检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2018年第8期48卷 991-997页

作者：张健淞夏雨婷沈懿娟梁中洋李玉峰南京农业大学动物医学院/农业部动物细菌学重点开放实验室

为了探讨多杀性巴氏杆菌皮肤坏死毒素（PMT）对真核细胞的致病机制,将编码PMT的tox A基因以及其N端tox N（1~1461 bp）和C端tox C（2 958~3 858 bp）分别克隆到原核表达载体p ET-32a中进行蛋白表达。3个重组蛋白在大肠杆菌中均以可溶性... 详细信息

为了探讨多杀性巴氏杆菌皮肤坏死毒素（PMT）对真核细胞的致病机制,将编码PMT的tox A基因以及其N端tox N（1~1461 bp）和C端tox C（2 958~3 858 bp）分别克隆到原核表达载体p ET-32a中进行蛋白表达。3个重组蛋白在大肠杆菌中均以可溶性形式表达,其分子质量大小分别为176 ku、88 ku和67 ku,均能与His单克隆抗体发生特异性免疫反应。体外细胞毒性试验和豚鼠皮肤坏死试验均表明,r PMT与天然PMT具有相同的生物学功能。此外,以原核表达蛋白r PMT-N和r PMT-C分别制备的鼠多抗为一抗,对转染表达N端和C端真核质粒的Vero细胞进行IFA和Western-blot检测。结果表明,2种蛋白特异性良好,制备的多克隆抗体免疫反应条带单一。该研究的成功开展将为后续探究PMT细胞内作用机制提供可靠的生物材料。

关键词：产毒素巴氏杆菌多杀性巴氏杆菌皮肤坏死毒素生物学活性截短表达多克隆抗体

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Tubacin对蓝舌病毒感染的抑制作用

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中国兽医学报 2019年第10期39卷 1902-1906页

作者：陈新曹雨薄宗义陈欢孙雯张志芳印春生钱莺娟 JUNG Yong-sam 戴建君南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210095 中国兽医药品监察所北京100081 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

蓝舌病(bluetongue,BT)是由蓝舌病毒(bluetongue virus,BTV)感染反刍动物,包括山羊、绵羊、水牛和骆驼等,引起的非接触性传染病,以口腔、鼻腔及胃黏膜发生溃疡性炎症病变为主要特征,库蠓是其主要传播媒介。BTV传播相当广泛,除了南极洲... 详细信息

蓝舌病(bluetongue,BT)是由蓝舌病毒(bluetongue virus,BTV)感染反刍动物,包括山羊、绵羊、水牛和骆驼等,引起的非接触性传染病,以口腔、鼻腔及胃黏膜发生溃疡性炎症病变为主要特征,库蠓是其主要传播媒介。BTV传播相当广泛,除了南极洲外的所有洲都有发现,近20年间在欧洲肆虐传播,造成了巨大的经济损失。目前发现的BTV包含26个血清型,型间没有交叉保护作用,使用传统疫苗只能提供部分保护。虽然目前已经有针对多种血清型BTV重组疫苗的研究,但保护效果并不理想。因此,研究防治BT的药物具有重要的应用价值。本研究发现,组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)的特异性抑制剂Tubacin能够抑制13型BTV感染,通过半定量PCR、Western blot、TCID50等试验验证,Tubacin处理后细胞病变减轻,病毒RNA和蛋白表达水平下降,上清中病毒粒子含量减少。结果证明Tubacin可在一定程度上抑制BTV感染,Tubacin是抗BTV的候选药,HDAC6可能是抗BTV感染的靶点之一。

关键词：蓝舌病 Tubacin 抗病毒

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猪圆环病毒3型LAMP检测方法的建立与应用

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畜牧兽医学报 2018年第6期49卷 1314-1319页

作者：姜辰龙严秀文张日腾李勇姜平白娟南京农业大学生命科学学院南京210095 南京农业大学动物医学院农业部动物细菌学重点实验室南京210095

为快速诊断和检测猪圆环病毒3型(PCV3),本研究根据其ORF2基因保守序列,设计特异性引物,并通过Bst DNA聚合酶、引物最佳浓度比例、Mg^(2+)、dNTPs和甜菜碱浓度及反应条件优化,建立了环介导等温核酸扩增(LAMP)检测方法。结果显示,59℃恒... 详细信息

为快速诊断和检测猪圆环病毒3型(PCV3),本研究根据其ORF2基因保守序列,设计特异性引物,并通过Bst DNA聚合酶、引物最佳浓度比例、Mg^(2+)、dNTPs和甜菜碱浓度及反应条件优化,建立了环介导等温核酸扩增(LAMP)检测方法。结果显示,59℃恒温扩增36min即可出现梯形条带,且产物亦可通过SYBR GreenⅠ染色进行判断。该方法最低检测限为1.0×10~1copies·μL^(-1),与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)及猪圆环病毒1型和2型(PCV1、PCV2)等均无交叉反应。检测68份呼吸道病猪淋巴结样品,PCV3阳性率占30.9%,与PCR检测结果符合率为95.6%(65/68)。相对传统PCR方法而言,该方法敏感特异,简便快速,可用于PCV3检测和临床诊断。

关键词：猪圆环病毒3型 RT-LAMP 检测

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猪流行性腹泻病毒CZ2014株的分离鉴定

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畜牧与兽医 2018年第9期50卷 46-50页

作者：李松玲郑素雅周红范红结蔺辉星南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业部动物细菌学重点实验室

2014年江苏某规模猪场发生腹泻疫情,采集发病仔猪小肠组织及肠内容物,经RT-PCR检测,仅猪流行性腹泻病毒（PEDV）阳性。将病料接种Vero细胞,盲传3代后,出现明显的细胞合胞体病变,细胞空泡化,最终裂解脱落。将细胞反复冻融后,收获病毒,经R... 详细信息

2014年江苏某规模猪场发生腹泻疫情,采集发病仔猪小肠组织及肠内容物,经RT-PCR检测,仅猪流行性腹泻病毒（PEDV）阳性。将病料接种Vero细胞,盲传3代后,出现明显的细胞合胞体病变,细胞空泡化,最终裂解脱落。将细胞反复冻融后,收获病毒,经RT-PCR以及间接免疫荧光（IFA）鉴定后,确认所收获的病毒为PEDV,将该分离毒株命名为CZ2014株（Gen Bank：KT428878.1）。RT-PCR扩增其S基因,序列分析结果表明,CZ2014株S基因序列与近年来流行的毒株同源性较高,而与经典疫苗毒株同源性较低。PEDV流行毒株的分离为该病毒致病机制研究及其防控奠定了基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒流行毒株分离

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马立克病病毒致瘤蛋白Meq转录调节鸡p21基因的表达

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畜牧与兽医 2018年第5期50卷 84-88页

作者：鲍晨沂连雪杨莎莎张旭 JUNG Yong-Sam 钱莺娟南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业部细菌学重点实验室

为研究马立克病病毒（Marek＇s disease virus,MDV）致瘤蛋白Meq对细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21表达的调节作用,采用RTPCR、Western blot方法检测Meq蛋白表达在鸡胚成纤维细胞（Chicken embryo fibroblasts,CEF）中对p21 mRNA和... 详细信息

为研究马立克病病毒（Marek＇s disease virus,MDV）致瘤蛋白Meq对细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21表达的调节作用,采用RTPCR、Western blot方法检测Meq蛋白表达在鸡胚成纤维细胞（Chicken embryo fibroblasts,CEF）中对p21 mRNA和蛋白水平的影响。然后,构建p21启动子的荧光素酶报告载体,检测Meq蛋白对p21的启动子活性的影响。最后,分别用MDV Md5强毒株和CVI988/Rispens疫苗毒株感染CEF细胞,利用Western blot检测MDV感染后p21蛋白水平的变化。结果：过表达Meq上调p21的mRNA和蛋白表达水平,Meq能够激活p21基因启动子活性,MDV感染细胞中p21蛋白的表达水平也有明显升高。这些发现为了解Meq在MDV感染中的作用机理奠定了基础。

关键词： MDV Meq致瘤蛋白 p21基因

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猪链球菌LuxS/AI-2型密度感应系统研究进展

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畜牧兽医学报 2018年第2期49卷 223-230页

作者：王瑜欣汪洋易力陆承平河南科技大学动物科技学院洛阳471003 洛阳师范学院生命科学学院洛阳471022 南京农业大学动物医学院农业部动物细菌学重点实验室南京210095

密度感应(quorum sensing,QS)系统在细菌中普遍存在,能够通过一种或多种信号分子来影响多个基因的转录表达,从而协调多种细菌病原体的群体反应。该系统存在多种类型,其中LuxS/AI-2型是研究最热的系统之一,luxS作为一个高度保守的基因,... 详细信息

密度感应(quorum sensing,QS)系统在细菌中普遍存在,能够通过一种或多种信号分子来影响多个基因的转录表达,从而协调多种细菌病原体的群体反应。该系统存在多种类型,其中LuxS/AI-2型是研究最热的系统之一,luxS作为一个高度保守的基因,参与调控多种基因的表达,从而调节细菌的生长和毒力等多种生命活动,使其适应不同的环境。LuxS蛋白分解形成同型半胱氨酸和4,5-二羟基-2,3-戊二酮(4,5-dihydroxy-2,3-pentanedione,DPD),DPD通过自环化形成自诱导分子autoinducer 2(AI-2)。猪链球菌(Streptococcus suis,SS)作为一种重要的人兽共患病原菌,研究其LuxS/AI-2型密度感应系统,利用LuxS/AI-2系统对猪链球菌病进行预防和治疗,具有重要意义。本文着重从SS的QS系统一般机制以及LuxS/AI-2系统的发现、结构、代谢作用、表达调控等方面对该菌的相关研究进行了综述。

关键词：密度感应系统 LuxS/AI-2系统猪链球菌调控

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13种兽用抗菌药对大肠杆菌及沙门菌的体外抑菌效果

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畜牧与兽医 2018年第6期50卷 110-113页

作者：王虹杨德鸿汤芳李亚芯徐长青胡贺张永春任建鸾南京农业大学动物医学院/农业部动物细菌病重点实验室江苏南京210095 南京福润德动物药业有限公司江苏南京210007

为了解目前市售抗菌药对畜牧生产中常见病原菌的抑菌作用,选用13种常见抗菌药,对参考菌株大肠杆菌（ATCC25922）进行了最小抑菌浓度（MIC）测定,并挑选其中抑菌效果相对较好的药物对来自河南省和江苏省各集约化禽类养殖场分离鉴定所得... 详细信息

为了解目前市售抗菌药对畜牧生产中常见病原菌的抑菌作用,选用13种常见抗菌药,对参考菌株大肠杆菌（ATCC25922）进行了最小抑菌浓度（MIC）测定,并挑选其中抑菌效果相对较好的药物对来自河南省和江苏省各集约化禽类养殖场分离鉴定所得的39株大肠杆菌和沙门菌进行了MIC测定。结果显示：药物D（10%阿莫西林）、药物G（100 g∶10 g硫酸黏菌素）、药物I（100 mL∶25 g磺胺嘧啶、5 g甲氧苄啶）、药物J（100 mL∶磺胺间甲氧嘧啶钠10 g、甲氧苄啶2 g）、药物L（100 mL∶10 g氟苯尼考）抑菌效果较好（MIC〈78.12μg/mL）,药物E（5%盐酸多西环素）、药物F（10%盐酸多西环素）的抑菌效果次之（MIC为156.25μg/mL）,药物B（100 g∶3.25 g硫酸新霉素）和K（5 g戊二醛、5 g葵甲溴铵）的抑菌效果较差（MIC〈625μg/mL）,药物A（10%盐酸林可霉素）、药物C（100 g∶10 g A型酒石酸泰乐菌素）、药物H（100 g∶5 g硫氰酸红霉素）、药物M（聚维酮碘）抑菌效果最差,所有稀释倍数均长菌;挑选的抑菌效果较好的药物MIC结果显示,药物I对39个临床菌株均无效,药物L对5株临床菌株有效,药物E对23株临床菌株有效。结果表明：药物E可用于大肠杆菌、沙门菌感染的抗菌治疗。

关键词：抗菌药最小抑菌浓度(MIC) 耐药性大肠杆菌沙门菌

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毕赤酵母分泌表达JEV prME蛋白及其形成病毒样颗粒的免疫原性鉴定

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生物工程学报 2017年第5期33卷 863-874页

作者：赵鹏江雅王经满范浩杰曹瑞兵南京农业大学动物医学院农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210095

应用毕赤酵母分泌表达日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)prME蛋白,鉴定其表达效果与免疫原性,以期为JEV亚单位疫苗的研制奠定基础。RT-PCR扩增JEV SA14-14-2株prME基因,将其连接到毕赤酵母表达载体pPICZa-A,分别获得pPICZa... 详细信息

应用毕赤酵母分泌表达日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)prME蛋白,鉴定其表达效果与免疫原性,以期为JEV亚单位疫苗的研制奠定基础。RT-PCR扩增JEV SA14-14-2株prME基因,将其连接到毕赤酵母表达载体pPICZa-A,分别获得pPICZa-prME和携带JEV Cap蛋白C末端19个Aa信号肽的pPICZa-SprME质粒。表达载体用PmeⅠ酶切线性化,通过电转化转入毕赤酵母X33并诱导发酵培养。利用SDS-PAGE和Western blotting鉴定酵母发酵上清中目的蛋白的表达情况。利用GE蛋白层析纯化柱纯化目的蛋白,利用电镜观察纯化前后的目的蛋白,将不同剂量纯化后的prME蛋白与弗氏佐剂混合以及定量纯化后的prME蛋白与不同剂量的核酸佐剂混合分别免疫4周龄小鼠,定期采血,ELISA检测被免小鼠血清的抗体水平,空斑减少试验测定抗体中和效价。SDS-PAGE结果表明毕赤酵母可以分泌表达完整的prME蛋白,目的蛋白在70–100 kDa之间;Western blotting结果显示分泌表达的prME蛋白具有良好的反应原性,进一步证明prME蛋白在酵母X33中以整体的形式分泌表达,没有发生水解切割。纯化目的蛋白,根据洗脱时间和体积表明其分子量大于1×10~6 Da,因此推断prME蛋白可能形成多聚化的颗粒。电镜观察发现直径30–50 nm的病毒样颗粒(Virus like particles,VLPs)。免疫试验结果表明,纯化后的重组蛋白10–15μg/只接种小鼠在3周后抗体达到高峰值,之后逐渐下降,免疫7周后小鼠血清仍可检测到JEV抗体。将prME VLPs以10μg/只的剂量与不同剂量的核酸佐剂配伍后接种小鼠,ELISA检测结果表明核酸佐剂可明显增强JEV prME VLPs免疫应答,免疫4周后小鼠血清的中和抗体效价为1∶80–1∶160。上述结果表明毕赤酵母表达JEV prME虽不能发生水解切割,但仍可形成VLP并诱导免疫小鼠产生较高水平中和抗体。

关键词：日本脑炎病毒 prME蛋白毕赤酵母病毒样颗粒免疫原性

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禽流感病毒NP蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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畜牧与兽医 2018年第12期50卷 53-58页

作者：肖倩姚露毕振威雷静颜焰闫丽萍教育部动物健康与食品安全国际联合实验室江苏省动物免疫工程实验室江苏省陆生野生动物疫源疫病检测中心南京农业大学免疫研究所南京农业大学动物医学院江苏南京210095 农业部动物病毒学重点实验室浙江大学浙江杭州310058

为了制备H5N6亚型禽流感病毒(AIV)的单克隆抗体(MAb),采用纯化的H5N6 AIV免疫BALB/c鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA方法进行筛选,获得2株能稳定分泌抗NP蛋白的杂交瘤细胞,分别命名为3D9和2B10。间接ELISA检测2... 详细信息

为了制备H5N6亚型禽流感病毒(AIV)的单克隆抗体(MAb),采用纯化的H5N6 AIV免疫BALB/c鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA方法进行筛选,获得2株能稳定分泌抗NP蛋白的杂交瘤细胞,分别命名为3D9和2B10。间接ELISA检测2株杂交瘤细胞培养上清液抗体效价分别为1∶1×10^3和1∶1×10^4,腹水的抗体效价分别达到1∶1×10^5和1∶1×10^6; 3D9和2B10亚类鉴定重链为IgM,轻链为κ链; Western blot分析表明,2株杂交瘤细胞上清均能与不同的AIV感染的尿囊液在56 kD处发生特异性反应,并能与原核表达的重组NP蛋白发生特异性反应;间接免疫荧光试验显示,2株单克隆抗体均能与不同的AIV感染的MDCK细胞产生特异性反应。以上结果表明,本研究针对H5N6 AIV的NP蛋白制备了2株单克隆抗体,且都具有较好的特异性、保守性和广谱性,为今后禽流感诊断方法的开发奠定了基础。

关键词： H5N6 禽流感病毒单克隆抗体 NP蛋白特异性保守性

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罗非鱼源无乳链球菌灭活疫苗免疫效果的研究

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中国兽医科学 2017年第5期47卷 636-643页

作者：朱洁莲高婷婷钟孝俊刘广锦姚火春南京农业大学动物医学院农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210095

将罗非鱼源无乳链球菌GD201008-001连续传50代,用API20 Strep生化鉴定试剂条和全自动生化分析仪对其各代次进行比较鉴定;将灭活疫苗以5×10~8CF U/尾分别肌肉注射和腹腔注射30 g±5 g的罗非鱼,第3次免疫后第14天,以50倍LD_(50)... 详细信息

将罗非鱼源无乳链球菌GD201008-001连续传50代,用API20 Strep生化鉴定试剂条和全自动生化分析仪对其各代次进行比较鉴定;将灭活疫苗以5×10~8CF U/尾分别肌肉注射和腹腔注射30 g±5 g的罗非鱼,第3次免疫后第14天,以50倍LD_(50)对其攻毒,记录死亡情况;在免疫后不同时间里用试剂盒检测罗非鱼肝的各个酶活指标,用RT-PCR检测头肾中IL-1β的表达量,分析其免疫保护效果。结果显示,GD201008-001各代次间生化特性稳定;肌肉注射免疫组和腹腔注射免疫组的免疫保护率分别为83.97%和93.33%,免疫前后多数酶活指标并没有显著差异(P>0.05),第3次免疫后第14天IL-1β的表达量均显著高于第1次免疫后第14天的数值,且肌肉注射方式显著高于腹腔注射(P<0.05),肌肉注射组超氧化物歧化酶活力、溶菌酶活力、总抗氧化能力、过氧化氢酶活力均略低于腹腔注射组,而丙二醛及IL-1β表达量则相反。结果表明,该无乳链球菌灭活疫苗对罗非鱼具有很好的免疫保护性,可以作为预防无乳链球菌感染的候选疫苗。

关键词：无乳链球菌疫苗免疫保护肌肉注射腹腔注射

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