检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学通报 2021年第9期48卷 3218-3229页

作者：黄豪圣王许航席静巩倩雯薛峰任建鸾汤芳戴建君南京农业大学动物医学院农业农村部动物细菌学重点实验室江苏南京210095 广州海关技术中心广东广州510623 中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210095

【背景】大肠杆菌(Escherichia coli,***)是引发新生儿脑膜炎和禽类脑膜炎最常见的革兰氏阴性菌,其中含K1荚膜大肠杆菌是重要的病原菌。目前,K1荚膜大肠杆菌的检测方法存在一些弊端。【目的】利用PNJ1809-36噬菌体的宿主特异性建立快速... 详细信息

【背景】大肠杆菌(Escherichia coli,***)是引发新生儿脑膜炎和禽类脑膜炎最常见的革兰氏阴性菌,其中含K1荚膜大肠杆菌是重要的病原菌。目前,K1荚膜大肠杆菌的检测方法存在一些弊端。【目的】利用PNJ1809-36噬菌体的宿主特异性建立快速检测K1荚膜大肠杆菌的方法。【方法】用荧光染料SYBR Gold标记PNJ1809-36噬菌体,侵染33株受试菌,在荧光显微镜下观察,测定该方法的特异性;倍比稀释宿主菌DE058,用荧光标记噬菌体侵染,测定该方法的灵敏度;用荧光标记噬菌体检测8份模拟粪样,测定该方法的临床应用效果;测定4℃避光保存4个月的荧光标记噬菌体的效价和检测效果。【结果】33株受试菌中的9株K1荚膜大肠杆菌有8株可见环状荧光,1株未能检出;20株非K1荚膜大肠杆菌以及4株非大肠杆菌属细菌均不能观察到荧光,检测灵敏度达100CFU/mL。8份模拟粪样的检测结果显示,3份含有K1荚膜大肠杆菌的粪样均可见环状荧光,5份不含K1荚膜大肠杆菌的粪样均无荧光。荧光标记噬菌体4℃避光保存4个月后效价无明显下降,检测效果无明显变化,表明该荧光标记噬菌体在4℃避光条件下较稳定。【结论】用荧光标记的PNJ1809-36噬菌体能够在15min内特异、快速、直观地检测K1荚膜大肠杆菌。

关键词：噬菌体荧光标记大肠杆菌检测 K1荚膜

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黄腐酚对猪流行性腹泻病毒的体外抑制作用

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病毒学报 2020年第5期36卷 907-912页

作者：赵诗莹陈新陈欢钱莺娟郑龙三戴建君南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室农业部细菌学重点实验室南京210095

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种以仔猪水样腹泻、呕吐、脱水和高死亡率为主要特征的高度接触性传染病。该病首先在欧洲出现地区性暴发,2000年后在... 详细信息

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种以仔猪水样腹泻、呕吐、脱水和高死亡率为主要特征的高度接触性传染病。该病首先在欧洲出现地区性暴发,2000年后在亚洲流行严重,给全球养猪业造成了巨大的损失。由于PEDV毒株变异迅速,研究对PEDV具有抑制作用的天然活性化合物对于了解病毒感染致病机制以及防控PED具有重要意义。本研究通过RT-PCR、空斑形成试验、Western Blot和MTT试验等方法探究黄腐酚是否对PEDV感染具有抑制作用,并验证其作用效果。结果显示,黄腐酚能够明显抑制PEDV感染Vero-E6细胞中病毒M基因mRNA水平,显著降低细胞内和上清中病毒粒子的产生;黄腐酚对Vero-E6细胞几乎无毒性,抑制PEDV呈剂量依赖性且半数有效浓度为3.865μM;黄腐酚处理能明显降低PEDV不同毒株(如CV777和SQ2014毒株)感染细胞中N蛋白表达水平。本研究为进一步探究黄腐酚抗PEDV感染机制,研制抗PEDV或广谱抗冠状病毒药物奠定了基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒(PEDV) 猪流行性腹泻(PED) 黄腐酚抗病毒

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非洲猪瘟病毒蛋白pS183L的原核表达及多克隆抗体制备

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畜牧与兽医 2025年第2期57卷 112-117页

作者：余群邹艳丽陈欢刘珊苗雨润任炜杰王振忠何佳依高晓宇钱莺娟吴晓东郑龙三南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业农村部细菌学重点实验室江苏南京210095 中国动物卫生与流行病学中心/国家非洲猪瘟参考实验室山东青岛266000

旨在制备非洲猪瘟病毒(ASFV)非结构蛋白pS183L的多克隆抗体。根据公布的毒株ASFV China/2018/Anhui XCGQ基因序列设计引物,酶切连接法构建重组质粒pET-28a-S183L;经鉴定成功的质粒转化大肠杆菌Rosetta,诱导表达后经镍柱亲和层析纯化后... 详细信息

旨在制备非洲猪瘟病毒(ASFV)非结构蛋白pS183L的多克隆抗体。根据公布的毒株ASFV China/2018/Anhui XCGQ基因序列设计引物,酶切连接法构建重组质粒pET-28a-S183L;经鉴定成功的质粒转化大肠杆菌Rosetta,诱导表达后经镍柱亲和层析纯化后获得重组蛋白pS183L,免疫小鼠并制备抗pS183L的多克隆抗体。通过ELISA鉴定多克隆抗体效价大于1∶128000;Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)表明,该多克隆抗体能识别293T和PK15细胞外源表达蛋白及ASFV感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)内源表达蛋白。综上,本研究成功制备抗pS183L多克隆抗体,为深入研究ASFV pS183L的功能提供了关键生物材料。

关键词：非洲猪瘟病毒 pS183L 多克隆抗体

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前噬菌体对禽致病性大肠杆菌DE205B环境耐受力的影响

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畜牧与兽医 2020年第4期52卷 66-71页

作者：刘云张中华姜珊钱新杰巩倩雯李德志汤芳戴建君教育部动物健康与食品安全国际联合实验室农业部细菌学重点实验室南京农业大学动物医学院江苏南京210095

禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)DE205B基因组中存在前噬菌体phiv205-1。本文利用RED同源重组技术构建前噬菌体phiv205-1缺失株,采用倍比稀释的方法检测野生株DE205B和前噬菌体缺失株DE205BΔphiv205-1在酸... 详细信息

禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)DE205B基因组中存在前噬菌体phiv205-1。本文利用RED同源重组技术构建前噬菌体phiv205-1缺失株,采用倍比稀释的方法检测野生株DE205B和前噬菌体缺失株DE205BΔphiv205-1在酸、盐和氧化应激等不利条件下的存活率,分析前噬菌体对APEC环境适应力的影响。结果显示,与野生株相比,前噬菌体缺失株DE205BΔphiv205-1酸性耐受力下降了56.62%(P<0.001),在氧化应激条件下的存活率下降了91.78%(P<0.001)。为研究前噬菌体phiv205-1中影响宿主细菌对酸和氧化应激耐受的基因,采用real-time PCR检测了部分phiv205-1基因在氧化应激环境中的表达量,结果显示基因2971、2989、3327及Erf的表达量显著升高。进一步构建了Δ2971、Δ2989、Δ3327及ΔErf的单基因缺失株,环境耐受实验结果显示,与野生株相比,单基因缺失株Δ2971、Δ2989、Δ3327及ΔErf在H2O2环境下的存活率依次降低了89.32%、67.79%、27.84%和71.29%。研究表明,前噬菌体phiv205-1增加了细菌对环境压力的抵抗力,为宿主菌在恶劣条件下的生存提供了多种益处。

关键词：前噬菌体禽致病性大肠杆菌环境耐受力氧化应激酸

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制备大肠杆菌菌蜕的方法比较

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江苏农业学报 2020年第2期36卷 410-416页

作者：袁橙郭长明左伟勇郝福星左沁丹蔺辉星江苏农牧科技职业学院动物医学院江苏泰州225300 南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210095

为进一步研究大肠杆菌菌蜕的制备技术,以pBV221、pCold IV和pETDuet1载体为基础构建了表达噬菌体E基因的溶菌质粒,并利用pETDuet1的2个多克隆位点构建了同时表达E基因和金黄色葡萄球菌核酸酶A的双表达溶菌质粒。经检测,pBV221-E/DH5α组... 详细信息

为进一步研究大肠杆菌菌蜕的制备技术,以pBV221、pCold IV和pETDuet1载体为基础构建了表达噬菌体E基因的溶菌质粒,并利用pETDuet1的2个多克隆位点构建了同时表达E基因和金黄色葡萄球菌核酸酶A的双表达溶菌质粒。经检测,pBV221-E/DH5α组和pCold-E/BL21组的裂解效率最高,但pCold-E/BL21组的裂解起始时间晚于其他几组。诱导剂的浓度对pETDuet1-E-SNA/BL21(DE3)的裂解效率有较大影响。电泳结果显示,随着E基因的表达,细菌DNA逸出膜外,同时金黄色葡萄球菌核酸酶A将DNA降解为250 bp以下的小片段。除pBV221-E/BL21组外,β-丙内酯可实现对其他试验组菌蜕的完全灭活。电镜观察发现,几组菌蜕在结构上并无明显差别。与对照菌相比,菌蜕结构完整,电子密度低且不均匀,细胞膜有不同程度的皱缩。

关键词：菌蜕大肠杆菌 E基因金黄色葡萄球菌核酸酶A 裂解效率

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奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌小菌落突变株的表型鉴定及其遗传基础分析

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畜牧与兽医 2020年第5期52卷 64-72页

作者：熊甘爽 Alkasir Rashad 仲亮律娜戴建君李晶汤芳朱宝利南京农业大学动物医学院/农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210095 中国科学院微生物研究所北京100101

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是导致奶牛乳房炎的主要病原菌,其在抗菌药物的作用下可形成小菌落突变株(small colony variants,SCVs)。为了探讨牛源性金黄色葡萄球菌在表型转变过程中的遗传基础,对临床分离的奶牛乳房炎金黄... 详细信息

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是导致奶牛乳房炎的主要病原菌,其在抗菌药物的作用下可形成小菌落突变株(small colony variants,SCVs)。为了探讨牛源性金黄色葡萄球菌在表型转变过程中的遗传基础,对临床分离的奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌野生型及其SCV、人工诱导的SCV、临床SCV的表型回复株进行了相关特性及基因组序列的分析。结果发现:金黄色葡萄球菌的SCV和野生型差异显著,野生型菌株在庆大霉素及磺胺甲噁唑/甲氧苄啶(SXT)的诱导下绝大多数产生甲萘醌缺陷型SCV,仅有1株经SXT诱导产生的SCV为胸腺嘧啶核苷(胸苷)缺陷型。菌株基因与表型之间存在明显关联,与野生型基因组相比,临床SCV均显示喹啉/醌代谢相关基因menA的碱基缺失,可能导致蛋白表达提前终止。庆大霉素诱导的SCV在基因menB处出现碱基位点突变;SXT诱导的SCV在代谢相关基因MW1485和aroA处分别出现基因片段的缺失和插入。回复株可能通过在代谢相关基因menA二次突变来恢复功能。本研究首次利用全基因组测序技术分析牛源性金黄色葡萄球菌SCV表型改变的遗传基础,有助于对奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌SCV产生更深入的理解。

关键词：金黄色葡萄球菌小菌落突变株表型回复甲萘醌缺陷突变奶牛乳房炎

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信号肽序列对A型流感病毒H1N1 HA蛋白表达的影响

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畜牧与兽医 2020年第8期52卷 64-67页

作者：郑屠园李娅慧周继勇胡伯里南京农业大学动物医学院江苏南京210095 浙江大学动物医学系农业部动物病毒学重点实验室浙江杭州310058

为了探究信号肽对A型流感病毒血凝素蛋白(hemagglutinin,HA)表达的影响,扩增了病毒的HA基因,利用双酶切方法将HA基因分别克隆至pCMV-Flag-N及pCMV-Flag-C载体中,成功获得了包含HA信号肽的SP-HA-Flag载体和缺失信号肽的Flag-HA载体,将重... 详细信息

为了探究信号肽对A型流感病毒血凝素蛋白(hemagglutinin,HA)表达的影响,扩增了病毒的HA基因,利用双酶切方法将HA基因分别克隆至pCMV-Flag-N及pCMV-Flag-C载体中,成功获得了包含HA信号肽的SP-HA-Flag载体和缺失信号肽的Flag-HA载体,将重组质粒转染至293T细胞后利用Western blot及间接免疫荧光方法检测HA蛋白表达情况。结果表明,该信号肽显著下调HA蛋白的表达量,并调控HA在细胞内的定位:含信号肽序列的HA蛋白主要定位在细胞膜,而不含信号肽的HA蛋白则主要定位在细胞质。本研究为进一步研究流感病毒HA蛋白的生物学功能提供了基础信息。

关键词：血凝素载体构建信号肽重组蛋白表达

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原核表达IBDV VP5基因同源dsRNA方法的建立

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畜牧与兽医 2020年第8期52卷 85-88页

作者：季刚俞天奇张宜娜周继勇胡伯里南京农业大学动物医学院江苏南京210095 浙江大学动物医学系/农业部动物病毒学重点实验室浙江杭州310058

为了深入研究传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus IBDV)VP5基因的功能,本研究以RNA干扰载体L4440为骨架,将IBDV VP5基因连入载体中,并将重组载体转入大肠杆菌HT115(DE3),在异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)的诱导下,表达出VP5基因同源dsRNA。与传统的方法相比,利用基因工程菌合成同源基因dsRNA的方法高效迅速,为后续研究VP5的功能奠定基础。

关键词：传染性法氏囊病病毒 VP5基因原核表达 dsRNA

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猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

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中国兽医科学 2019年第7期49卷 821-827页

作者：于洁刘雪威白娟宋中宝姜平南京农业大学动物医学院农业部动物细菌学重点实验室

为了鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白抗原表位,本研究将PRRSV N蛋白进行了原核表达和纯化,并用纯化后的N蛋白免疫BALB/c小鼠。利用淋巴瘤细胞融合技术和间接ELISA抗体筛选方法,制备获得4株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株3D10... 详细信息

为了鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白抗原表位,本研究将PRRSV N蛋白进行了原核表达和纯化,并用纯化后的N蛋白免疫BALB/c小鼠。利用淋巴瘤细胞融合技术和间接ELISA抗体筛选方法,制备获得4株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株3D10、3G12、6E2和6F4,Western-blot和IFA鉴定其均能与PRRSV特异性反应。4株单抗均属于IgG1亚类,轻链均为κ链。ELISA结果显示,3D10、3G12、6E2和6F4之间的叠加系数均在50%以上。选择N蛋白3个主要抗原表位合成肽进行ELISA检测,证明4株单抗识别的抗原表位均为30~52 aa,提示4株单克隆抗体亲和力可能存在一定差异,为该病毒研究提供了重要材料。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体 N蛋白

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猪繁殖与呼吸综合征病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的建立与应用

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中国兽医科学 2019年第12期49卷 1505-1513页

作者：张杰刘雪威白娟宋中宝姜平南京农业大学动物医学院农业部动物细菌学重点实验室

本研究根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因序列,设计出一对引物,建立了检测该病毒的SYBR GreenⅠ染料荧光定量PCR方法。此法特异性高,与猪流行性腹泻(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)、塞内卡谷病毒(SVV)、脑心肌炎病毒(EMCV)、伪狂犬病... 详细信息

本研究根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因序列,设计出一对引物,建立了检测该病毒的SYBR GreenⅠ染料荧光定量PCR方法。此法特异性高,与猪流行性腹泻(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)、塞内卡谷病毒(SVV)、脑心肌炎病毒(EMCV)、伪狂犬病病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)均无交叉反应;采用不同滴度的PRRSV测定,当Ct≤32且有明显的指数扩增曲线,判定为PRRSV阳性,Ct>32或者无Ct值则判定为PRRSV阴性。该方法检测下限为1×10^0.5TCID50病毒,高于常规RT-PCR国家标准(GB/T18090-2008),批内和批间变异系数均小于1%。PRRSV人工感染仔猪15份肺脏组织和60份血清样品检测结果均为阳性,SPF仔猪8份肺脏组织和25份血清检测结果均为阴性。采集245份临床仔猪肺脏组织病料检测,PRRSV阳性率为67.35%,明显高于普通RT-PCR检测阳性率(56.33%)。上述结果表明,本方法可用于PRRSV临床病料检测。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征 SYBR GreenⅠ 实时荧光定量PCR

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