检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧与兽医 2025年第2期57卷 112-117页

作者：余群邹艳丽陈欢刘珊苗雨润任炜杰王振忠何佳依高晓宇钱莺娟吴晓东郑龙三南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业农村部细菌学重点实验室江苏南京210095 中国动物卫生与流行病学中心/国家非洲猪瘟参考实验室山东青岛266000

旨在制备非洲猪瘟病毒(ASFV)非结构蛋白pS183L的多克隆抗体。根据公布的毒株ASFV China/2018/Anhui XCGQ基因序列设计引物,酶切连接法构建重组质粒pET-28a-S183L;经鉴定成功的质粒转化大肠杆菌Rosetta,诱导表达后经镍柱亲和层析纯化后... 详细信息

旨在制备非洲猪瘟病毒(ASFV)非结构蛋白pS183L的多克隆抗体。根据公布的毒株ASFV China/2018/Anhui XCGQ基因序列设计引物,酶切连接法构建重组质粒pET-28a-S183L;经鉴定成功的质粒转化大肠杆菌Rosetta,诱导表达后经镍柱亲和层析纯化后获得重组蛋白pS183L,免疫小鼠并制备抗pS183L的多克隆抗体。通过ELISA鉴定多克隆抗体效价大于1∶128000;Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)表明,该多克隆抗体能识别293T和PK15细胞外源表达蛋白及ASFV感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)内源表达蛋白。综上,本研究成功制备抗pS183L多克隆抗体,为深入研究ASFV pS183L的功能提供了关键生物材料。

关键词：非洲猪瘟病毒 pS183L 多克隆抗体

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非洲猪瘟病毒p54蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫原性分析

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中国动物传染病学报 2021年

作者：敖清莹钟秋萍史馨瑾魏常青刘英楠廖欣欣谢振华钱莺娟郑龙三陈鸿军南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室农业部细菌学重点实验室中国农业科学院上海兽医研究所

非洲猪瘟病毒（ASFV）p54蛋白由晚期基因E183L编码，是主要的结构蛋白之一。为了获得免疫原性强的p54蛋白。本研究将E183L基因克隆至pFastBac1载体中，取1μg重组质粒转座DH10Bac感受态细菌，经三轮蓝白斑筛选后，获得重组Bacmid-p54。... 详细信息

非洲猪瘟病毒（ASFV）p54蛋白由晚期基因E183L编码，是主要的结构蛋白之一。为了获得免疫原性强的p54蛋白。本研究将E183L基因克隆至pFastBac1载体中，取1μg重组质粒转座DH10Bac感受态细菌，经三轮蓝白斑筛选后，获得重组Bacmid-p54。将提取的Bacmid-p54质粒DNA转染Sf9细胞，出现明显病变后，收获细胞培养上清，在正常Sf9细胞中传三代，获得的杆状病毒命名为rBac-P54。利用SDS-PAGE检测rBac-P54感染后昆虫细胞的蛋白表达情况，并通过间接免疫荧光（IFA）和Western-blot鉴定p54蛋白的免疫原性。结果显示，在感染的Sf9细胞中，p54蛋白能获得高效表达，并可被ASFV阳性血清特异性识别。这表明杆状病毒系统表达的p54蛋白具有良好的免疫原性，为后续开展非洲猪瘟血清学诊断和p54功能研究奠定基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 p54蛋白昆虫细胞表达系统免疫原性

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猪塞尼卡病毒VP2 ELISA抗体检测方法的建立及初步应用

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中国预防兽医学报 2020年第11期42卷 1123-1127,1151页

作者：周而璇范慧延君芳姜平白娟南京农业大学动物医学院/农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210095

猪塞尼卡病毒(SVA)是影响我国生猪产业的一种新的重要病原,临床上主要引起猪口腔和蹄冠部水泡,与口蹄疫临床症状十分相似。为建立快速、敏感和特异的SVA血清抗体检测方法,本研究采用原核表达系统表达该病毒VP2蛋白,证实其以包涵体形式表... 详细信息

猪塞尼卡病毒(SVA)是影响我国生猪产业的一种新的重要病原,临床上主要引起猪口腔和蹄冠部水泡,与口蹄疫临床症状十分相似。为建立快速、敏感和特异的SVA血清抗体检测方法,本研究采用原核表达系统表达该病毒VP2蛋白,证实其以包涵体形式表达,纯化后获得了VP2重组蛋白。经过反应条件优化,建立了SVA VP2间接ELISA抗体的检测方法。该方法与口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒和猪伪狂犬病毒阳性血清均无交叉反应;敏感性为91.6%,批内和批间重复系数分别为11.1%和9.67%。上述结果表明该方法特异性、敏感性和重复性较好。符合率试验结果显示,该方法与血清中和抗体试验符合率为91.9%。利用本实验建立的间接ELISA抗体方法检测2016年~2019年华东地区5个省份2070份猪血清,结果显示,江苏、安徽、浙江、山东和江西省SVA抗体阳性率分别为73%、67%、69%、74%和73%;且各年度抗体阳性率均较高,其中2016年最高达86.9%。本研究为我国SVA检测和流行病学调查提供了有效方法。

关键词：塞内卡病毒 VP2 间接ELISA 流行病学

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2018-2019年苏豫赣三省猪伪狂犬病病毒野毒抗体流行病学调查

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畜牧与兽医 2020年第1期52卷 122-124页

作者：陈驰曹明珠吕林白娟王先炜姜平南京农业大学动物医学院/农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210095

为了解近2年苏豫赣地区猪伪狂犬病病毒(PRV)感染情况,采集江苏、河南和江西3省111家规模猪场3 804份猪的血清样品,用PRV gE-ELISA抗体检测方法进行PRV野毒抗体检测,结果:猪场PRV gE抗体阳性率为75.68%(84/111),血清样品总阳性率为36.75%... 详细信息

为了解近2年苏豫赣地区猪伪狂犬病病毒(PRV)感染情况,采集江苏、河南和江西3省111家规模猪场3 804份猪的血清样品,用PRV gE-ELISA抗体检测方法进行PRV野毒抗体检测,结果:猪场PRV gE抗体阳性率为75.68%(84/111),血清样品总阳性率为36.75%(1 398/3 804),其中,种公猪PRV gE抗体阳性率最高,为68.89%;生产母猪PRV gE抗体阳性率最低,为28.84%。此外,春季血清gE抗体阳性率最高,夏季较低。调查结果表明,该地区猪场PRV野毒感染率依然较高,制定科学合理的免疫程序并加强综合防控十分必要。

关键词：伪狂犬病病毒流行病学 gE抗体

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安徽部分地区猪场产肠毒素大肠杆菌的分离鉴定及其生物学特性分析

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畜牧与兽医 2020年第5期52卷 87-91页

作者：任建鸾张鹏殷晗杰黄豪胜杨德鸿曾颃李一昊南京农业大学农业部动物细菌学重点实验室/南京农业大学动物医学院江苏南京210095

产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是猪场仔猪黄白痢的重要病原之一。为调查安徽省猪场中ETEC的感染情况,在2018年对该省6个地区的17个规模化猪场的仔猪黄白痢样品进行了ETEC的分离鉴定。结果:经PCR鉴定,在479... 详细信息

产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是猪场仔猪黄白痢的重要病原之一。为调查安徽省猪场中ETEC的感染情况,在2018年对该省6个地区的17个规模化猪场的仔猪黄白痢样品进行了ETEC的分离鉴定。结果:经PCR鉴定,在479份病料中分离出110株ETEC菌株。对这些菌株进行血清型、耐药性和致病力分析表明,该110株ETEC菌株共鉴定出13种血清型,以O8、O20、O128为优势血清型。110株ETEC菌株表现出高耐药性,对强力霉素的耐药率高达100%(110/110);对新霉素、红霉素、庆大霉素、阿莫西林、四环素等抗生素的耐药率均高达70%以上,且多数菌株表现出多重耐药,其中9、10重耐药菌株数最多。分别将优势血清型O8、O20、O128菌株对小鼠进行攻毒,结果同一血清型中强毒株数量分别占该血清型菌株总数的50%(55/110)、72.7%(8/11)和66.7%(4/6),表明这些优势血清型菌株的毒力普遍较高。本研究为猪场ETEC引起的仔猪黄白痢的流行病学研究及防控提供一定的参考。

关键词：产肠毒素大肠杆菌血清型耐药性毒力

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黄腐酚对猪流行性腹泻病毒的体外抑制作用

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病毒学报 2020年第5期36卷 907-912页

作者：赵诗莹陈新陈欢钱莺娟郑龙三戴建君南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室农业部细菌学重点实验室南京210095

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种以仔猪水样腹泻、呕吐、脱水和高死亡率为主要特征的高度接触性传染病。该病首先在欧洲出现地区性暴发,2000年后在... 详细信息

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种以仔猪水样腹泻、呕吐、脱水和高死亡率为主要特征的高度接触性传染病。该病首先在欧洲出现地区性暴发,2000年后在亚洲流行严重,给全球养猪业造成了巨大的损失。由于PEDV毒株变异迅速,研究对PEDV具有抑制作用的天然活性化合物对于了解病毒感染致病机制以及防控PED具有重要意义。本研究通过RT-PCR、空斑形成试验、Western Blot和MTT试验等方法探究黄腐酚是否对PEDV感染具有抑制作用,并验证其作用效果。结果显示,黄腐酚能够明显抑制PEDV感染Vero-E6细胞中病毒M基因mRNA水平,显著降低细胞内和上清中病毒粒子的产生;黄腐酚对Vero-E6细胞几乎无毒性,抑制PEDV呈剂量依赖性且半数有效浓度为3.865μM;黄腐酚处理能明显降低PEDV不同毒株(如CV777和SQ2014毒株)感染细胞中N蛋白表达水平。本研究为进一步探究黄腐酚抗PEDV感染机制,研制抗PEDV或广谱抗冠状病毒药物奠定了基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒(PEDV) 猪流行性腹泻(PED) 黄腐酚抗病毒

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制备大肠杆菌菌蜕的方法比较

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江苏农业学报 2020年第2期36卷 410-416页

作者：袁橙郭长明左伟勇郝福星左沁丹蔺辉星江苏农牧科技职业学院动物医学院江苏泰州225300 南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210095

为进一步研究大肠杆菌菌蜕的制备技术,以pBV221、pCold IV和pETDuet1载体为基础构建了表达噬菌体E基因的溶菌质粒,并利用pETDuet1的2个多克隆位点构建了同时表达E基因和金黄色葡萄球菌核酸酶A的双表达溶菌质粒。经检测,pBV221-E/DH5α组... 详细信息

为进一步研究大肠杆菌菌蜕的制备技术,以pBV221、pCold IV和pETDuet1载体为基础构建了表达噬菌体E基因的溶菌质粒,并利用pETDuet1的2个多克隆位点构建了同时表达E基因和金黄色葡萄球菌核酸酶A的双表达溶菌质粒。经检测,pBV221-E/DH5α组和pCold-E/BL21组的裂解效率最高,但pCold-E/BL21组的裂解起始时间晚于其他几组。诱导剂的浓度对pETDuet1-E-SNA/BL21(DE3)的裂解效率有较大影响。电泳结果显示,随着E基因的表达,细菌DNA逸出膜外,同时金黄色葡萄球菌核酸酶A将DNA降解为250 bp以下的小片段。除pBV221-E/BL21组外,β-丙内酯可实现对其他试验组菌蜕的完全灭活。电镜观察发现,几组菌蜕在结构上并无明显差别。与对照菌相比,菌蜕结构完整,电子密度低且不均匀,细胞膜有不同程度的皱缩。

关键词：菌蜕大肠杆菌 E基因金黄色葡萄球菌核酸酶A 裂解效率

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前噬菌体对禽致病性大肠杆菌DE205B环境耐受力的影响

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畜牧与兽医 2020年第4期52卷 66-71页

作者：刘云张中华姜珊钱新杰巩倩雯李德志汤芳戴建君教育部动物健康与食品安全国际联合实验室农业部细菌学重点实验室南京农业大学动物医学院江苏南京210095

禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)DE205B基因组中存在前噬菌体phiv205-1。本文利用RED同源重组技术构建前噬菌体phiv205-1缺失株,采用倍比稀释的方法检测野生株DE205B和前噬菌体缺失株DE205BΔphiv205-1在酸... 详细信息

禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)DE205B基因组中存在前噬菌体phiv205-1。本文利用RED同源重组技术构建前噬菌体phiv205-1缺失株,采用倍比稀释的方法检测野生株DE205B和前噬菌体缺失株DE205BΔphiv205-1在酸、盐和氧化应激等不利条件下的存活率,分析前噬菌体对APEC环境适应力的影响。结果显示,与野生株相比,前噬菌体缺失株DE205BΔphiv205-1酸性耐受力下降了56.62%(P<0.001),在氧化应激条件下的存活率下降了91.78%(P<0.001)。为研究前噬菌体phiv205-1中影响宿主细菌对酸和氧化应激耐受的基因,采用real-time PCR检测了部分phiv205-1基因在氧化应激环境中的表达量,结果显示基因2971、2989、3327及Erf的表达量显著升高。进一步构建了Δ2971、Δ2989、Δ3327及ΔErf的单基因缺失株,环境耐受实验结果显示,与野生株相比,单基因缺失株Δ2971、Δ2989、Δ3327及ΔErf在H2O2环境下的存活率依次降低了89.32%、67.79%、27.84%和71.29%。研究表明,前噬菌体phiv205-1增加了细菌对环境压力的抵抗力,为宿主菌在恶劣条件下的生存提供了多种益处。

关键词：前噬菌体禽致病性大肠杆菌环境耐受力氧化应激酸

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非洲猪瘟病毒pK205R蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立

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畜牧与兽医 2025年第2期57卷 105-111页

作者：王燕邹艳丽何佳依刘珊苗雨润任炜杰王振忠白昀陈欢钱莺娟贾红吴晓东冯志新郑龙三南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业农村部细菌学重点实验室江苏南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所江苏南京210014 中国动物卫生与流行病学中心/国家非洲猪瘟参考实验室山东青岛266000 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

旨在建立可以检测非洲猪瘟病毒(ASFV)非结构蛋白pK205R抗体的血清学检测方法。基于杆状病毒表达系统构建重组杆粒BacmidpK205R,以纯化的pK205R蛋白为包被抗原,优化各项反应条件,建立间接ELISA抗体检测方法,验证方法的特异性、灵敏性、... 详细信息

旨在建立可以检测非洲猪瘟病毒(ASFV)非结构蛋白pK205R抗体的血清学检测方法。基于杆状病毒表达系统构建重组杆粒BacmidpK205R,以纯化的pK205R蛋白为包被抗原,优化各项反应条件,建立间接ELISA抗体检测方法,验证方法的特异性、灵敏性、重复性,并对临床血清样品进行检测。结果显示:pK205R蛋白可以与ASFV阳性血清发生发应,ELISA方法的抗原包被浓度为50 ng/孔,4℃过夜包被,封闭液为2%牛血清白蛋白(BSA),37℃封闭1 h,待检血清以5%脱脂乳进行1∶200稀释,37℃孵育0.5 h;二抗工作浓度为1∶5000,37℃孵育0.5 h,37℃下显色10 min;该方法的阳性临界值为0.186(≥0.186为阳性,<0.186为阴性),且具有良好的特异性、灵敏性、可重复性,与商品化试剂盒符合率为79.92%。本研究成功建立pK205R非洲猪瘟间接ELISA抗体检测方法,为进一步优化和研制非洲猪瘟抗体的快速检测试剂盒提供了参考。

关键词：非洲猪瘟病毒 pK205R蛋白间接ELISA 杆状病毒表达

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奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌小菌落突变株的表型鉴定及其遗传基础分析

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畜牧与兽医 2020年第5期52卷 64-72页

作者：熊甘爽 Alkasir Rashad 仲亮律娜戴建君李晶汤芳朱宝利南京农业大学动物医学院/农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210095 中国科学院微生物研究所北京100101

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是导致奶牛乳房炎的主要病原菌,其在抗菌药物的作用下可形成小菌落突变株(small colony variants,SCVs)。为了探讨牛源性金黄色葡萄球菌在表型转变过程中的遗传基础,对临床分离的奶牛乳房炎金黄... 详细信息

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是导致奶牛乳房炎的主要病原菌,其在抗菌药物的作用下可形成小菌落突变株(small colony variants,SCVs)。为了探讨牛源性金黄色葡萄球菌在表型转变过程中的遗传基础,对临床分离的奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌野生型及其SCV、人工诱导的SCV、临床SCV的表型回复株进行了相关特性及基因组序列的分析。结果发现:金黄色葡萄球菌的SCV和野生型差异显著,野生型菌株在庆大霉素及磺胺甲噁唑/甲氧苄啶(SXT)的诱导下绝大多数产生甲萘醌缺陷型SCV,仅有1株经SXT诱导产生的SCV为胸腺嘧啶核苷(胸苷)缺陷型。菌株基因与表型之间存在明显关联,与野生型基因组相比,临床SCV均显示喹啉/醌代谢相关基因menA的碱基缺失,可能导致蛋白表达提前终止。庆大霉素诱导的SCV在基因menB处出现碱基位点突变;SXT诱导的SCV在代谢相关基因MW1485和aroA处分别出现基因片段的缺失和插入。回复株可能通过在代谢相关基因menA二次突变来恢复功能。本研究首次利用全基因组测序技术分析牛源性金黄色葡萄球菌SCV表型改变的遗传基础,有助于对奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌SCV产生更深入的理解。

关键词：金黄色葡萄球菌小菌落突变株表型回复甲萘醌缺陷突变奶牛乳房炎

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