检索结果-内蒙古大学图书馆

迟缓爱德华菌(Edwardasiella tarda)对小鼠和剑尾鱼的免疫保护试验

中国兽医学报 2002年第3期22卷 251-253页

作者：熊清明陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

为了评价迟缓爱德华菌 (Edwardasiella tarda)的免疫保护效果 ,用致病性 *** JEL4的全菌灭活物 (FKC)和胞外产物 (ECP)分别 2次免疫小鼠 15 0只和 1次免疫剑尾鱼 30 0尾 ,7周后用同源菌株和异源菌株进行攻击。结果显示 ,除 ECP组对某一... 详细信息

为了评价迟缓爱德华菌 (Edwardasiella tarda)的免疫保护效果 ,用致病性 *** JEL4的全菌灭活物 (FKC)和胞外产物 (ECP)分别 2次免疫小鼠 15 0只和 1次免疫剑尾鱼 30 0尾 ,7周后用同源菌株和异源菌株进行攻击。结果显示 ,除 ECP组对某一异源菌株为 4/ 5保护外 ,免疫小鼠 FKC组和 ECP组全部获得保护 (5 / 5 )。在免疫的剑尾鱼中 ,FKC和 ECP组对同源菌株保护率分别为 6 0 %和 10 0 % ;对异源菌株的攻击 ,均不能全部保护 ,但

关键词：爱德华菌免疫保护小鼠剑尾鱼保护迟缓迟验

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禽腺病毒江苏分离株的细胞培养特性

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南京农业大学学报 2005年第2期28卷 140-143页

作者：周斌郑其升刘华雷曹瑞兵陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

为进一步研究的生物学特性,应用鸡胚成纤维细胞(CEF)和鸡胚肾细胞(CEK)培养禽腺病毒江苏分离株,进行培养特性、血凝特性、理化特性、超薄切片观察和PCR检测。实验结果表明,CEF感染病毒后没有出现病变。CEK感染病毒后则表现出很强的聚集... 详细信息

为进一步研究的生物学特性,应用鸡胚成纤维细胞(CEF)和鸡胚肾细胞(CEK)培养禽腺病毒江苏分离株,进行培养特性、血凝特性、理化特性、超薄切片观察和PCR检测。实验结果表明,CEF感染病毒后没有出现病变。CEK感染病毒后则表现出很强的聚集性并形成细胞团,有的成束状,最后脱落;ReedMuench方法测得其TCID50为每0.1mL10-5.4。CEK核内存在大量70～80nm、呈典型的晶格状排列的腺病毒颗粒。

关键词：培养特性禽腺病毒分离株江苏鸡胚成纤维细胞 TCID50 生物学特性 PCR检测血凝特性理化特性超薄切片病毒颗粒肾细胞 CEF 细胞团聚集性感染

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一株猪源脑心肌炎病毒的分离与鉴定

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中国兽医科学 2010年第12期40卷 1218-1222页

作者：白娟蒋康富王先炜李玉峰姜平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

将江苏省某规模化猪场疑似脑心肌炎仔猪病料接种BHK-21细胞,并采用间接免疫荧光试验（IFA）、基因序列测定和动物人工感染试验进行鉴定,结果显示,BHK-21细胞接种病料样品后盲传3代出现细胞病变,病毒TCID50为10-9.2/mL;用脑心肌炎病毒（E... 详细信息

将江苏省某规模化猪场疑似脑心肌炎仔猪病料接种BHK-21细胞,并采用间接免疫荧光试验（IFA）、基因序列测定和动物人工感染试验进行鉴定,结果显示,BHK-21细胞接种病料样品后盲传3代出现细胞病变,病毒TCID50为10-9.2/mL;用脑心肌炎病毒（EMCV）单克隆抗体-IFA检测,在感染细胞的胞浆中可见特异性荧光;分离物的PCR扩增产物的基因序列与GenBank中的EMCV VP1基因的同源性为85.7%~99.8%;BALB/c小鼠人工感染该分离株后出现明显的临床症状和EMCV的典型病理变化,免疫组织化学试验证明,试验鼠脑组织中含有EMCV抗原,商品仔猪人工感染后未出现明显的临床症状及病理变化,证明该分离病毒为EMCV（NJ08株）,且对BALB/c小鼠具有较强的致病作用。

关键词：脑心肌炎病毒分离鉴定

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猪链球菌2型江苏分离株溶血素的纯化

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中国预防兽医学报 2003年第5期25卷 363-365页

作者：方绍庆陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

将猪链球菌 2型 (Streptococcussuistype 2 )江苏分离株HA980 1接种于THB培养基中培养 ,得到含溶血素的培养液 ,其溶血价为 12 8,再经 5 0 %饱和硫酸铵沉淀 ,脱盐 ,得到溶血素粗提物 ,溶血价为 2 0 4 8。粗提物用阴离子交换柱层析及凝... 详细信息

将猪链球菌 2型 (Streptococcussuistype 2 )江苏分离株HA980 1接种于THB培养基中培养 ,得到含溶血素的培养液 ,其溶血价为 12 8,再经 5 0 %饱和硫酸铵沉淀 ,脱盐 ,得到溶血素粗提物 ,溶血价为 2 0 4 8。粗提物用阴离子交换柱层析及凝胶过滤层析 ,所得活性峰收集液溶血价分别为 4 0 96、10 2 4。通过以上三步的纯化 ,溶血素的比活提高 2 0 0倍。纯化蛋白在SDS_PAGE中呈现一条带 ,达电泳级纯度。

关键词：猪链球菌溶血素纯化

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传染性支气管炎病毒青岛腺胃分离株(SD/97/02)S2蛋白基因的序列测定和分析

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病毒学报 2001年第4期17卷 356-359页

作者：潘杰彦陈德胜戴亚斌陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

根据GenBank上发表的IBVS2基因序列 ,自行设计了两对引物 ,分别扩增SD/ 97/ 0 2株S2基因的上游110 0bp部分和下游的 90 0bp部分 ,两段序列拼接后包含了S2全基因的序列。将此两段分别克隆入pGEMT easy载体 ,测序后将序列用分析软件DNASTA... 详细信息

根据GenBank上发表的IBVS2基因序列 ,自行设计了两对引物 ,分别扩增SD/ 97/ 0 2株S2基因的上游110 0bp部分和下游的 90 0bp部分 ,两段序列拼接后包含了S2全基因的序列。将此两段分别克隆入pGEMT easy载体 ,测序后将序列用分析软件DNASTAR和网上的BLAST软件进行分析 ,结果表明 ,S2基因比S1基因相对来说更保守 ,位于氨基酸第 5 6 0～ 6 0 0位很可能是与囊膜锚着的部位 ,而S2与S1的交界处以HRRRR为特征 ,这不同于常规的RRF/SRR。

关键词：传染性支气管炎病毒腺胃分离株基因序列分析 S2蛋白鸡病毒

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FMDV抗原表位与hsp_(70)的融合表达及表达产物对小鼠的免疫应答

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南京农业大学学报 2008年第2期31卷 97-100页

作者：苏春霞段相国曹瑞兵周斌陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

将人工合成的O型口蹄疫病毒主要表位基因与结核杆菌热休克蛋白70(HSP70)基因克隆入酵母表达载体pPICZαA中,以电穿孔法转化酵母菌X-33,用Zeocin平板筛选重组子,PCR鉴定后甲醇诱导表达。SDS-PAGE显示,其相对分子质量为89 000,表达量约为1... 详细信息

将人工合成的O型口蹄疫病毒主要表位基因与结核杆菌热休克蛋白70(HSP70)基因克隆入酵母表达载体pPICZαA中,以电穿孔法转化酵母菌X-33,用Zeocin平板筛选重组子,PCR鉴定后甲醇诱导表达。SDS-PAGE显示,其相对分子质量为89 000,表达量约为190 mg.L-1;免疫印迹分析证实表达产物具有免疫反应性。融合蛋白以皮下接种的方式对8只小鼠进行3次免疫,然后通过ELISA和MTT分别检测抗体水平和淋巴细胞增殖反应。结果表明,融合蛋白既能诱导细胞免疫应答,又能诱导体液免疫应答,其产生的抗体水平接近于常规灭活疫苗。MTT试验结果显示,融合蛋白的A570为0.381±0.072,灭活疫苗的A570为0.340±0.050,表明融合蛋白的细胞免疫应答水平高于后者。提示,hsp70作为分子佐剂在口蹄疫基因工程疫苗研究中具有很好的应用前景。

关键词： 0型口蹄疫病毒表位基因 hsp70 毕赤酵母融合表达

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华东地区PMWS患病猪群PCV-2的检测及其基因特征

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中国兽医学报 2004年第3期24卷 240-242页

作者：王先炜姜平李玉峰张书霞许家荣南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

用 PCR方法 ,对江苏、上海、山东、江西、安徽和浙江等省市 6 5家猪场 99例断奶仔猪多系统衰弱综合征(PMWS)肺脏和淋巴结病料 ,进行了猪圆环病毒 - 2 (PCV- 2 )基因检测 ,发现其中 18家猪场 2 1例病料为 PCV- 2阳性。源自安徽和上海的 P... 详细信息

用 PCR方法 ,对江苏、上海、山东、江西、安徽和浙江等省市 6 5家猪场 99例断奶仔猪多系统衰弱综合征(PMWS)肺脏和淋巴结病料 ,进行了猪圆环病毒 - 2 (PCV- 2 )基因检测 ,发现其中 18家猪场 2 1例病料为 PCV- 2阳性。源自安徽和上海的 PCV- 2分离株经基因序列分析显示 ,2个分离株部分 ORF2 与国外分离毒株同源性为 92 %～99%。安徽分离株 AHHF6与韩国分离株 KSY- 1同源性为 99% ,而上海分离株 SHHT1与加拿大分离株 Imp.114 7同源性为 98%。上述结果表明 ,我国 PMWS患病猪群广泛存在 PCV- 2 ,不同地区 PCV- 2存在一定基因差异。

关键词：华东地区 PMWS 患病猪群 PCV-2 基因猪圆环病毒 PCR

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日本脑炎病毒E基因抗原域Ⅲ的克隆及高效表达

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南京农业大学学报 2004年第4期27卷 77-80页

作者：郑其升杨松徐学清曹瑞兵陈德胜陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

根据GenBank公布的日本脑炎病毒 (Japaneseencephalitisvirus ,JEV)SA14 14 2减毒株的核苷酸序列 ,设计并合成一对特异性引物 ,应用RT PCR方法扩增出编码JEV囊膜蛋白抗原域Ⅲ的基因 (EⅢ) ,将其连接入pMD18 T载体 ,经测序后克隆入原... 详细信息

根据GenBank公布的日本脑炎病毒 (Japaneseencephalitisvirus ,JEV)SA14 14 2减毒株的核苷酸序列 ,设计并合成一对特异性引物 ,应用RT PCR方法扩增出编码JEV囊膜蛋白抗原域Ⅲ的基因 (EⅢ) ,将其连接入pMD18 T载体 ,经测序后克隆入原核表达载体pET 32a (+) ,构建原核表达载体pET EⅢ 。阳性质粒转化感受态大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导 ,JEV EⅢ 基因获得表达 ,经细胞定位分析 ,目的蛋白以包涵体的形式存在于大肠杆菌中。通过改变IPTG的浓度和诱导时间 ,确定了表达EⅢ 蛋白的最佳诱导条件 :IPTG终浓度为 0 1mmol·L-1,诱导时间为 3h。在大肠杆菌中的最高表达量占菌体总蛋白的 5 4 9%。Western blot分析表明表达产物具有良好的免疫学活性。利用纯化的表达产物作抗原包被酶标板 ,可以明显地区分JEV阴、阳性血清 ,并且不与猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒、猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒、猪细小病毒、猪瘟病毒的阳性血清发生反应。结论 :重组JEVEⅢ 蛋白可以用于检测猪血清中JEV抗体水平。

关键词：日本脑炎病毒囊膜蛋白克隆原核表达

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犬瘟热病毒细胞膜受体的鉴定

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病毒学报 2000年第2期16卷 155-157页

作者：郭爱珍陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

犬瘟热病毒 (CDV)敏感细胞Vero用SDS或RIPA溶解缓冲液溶解 ,利用病毒铺覆蛋白印迹技术 (VOPBA)鉴定犬瘟热病毒疫苗株 (CDV -onderstepoort)的细胞受体。结果发现 ,在Vero细胞上有两组CDV结合蛋白质 ,即高分子量组蛋白质 (12 7kD、12 0kD... 详细信息

犬瘟热病毒 (CDV)敏感细胞Vero用SDS或RIPA溶解缓冲液溶解 ,利用病毒铺覆蛋白印迹技术 (VOPBA)鉴定犬瘟热病毒疫苗株 (CDV -onderstepoort)的细胞受体。结果发现 ,在Vero细胞上有两组CDV结合蛋白质 ,即高分子量组蛋白质 (12 7kD、12 0kD、110kD)与低分子量组蛋白质 (2 7kD和 30kD)。这些CDV结合蛋白组分的性质及在CDV致病中的作用有待进一步研究。

关键词：犬瘟热病毒病毒受体 VOPBA 鉴定致病机理

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鸭瘟病毒gB蛋白N端主要抗原域的表达及间接ELISA检测

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微生物学报 2008年第1期48卷 98-102页

作者：潘华奇曹瑞兵刘磊孙海亮姬向波陈勇军陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

在分析鸭瘟病毒gB蛋白抗原性的基础上,设计一对引物克隆gB蛋白N端抗原性较好的抗原域编码基因。将克隆的基因定向插入pET-32a的EcoRⅠ和HindⅢ之间,构建了gB蛋白主要抗原域原核表达载体pET-gB1。将pET-gB1质粒转化BL(21)宿主菌后,对培... 详细信息

在分析鸭瘟病毒gB蛋白抗原性的基础上,设计一对引物克隆gB蛋白N端抗原性较好的抗原域编码基因。将克隆的基因定向插入pET-32a的EcoRⅠ和HindⅢ之间,构建了gB蛋白主要抗原域原核表达载体pET-gB1。将pET-gB1质粒转化BL(21)宿主菌后,对培养和表达条件进行了优化,实现了DPVgB蛋白主要抗原域的高效表达。免疫印迹试验表明获得的表达产物具有良好的反应原性。应用His·Bind亲和层析柱纯化重组DPVgB蛋白,以纯化的重组gB1蛋白作为检测抗原,初步建立了检测鸭瘟病毒抗体的igB1-ELISA。结果表明,抗原的最佳包被浓度为6.5μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶80,阳性标准初步定为:待检血清OD490>0.4,且待检血清OD490/阴性血清OD490>2。应用igB1-ELISA对鸭血清样品进行检测,结果表明igB1-ELISA与全病毒包被的iDPV-ELISA符合率达到95.6%。

关键词：鸭瘟病毒 gB蛋白原核表达抗原域间接ELISA

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