgG2bκ和IgG2bκ,腹水抗体ELISA效价分别为103、105和106。用纯化的单克隆抗体2E7标记胶体金,制备金标抗体玻璃纤维素膜;将纯化的2H7和羊抗鼠IgG分别作为检测和对照捕捉抗体包被于硝酸纤维素膜(NC)上;组装成双抗夹心法O157:H7胶体金免疫层析检测试纸条。用该试纸条可特异检测O157:H7,敏感度为106CFU/ml,与相同单克隆抗体2H7和2E7建立的O157:H7夹心ELISA检测方法的敏感度相当,试纸条简便快速,在1～5 min内可得出检测结果,便于O157:H7的临床快速诊断与现场检测样品的快速筛查。

关键词：大肠杆菌O157:H7 单克隆抗体(mAb) 胶体金免疫层析试纸条人兽共患病

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